KX6-Dl基因、TaCWl-4A基因、TaGS-Dl基因、 TaGASR7-Al 基因、I-FEH w3 基因、Pinb2-v2 基因、Psy-Bl 基因、Psyl-Dl 基因、TaZds-Al 基 因、Talyce-Bl基因、TaPds-Bl基因、Glu-Bl基因，其特征在于：所述方法为如下（A)或（B): ⑷由如下（al)，以及如下（a2)_(al4)这13种中的至少一种组成： (B)为如下（al); (al)检测或辅助检测待测小麦的Ppo-Dl基因的基因型的方法，包括如下步骤：以所述 待测小麦的基因组DNA为模板，采用权利要求7所述的试剂盒进行PCR扩增，将所得扩增 产物进行荧光信号扫描，采用Kluster Caller软件对扫描数据进行分析，根据分析结果按 照如下确定所述待测小麦的Ppo-Dl基因的基因型：若所述待测小麦的扩增产物的荧光信 号数据经Kluster Caller软件分析呈现蓝色，则所述待测小麦的Ppo-Dl基因的基因型为 GG ;若所述待测小麦的扩增产物的荧光信号数据经KlusterCaller软件分析呈现红色，则 所述待测小麦的Ppo-Dl基因的基因型为CC ;若所述待测小麦的扩增产物的荧光信号数据 经Kluster Caller软件分析呈现绿色，则所述待测小麦的Ppo-Dl基因的基因型为CG ; (a2)检测或辅助检测待测小麦的TaPod-Al基因的基因型的方法，包括如下步骤：以所 述待测小麦的基因组DNA为模板，采用权利要求7所述的试剂盒进行PCR扩增，将所得扩增 产物进行荧光信号扫描，采用Kluster Caller软件对扫描数据进行分析，根据分析结果按 照如下确定所述待测小麦的TaPod-Al基因的基因型：若所述待测小麦的扩增产物的荧光 信号数据经Kluster Caller软件分析呈现蓝色，则所述待测小麦的TaPod-Al基因的基因 型为GG ;若所述待测小麦的扩增产物的荧光信号数据经Kluster Caller软件分析呈现红 色，则所述待测小麦的TaPod-Al基因的基因型为AA ;若所述待测小麦的扩增产物的荧光信 号数据经Kluster Caller软件分析呈现绿色，则所述待测小麦的TaPod-Al基因的基因型 为AG ; (a3)检测或辅助检测待测小麦的TaCKX6-Dl基因的基因型的方法，包括如下步骤：以 所述待测小麦的基因组DNA为模板，采用权利要求7所述的试剂盒进行PCR扩增，将所得扩 增产物进行荧光信号扫描，采用Kluster Caller软件对扫描数据进行分析，根据分析结果 按照如下确定所述待测小麦的TaCKX6-Dl基因的基因型：若所述待测小麦的扩增产物的荧 光信号数据经Kluster Caller软件分析呈现蓝色，则所述待测小麦的TaCKX6-Dl基因的基 因型为Ins ;若所述待测小麦的扩增产物的荧光信号数据经Kluster Caller软件分析呈现 红色，则所述待测小麦的TaCKX6-Dl基因的基因型为Del ; (a4)检测或辅助检测待测小麦的TaCWl-4A基因的基因型的方法，包括如下步骤：以所 述待测小麦的基因组DNA为模板，采用权利要求7所述的试剂盒进行PCR扩增，将所得扩增 产物进行荧光信号扫描，采用Kluster Caller软件对扫描数据进行分析，根据分析结果按 照如下确定所述待测小麦的TaCWl-4A基因的基因型：若所述待测小麦的扩增产物的荧光 信号数据经Kluster Caller软件分析呈现蓝色，则所述待测小麦的TaCWl-4A基因的基因 型为CC ;若所述待测小麦的扩增产物的荧光信号数据经Kluster Caller软件分析呈现红 色，则所述待测小麦的TaCWl-4A基因的基因型为TT ;若所述待测小麦的扩增产物的荧光信 号数据经Kluster Caller软件分析呈现绿色，则所述待测小麦的TaCWl-4A基因的基因型 