Sf9细胞在Grace+10%FBS中 生长曲线（右栏）。
[0048] 图2 :化曲Five细胞在IPk41+SM中生长曲线（左栏）与化曲Five细胞在 I化-41+10%FBS中生长曲线（右栏）。
【具体实施方式】 W例实施例1.适合昆虫细胞生长的无血清培养基的配置
[0050] 本发明提供一种适合昆虫细胞生长的无血清培养基及其配制方法，它WGibico 生产的Grace或者IPk41作为基础培养基添加氨基酸、脂类、微量元素、水解物等，所用材 料如无特殊说明均购自sigma公司，具体添加物如下： 阳0川葡萄糖，8g/L; 阳05引心精氨酸，5.49mM; 阳05引 k天冬酷胺，3. 9mM;
[0054]心甘氨酸，12. 89mM; 阳05引心组氨酸，2. 77mM;
[0056] k异亮氨酸，8. 41mM;
[0057] 心亮氨酸，10.4mM; 阳05引 心赖氨酸，7. 59mM;
[0059] 心蛋氨酸，0. 49mM;
[0060] 心苏氨酸，4. 66mM;
[0061] 心色氨酸，0.911111; W62] 心结氨酸，4. 52mM; 阳06引心脯氨酸，8. 22mM;
[0064] 棉巧水解物800mg/L; 阳0化]大米水解物3000mg/L;
[0066] 麦教水解物300mg/L;
[0067] 重组膜岛素25mg/L; W側丙酬酸钢60mg/L;
[0069] 亚砸酸钢 0.Olmg/L;
[0070] 巧樣酸铁 0. 5mg/L; 阳0川亚油酸0. 2mg/L; 阳0巧大豆卵憐脂45mg/L; 阳07；3] 胆固醇20mg/L;
[0074] 环庚Ξ締酪酬6mg/L; 阳0巧]F-68 200mg/L;
[0076] 还原型谷脫甘肤0. 04mg/L;
[0077] 心谷氨酷胺7g/L。
[0078] 将W上的添加物自命名为SM。
[0079] 其中棉巧水解物"、"麦教水解物及"大米水解物"在本领域中有公认的含义， 就是将棉巧，麦教，大米，经过特殊的工艺，包括酶消化、酸处理等手段进行处理后，提取适 合细胞生长组分，目前均有商品化试剂，本发明具体使用的是Difico公司生产的水解物。
[0080] Grace和IPk41，是成分公开的培养基，目前均有商品化试剂，本发明具体使用的 是LifeTechnology公司生产的基础培养基。
[0081] 培养基的配制方法包括如下工艺步骤：
[0082] S1 :在容器中加注射用水至总体积的90%，将一袋Grace或者是IPk41培养基全 部倒入容器中，用少量注射用水将袋内残留培养基洗下并入容器，轻微揽拌溶解；
[0083] S2 :将上述组分依次加入到溶液中，轻微揽拌溶解；
[0084] S3 :轻微揽拌至完全溶解，加注射用水至总体积的100% ; 柳8日]S4 :用Imol/L氨氧化钢溶液或Imol/L盐酸溶液调抑至6. 2 ;
[0086] S5 :用0. 2μm滤膜正压过滤除菌；
[0087] S6 :溶液配制完成后应在2°C~8°C下密闭避光保存。
[0088] 实施例2.本发明的培养基用于细胞培养的对比实验对比实验分为两组：
[0089] 试验一：WSf-9细胞在Grace+SM，Grace+10%FBS中的生长情况进行比较试验 (如图1所示）；
[0090] 试验二：W化曲Five细胞在I化-41+SM，I化-41+10%FBS的实验情况进行比较 试验（如图2所示）。
[0091] 细胞生长的具体情况如表1所示。
[0092] 可见，Sf-9细胞和化曲Five细胞在Grace+SM及I化-41+SM中的生长的峰值浓度 分别为600*104个/ml和690*104个/ml，且细胞活力都在95%W上；而作为对照组的Sf-9 细胞在Grace+10%FBS培养基中的峰值浓度为520*104个/ml，细胞活力最低值为93. 2%; 化曲Five细胞在I化-41+10%FBS培养基中峰值浓度为580*104个/ml,且最低细胞活力 为90.6%。
