鉴定或辅助鉴定鲟鱼种质的pcr引物对组合物及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物技术领域中鉴定或辅助鉴定鲟鱼种质的PCR引物对组合物及其 应用。
【背景技术】
[0002] 鲟鱼隶属于硬骨鱼纲（Osteichthyes)、福鳍亚纲（Actinopterygii)、硬鳞总 目（Chondrostei)、鲟形目（Acipenseriformes)。鲟鱼类是一种古老的、有重要经济价 值的、大型的亚冷水性鱼类。现存的鲟鱼有2科6属27种，其中鲟科（Acipenseridae) 有鱼皇属（此80)2种、鲟属（4(^口6]1861')18种、|产鲟属（3〇3。11；[1'11711(311118)2种、拟|产鲟属 (Pseudoscaphirhynchus)3种，白鲟科（Polyodontidae)有白鲟属（Psephurus)和匙吻鲟属 (Polyodon)各 1 种。
[0003] 在鲟鱼野生资源日益枯竭的同时，由于其重要的经济价值，市场对鲟鱼产品的需 求却逐年增加，因此人工养殖就成为解决鲟鱼资源保护和市场需求间矛盾的唯一方法。但 是现存的鲟鱼都是多倍体，彼此间极易进行杂交，鲟形目鱼类种间甚至属间的杂交现象极 为普遍，且部分杂交种仍可育，产生三杂交后代，且产生的杂交种很难区分，这为进行鲟鱼 种质鉴定造成了极大的困难。而不同种类鲟鱼及其杂交种的生长速度和适应条件各不相 同，其经济价值也不尽相同。因此，进行正确的鲟鱼种质鉴定是解决因种质混乱引起的纠纷 及提高鲟鱼产业价值的有效途径。
[0004] 由于目前没有规范的养殖引种制度，且国内外也还没有一套完善的鲟鱼种质鉴定 体系，使得鲟鱼种质现状繁杂，极不利于鲟鱼产业的健康发展。为规范鲟鱼贸易以及防止非 法捕捞和交易，急需建立一套完整的鲟鱼种质鉴定体系。
【发明内容】
[0005] 本发明所要解决的技术问题是如何鉴定或辅助鉴定鲟鱼种质，并且区分鲟鱼的父 本和母本。
[0006] 本发明所提供的鉴定或辅助鉴定鲟鱼母本和鲟鱼父本的PCR引物对组合物，其名 称为组合物1，由鉴定或辅助鉴定鲟鱼母本的组合物甲、鉴定或辅助鉴定鲟鱼亲本的组合物 乙和鉴定或辅助鉴定鲟鱼母本是否为小体鲟的组合物丙组成；所述组合物甲、所述组合物 乙和所述组合物丙均独立包装；
[0007] 所述组合物甲由名称为AGF的PCR引物对、名称为ABF的PCR引物对、名称为ABRM 的PCR引物对、名称为DauF的PCR引物对和名称为SchF的PCR引物对组成；
[0008] 所述AGF由序列表中序列27和序列28所示的两条单链DNA组成；
[0009] 所述ABF由序列表中序列27和序列29所示的两条单链DNA组成；
[0010] 所述ABRM由序列表中序列30和序列29所示的两条单链DNA组成；
[0011] 所述DauF由序列表中序列27和序列31所示的两条单链DNA组成；
[0012] 所述SchF由序列表中序列27和序列33所示的两条单链DNA组成；
[0013] 所述组合物乙由名称分别为 Atr-101、Atr-105、Atr-107、Atr-114、Atr-117、 Eu-39、Eu-40、Eu-41、Aful9、Afu22、Afu39、Afu54和Afu68的组成；
[0014] 所述Atr-101由序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA组成；
[0015] 所述Atr-105由序列表中序列3和序列4所示的两条单链DNA组成；
[0016] 所述Atr-107由序列表中序列5和序列6所示的两条单链DNA组成；
[0017] 所述Atr-114由序列表中序列7和序列8所示的两条单链DNA组成；
[0018] 所述Atr-117由序列表中序列9和序列10所示的两条单链DNA组成；
[0019] 所述Eu-39由序列表中序列11和序列12所示的两条单链DNA组成；
[0020] 所述Eu-40由序列表中序列13和序列14所示的两条单链DNA组成；
[0021] 所述Eu-41由序列表中序列15和序列16所示的两条单链DNA组成；