为CT ; (a5)检测或辅助检测待测小麦的TaGS-Dl基因的基因型的方法，包括如下步骤：以所 述待测小麦的基因组DNA为模板，采用权利要求7所述的试剂盒进行PCR扩增，将所得扩增 产物进行荧光信号扫描，采用Kluster Caller软件对扫描数据进行分析，根据分析结果按 照如下确定所述待测小麦的TaGS-Dl基因的基因型：若所述待测小麦的扩增产物的荧光信 号数据经Kluster Caller软件分析呈现蓝色，则所述待测小麦的TaGS-Dl基因的基因型为 GG ;若所述待测小麦的扩增产物的荧光信号数据经Kluster Caller软件分析呈现红色，则 所述待测小麦的TaGS-Dl基因的基因型为TT ;若所述待测小麦的扩增产物的荧光信号数据 经Kluster Caller软件分析呈现绿色，则所述待测小麦的TaGS-Dl基因的基因型为GT ; (a6)检测或辅助检测待测小麦的TaGASR7-Al基因的基因型的方法，包括如下步骤：以 所述待测小麦的基因组DNA为模板，采用权利要求7所述的试剂盒进行PCR扩增，将所得扩 增产物进行荧光信号扫描，采用Kluster Caller软件对扫描数据进行分析，根据分析结果 按照如下确定所述待测小麦的TaGASR7-Al基因的基因型：若所述待测小麦的扩增产物的 荧光信号数据经Kluster Caller软件分析呈现蓝色，则所述待测小麦的TaGASR7-Al基因 的基因型为Ins ;若所述待测小麦的扩增产物的焚光信号数据经Kluster Caller软件分析 呈现红色，则所述待测小麦的TaGASR7-Al基因的基因型为Del ; (a7)检测或辅助检测待测小麦的I-FEH w3基因的基因型的方法，包括如下步骤：以所 述待测小麦的基因组DNA为模板，采用权利要求7所述的试剂盒进行PCR扩增，将所得扩增 产物进行荧光信号扫描，采用Kluster Caller软件对扫描数据进行分析，根据分析结果按 照如下确定所述待测小麦的I-FEH w3基因的基因型：若所述待测小麦的扩增产物的荧光 信号数据经Kluster Caller软件分析呈现蓝色，则所述待测小麦的I-FEH w3基因的基因 型为CC ;若所述待测小麦的扩增产物的荧光信号数据经Kluster Caller软件分析呈现红 色，则所述待测小麦的I-FEH w3基因的基因型为TT ;若所述待测小麦的扩增产物的荧光信 号数据经Kluster Caller软件分析呈现绿色，则所述待测小麦的I-FEH w3基因的基因型 为CT ; (a8)检测或辅助检测待测小麦的Pinb2-v2基因的基因型的方法，包括如下步骤：以所 述待测小麦的基因组DNA为模板，采用权利要求7所述的试剂盒进行PCR扩增，将所得扩增 产物进行荧光信号扫描，采用Kluster Caller软件对扫描数据进行分析，根据分析结果按 照如下确定所述待测小麦的Pinb2-v2基因的基因型：若所述待测小麦的扩增产物的荧光 信号数据经Kluster Caller软件分析呈现蓝色，则所述待测小麦的Pinb2-v2基因的基因 型为Ins ;若所述待测小麦的扩增产物的荧光信号数据经Kluster Caller软件分析呈现红 色，则所述待测小麦的Pinb2-v2基因的基因型为Del ; (a9)检测或辅助检测待测小麦的Psy-Bl基因的基因型的方法，包括如下步骤：以所述 待测小麦的基因组DNA为模板，采用权利要求7所述的试剂盒进行PCR扩增，将所得扩增产 物进行荧光信号扫描，采用Kluster Caller软件对扫描数据进行分析，根据分析结果按照 如下确定所述待测小麦的Psy-Bl基因的基因型：若所述待测小麦的扩增产物的荧光信号 数据经Kluster Caller软件分析呈现蓝色，则所述待测小麦的Psy-Bl基因的基因型为TT ; 若所述待测小麦的扩增产物的荧光信号数据经Kluster