化合物acaromycin A及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用
【技术领域】：
[0001 ]本发明属于生物和医药领域，具体涉及化合物acaromycin A及其制备方法和在制 备抗肿瘤药物中的应用。
【背景技术】：
[0002] 海洋拥有特殊的环境，尤其是深海海洋环境，栖息于海洋环境的海洋微生物为了 适应这些高盐、弱碱性、低营养、缺氧等特殊环境，因此海洋微生物的次级代谢产物具有独 特的结构类型和丰富多样的生物活性。这些新化学实体不仅能揭示新的生物合成途径，而 且还能启发人们对这些化学实体进行仿生合成和生物活性研究。因此，海洋微生物次生代 谢产物具有重要的科研和应用价值，是药物开发的重要资源(Sun L，et al.2012)。
[0003] 深海真菌厶〇&1'〇1115^68；[叫01(1;^?3121于2011年9月从南海（18°44.606/1^，119° 44.263'E)水深3415米处海底表层沉积物中分离得到。文献查阅显示，到目前为止没有对于 Acaromyces属真菌的次生代谢产物的研究，因此有必要对其次级代谢产物进行深入研究。
【发明内容】
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[0004] 本发明的第一个目的是提供对肿瘤细胞具有抑制活性的化合物acaromycin A。
[0005] 本发明通过深海真菌Acaromyces ingoldii FS121的发酵培养、发酵产物的分离 纯化和结构鉴定，获得了 1个具有抗肿瘤活性的3,4-dihydro-2H-naphtho-[2,3-b]pyran-5 ， 10-dione类新化合物， 命名为acaromycin AJ ，4-dihydr〇-2H-naphth〇-[2 ， 3-b]pyran-5，10-dione类化合物具有广泛的生物活性，对革兰氏阳性菌都有一定的抑制活性(Gupta R.B.et al.1989)，能够抑制脂多糖(LPS)刺激下小鼠 RAW264.7的巨噬细胞产生一氧化氮 (NO)(Byeong M P.et al.2010)，对恶性症原虫Plasmodium falciparum 3D7和人胚肺成纤 维细胞(MRC-5)有一定的抑制活性(Paula F.C. et al · 2016)。因此，从深海真菌Acaromyces ingoldii FS121中发现的新化合物acaromycin A可为抗肿瘤药物研发提供候选化合物，为 开发利用海洋真菌资源提供科学依据。
[0006] 本发明的化合物acaromycin A，其特征在于，结构如式(I)所示：
[0007]
[0008] 本发明的第二个目的是提供化合物acaromycin A的制备方法，其特征在于，所述 的化合物acaromycin A是从深海真菌Acaromyces ingoldii FS121的发酵培养物中制备得 到。
[0009]优选，具体步骤如下：
[00?0]制备Acaromyces ingoldii FS121的发酵培养物，将该发酵培养物的发酵液和菌 丝体分离，发酵液用乙酸乙酯萃取，萃取液经蒸馏浓缩后得到浸膏；
[0011] 将浸膏过正相硅胶柱，先用石油醚-乙酸乙酯从30:1，20:1，10:1，7:1，9:2,3 :1，2: l，l:l，l:2v/v梯度洗脱，再用乙酸乙酯洗脱，最后用二氯甲烷：甲醇= 5:lv/v洗脱;收集浸 膏被石油醚：乙酸乙酯体积比1:2洗脱的馏分，该馏分再经TLC以石油醚：乙酸乙酯=1:4v/v 展开得Rf = 2.7/3.7的馏分E22，该馏分E22经Sephadex LH-20柱，以二氯甲烷：甲醇=1:1 v/ v作为洗脱剂，收集TLC以石油醚：乙酸乙酯=1: 2v/v展开得Rf = 1.5/3.5的组分，然后过反 相硅胶柱层析，以体积比甲醇:水=2:8等度洗脱，收集洗脱下来的馏分，上样正相硅胶薄层 层析板，以二氯甲烷：甲醇= 10:1为展开剂展开，割板纯化Rf=l.4/3.3的组分，得到化合物 acaromycin A〇
[0012] 所述的制备Acaromyces ingoldii FS121的发酵培养物优选是将活化的 Acaromyces ingoldii FS121菌种接入含质量分数1.5%海盐的马铃薯葡萄糖液体培养基 中，28°C，120rpm，培养5d制得种子液，将种子液以体积比10 %的接种量接入到含质量分数 1.5%海盐的马铃薯葡萄糖液体培养基中，相同条件下培养7d，制得发酵培养物。
