1.一种丙型肝炎病毒(HCV)恒温检测试剂盒,包括PCR反应液,PCR反应启动液、PCR反应酶系,HCV特异性引物及探针,内标18S RNA的特异性引物及探针,阴阳性质控品,其特征在于:所述的HCV特异性引物及探针、内标18S RNA的特异性引物及探针序列如下:
检测HCV的上游引物F1的序列为:
CCTACTACCGCGGTCTTGACGTGTCTGTCATC;
检测HCV的下游引物R1的序列为:CAGTCTATCACCGAGTCGAAATCGCCGGTAAAGCC;
检测HCV的荧光探针P1序列为:FAM-CGGCCAGTG(dSpacer)CGATGTTGTCGTAGTGGCAAC-BHQ;
检测内标18SRNA的上游引物F1序列为:CCGATCGCACGCCCCCCGTGGCGGCGACGACC;
检测内标18SRNA的下游引物R1的序列为:CCCGTCACCCGTGGTCACCATGGTAGGCAC;
检测内标18SRNA的荧光探针P1序列为:
HEX-CGAACGTCT(dSpacer)CCCTATCAACTTTCGATGGTAGTC-BHQ。
2.根据权利要求1所述的一种丙型肝炎病毒(HCV)恒温检测试剂盒,其特征在于:其PCR反应液成分包括:
Tris-缓冲液 50~100mmol/L
KCl 20~60mmol/L
二硫苏糖醇 2~5mmol/L
甜菜碱 0.5~2mol/L
海藻糖 1%~4%
PEG 2%~5%
BSA 0.1~0.6mg/mL。
3.根据权利要求2所述的一种丙型肝炎病毒(HCV)恒温检测试剂盒,其特征在于:Tris-缓冲液可选自Tris-H2SO4、Tris-乙酸、Tris-HCl中的任意一种或多种,Tris-缓冲液的pH为7.0~9.0。
4.根据权利要求1所述的一种丙型肝炎病毒(HCV)恒温检测试剂盒,其特征在于:其PCR启动液成分包括:
Mg2+ 8mM~30mM 。
5.根据权利要求4所述的一种丙型肝炎病毒(HCV)恒温检测试剂盒,其特征在于:Mg2+来自于硫酸镁、乙酸镁、氯化镁中的任意一种或多种。
6.根据权利要求1所述的一种丙型肝炎病毒(HCV)恒温检测试剂盒,其特征在于:其PCR反应酶系成分包括:
dNTPs 180~250μmol/L
聚合酶Bsu 120~160ng/μl
单链结合蛋白 200~700ng/μl
重组酶 100~300ng/μl
逆转录酶 0.05~0.9U/μl。
7.根据权利要求6所述的一种丙型肝炎病毒(HCV)恒温检测试剂盒,其特征在于:重组酶选自E.coli RecT蛋白;λ噬菌体β蛋白;啤酒酵母SepΙ/STPβ;啤酒酵母DPA蛋白;啤酒酵母STPα蛋白;粟酒裂殖酵母p140/Exoǁ蛋白以及RrpΙ、HPP-Ι、v-SEP、ICP8蛋白。
8.根据权利要求1所述的一种丙型肝炎病毒(HCV)恒温检测试剂盒,其特征在于:HCV探针连接的荧光基团不同于内标18SRNA探针连接的荧光基团。
9.根据权利要求1、2、4、6所述的一种丙型肝炎病毒(HCV)恒温检测试剂盒,其特征在于:恒温扩增的扩增温度为35℃~42℃。