用于检测人类红细胞Kidd血型基因分型的引物组及试剂盒的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物技术领域，特别涉及一种用于检测人类红细胞Kidd血型基因分 型的试剂盒（PCR-SSP法)。
【背景技术】
[0002] Kidd血型是一种稀有血型。1951年Alien在一新生儿溶血病患儿的母亲血清中 发现一新的抗体，称抗-Jka,检出相应的Jka抗原。该母亲姓Kidd,故被称为Kidd血型。 1953年检出Kidd血型中的另一个抗原Jkb，家系调查表明这两个抗原受控于同一座位上 的二个显性基因。1959年Pinkerton在菲律宾的西班牙-中国血统的后裔中，发现存在于 Jk (a-b_)以外的所有红细胞上。
[0003] Kidd血型系统的决定基因位于18号染色体（18ql2. 3)的/4基因。该基因有一对 共显性等位基因/妨卩分别编码抗原Jk和Jk。1997年，国际输血协会（ISBT)确定Kidd 血型系统（009)有三个抗原：即 Jka (009001)，Jkb (009002) Jk3 (009003)。
[0004] 在不同种族中，Kidd血型分布有一定差异。白种人和黑人中Jka基因频率较高， Jk基因几乎不存在。东方人中Jkb基因一般高于Jka。
[0005] 抗-Jka及抗-Jkb都可以引起急性溶血性输血反应HTR，特别是迟发性溶血性输血 反应DHTR，约占据1/2。这至少部分是由于Kidd抗体，在初次测到后很少几个月内不再测 到，病人再次输血后，需经再次免疫产生抗体。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是：克服血清学检测试剂的价格昂贵，试剂不好购买等不足，提供一 种免疫学方法能够简单方便的检测人类红细胞Kidd血型基因的引物组。
[0007] 本发明的第二个目的是提供一种具有灵敏、特异、经济、简便、快速的用于检测人 类红细胞Kidd血型基因的试剂盒。
[0008] -种用于检测人类红细胞Kidd血型基因的引物组，其特征是包括JKa引物对，JK b 引物对及内参引物对。
[0009] 所述JKa的上下游引物位于Kidd的DNA参考序列的EX0N8 818-838和Intron8 91-111位置，上、下游引物分别是序列表中SEQ ID NO. 1、SEQ ID NO. 2所示的核苷酸序列。
[0010] 所述JKb的上下游引物位于Kidd的DNA参考序列的EX0N8 818-838和Intron8 91-111位置，上、下游引物分别是序列表中SEQ ID NO. 3、SEQ ID NO. 2所示的核苷酸序列。
[0011] 一种用于检测人类红细胞Kidd血型基因的试剂盒，其特征是包括包被有JKa引物 对，JK b引物对及内参引物对的引物板和浓缩dNTP-Buffer。
[0012] 所述JKa的上下游引物位于Kidd的DNA参考序列的EX0N8 818-838和Intron8 91-111位置，上、下游引物分别是序列表中SEQ ID NO. 1、SEQ ID NO. 2所示的核苷酸序列。
[0013] 所述JKb的上下游引物位于Kidd的DNA参考序列的EX0N8 818-838和Intron8 91-111位置，上、下游引物分别是序列表中SEQ ID NO. 3、SEQ ID NO. 2所示的核苷酸序列。
【附图说明】
[0014] 图1为人类红细胞Kidd血型基因特异引物孔位图。
[0015] 图2为实验结果阴阳性判读图。
[0016] 图3为人类红细胞Kidd血型基因测定结果分型读板纸。
[0017] 图4为人类红细胞Kidd血型基因测定试剂盒电泳结果胶图。 具体实施方案
[0018] 下面结合具体实施例对本发明做进一步说明。
[0019] 实施例1。
[0020] 依据美国国立生物技术信息中心基因库（NCBI Gene Bank)公开的Kidd等位基因 序列，设计出用于检测人类红细胞Kidd血型基因的引物组，该引物组包括JKa引物对，JK b 引物对及内参引物对。
[0021] 实施例2。
[0022] -种用于检测人类红细胞Kidd血型基因的试剂盒，包括包被有JKa引物对，JK b弓丨 物对及内参引物对的引物板和浓缩dNTP-Buffer。
[0023] 用于检测人类红细胞Kidd血型基因的试剂盒的制备方法是： (1) 依据人类红细胞Kidd血型基因特异引物孔位图（见图1)，分别将JKa引物对，JKb 引物对及内参引物对包被至引物板的相应位置上，干燥处理； (2) 依据配 220mM dNTP、3.5mM Mg2+、500mM KCUlOOmM Tris-HCL、1% TritonX-IOO 制 备出 440 μ I 浓缩 dNTP-Buf fer ; (3) 将包被有引物对的引物板每人份检测包括2孔特异性引物孔，浓缩dNTP-Buffer组 成一种用于检测人类红细胞Kidd血型基因的试剂盒。
[0024] 实施例3。
[0025] 使用操作流程。
[0026] -、2. 5%琼脂糖凝胶的准备。
[0027] 1.将加入2. 5g琼脂糖加入100ml IXTBE溶液（Tris-硼酸盐-EDTA溶液)，加热 直到形成均匀的凝胶溶液。再加入适量电泳染色剂，混合均匀。
[0028] 2.将凝胶槽置于水平位置，向凝胶槽中加入适量凝胶溶液，插入电泳梳。前后水平 移动凝胶槽，确保凝胶溶液覆盖均匀。
[0029] 3.待凝胶完全凝固后，坚直拔出电泳梳。
[0030] 二、PCR循环参数见表1。
[0031] 表1扩增参数特征表。
【主权项】
1. 一种用于检测人类红细胞Kidd血型基因的引物组，其特征是包括JK3引物对，JKb弓丨 物对及内参引物对； 所述JKa的上下游引物位于Kidd的DNA参考序列的EX0N8 818-838和Intron8 91-111 位置，上、下游引物分别是序列表中SEQIDNO. 1、SEQIDNO. 2所示的核苷酸序列； 所述JKb的上下游引物位于Kidd的DNA参考序列的EX0N8 818-838和Intron8 91-111 位置，上、下游引物分别是序列表中SEQIDNO. 3、SEQIDNO. 2所示的核苷酸序列。
2. -种用于检测人类红细胞Kidd血型基因的试剂盒，其特征是包括包被有JK3引物 对，JKb引物对及内参引物对的引物板和浓缩dNTP-Buffer; 所述JKa的上下游引物位于Kidd的DNA参考序列的EX0N8 818-838和Intron8 91-111 位置，上、下游引物分别是序列表中SEQIDNO. 1、SEQIDNO. 2所示的核苷酸序列； 所述JKb的上下游引物位于Kidd的DNA参考序列的EX0N8 818-838和Intron8 91-111 位置，上、下游引物分别是序列表中SEQIDNO. 3、SEQIDNO. 2所示的核苷酸序列。
【专利摘要】本发明公开了一种用于检测人类红细胞Kidd血型基因的引物组及试剂盒。用于Kidd血型基因测定的引物组包括JKa引物对，JKb引物对及内参引物对。本发明的试剂盒克服了血清学方法鉴定Kidd血型的种种限制、是正确判定血型不可缺少的辅助手段，具有广泛的应用前景和临床参考价值。
【IPC分类】C12N15-11, C12Q1-68
【公开号】CN104726587
【申请号】CN201510125425
【发明人】赵卫军
【申请人】天津市秀鹏生物技术开发有限公司
【公开日】2015年6月24日
【申请日】2015年3月20日