沉（目的是除去部分多糖）过程，缩短了生产周期；（3) 本发明采用渗漉法，可以大幅度提高提取液浓度，缩短了提取液浓缩受热时间，减少了莫诺 苷在提取液浓缩过程中受热时间长而发生分解；(4)由于本发明采用渗漉法，大幅度提高 提取液中莫诺苷的含量，避免了进一步大孔树脂法精制过程，一方面减少了工艺过程，降低 了生产成本，另一方面，也减少了上大孔树脂后的浓缩过程，避免莫诺苷浓缩过程中受热分 解；本发明采用的渗漉法是在室温状态下进行，温度为室温，同样可以加热回流提取法过程 中，莫诺苷浓缩过程中受热分解；(6)本发明采用的柱层析硅胶为200~300目，使色谱柱 单位体积的吸附面积大幅度提高，因此显著提高了分离效率；（7)本发明采用的层析硅胶 柱的径-高比为1 :〇. 5~1 :5,比常规径-高比大于1 :10的硅胶柱缩短了分离时间，不仅 缩短了生产周期，也克服了莫诺苷在色谱柱上由于吸附时间长而导致的分解比例增大的缺 点。
【具体实施方式】
[0031] 下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不限于以下实施例。
[0032] 实施例
[0033] 1)取山茱萸2kg，粉碎成粗份（20目），以70%甲醇（水与醇的体积比为30:70) 为溶剂，用渗漉法提取，具体方法为：将所述山茱萸置于密封容器中，加入溶剂甲醇，浸润2 小时，使山茱萸充分膨胀，分次均匀地装入底部垫有多层纱布的渗漉器中，每次装好后用木 棒压紧，装完后在山茱萸上面覆盖纱布并压上重物，打开渗滤器下口开关，再慢慢地从渗漉 器上部加入70%甲醇，当液体刚开始自下口流出时，关闭开关，并保持上层液面高出药面5 厘米为止，然后加盖放置24小时后，打开下口开关，使渗漉液缓缓流出，收集6L渗漉液，得 到山茱萸提取液；
[0034] 2)将所述步骤1)得到的山茱萸提取液浓缩至400ml，得到山茱萸浸膏；
[0035] 3)将所述步骤2)得到的山茱萸浸膏与粒径规格为200目~300目的柱层析硅胶 220g混匀，干燥，研细后，装填于已填有440g柱层析用空白硅胶（粒径规格为200目~300 目）的色谱柱中，该硅胶色谱柱的径高比为1 :1 ;
[0036] 4)用由二氯甲烷与甲醇组成，依次以体积比为100 :0、100 :10、100 :30混合的混 合液为洗脱液，进行洗脱，每种比例的混合液使用2个柱体积，流速为200ml/小时，以200ml 为1个流分，弃去最先洗脱出的第1~第3个流分，收集第4~第7个流分，合并所收集的 流分，浓缩，用甲醇溶解残留物；
[0037] 5)将步骤5)所得甲醇溶解液用甲醇重结晶，得到白色粉末，经检测确认，该白色 粉末为纯度为82%的莫诺苷；分别测定步骤1)投料药材和该白色粉末中莫诺苷的含量并 以此计算转移率。莫诺苷的结构式如以下式I所示。
[0038]
【主权项】
1. 制备莫诺苷的方法，包括如下步骤： 1) 将山茱萸原料，用含水甲醇进行渗漉，得到山茱萸提取液； 2) 将所述步骤1)得到的山茱萸提取液进行浓缩，得到山茱萸提取液的浸膏； 3) 将所述步骤2)得到的山茱萸浸膏与硅胶混匀、干燥、研细后，装填于色谱柱中；所述 色谱柱中已装有柱层析用空白硅胶； 4) 用洗脱液对所述色谱柱进行洗脱，以相当于所述色谱柱中空白硅胶柱体积的流出液 为1个流分，按照下述洗脱法a~洗脱法c中的任意一种进行洗脱并收集流分，用薄层色 谱法合并相似流分，再除去所述收集到的流分中的洗脱液，用甲醇溶解残留物，得甲醇溶解 液； 其中， 所述洗脱法a为：弃去最先洗脱出的第1~第3个流分，收集第4~第7个流分； 所述洗脱法b为：弃去最先洗脱出的第1~第5个流分，收集第6~第9个流分； 所述洗脱法c为：弃去最先洗脱的第1~第7个流分，收集第8~第12个流分。 5) 将步骤4)所得甲醇溶解液进行重结晶，得到产物。2. 根据权利要求1的方法，其中步骤1)中，所述山茱萸可以为原药材，也可以为粉末， 如为粉末，其目数为10-60目，优选10-20目。3. 