一种丙型肝炎病毒(HCV)恒温检测试剂盒的制作方法

文档序号:12779155阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种丙型肝炎病毒(HCV)恒温检测试剂盒,包括PCR反应液,PCR反应启动液、PCR反应酶系,HCV特异性引物及探针,内标18S RNA的特异性引物及探针,阴阳性质控品,其特征在于:所述的HCV特异性引物及探针、内标18S RNA的特异性引物及探针序列如下:

检测HCV的上游引物F1的序列为:

CCTACTACCGCGGTCTTGACGTGTCTGTCATC;

检测HCV的下游引物R1的序列为:CAGTCTATCACCGAGTCGAAATCGCCGGTAAAGCC;

检测HCV的荧光探针P1序列为:FAM-CGGCCAGTG(dSpacer)CGATGTTGTCGTAGTGGCAAC-BHQ;

检测内标18SRNA的上游引物F1序列为:CCGATCGCACGCCCCCCGTGGCGGCGACGACC;

检测内标18SRNA的下游引物R1的序列为:CCCGTCACCCGTGGTCACCATGGTAGGCAC;

检测内标18SRNA的荧光探针P1序列为:

HEX-CGAACGTCT(dSpacer)CCCTATCAACTTTCGATGGTAGTC-BHQ。

2.根据权利要求1所述的一种丙型肝炎病毒(HCV)恒温检测试剂盒,其特征在于:其PCR反应液成分包括:

Tris-缓冲液 50~100mmol/L

KCl 20~60mmol/L

二硫苏糖醇 2~5mmol/L

甜菜碱 0.5~2mol/L

海藻糖 1%~4%

PEG 2%~5%

BSA 0.1~0.6mg/mL。

3.根据权利要求2所述的一种丙型肝炎病毒(HCV)恒温检测试剂盒,其特征在于:Tris-缓冲液可选自Tris-H2SO4、Tris-乙酸、Tris-HCl中的任意一种或多种,Tris-缓冲液的pH为7.0~9.0。

4.根据权利要求1所述的一种丙型肝炎病毒(HCV)恒温检测试剂盒,其特征在于:其PCR启动液成分包括:

Mg2+ 8mM~30mM 。

5.根据权利要求4所述的一种丙型肝炎病毒(HCV)恒温检测试剂盒,其特征在于:Mg2+来自于硫酸镁、乙酸镁、氯化镁中的任意一种或多种。

6.根据权利要求1所述的一种丙型肝炎病毒(HCV)恒温检测试剂盒,其特征在于:其PCR反应酶系成分包括:

dNTPs 180~250μmol/L

聚合酶Bsu 120~160ng/μl

单链结合蛋白 200~700ng/μl

重组酶 100~300ng/μl

逆转录酶 0.05~0.9U/μl。

7.根据权利要求6所述的一种丙型肝炎病毒(HCV)恒温检测试剂盒,其特征在于:重组酶选自E.coli RecT蛋白;λ噬菌体β蛋白;啤酒酵母SepΙ/STPβ;啤酒酵母DPA蛋白;啤酒酵母STPα蛋白;粟酒裂殖酵母p140/Exoǁ蛋白以及RrpΙ、HPP-Ι、v-SEP、ICP8蛋白。

8.根据权利要求1所述的一种丙型肝炎病毒(HCV)恒温检测试剂盒,其特征在于:HCV探针连接的荧光基团不同于内标18SRNA探针连接的荧光基团。

9.根据权利要求1、2、4、6所述的一种丙型肝炎病毒(HCV)恒温检测试剂盒,其特征在于:恒温扩增的扩增温度为35℃~42℃。

当前第2页1 2 3 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1