Caller软件分析呈现红色，则所述 待测小麦的Psy-Bl基因的基因型为CC ;若所述待测小麦的扩增产物的荧光显示绿色，则所 述待测小麦的Psy-Bl基因的基因型为CT ; (alO)检测或辅助检测待测小麦的Psyl-Dl基因的基因型的方法，包括如下步骤：以所 述待测小麦的基因组DNA为模板，采用权利要求7所述的试剂盒进行PCR扩增，将所得扩增 产物进行荧光信号扫描，采用Kluster Caller软件对扫描数据进行分析，根据分析结果按 照如下确定所述待测小麦的Psyl-Dl基因的基因型：若所述待测小麦的扩增产物的荧光信 号数据经Kluster Caller软件分析呈现蓝色，则所述待测小麦的Psyl-Dl基因的基因型为 CC ;若所述待测小麦的扩增产物的荧光信号数据经Kluster Caller软件分析呈现红色，则 所述待测小麦的Psyl-Dl基因的基因型为TT ;若所述待测小麦的扩增产物的荧光信号数据 经Kluster Caller软件分析呈现绿色，则所述待测小麦的Psyl-Dl基因的基因型为CT ; (all)检测或辅助检测待测小麦的TaZds-Al基因的基因型的方法，包括如下步骤：以 所述待测小麦的基因组DNA为模板，采用权利要求7所述的试剂盒进行PCR扩增，将所得扩 增产物进行荧光信号扫描，采用Kluster Caller软件对扫描数据进行分析，根据分析结果 按照如下确定所述待测小麦的TaZds-Al基因的基因型：若所述待测小麦的扩增产物的荧 光信号数据经Kluster Caller软件分析呈现蓝色，则所述待测小麦的TaZds-Al基因的基 因型为GG ;若所述待测小麦的扩增产物的荧光信号数据经Kluster Caller软件分析呈现 红色，则所述待测小麦的TaZds-Al基因的基因型为CC ;若所述待测小麦的扩增产物的荧光 信号数据经Kluster Caller软件分析呈现绿色，则所述待测小麦的TaZds-Al基因的基因 型为CG ; (al2)检测或辅助检测待测小麦的Talyce-Bl基因的基因型的方法，包括如下步骤：以 所述待测小麦的基因组DNA为模板，采用权利要求7所述的试剂盒进行PCR扩增，将所得扩 增产物进行荧光信号扫描，采用Kluster Caller软件对扫描数据进行分析，根据分析结果 按照如下确定所述待测小麦的Talyce-Bl基因的基因型：若所述待测小麦的扩增产物的荧 光信号数据经Kluster Caller软件分析呈现蓝色，则所述待测小麦的Talyce-Bl基因的基 因型为GG ;若所述待测小麦的扩增产物的荧光信号数据经Kluster Caller软件分析呈现 红色，则所述待测小麦的Talyce-Bl基因的基因型为CC ;若所述待测小麦的扩增产物的荧 光信号数据经Kluster Caller软件分析呈现绿色，则所述待测小麦的Talyce-Bl基因的基 因型为CG ; (al3)检测或辅助检测待测小麦的TaPds-Bl基因的基因型的方法，包括如下步骤：以 所述待测小麦的基因组DNA为模板，采用权利要求7所述的试剂盒进行PCR扩增，将所得扩 增产物进行荧光信号扫描，采用Kluster Caller软件对扫描数据进行分析，根据分析结果 按照如下确定所述待测小麦的TaPds-Bl基因的基因型：若所述待测小麦的扩增产物的荧 光信号数据经Kluster Caller软件分析呈现蓝色，则所述待测小麦的TaPds-Bl基因的基 因型为CC ;若所述待测小麦的扩增产物的荧光信号数据经Kluster Caller软件分析呈现 红色，则所述待测小麦的TaPds-Bl基因的基因型为GG ;若所述待测小麦的扩增产物的荧光 信号数据经Kluster Caller软件分析呈现绿色，则所述待测小麦的TaPds-Bl基因的基因 型为CG ; (al4)检测或辅助检测待测小麦的Glu-Bl基因的基因型的方法，包括如下步骤：以所 