一种一步均相IL‑6检测试剂盒及其制备和使用方法与流程

文档序号:11861091阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种一步均相IL-6检测试剂盒,其特征在于,主要组成包括:抗IL-6抗体偶联的发光微球、抗IL-6抗体偶联的感光微球、分析缓冲液、反应孔。

2.根据权利要求1所述的一步均相IL-6检测试剂盒,其特征在于,所述抗IL-6抗体为针对IL-6不同表位的单克隆抗体或多克隆抗体。

3.根据权利要求1所述的一步均相IL-6检测试剂盒,其特征在于,所述反应孔为微孔板、微流控试剂盘、反应杯或反应管。

4.权利要求1-3任一所述的一步均相IL-6检测试剂盒的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:

(1)抗IL-6抗体偶联发光微球的制备;

(2)抗IL-6抗体偶联感光微球的制备;

(3)分析缓冲液的制备。

5.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,所述抗IL-6抗体偶联发光微球的制备,包括如下步骤:

(1)将抗IL-6抗体加入到超滤管中,离心,用HEPES缓冲液洗涤,备用;将发光微球,用HEPES缓冲液清洗,离心,去除上清;

(2)将抗体溶液加入到发光微球中,重悬;

(3)加入2.0-3.0μl 10%质量分数Tween 20,8-12μl 400mM NaCNBH3,加入HEPES缓冲液将体积补足到200μl,震荡反应24-48小时;

(4)加8-12μl 65mg/ml CMO溶液到反应体系中;震荡反应0.5-1.5小时,离心,去除上清;

(5)加入150-250μl Tris-HCl缓冲液重悬,离心,去除上清,重复一次;

(6)最后一次离心后用PBS缓冲液和牛血清白蛋白混合液重悬微球,使用前稀释至所需浓度。

6.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,所述抗IL-6抗体偶联感光微球的制备,包括如下步骤:

(1)将抗IL-6抗体加入到超滤管中,离心,用HEPES缓冲液洗涤,备用;将感光微球,用HEPES缓冲液清洗,离心,去除上清;

(2)将抗体溶液加入到感光微球中,重悬;

(3)加入2.0-3.0μl 10%质量分数Tween 20,8-12μl 400mM NaCNBH3,加入HEPES缓冲液将体积补足到200μl,震荡反应24-48小时;

(4)加8-12μl 65mg/ml CMO溶液到反应体系中;震荡反应0.5-1.5小时,离心,去除上清;

(5)加入150-250μl Tris-HCl缓冲液重悬,离心,去除上清,重复一次;

(6)最后一次离心后用PBS缓冲液和牛血清白蛋白混合液重悬微球,使用前稀释至所需浓度。

7.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,所述分析缓冲液的制备,包括如下步骤:将HEPES 0.1-2g、BSA 0.1-5g、Casein 0.1-5g、NaCl 0.5-3g、Triton X-100 0.01-1ml加入蒸馏水溶解后,制成分析缓冲液。

8.根据权利要求5所述的制备方法,其特征在于,步骤(1)中所述抗IL-6抗体与发光微球与的质量比为1:(1-100)。

9.根据权利要求6所述的制备方法,其特征在于,步骤(1)所述抗IL-6抗体与感光微球的质量比为1:(1-100)。

10.权利要求1-3任一所述的一步均相IL-6检测试剂盒的使用方法,包括如下步骤:

(1)在试剂盒的反应孔中加入样品、抗IL-6抗体偶联的发光微球和抗IL-6抗体偶联的感光微球,混合反应5-60分钟;

(2)激发光照射反应孔,测量每个反应孔发光量获得光信号值;

(3)绘制IL-6浓度与光信号值的标准曲线,利用步骤(2)测得的光信号值,通过标准曲线计算IL-6含量。

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