苯并三氮唑类化合物、制备方法和其医药用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药领域，具体涉及涉及一类小分子苯并三氮唑类化合物、药学上可 接受的盐及其医药用途。 技术背景
[0002] 癌症长期以来威胁着人类的健康，与糖尿病、心脑血管疾病并称为人类健康的三 大杀手。对于癌症，目前的主要治疗手段分为外科手术治疗、放疗和化疗。虽然，对于早期 的癌症患者，可以通过手术的方法切除肿瘤，但是到中晚期之后，癌细胞就会扩散，相应的 手术切除方法也不会达到很好的治疗效果。
[0003] 随着人类基因组计划及测序技术的飞速发展，通过对人类肿瘤样本进行全基因组 测序分析，可以准确地获取肿瘤基因组复杂的遗传信息，对肿瘤的发生发展及其遗传复杂 性获得更多的认识，并为肿瘤的分子分型和患者的个性化治疗提供有利信息。肿瘤是一种 基因病这一观点现已被广泛接受，肿瘤的发生是由多个相关基因（高频突变和低频突变 的基因）共同突变引起的，包括癌基因的激活表达和抑癌基因的失活，这也是肿瘤细胞无 限制生长的分子基础。虽然肿瘤细胞中存在大量不同类型的基因突变，但只有少数基因 (15-20个）的突变才能开启肿瘤发生的进程。在人类众多的癌基因中，RAS是肿瘤中突变 概率最高的基因家族之一。据统计RAS突变肿瘤约占人类所有恶性肿瘤总数的三分之一， 且其频发于肺癌，结肠癌和胰腺癌中，这三类肿瘤和乳腺癌一起构成人类四大致死性癌症。 可见RAS突变肿瘤危害极大。
[0004] RAS蛋白是原癌基因 RAS的编码产物，为RAS超家族蛋白重要成员之一，是一类分 子量为20~25kDa的单体GTP结合蛋白。RAS蛋白在正常生理状态下通常处于非活化状 态，RAS蛋白的活化受到严格地调控，活化的RAS蛋白在发挥其功能后迅速恢复到非活化状 态，有序地调控下游信号通路，从而维持细胞正常的生长、分化等。但RAS作为原癌基因，一 旦被激活就成了具有致癌活性的癌基因。RAS基因最常见的激活方式是基因的错义突变， 通常发生在12,13和61位密码子上。基因突变导致RAS蛋白空间结构的改变，使RAS处 于与GTP结合的持续活化状态，不断激活下游信号通路，从而导致细胞的增殖失控，产生癌 变。RAS基因家族的三个成员HRAS、NRAS和KRAS，它们在不同的肿瘤类型中突变概率不尽 相同，存在着组织特异性，HRAS常见突变于皮肤（黑色素瘤）和头颈癌中，NRAS常见突变于 造血系统恶性肿瘤中，而KRAS则常见突变于结直肠癌、肺癌（尤其是非小细胞肺癌）及胰 腺癌中。KRAS的突变占所有RAS基因突变的86%，约占人类所有恶性肿瘤的21.6%。在结 肠癌中，KRAS突变肿瘤占到45 %，肺癌中有35 %，而胰腺癌则高达90 %。有研究报道，KRAS 突变能造成某些特定的细胞表现出干细胞特性，而HRAS和NRAS却没有这种功能，这一特性 也被认为是KRAS较HRAS和NRAS在人类肿瘤中有更高突变概率的可能原因，KRAS基因的 突变更利于癌症的发生。
[0005] RAS基因作为重要的癌基因自发现以来已被研究了三十多年，其蛋白结构、功能、 活化机制及上下游信号通路也日益明确；RAS基因，尤其是KRAS基因，在人类肿瘤中的高突 变率及其在肿瘤发生发展中重要的推动作用使其成为肿瘤分子靶向治疗的一个理想的靶 点，也是肿瘤细胞中主要的依赖性癌基因。然而迄今为止临床上尚无有效治疗RAS突变肿 瘤的小分子抑制剂。因此针对RAS突变进行药物开发和肿瘤治疗具有重要意义。
[0006] 本发明以等基因细胞系T29和KTlP(KRASm)为筛选模型，利用协同致死模型经过 对大量化合物的生物活性筛选后创新性地发现一类含有苯并三氮唑类结构骨架的小分子 有机化合物及其药学上可接受的盐具有特异性抑制RAS突变肿瘤细胞存活的能力，并在此 基础上设计并合成了一类特异性靶向RAS突变的抗癌小分子活性化合物，经过后续深入研 究发现，本发明化合物具有很好的抑制RAS突变恶性肿瘤生长和转移活性，并且对RAS突变 的肿瘤细胞也具有优异的选择性。这类化学结构新颖的活性化合物可以用于治疗由于RAS 突变引起的肿瘤生长和转移，并有希望成为肿瘤治疗的一类候选药物。该类化合物或含有 该类化合物的药物组合物在制备治疗靶向于RAS基因突变的肿瘤药物中的用途，以及用于 制备预防和治疗各种由于RAS基因突变引发的肿瘤发生和发展，包括肿瘤生长、浸润和转 移药物中的用途。
