基-3-甲基咪唑和1-乙基-3甲基咪唑醋酸盐组成，混合比例为6重量份的氯化1-烯丁基-3-甲基咪唑与1重量份的1-乙基-3甲基咪唑醋酸盐相混合；真空条件下加热至90°C，带搅拌，加热4h至完全溶解为米黄色液体，观察不到白色的羊毛。
[0029](2)将经步骤(1)处理的羊毛溶解液，放入分液体漏斗中，加入10ml缓冲液，缓冲液配置是取2重量份0.2mol/l的磷酸氢二钾溶液和4重量份的0.lmol/1柠檬酸混合，并加入余量的去离子水，两者混合后的缓冲液PH = 3.94，加入缓冲液后在温度20-30°C条件下，在超生波处理器中处理20min。
[0030](3)经步骤(2)处理的溶液进行离心分离获得羊毛角蛋；
[0031](4)分离出下层米黄色液体，再向分离出的液体中加入缓冲液，循环步骤(2)和步骤(3)，重复萃取6次，用离心机离心得到固体，即为角蛋白。
[0032]采用上述方案角蛋白回收率为92.8%，分子量分布为121.6KD。最后分离出来的米黄色液体为混合离子液体可以重复使用。
[0033]实施例3
[0034]本实施例所述的一种羊毛角蛋白的提取方法，包括以下步骤:
[0035](1)将羊毛扯松，加入复配离子液体，羊毛与复配离子液体的比重为lg: 10ml。所述复配离子液体由氯化1-烯丁基-3-甲基咪唑和1-乙基-3甲基咪唑醋酸盐组成，混合比例为8重量份的氯化1-烯丁基-3-甲基咪唑与4重量份的1-乙基-3甲基咪唑醋酸盐相混合；真空条件下加热至100°C，带搅拌，加热4h至完全溶解为米黄色液体，观察不到白色的羊毛。
[0036](2)将经步骤(1)处理的羊毛溶解液，放入分液体漏斗中，加入10ml缓冲液，缓冲液配置是取2重量份0.2mol/l的磷酸氢二钾溶液和4重量份的0.lmol/1柠檬酸混合，并加入余量的去离子水，两者混合后的缓冲液PH = 3.9，加入缓冲液后在温度20-30°C条件下，在超生波处理器中处理30min。
[0037](3)经步骤(2)处理的溶液进行离心分离获得羊毛角蛋；
[0038](4)分离出下层米黄色液体，再向分离出的液体中加入缓冲液，循环步骤⑵和步骤
[0039](3)，重复萃取9次，用离心机离心得到固体，即为角蛋白。
[0040]采用上述方案角蛋白回收率为93.1%，分子量分布为89.2KD。最后分离出来的米黄色液体为混合离子液体可以重复使用。
[0041]实施例4
[0042]本实施例所述的一种羊毛角蛋白的提取方法，包括以下步骤:
[0043](1)将羊毛扯松，加入复配离子液体，羊毛与复配离子液体的比重为lg:10ml。所述复配离子液体由氯化1-烯丁基-3-甲基咪唑和1-乙基-3甲基咪唑醋酸盐组成，混合比例为6重量份的氯化1-烯丁基-3-甲基咪唑与1重量份的1-乙基-3甲基咪唑醋酸盐相混合；真空条件下加热至95°C，带搅拌，加热4h至完全溶解为米黄色液体，观察不到白色的羊毛。
[0044](2)将经步骤(1)处理的羊毛溶解液，放入分液体漏斗中，加入10ml缓冲液，缓冲液配置是取2重量份0.2mol/l的磷酸氢二钾溶液和5重量份的0.lmol/1柠檬酸混合，并加入余量的去离子水，两者混合后的缓冲液PH = 4，加入缓冲液后在温度20-30°C条件下，在超生波处理器中处理60min。
[0045](3)经步骤(2)处理的溶液进行离心分离获得羊毛角蛋；
[0046](4)分离出下层米黄色液体，再向分离出的液体中加入缓冲液，循环步骤(2)和步骤(3)，重复萃取10次，用离心机离心得到固体，即为角蛋白。
[0047]采用上述方案角蛋白回收率为93.3%，分子量分布为107.3KD。最后分离出来的米黄色液体为混合离子液体可以重复使用。
【主权项】
1.一种羊毛角蛋白的提取方法，其特征在于包括以下步骤: (1)将羊毛浸入复配离子液体处理；将松散的羊毛加入到复配离子液体中；真空条件下加热至80-100°C，带搅拌，加热2-4h至羊毛溶解为米黄色液体。 (2)向步骤(1)处理后的液体加入缓冲液； (3)经步骤(2)处理的溶液进行离心分离获得羊毛角蛋； (4)再向分离出的液体中加入缓冲液，循环步骤(2)和步骤(3)，重复萃取4-10次，最终将分离出来的羊毛角蛋全部混合。2.根据权利要求1所述的一种羊毛角蛋白的提取方法，其特征在于:所述复配离子液体由氯化1-烯丁基-3-甲基咪唑和1-乙基-3甲基咪唑醋酸盐组成，混合比例为6-9重量份的氯化1-烯丁基-3-甲基咪唑与1-4重量份的1-乙基-3甲基咪唑醋酸盐相混合。3.根据权利要求1所述的一种羊毛角蛋白的提取方法，其特征在于:所述步骤(2)的缓冲液由磷酸氢二钾溶液与柠檬酸组成。4.根据权利要求1所述的一种羊毛角蛋白的提取方法，其特征在于:所述步骤(2)中在加入缓冲液后，在温度20-30°C条件下，在超生波处理器中处理10-60min。5.根据权利要求3所述的一种羊毛角蛋白的提取方法，其特征在于:缓冲液的配置是取1-2重量份0.2mol/l的磷酸氢二钾溶液和3_5重量份的0.lmol/1柠檬酸混合。6.根据权利要求5所述的一种羊毛角蛋白的提取方法，其特征在于:缓冲液PH=.3.8-4.2 .
【专利摘要】本发明涉及一种羊毛角蛋白的提取方法，包括如下步骤：(1)将羊毛浸入复配离子液体处理；将松散的羊毛加入到复配离子液体中；真空80-100℃真空条件下加热至80-100℃,带搅拌，加热2-4h至羊毛溶解为米黄色液体。(2)向步骤(1)处理后的液体加入缓冲液。经(2)处理的溶液进行离心分离获得羊毛角蛋。(4)再向分离出的液体中加入缓冲液，循环步骤(2)和步骤(3)，重复萃取4-10次，最终将分离出来的羊毛角蛋全部混合。
【IPC分类】C07K1/14, C07K14/47
【公开号】CN105399809
【申请号】CN201511004518
【发明人】夏双双, 徐荣, 马辉, 沈加加
【申请人】嘉兴学院
【公开日】2016年3月16日
【申请日】2015年12月28日