[0013] 本发明的第三个目的是提供Acaromyces ingoldii FS121在制备化合物 acaromycin A中的应用。
[0014]本发明通过肿瘤细胞生长抑制活性测试发现，化合物acaromycin A对肿瘤细胞株 SF-268、MCF-7、NCI-H460和HePG-2均具有良好的抑制活性，对上述4种肿瘤细胞的IC5Q值分 别为7.8±0.5，6.7 ± 1.6，10.0±0.1和7.3 ± 1.8μΜ，阳性对照药物顺铂对上述四种肿瘤细 胞株的IC5Q值分别为4.1±0.2,2.9±0.5,2.9±0.2和2.5±0.2以1。结果表明：本发明的化合 物acaromycin A对肿瘤细胞具有显著的抑制活性，能用于在制备抗肿瘤药物。
[0015] 本发明的第四个目的是提供化合物acaromycin A在制备抗肿瘤药物中的应用。
[0016] 所述的抗肿瘤药物优选为抗神经胶质瘤、乳腺癌、非小细胞肺癌或肝癌的药物。
[0017] 本发明的第五个目的是提供一种抗肿瘤药物，其特征在于，含有化合物 acaromycin A作为有效成分。
[0018] 所述的抗肿瘤药物优选为抗神经胶质瘤、乳腺癌、非小细胞肺癌或肝癌的药物。 [0019]本发明从深海真菌Acaromyces ingoldii FS121的发酵培养物中分离得到新化合 物acaromycin A，该化合物对肿瘤细胞具有良好的抑制活性，可为抗肿瘤新药研发提供候 选化合物，为开发利用海洋真菌资源提供科学依据。
[0020] 本发明的Acaromyces ingoldii FS121公开于文献:23株海洋真菌的分子鉴定及 其抗植物病原真菌和细胞毒活性研究，杨小岚，陈玉婵，李浩华，章卫民2014，0(8):132_ 137。该菌株本申请人也持有，并保证自申请日起20年内向公众提供。
【附图说明】：
[0021] 图1是化合物1的1H-NMR谱；
[0022] 图2是化合物1的13C_NMR谱；
[0023] 图3是化合物1的DEPT 135谱；
[0024]图4是化合物1的HSQC谱；
[0025] 图5是化合物1的HMBC谱；
[0026] 图6是化合物1的1H-1!! COSY谱；
[0027] 图7是化合物1的N0ESY谱；
[0028] 图8是化合物1的HRESB1S谱；
[0029] 图9是化合物1的⑶谱。
【具体实施方式】：
[0030]以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
[0031] 实施例1:
[0032] 将活化的深海真菌Acaromyces ingoldii FS121接入含质量分数1.5%海盐的马 铃薯葡萄糖液体培养基(每升含有15g海盐、200g马铃薯、葡萄糖20g，余量为水，其配制方法 是:将马铃薯洗净去皮，切成大小约为lcm3的小块，称量200g，放入1L水中煮沸20-30分钟， 用双层纱布过滤，取滤液，在滤液中加入海盐15g、葡萄糖20g，加水补足1L，灭菌备用。）中， 28°C，120rpm，培养5d制得种子液，将种子液以体积比10%的接种量接入到新的含质量分数 1.5%海盐的马铃薯葡萄糖液体培养基中，28°C，120rpm下振荡培养7d，制得发酵培养物。 [0033]将该发酵培养物的发酵液和菌丝体分离，发酵液用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯萃取 液经蒸馏浓缩后得到浸膏。将浸膏过正相硅胶柱，先用石油醚-乙酸乙酯从30:1，20:1，10: 1，7 :1，9:2,3:1，2:1，1:1，1 :2&八)梯度洗脱，再用乙酸乙酯洗脱，最后用二氯甲烷：甲醇= 5:l(v/v)洗脱;收集浸膏被石油醚：乙酸乙酯= l:2(v/v)洗脱的馏分，该馏分再经TLC薄层 层析，以石油醚:乙酸乙酯=1:4(v/v)展开得Rf = 2.7/3.7的馏分E22。
[0034] 馏分E22以二氯甲烷：甲醇=1:1 (v/v)洗脱过Sephadex LH-20，收集TLC以石油醚： 乙酸乙酯= l:2v/v展开得Rf = 1.5/3.5的组分，然后过反相硅胶柱层析，以体积比甲醇：水 = 2:8等度洗脱，收集洗脱下来的馏分，上样正相硅胶薄层层析，以二氯甲