[0093] 表1.Sf-9细胞和化曲Five细胞在不同培养基中生长情况
[0094]
[0095] 实验表面本发明的培养基对常规培养基进行添加，通过氨基酸、脂类、微量元素、 水解物成分的添加明显促进了细胞生长，缩短倍增时间，而且细胞活力也明显高于对照组。 相比较传统的Grace和IPk41培养基加血清培养，本发明培养基不仅去除了血清的添加， 而且细胞生长密度更高，细胞活力更好，所W本发明的培养基更适合于昆虫细胞，包括Sf-9 细胞和化曲Five细胞的无血清悬浮培养。
[0096] W上所述，仅为本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何形式上和实质上的限 审IJ，凡熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用W上所掲示的技 术内容，而作出的些许更动、修饰与演变的等同变化，均为本发明的等效实施例；同时，凡依 据本发明的实质技术对W上实施例所作的任何等同变化的更动、修饰与演变，均仍属于本 发明的技术方案的范围内。
【主权项】
1. 一种适合昆虫细胞培养的无血清培养基，其特征在于，在常规Grace或者是IPL-41 培养基的基础上，添加成分如下： 葡萄糖3-15g/L， L-精氨酸2-9mM， L-天冬酰胺l_8mM， L_甘氨酸5-14mM, L-组氨酸2. 77mM, L_异亮氨酸8.41mM, L-亮氨酸5-llmM, L-赖氨酸4-9mM, L-蛋氨酸0· 1-0. 7mM, L-苏氨酸l_9mM， L-色氨酸0. 2-1. 4mM, L-结氨酸，2-5mML-脯氨酸7-10mM， 棉籽水解物300-3000mg/L， 大米水解物300-3000mg/L， 麦麸水解物300-3000mg/L， 重组胰岛素2-25mg/L， 丙酮酸钠50-300mg/L， 亚硒酸钠 〇· 0010. 04mg/L, 柠檬酸铁〇.〇5-lmg/L， 亚油酸0· 1-0. 3mg/L, 大豆卵磷脂l〇-65mg/L, 胆固醇5-25mg/L, 环庚三稀酸酮〇· l-6mg/L, F-68 100-600mg/L, 还原型谷胱甘肽0. 04-0. 5mg/L, L-谷氨酰胺3_15g/L。2.根据权利要求1中所述的培养基，其中，昆虫细胞为Sf9和High Five细胞。3. 权利要求1所述培养基的配制方法，所述配制方法包括如下工艺步骤： 51 :在容器中加注射用水至总体积的90%，将一袋Grace或者是IPL-41培养基全部倒 入容器中，用少量注射用水将袋内残留培养基洗下并入容器，轻微搅拌溶解； 52 :将上述组分依次加入到溶液中，轻微搅拌溶解； 53 :轻微搅拌至完全溶解，加注射用水至总体积的100%; 54 :用lmol/L氢氧化钠溶液或lmol/L盐酸溶液调pH至6. 2; 55 :用0. 2 μ m滤膜正压过滤除菌； 56 :溶液配制完成后应在2°C~8°C下密闭避光保存。4. 根据权利要求3的配置方法，所述S1步骤中注射用水的水温为30°C。
【专利摘要】本发明涉及生物制药技术领域，具体涉及一种适合对昆虫细胞(主要包括Sf9和High？Five细胞)的无血清无动物源培养的添加物的研制。本发明以传统培养基Grace或者是IPL-41作为基础，添加有利于昆虫细胞生长的添加物，在培养昆虫细胞的过程当中，能起到代替血清的功能，并且价格低廉，昆虫细胞能够获得240h的连续生长，细胞活力能保持在95％以上。
【IPC分类】C12N5/07
【公开号】CN105255811
【申请号】CN201510760016
【发明人】赵峻岭, 苏广华, 黄新朋
【申请人】内蒙古金源康生物工程有限公司
【公开日】2016年1月20日
【申请日】2015年11月9日