专利名称：组蛋白去乙酰化酶抑制剂在培育克隆胚胎或转基因胚胎中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及组蛋白去乙酰化酶抑制剂在培育转基因胚胎中的应用。
背景技术：
在常规克隆操作过程中，在重构卵融合之后，将其转移到培养液中，在37°C，5% C02条件下培养1至数小时不等。在此期间没有TSA的参与。然后，再进行激活处理。在这种操作条件下，重构胚的染色体容易发生位置漂移、扩散现象，造成胚胎非正常二倍体率增加，影响胚胎发育与胚胎质量。
发明内容
本发明的目的在于提供组蛋白去乙酰化酶抑制剂在培育克隆动物胚胎或转基因克隆动物胚胎中的应用。所述培育克隆动物胚胎或转基因克隆动物胚胎，包括如下步骤1)将离体的供体细胞与离体的去核卵母细胞融合得到重构胚；2)将所述重构胚进行体外激活，其特征在于所述方法还包括步骤1)和步骤幻之间的组蛋白去乙酰化酶抑制剂处理，所述组蛋白去乙酰化酶抑制剂处理包括以下步骤将所述步骤1)的重构胚移入含组蛋白去乙酰化酶抑制剂的胚胎培养液中培养1-6小时。上述胚胎培养液是在CRlaa培养液中添加BSA和组蛋白去乙酰化酶抑制剂得到的培养液；所述胚胎培养液中BSA和组蛋白去乙酰化酶抑制剂的终浓度为如下a)或b)a) BSA 为 0. 3-0. 5g/100ml、组蛋白去乙酰化酶抑制剂为 1. 0-10. Ong/ml ；b)BSA为0. 4g/100ml、组蛋白去乙酰化酶抑制剂为lOng/ml ；所述组蛋白去乙酰化酶抑制剂是曲古抑菌素A(TSA)。上述培养的条件可以是38. 5°C和5% C02。其中CRlaa培养液的溶剂是水，溶质如表1所示。表1. CRlaa培养液的溶质
权利要求
1.组蛋白去乙酰化酶抑制剂在培育克隆动物胚胎或转基因克隆动物胚胎中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述培育克隆动物胚胎或转基因克隆动物胚胎，包括如下步骤1)将离体的供体细胞与离体的去核卵母细胞融合得到重构胚；2)将所述重构胚进行体外激活，其特征在于所述方法还包括步骤1)和步骤幻之间的组蛋白去乙酰化酶抑制剂处理，所述组蛋白去乙酰化酶抑制剂处理包括以下步骤将所述步骤1)的重构胚移入含组蛋白去乙酰化酶抑制剂的胚胎培养液中培养1-6小时。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述胚胎培养液是在CRlaa培养液中添加 BSA和组蛋白去乙酰化酶抑制剂得到的培养液；所述胚胎培养液中BSA和组蛋白去乙酰化酶抑制剂的终浓度为如下a)或b)a)BSA为0. 3-0. 5g/100ml、组蛋白去乙酰化酶抑制剂为1. 0-10. Ong/ml ；b)BSA为0.4g/100ml、组蛋白去乙酰化酶抑制剂为lOng/ml ； 所述CRlaa培养液的溶剂是水，溶质如表1所示。
4.如权利要求1-3中任一所述的应用，其特征在于所述组蛋白去乙酰化酶抑制剂是曲古抑菌素A。
5.如权利要求2-4中任一所述的应用，其特征在于所述培养的条件是38.5°C和5%CO2。
6.如权利要求2-5中任一所述的应用，其特征在于所述培养的时间为2-3小时。
7.如权利要求1-6中任一所述的应用，其特征在于所述动物是猪、牛、羊或鼠。
全文摘要
本发明公开了一种组蛋白去乙酰化酶抑制剂在培育克隆胚胎或转基因胚胎中的应用。所述培育克隆胚胎或转基因克隆胚胎，包括如下步骤1)将离体的供体细胞与离体的去核卵融合得到重构胚；2)将所述重构胚进行体外激活，所述方法还包括步骤1)和步骤2)之间的TSA处理，所述TSA处理包括以下步骤将所述步骤1)的重构胚移入含组蛋白去乙酰化酶抑制剂的胚胎培养液中培养1-6小时。实验证明TSA处理激活前的重构胚可使染色体保持完整性，保证了移入核的遗传物质的完整性，并且TSA处理后，胚胎发育质量得到提高(7天囊胚细胞数从87.6提高到111.3)。
文档编号C12N15/877GK102344940SQ20101024115
公开日2012年2月8日 申请日期2010年7月29日 优先权日2010年7月29日
发明者李光鹏 申请人:内蒙古大学