外周血单核细胞基因中mRNA逆转录成ＤＮＡ的方法
【专利摘要】本发明公开了外周血单核细胞基因中mRNA逆转录成ＤＮＡ的方法。步骤如下：首先将目标片段选取模版，然后在ＰＣＲ试管中配置反应体系；混合摇匀，高速离心；烤箱中孵育３分钟，温度为７０－７５摄氏度；冰上冷却１分钟；微量离心机简短离心；放入三倍体积的缓冲液以及核糖核酸酶抑制剂、逆转录酶分别2倍体积；再次孵育，时间1-1.5小时；直接取至冰上，冷却3-5分钟后高速离心，于零下50-80温度下保存即可，再次孵育之前需要加入无水乙醇1-1.5倍体积。本发明的有益效果是：操作简单，成本较低，纯度较高，再现性强，数据精确。
【专利说明】外周血单核细胞基因中mRNA逆转录成DNA的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及生化实验领域，具体涉及外周血单核细胞基因中mRNA逆转录成D NA的方法。
【背景技术】
[0002]外周血是除骨髓之外的血液，临床上常用一些方法把骨髓中的造血干细胞释放到血外周血液中，再在从血液中提取分离得到造血干细胞，我们把这样得到的干细胞称为外周血干细胞，在二十一世纪初人类开始的生命方舟计划中首次提出外周血这一新概念，正常人外周血中一般看不见幼稚的干细胞的，只存在有极少量的造血干细胞，其含量为
0.01%左右。如果幼稚细胞的比例大幅增加，有可能是类白血病。正因为存在0.01%的造血干细胞，可利用细胞分离的技术(血细胞自动分离机)，将外周血中含有造血干细胞的单个核细胞进行分离保存，重复数次达一定细胞数量后，回输给患者以之代替骨髓而进行的干细胞移植，称为外周血干细胞移植。
【发明内容】
[0003]本发明要解决的技术问题在于，针对现有技术缺陷，提供一种技术方案:
外周血单核细胞基因中mRNA逆转录成DNA的方法，步骤如下:首先将目标片段选取模版，然后在P C R试管中配置反应体系；混合摇匀，高速离心；烤箱中孵育3分钟，温度为7 0 — 7 5摄氏度；冰上冷却I分钟；微量离心机简短离心；放入三倍体积的缓冲液以及核糖核酸酶抑制剂、逆 转录酶分别2倍体积；再次孵育，时间1-1.5小时；直接取至冰上，冷却3-5分钟后高速离心，于零下50-80温度下保存即可。
[0004]本发明中，再次孵育之前需要加入无水乙醇1-1.5倍体积。
[0005]本发明的有益效果是:操作简单，成本较低，纯度较高，再现性强，数据精确。
【具体实施方式】
[0006]外周血单核细胞基因中mRNA逆转录成D N A的方法，步骤如下:首先将目标片段选取模版，然后在P C R试管中配置反应体系；混合摇匀，高速离心；烤箱中孵育3分钟，温度为7 0摄氏度；冰上冷却I分钟；微量离心机简短离心；放入三倍体积的缓冲液以及核糖核酸酶抑制剂、逆转录酶分别2倍体积；再次孵育，时间1.2小时；直接取至冰上，冷却4.5分钟后高速离心，于零下50-80温度下保存即可，再次孵育之前需要加入无水乙醇1-1.5倍体积。以上所述，仅为本发明较佳的【具体实施方式】，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本【技术领域】的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
【权利要求】
1.外周血单核细胞基因中mRNA逆转录成DNA的方法，其特征在于，步骤如下:首先将目标片段选取模版，然后在P C R试管中配置反应体系；混合摇匀，高速离心；烤箱中孵育3分钟，温度为7 O — 7 5摄氏度；冰上冷却I分钟；微量离心机简短离心；放入三倍体积的缓冲液以及核糖核酸酶抑制剂、逆转录酶分别2倍体积；再次孵育，时间1-1.5小时；直接取至冰上，冷却3-5分钟后高速离心，于零下50-80温度下保存即可。
2.如权利要求1所述的外周血单核细胞基因中mRNA逆转录成DN A的方法，其特征在于，再次孵育之前需要加入无水乙醇1-1`.5倍体积。
【文档编号】C12N15/10GK103614366SQ201310537861
【公开日】2014年3月5日 申请日期:2013年11月5日 优先权日:2013年11月5日
【发明者】辛竹 申请人:辛竹