述待测小麦的基因组DNA为模板，采用权利要求7所述的试剂盒进行PCR扩增，将所得扩增 产物进行荧光信号扫描，采用Kluster Caller软件对扫描数据进行分析，根据分析结果按 照如下确定所述待测小麦的Glu-Bl基因的基因型：若所述待测小麦的扩增产物的荧光信 号数据经Kluster Caller软件分析呈现蓝色，则所述待测小麦的Glu-Bl基因的基因型为 GG ;若所述待测小麦的扩增产物的荧光信号数据经Kluster Caller软件分析呈现红色，则 所述待测小麦的Glu-Bl基因的基因型为CC ;若所述待测小麦的扩增产物的荧光信号数据 经Kluster Caller软件分析呈现绿色，则所述待测小麦的Glu-Bl基因的基因型为CG。9. 权利要求8所述方法在培育具有如下性状中至少一种的小麦品种中的应用： (a) 千粒重和/或广量提尚； (b) 籽粒长度增加； (c) 籽粒硬度指数提高； (d) 多酚氧化酶活性降低和/或小麦制品褐变减少； (e) 过氧化物酶活性提高和/或面粉白度提高和/或面团粘性降低； (f) 黄色素含量提尚； (g) 面筋强度提高。10. -种培育小麦品种的方法，为如下（C)或⑶： (C) 由如下（bl)，以及如下（b2)-(b7)这6种中的至少一种组成： (D) 为如下（bl); (bl)培育多酚氧化酶活性降低和/或小麦制品褐变减少的小麦品种的方法，包括采用 通过权利要求8所述的方法检测得到的Ppo-Dl基因的基因型为CC的小麦作为亲本进行育 种的步骤； (b2)培育过氧化物酶活性提高和/或面粉白度提高和/或面团粘性降低的小麦品种的 方法，包括采用通过权利要求8所述的方法检测得到的TaPod-Al基因的基因型为AA的小 麦作为亲本进行育种的步骤； (b3)培育千粒重和/或产量提高的小麦品种的方法，包括采用通过权利要求8所述的 方法检测得到的TaCKX6-Dl基因的基因型为Del，和/或TaCWl-4A基因的基因型为CC，和 /或TaGS-Dl基因的基因型为GG，和/或I-FEH w3基因的基因型为TT的小麦作为亲本进 行育种的步骤； (b4)培育籽粒长度增加的小麦品种的方法，包括采用通过权利要求8所述的方法检测 得到的TaGASR7-Al基因的基因型为Ins的小麦作为亲本进行育种的步骤； (b5)培育籽粒硬度指数提高的小麦品种的方法，包括采用通过权利要求8所述的方法 检测得到的Pinb2-v2基因的基因型为Del的小麦作为亲本进行育种的步骤； (b6)培育黄色素含量较高的小麦品种的方法，包括采用通过权利要求8所述的方法检 测得到的Psy-Bl基因的基因型为TT，和/或Psyl-Dl基因的基因型为CC，和/或TaZds-Al 基因的基因型为GG，和/或Talyce-Bl基因的基因型为CC，和/或TaPds-Bl基因的基因型 为GG的小麦作为亲本进行育种的步骤； (b7)培育面筋强度提高的小麦品种的方法，包括采用通过权利要求8所述的方法检测 得到的Glu-Bl基因的基因型为CC的小麦作为亲本进行育种的步骤。
【专利摘要】本发明公开了一种基于KASP技术检测小麦功能基因的成套引物及其应用。本发明所提供的成套引物是针对小麦的14个功能基因分别设计的共14组KASP引物，其具体的核苷酸序列为序列表中序列1-42。利用本发明所提供的成套KASP引物，可以快速检测不同小麦品种功能基因，其检测方法简便、快捷，检测结果准确可靠。本发明对利用分子标记辅助选择小麦品种具有重要的理论意义和经济价值。
【IPC分类】C12N15/11, C12Q1/68
【公开号】CN105112546
【申请号】CN201510613432
【发明人】何中虎, 阿韦斯·拉希德, 卢家玲, 夏先春
【申请人】中国农业科学院作物科学研究所
【公开日】2015年12月2日
【申请日】2015年9月23日