基于数字PCR用于血源筛查的引物、探针及试剂盒的制作方法

文档序号:20200801发布日期:2020-03-27 20:37阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种基于数字pcr用于血源筛查的引物组合,其特征在于,包括hbv检测引物、hcv检测引物、hiv1检测引物、hiv2检测引物和内标检测引物:

所述hbv检测引物包括核苷酸序列如seqidno.1所示的上游引物和核苷酸序列如seqidno.2所示的下游引物;

所述hcv检测引物包括核苷酸序列如seqidno.4所示的上游引物和核苷酸序列如seqidno.5所示的下游引物;

所述hiv1检测引物包括核苷酸序列如seqidno.7所示的上游引物和核苷酸序列如seqidno.8所示的下游引物;

所述hiv2检测引物包括核苷酸序列如seqidno.10所示的上游引物和核苷酸序列如seqidno.11所示的下游引物;

所述内标检测引物包括核苷酸序列如seqidno.13所示的上游引物和核苷酸序列如seqidno.14所示的下游引物。

2.根据权利要求1所述的基于数字pcr用于血源筛查的引物组合,其特征在于,还包括tp检测引物,所述tp检测引物包括核苷酸序列如seqidno.16所示的上游引物和核苷酸序列如seqidno.17所示的下游引物。

3.一种基于数字pcr用于血源筛查的探针组合,其特征在于,包括hbv检测探针、hcv检测探针、hiv1检测探针、hiv2检测探针和内标检测探针;

所述hbv检测探针的核苷酸序列如seqidno.3所示;

所述hcv检测探针的核苷酸序列如seqidno.6所示;

所述hiv1检测探针的核苷酸序列如seqidno.9所示;

所述hiv2检测探针的核苷酸序列如seqidno.12所示;

所述内标检测探针的核苷酸序列如seqidno.15所示;

所述hbv检测探针、hcv检测探针、hiv1检测探针、hiv2检测探针和内标检测探针上标记有荧光报告基团和荧光猝灭基团。

4.根据权利要求3所述的基于数字pcr用于血源筛查的探针组合,其特征在于,还包括tp检测探针,所述tp检测探针的核苷酸序列如seqidno.18所示,所述tp检测探针上标记有荧光报告基团和荧光猝灭基团。

5.根据权利要求4所述的基于数字pcr用于血源筛查的探针组合,其特征在于,

所述hbv检测探针的5’端标记fam荧光基团,3’端标记bhq1荧光猝灭基团;所述hcv检测探针的5’端标记hex荧光基团,3’端标记bhq1荧光猝灭基团;所述hiv1检测探针的5’端标记rox荧光基团,3’端标记bhq2荧光猝灭基团;所述hiv2检测探针的5’端标记rox荧光基团,3’端标记bhq2荧光猝灭基团;所述内标检测探针的5’端标记cy5荧光基团,3’端标记bhq3荧光猝灭基团;所述tp检测探针的5’端标记alexafluor700荧光基团,3’端标记bbq650荧光猝灭基团。

6.一种基于数字pcr用于血源筛查的试剂盒,其特征在于,包括hbv检测引物及探针、hcv检测引物及探针、hiv1检测引物及探针、hiv2检测引物及探针和内标检测引物和探针;

所述hbv检测引物包括核苷酸序列如seqidno.1所示的上游引物和核苷酸序列如seqidno.2所示的下游引物,所述hbv检测探针的核苷酸序列如seqidno.3所示;

所述hcv检测引物包括核苷酸序列如seqidno.4所示的上游引物和核苷酸序列如seqidno.5所示的下游引物,所述hcv检测探针的核苷酸序列如seqidno.6所示;

所述hiv1检测引物包括核苷酸序列如seqidno.7所示的上游引物和核苷酸序列如seqidno.8所示的下游引物,所述hiv1检测探针的核苷酸序列如seqidno.9所示;

所述hiv2检测引物包括核苷酸序列如seqidno.10所示的上游引物和核苷酸序列如seqidno.11所示的下游引物,所述hiv2检测探针的核苷酸序列如seqidno.12所示;

所述内标检测引物包括核苷酸序列如seqidno.13所示的上游引物和核苷酸序列如seqidno.14所示的下游引物,所述内标检测探针的核苷酸序列如seqidno.15所示;

所述hbv检测探针、hcv检测探针、hiv1检测探针、hiv2检测探针和内标检测探针上标记有荧光报告基团和荧光猝灭基团。

7.根据权利要求6所述的基于数字pcr用于血源筛查的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括tp检测引物和探针,所述tp检测引物包括核苷酸序列如seqidno.16所示的上游引物和核苷酸序列如seqidno.17所示的下游引物,所述tp检测探针的核苷酸序列如seqidno.18所示,所述tp检测探针上标记有荧光报告基团和荧光猝灭基团。

8.根据权利要求6所述的基于数字pcr用于血源筛查的试剂盒,其特征在于:

所述hbv检测探针的5’端标记fam荧光基团,3’端标记bhq1荧光猝灭基团;所述hcv检测探针的5’端标记hex荧光基团,3’端标记bhq1荧光猝灭基团;所述hiv1检测探针的5’端标记rox荧光基团,3’端标记bhq2荧光猝灭基团;所述hiv2检测探针的5’端标记rox荧光基团,3’端标记bhq2荧光猝灭基团;所述内标检测探针的5’端标记cy5荧光基团,3’端标记bhq3荧光猝灭基团;所述tp检测探针的5’端标记alexafluor700荧光基团,3’端标记bbq650荧光猝灭基团。

9.根据权利要求8所述的基于数字pcr用于血源筛查的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒中还包括dpcrbuffer、酶、无核酶水、阴性对照、阳性对照和内标。

10.根据权利要求9所述的基于数字pcr用于血源筛查的试剂盒,其特征在于,所述阳性对照为含hbv、hcv、hiv特异性片段的假病毒;所述内标为含人工设计特异性序列的rna假病毒。

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