[0022] 所述Aful9由序列表中序列17和序列18所示的两条单链DNA组成；
[0023] 所述Afu22由序列表中序列19和序列20所示的两条单链DNA组成；
[0024] 所述Afu39由序列表中序列21和序列22所示的两条单链DNA组成；
[0025] 所述Afu54由序列表中序列23和序列24所示的两条单链DNA组成；
[0026] 所述Afu68由序列表中序列25和序列26所示的两条单链DNA组成；
[0027] 所述组合物丙由名称为RutF的PCR引物对组成；所述RutF由序列表中序列27和 序列32所示的两条单链DNA组成；
[0028] 所述鲟鱼母本或所述鲟鱼父本为俄罗斯鲟、西伯利亚鲟、达氏鳇、小体鲟和施氏鲟 这五种鲟鱼中的五种、四种、三种、两种或一种。
[0029] 上述鉴定或辅助鉴定鲟鱼母本和鲟鱼父本的PCR引物对组合物中，所述鲟鱼可为 纯种俄罗斯鲟、俄罗斯鲟早X西伯利亚鲟?、俄罗斯鲟早X达氏鳇?、俄罗斯鲟早X小体 鲟?、俄罗斯鲟早X施氏鲟?、纯种西伯利亚鲟、西伯利亚鲟早X俄罗斯鲟?、西伯利亚鲟 早X达氏鳇?、西伯利亚鲟早X小体鲟?、西伯利亚鲟早X施氏鲟?、纯种达氏鳇、达氏 鳇早X俄罗斯鲟?、达氏鳇早X西伯利亚鲟?、达氏鳇早X小体鲟?、达氏鳇早X施氏 鲟?、纯种小体鲟、小体鲟早X俄罗斯鲟?、小体鲟早X西伯利亚鲟?、小体鲟早X达氏 鳇?、小体鲟早X施氏鲟?、纯种施氏鲟、施氏鲟早X俄罗斯鲟?、施氏鲟早X西伯利亚 鲟?、施氏鲟早X达氏鳇?、施氏鲟早X小体鲟?这25种鲟鱼中的任意一种或任意的组 合，具体可为纯种俄罗斯鲟、俄罗斯鲟早X西伯利亚鲟?、俄罗斯鲟早X达氏鳇?、纯种 西伯利亚鲟、西伯利亚鲟早X达氏鳇?、纯种施氏鲟、施氏鲟早X西伯利亚鲟?、小体鲟 早X达氏鱼皇?或施氏鲟早X达氏鱼皇古。
[0030] 上述鉴定或辅助鉴定鲟鱼母本和鲟鱼父本的PCR引物对组合物中，所述组合物 甲、所述组合物乙和组合物丙均可独立包装，在不同的步骤中使用。
[0031] 上述鉴定或辅助鉴定鲟鱼母本和鲟鱼父本的PCR引物对组合物中，所述AGF、所 述ABF、所述ABRM、所述DauF、所述SchF、所述RutF、所述Atr-101、所述Atr-105、所述 Atr-107、所述 Atr-114、所述 Atr-117、所述 Eu_39、所述 Eu_40、所述 Eu_41、所述 Aful9、所 述Afu22、所述Afu39、所述Afu54和所述Afu68均可独立包装。
[0032] 上述鉴定或辅助鉴定鲟鱼母本和鲟鱼父本的PCR引物对组合物中，所述AGF、所 述ABF、所述ABRM、所述DauF、所述SchF、所述RutF、所述Atr-101、所述Atr-105、所述 Atr-107、所述 Atr-114、所述 Atr-117、所述 Eu_39、所述 Eu_40、所述 Eu_41、所述 Aful9、所 述Afu22、所述Afu39、所述Afu54和所述Afu68的单链DNA均可独立包装。
[0033] 上述鉴定或辅助鉴定鲟鱼母本和鲟鱼父本的PCR引物对组合物中，所述Atr-101、 所述 Atr-105、所述 Atr-107、所述 Atr-114、所述 Atr-117、所述 Eu_39、所述 Eu_40、所述 Eu_41、所述Afu 19、所述Afu22、所述Afu39、所述Afu54和所述Afu68均用突光标记物标记， 所述荧光标记物具体可为TAMRA、HEX或FAM。
[0034] 在本发明的一个实施例中，所述Atr-101由TAMRA标记，所述Atr-105由HEX标记， 所述Atr-107由TAMRA标记，所述Atr-114由TAMRA标记，所述Atr-117由TAMRA标记，所 述Eu-39由FAM标记，所述Eu-40由HEX标记，所述Eu-41由FAM标记，所述Aful9由FAM 标记，所述Afu22由FAM标记，所述Afu39由HEX标记，所述Afu54由FAM标记，所述Afu68 由HEX标记。