【发明内容】
[0007] 本发明的第一个目的在于提供一类结构新颖的苯并三氮唑类化合物可作为预防 和治疗由RAS基因突变引起的抗肿瘤先导化合物，包括其药学上可接受的盐等。
[0008] 本发明合成结构如式（I)所示的一类苯并三氮唑或苯并异咪唑化合物或药学上 可接受的盐：
[0010] 其中：
[0011] m和P指链状亚甲基的个数，分别为0、1、2、3或者4。
[0012] η指羰基的个数，分别为0或者1个。
[0013] R1指苯环上的取代基，取自下列基团：氢、甲基、甲氧基、卤素、苄氧基、氰基、酰胺 基。
[0014] R2取自下列基团：氰基、ONO2、卤素、羟基、羧基、甲氧基、环丙烷基、呋喃基、乙烯 基、乙烯基羧基、三氟甲基、5-溴呋喃基、苯基、吡啶基、甲苯基、甲磺酰苯基、C1-C3烷氧基 苯基、环戊氧基苯基、卤代苯基、硝基苯基、苄氧基苯基、羟基苯基。
[0015] 本发明所示结构式中，当R2为取代苯基，m = 0时，其由下述结构式（II)表示：
[0018] p指链状亚甲基的个数，分别为〇、1、2、3或者4。
[0019] η指羰基的个数，分别为0或者1个。
[0020] R1指苯环上的取代基，取自下列基团：氢、甲基、甲氧基、卤素、苄氧基、氰基、酰胺 基。
[0021] R3取自下列基团：氢、羟基、甲基、卤素、C1-C3烷氧基、环戊氧基、三氟甲基、苄氧 基、硝基、甲磺酰基。
[0022] 本发明提供苯并三氮唑类化合物或其类似物或药学上可接受的盐，包括：
[0023] 5-溴呋喃-2-羧酸[2- (4-甲氧基苯基）-2Η-苯并三唑-5-基]-酰胺，
[0024] 5-溴呋喃-2-羧酸[2- (4-氯苯基）-2Η-苯并三唑-5-基]-酰胺，
[0025] 5-溴呋喃-2-羧酸[2- (4-溴苯基）-2Η-苯并三唑-5-基]-酰胺，
[0026] 5-溴呋喃-2-羧酸[2- (4-甲基苯基）-2Η-苯并三唑-5-基]-酰胺，
[0027] 5-溴呋喃-2-羧酸[2_(3, 5-二甲基苯基）-2Η_苯并三唑-5-基]-酰胺，
[0028] 5-溴呋喃-2-羧酸[2- (4-苄氧基苯基）-2Η-苯并三唑-5-基]-酰胺，
[0029] 5-溴呋喃-2-羧酸[2- (4-乙酰氨基苯基）-2Η-苯并三唑-5-基]-酰胺，
[0030] 5-溴呋喃-2-羧酸[2- (4-氰基苯基）-2Η-苯并三唑-5-基]-酰胺，
[0031] 5-溴呋喃-2-羧酸[2-(4-氟苯基）-2Η-苯并三唑-5-基]-酰胺，
[0032] 5-溴呋喃-2-羧酸[2-(3, 4, 5-三甲氧基苯基）-2Η-苯并三唑-5-基]-酰胺，
[0033] 5-溴呋喃-2-羧酸[2-苯基-2Η-苯并三唑-5-基]-酰胺，
[0034] 5-溴呋喃-2-羧酸[2-苄基-2Η-苯并三唑-5-基]-酰胺，
[0035] 5-溴呋喃-2-羧酸[1-(3-苯基丙基）-IH-苯并三唑-5-基]-酰胺，
[0036] 1-苯基羧酸[2-(4-甲氧基苯基）-2H_苯并三唑-5-基]-酰胺，
[0037] 1-(2-吡啶基）_羧酸[2-(4-甲氧基苯基）-2H_苯并三唑-5-基]-酰胺，
[0038] 1-(2,3,4_三甲氧基苯基）_羧酸[2-(4-甲氧基苯基）-2H_苯并三唑-5-基]-酰 胺，
[0039] 1-(2,4_二甲氧基苯基）_羧酸[2-(4-甲氧基苯基）-2H_苯并三唑-5-基]-酰 胺，
[0040] 2-(4-碘苯基）-N-[2-(4-甲氧基苯基）-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
[0041] 2-(4-溴苯基）-N-[2-(4-甲氧基苯基）-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
[0042] 2-(4-氯苯基）-N-[2-(4-甲氧基苯基）-2H_苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