根据权利要求1的方法，其中步骤1)中，所用溶剂为含水甲醇，水与甲醇的体积比 为70 :30~5 :95 ;或者是30~95%甲醇溶液；例如是50~90%甲醇溶液；例如是60~ 90%甲醇溶液。4. 根据权利要求1的方法，其中步骤1)中，的渗漉法是在室温状态下，温度为室温 (5°C~35°C，优选 20°C~25°C。5. 根据权利要求1的方法，其中步骤2)中，每毫升山茱萸提浸膏中，相当于含有所述山 茱萸原料的干重为2g~10g，优选4~5g。6. 根据权利要求1的方法，其中步骤3)中，所述硅胶的目数为粒径规格为200目~300 目；所述用于与山茱萸浸膏混匀的硅胶的用量，为所述山茱萸原料干重的5%~15%，优选 7~10% ;所述色谱柱中，已装填有柱层析用空白硅胶，所述柱层析用空白硅胶的用量为所 述山茱萸原料干重的10%~40%，优选14-20% ;所述色谱柱的径高比为1 :0. 5~1 :5,优 选 1 :1 ~1 :3,优选 1 :1 ~I :1. 5。7. 根据权利要求1的方法，其中所述步骤4)中，洗脱液由二氯甲烷与甲醇组成，依次 是体积比为100 :〇、100 :10、100 :30混合的混合液；每种比例的混合液使用2~4个柱体积 (即相当于所述色谱柱中空白硅胶柱体积）。8. 根据权利要求1的方法，其中所述步骤5)中，重结晶溶剂为甲醇或乙醇。9. 根据权利要求1的方法，其中步骤1)中，所述渗漉法可按照包括如下步骤的方法进 行：将所述山茱萸浸润于溶剂后，装入底部装有脱脂棉的渗漉器中，并像所述渗漉器中加入 溶剂，使所述渗漉器中的溶剂液面高出所述山茱萸面5厘米~15厘米，放置12小时~48 小时后，收集渗漉液，得到所述山茱萸提取液；所述溶剂为含水甲醇，温度为5°C~35°C，特 别是室温。10. 根据权利要求1的方法，其包括以下步骤： 1)取山茱萸2kg，粉碎成粗份（20目），以70%甲醇为溶剂，用渗漉法提取，具体方法 为：将所述山茱萸置于密封容器中，加入溶剂甲醇，浸润2小时，使山茱萸充分膨胀，分次均 匀地装入底部垫有多层纱布的渗漉器中，每次装好后用木棒压紧，装完后在山茱萸上面覆 盖纱布并压上重物，打开渗滤器下口开关，再慢慢地从渗漉器上部加入70%甲醇，当液体刚 开始自下口流出时，关闭开关，并保持上层液面高出药面5厘米为止，然后加盖放置24小时 后，打开下口开关，使渗漉液缓缓流出，收集6L渗漉液，得到山茱萸提取液； 2) 将所述步骤1)得到的山茱萸提取液浓缩至400ml，得到山茱萸浸膏； 3)将所述步骤2)得到的山茱萸浸膏与粒径规格为200目~300目的柱层析硅胶220g 混匀，干燥，研细后，装填于已填有440g柱层析用空白硅胶（粒径规格为200目~300目） 的色谱柱中，该硅胶色谱柱的径高比为1 :1 ; 4) 用由二氯甲烷与甲醇组成，依次以体积比为100 :0、100 :10、100 :30混合的混合液 为洗脱液，进行洗脱，每种比例的混合液使用2个柱体积，流速为200ml/小时，以200ml为1 个流分，弃去最先洗脱出的第1~第3个流分，收集第4~第7个流分，合并所收集的流分， 浓缩，用甲醇溶解残留物； 5) 将步骤5)所得甲醇溶解液用甲醇重结晶，得到白色粉末。
【专利摘要】本发明公开一种制备莫诺苷的方法。该方法，包括如下步骤：1)将山茱萸进行渗漉提取，得到山茱萸提取液；2)浓缩所述步骤1)得到的山茱萸提取液浓缩，得到山茱萸浸膏；3)得到所述山茱萸浸膏，与硅胶混匀、干燥、研细后，装填于色谱柱中；所述色谱柱中已装有柱层析用空白硅胶；4)用洗脱液对所述色谱柱进行洗脱并收集流分，再除去所述收集到的流分中的洗脱液，用甲醇溶解残留物，重结晶，得到所述莫诺苷。该方法所得产物纯度大于70％，可用于进一步纯化、生产高纯度莫诺苷，也可以直接用于生产各种目标产品。本方法既适用于实验室小规模制备，也适用于大规模工业生产。
【IPC分类】C07H17/04, C07H1/08
【公开号】CN104987354
【申请号】CN201510438773
【发明人】陈有根, 常增荣, 傅欣彤, 郭洪祝
【申请人】北京市药品检验所
【公开日】2015年10月21日
【申请日】2015年7月23日