具有抑制二肽基肽酶‑4的活性肽及其制备方法与应用与流程

文档序号:12776942阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种具有抑制二肽基肽酶-4的活性肽,其特征在于,该抑制肽具有下述的氨基酸序列:Ala-Gly-Phe-Ala-Gly-Asp-Asp-Ala-Pro-Arg-Ala。

2.权利要求1所述的具有抑制二肽基肽酶-4的活性肽的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)杂色蛤酶解物的制备:

将杂色蛤软体洗净泥沙,加水煎煮,分离煎煮液与肉渣,沥干;取肉渣,加水匀浆后,加入生物酶酶解,酶解结束后,于沸水浴灭活,然后加入无水乙醇进行醇沉,静置,再取上清液,浓缩,冷冻干燥,得到冻干粉;

(2)离子交换色谱纯化:

取步骤(1)酶解得到的冻干粉以去离子水溶解后,经过离子交换色谱分离,流动相:A相为水,B相为0.8mol/L的氯化钠溶液,梯度洗脱,流速:2mL/min;检测波长:220nm;经过离子交换色谱分离得到不同组分的酶解物,分别测定各组分对二肽基肽酶-4的抑制活性,取活性最好的部分,冷冻干燥,得冻干粉;

(3)反向色谱分离纯化:

取步骤(2)分离后的冻干粉以甲醇溶解,经过反相高效液相色谱分离,流动相:A相为体积浓度0.1%甲酸;B相为甲醇,梯度洗脱,流速:10mL/min;柱温:30℃,检测波长为220nm,分离收集到氨基酸序列为Ala-Gly-Phe-Ala-Gly-Asp-Asp-Ala-Pro-Arg-Ala的具有抑制二肽基肽酶-4的活性肽。

3.根据权利要求2所述的具有抑制二肽基肽酶-4的活性肽的制备方法,其特征在于,步骤(1)所述的酶为木瓜蛋白酶,所述木瓜蛋白酶活性为5000至50000U/g。

4.根据权利要求2所述的具有抑制二肽基肽酶-4的活性肽的制备方法,其特征在于,步骤(1)酶的加入重量为肉渣重量的0.01%-10%,酶解的温度为37至50℃,酶解的pH为7至9,酶解反应时间为2至6h。

5.根据权利要求2所述的具有抑制二肽基肽酶-4的活性肽的制备方法,其特征在于,步骤(1)所述的酶的加入重量为肉渣重量的0.1~10%,酶解的温度为40~60℃,酶解的pH为6~9,酶解反应时间为1~5h。

6.根据权利要求5所述的具有抑制二肽基肽酶-4的活性肽的制备方法,其特征在于,步骤(1)所述的酶的加入重量为肉渣重量的1%,酶解的温度为55℃,酶解的pH为7,酶解反应时间为4h。

7.根据权利要求5所述的具有抑制二肽基肽酶-4的活性肽的制备方法,其特征在于,步骤(2)梯度洗脱条件为:0~40min内0.8mol/L氯化钠溶液体积比为0%,40~140min内0.8mol/L氯化钠溶液体积比为0%~100%。

8.根据权利要求5所述的具有抑制二肽基肽酶-4的活性肽的制备方法,其特征在于,步骤(3)所述的梯度洗脱程序为:0~10min,B相甲醇比例由2%至10%,10~20min,B相甲醇比例由20%至40%,20~25min B相甲醇体积由40%至100%。

9.根据权利要求2所述的具有抑制二肽基肽酶-4的活性肽的制备方法,其特征在于,步骤(1)将杂色蛤软体洗净泥沙,加入3至8倍量水煎煮1至3次,每次30~120分钟,分离煎煮液与肉渣,沥干;取肉渣,加3至8倍量水匀浆后,加入生物酶进行酶解。

10.权利要求1所述的D具有抑制二肽基肽酶-4的活性肽在制备降糖药物中的应用。

当前第2页1 2 3 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1