[0043] 2- (4-氟-苯基）-N- [2- (4-甲氧基-苯基）-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
[0044] 2-(2-溴苯基）-N-[2-(4-甲氧基苯基）-2H_苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
[0045] 2-(4-甲基苯基）-N-[2-(4-甲氧基苯基）-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
[0046] 2-(4-甲基磺酰苯基）-N-[2-(4-甲氧基苯基）-2H_苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
[0047] 2-(4-硝基苯基）-N-[2-(4-甲氧基苯基）-2H_苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
[0048] 2-(4-甲氧基苯基）-N-[2-(4-甲氧基苯基）-2H_苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
[0049] 2- (3, 4, 5-三甲氧基苯基）-N- [2- (4-甲氧基苯基）-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰 胺，
[0050] 4-溴-N- [2- (4-甲氧基苯基）-2H-苯并三唑-5-基]-丁酰胺，
[0051] 3-((2-(4-甲氧基苯基-2H-苯并三唑-5-基）氨基）-3-氧代乙酸，
[0052] 2-溴-N-[2-(4-甲氧基苯基）-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
[0053] 2-溴-N-[2-(3, 4, 5-三甲氧基苯基）-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
[0054] 2-氰基-N-[2-(4-甲氧基苯基）-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
[0055] 2-甲氧基-N-[2-(4-甲氧基苯基）-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
[0056] 2-(2-甲氧基乙基）-N-[2-(4-甲氧基苯基）-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
[0057] 2-羟基-N-[2-(4-甲氧基苯基）-2H_苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
[0058] 1-环丙基羧酸-[2-(4-甲氧基苯基）-2H_苯并三唑-5-基]-酰胺，
[0059] 2-(4-苄氧基苯基）-N-[2-(4-甲氧基苯基）-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
[0060] 2-(4-羟基苯基）-N-[2-(4-甲氧基苯基）-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
[0061] 2- (4-异丙氧基苯基）-N- [2- (4-甲氧基苯基）-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
[0062] 2-(4-丙氧基苯基）-N-[2-(4-甲氧基苯基）-2H_苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
[0063] 2-(4-环戊氧基苯基）-N-[2-(4-甲氧基苯基）-2H_苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
[0064] 5- (N-2-苯基乙基氨基）-2- (4-甲氧基苯基）-2H-苯并三唑，
[0065] 5-(^3-苯基丙基氨基）-2-(4-甲氧基苯基）-2!1-苯并三唑，