[0035] 上述鉴定或辅助鉴定鲟鱼母本和鲟鱼父本的PCR引物对组合物中，所述AGF、所述 ABF、所述ABRM、所述DauF和所述SchF这五种引物对可组合在一起组合使用进行多重PCR。 这五种引物对单独使用或组合使用时，本申请的鉴定或辅助鉴定鲟鱼母本和鲟鱼父本的 PCR引物对组合物中这五种引物对的配比没有要求，可以根据待鉴定鲟鱼确定。本申请中， 这五种引物对组合在一起使用时，序列表中序列27、序列28、序列29、序列30、序列31和序 列33所示的单链DNA的摩尔比为0. 65:0. 55:0. 5:0. 5:0. 45:0. 45。
[0036] 上述鉴定或辅助鉴定鲟鱼母本和鲟鱼父本的PCR引物对组合物中，所述RutF的两 条单链DNA的配比可以根据待鉴定鲟鱼确定，本申请中所述RutF的两条单链DNA的摩尔比 为 1 :1。
[0037] 本发明的再一个目的是提供鉴定或辅助鉴定鲟鱼亲本的PCR引物对组合物。
[0038] 本发明所提供的为鉴定或辅助鉴定鲟鱼亲本的PCR引物对组合物，其名称为组合 物2,为下述Bl)-B7)中的任一种组合物：
[0039] B1)所述组合物乙与所述RutF ;
[0040] B2)所述组合物乙与所述AGF ;
[0041] B3)所述组合物乙与所述ABF ;
[0042] B4)所述组合物乙与所述ABRM ;
[0043] B5)所述组合物乙与所述DauF ;
[0044] B6)所述组合物乙与所述SchF ;
[0045] B7)所述组合物乙与所述RutF、所述AGF、所述ABF、所述ABRM、所述DauF、所述 SchF这八种中的任两种、任二种、任四种或任五种；
[0046] 所述鲟鱼亲本为俄罗斯鲟、西伯利亚鲟、达氏鳇、小体鲟和施氏鲟这五种鲟鱼中的 五种、四种、三种、两种或一种。
[0047] 上述鉴定或辅助鉴定鲟鱼亲本的PCR引物对组合物中，所述鲟鱼可为纯种俄罗斯 鲟、俄罗斯鲟早X西伯利亚鲟?、俄罗斯鲟早X达氏鳇?、俄罗斯鲟早X小体鲟?、俄罗 斯鲟早X施氏鲟?、纯种西伯利亚鲟、西伯利亚鲟早X俄罗斯鲟?、西伯利亚鲟早X达氏 鱼皇?、西伯利亚鲟早X小体鲟?、西伯利亚鲟早X施氏鲟?、纯种达氏鱼皇、达氏鱼皇早X俄 罗斯鲟?、达氏鳇早X西伯利亚鲟?、达氏鳇早X小体鲟?、达氏鳇早X施氏鲟?、纯种 小体鲟、小体鲟早X俄罗斯鲟?、小体鲟早X西伯利亚鲟?、小体鲟早X达氏鳇?、小体 鲟早X施氏鲟?、纯种施氏鲟、施氏鲟早X俄罗斯鲟?、施氏鲟早X西伯利亚鲟?、施氏 鲟早X达氏鳇?、施氏鲟早X小体鲟?这25种鲟鱼中的任意一种或任意的组合，具体可 为纯种俄罗斯鲟、俄罗斯鲟早X西伯利亚鲟?、俄罗斯鲟早X达氏鳇?、纯种西伯利亚鲟、 西伯利亚鲟早X达氏鳇?、纯种施氏鲟、施氏鲟早X西伯利亚鲟?、小体鲟早X达氏鳇古 或施氏鲟早X达氏鳇古。
[0048] 上述鉴定或辅助鉴定鲟鱼亲本的PCR引物对组合物中，所述组合物乙可独立包 装。
[0049] 上述鉴定或辅助鉴定鲟鱼亲本的PCR引物对组合物中，所述AGF、所述ABF、所述 ABRM、所述 DauF、所述 SchF、所述 RutF、所述 Atr-101、所述 Atr-105、所述 Atr-107、所述 Atr-114、所述 Atr-117、所述 Eu_39、所述 Eu_40、所述 Eu_41、所述 Aful9、所述 Afu22、所述 Afu39、所述Afu54和所述Afu68均可独立包装。
[0050] 上述鉴定或辅助鉴定鲟鱼亲本的PCR引物对组合物中，所述AGF、所述ABF、所述 ABRM、所述 DauF、所述 SchF、所述 RutF、所述 Atr-101、所述 Atr-105、所述 Atr-107、所述 Atr-114、所述 Atr-117、所述 Eu_39、所述 Eu_40、所述 Eu_41、所述 Aful9、所述 Afu22、所述 Afu39、所述Afu54和所述Afu68的单链DNA均可独立包装。
[0051] 上述鉴定或辅助鉴定鲟鱼亲本的PCR引物对组合物中，所述Atr-101、所述 Atr-105、所述 Atr-107、所述 Atr-114、所述 Atr-117、所述 Eu_39、所述 Eu_40、所述 Eu_41、 所述Afu 19、所述Afu22、所述Afu39、所述Afu54和所述Afu68均用突光标记物标记，所述突 光标记物具体可为TAMRA、HEX或FAM。
[0052] 上述鉴定或辅助鉴定鲟鱼亲本的PCR引物对组合物中，所述RutF、所述AGF、所述 ABF、所述ABRM