[0066] 5- (N-4-甲氧基苄基氨基）-2- (4-甲氧基苯基）-2H-苯并三唑，
[0067] 5- (N-2-甲氧基苄基氨基）-2- (4-甲氧基苯基）-2H-苯并三唑，
[0068] 5- (N-2- (4-甲氧基苯基乙基）氨基）-2- (4-甲氧基苯基）-2H-苯并三唑，
[0069] 5- (N-2, 4-二甲氧基苄基氨基）-2- (4-甲氧基苯基）-2H-苯并三唑，
[0070] 5- (N-2, 4, 6-三甲氧基苄基氨基）-2- (4-甲氧基苯基）-2H-苯并三唑，
[0071] 5-(N-4-三氟甲基苄基氨基）-2-(4-甲氧基苯基）-2H-苯并三唑，
[0072] 5- (N-3-溴苄基氨基）-2- (4-甲氧基苯基）-2H-苯并三唑，
[0073] 5- (N-2- (3, 4, 5-三甲氧基苯基）乙基氨基）-2- (4-甲氧基苯基）-2H-苯并三唑，
[0074] 5- (N- (2-呋喃甲基）氨基）-2- (4-甲氧基苯基）-2H-苯并三唑，
[0075] 1-氯-N-[2-(4-甲氧基苯基）-2H_苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
[0076] 3-氯-N- [2- (4-甲氧基苯基）-2H-苯并三唑-5-基]-丁酰胺，
[0077] 3- [2- (4-甲氧基苯基）-2H-苯并三唑-5-基氨基甲酰基]-丙烯酸，
[0078] 三氟甲基-N-[2-(4-甲氧基苯基）-2H_苯并三唑-5-基]-乙酰胺，或
[0079] 硝酸2- ((2- (4-甲氧基苯基）-2H-苯并三唑-5-基）氨基-2-氧代乙基酯。
[0080] 本发明还提出了由所述苯并三氮唑类小分子有机化合物与酸形成的酸加成盐；优 选地，所述酸为盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、乙酸、酒石酸、水杨酸、梓檬酸、甲磺酸、对甲苯磺 酸、乳酸、丙酮酸、马来酸、琥珀酸之任意的一种。
[0081] 本发明还提出了一种制备所述苯并三氮唑类小分子有机化合物的方法，包括以下 步骤：
[0082] 方法一：
[0083]
[0084] (1)由4-硝基邻苯二胺在亚硝酸钠与乙酸存在下产生固体的5-硝基苯并三氮 唑；
[0085] (2)由步骤（1)得到的5-硝基苯并三氮唑与各种卤代烷烃在碱性条件下发生取代 反应，经分离后得到5-硝基-2-取代基-2H-苯并三唑；
[0086] (3)由步骤（2)得到的5-硝基-2-取代基-2H-苯并三唑在铁粉（或者锌粉、镁 粉）及盐酸（或者乙酸）的存在下生成取代的5-氨基-2H-苯并三氮唑关键中间体； [0087] (4)由步骤（3)得到的取代的5-氨基-2H-苯并三氮唑关键中间体与各种酸、酰卤 或者酸酐偶联形成所述最终产物苯并三氮唑类化合物。
[0090] (1)由各种取代芳香胺与亚硝酸钠在酸性条件下形成重氮盐；
[0091] (2)由步骤（1)得到的生成重氮盐与间苯二胺形成偶氮中间体；
[0092] (3)由步骤⑵得到的偶氮中间体在硫酸铜、氨水以及吡啶的存在下生成取代的 5-氨基-2H-苯并三氮唑关键中间体；
[0093] (4)由步骤（3)得到的取代的5-氨基-2H-苯并三氮唑关键中间体与各种酸、酰卤 或者酸酐偶联形成所述最终产物苯并三氮唑类化合物；
[0094] 所述酸为盐酸、乙酸。
[0095] 本发明还提出了一种制备所述的苯并三唑类化合物的药学上可接受的盐的方法， 其特征在于，所述方法包括以下步骤：
[0096] (1)将苯并三氮唑类化合物类化合物溶于相应的有机溶剂（甲醇、乙醇、丙酮、乙 腈、乙醚、二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、二氧六环、乙二醇二甲醚）中；
[0097] (2)将氯化氢、溴化氢、硫酸、磷酸、乙酸、酒石酸、水杨酸、柠檬酸、甲磺酸、对甲苯 磺酸、乳酸、丙酮酸、马来酸、琥珀酸溶于相应的有机溶剂（甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、乙醚、二 氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、二氧六环、乙二醇二甲醚