枯草芽孢杆菌-刺五加多糖合生元、其制备方法及其作为饲料添加剂的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于微生态饲料添加剂技术领域，尤其涉及一种枯草芽孢杆菌-刺五加多 糖合生元、其制备方法及其作为饲料添加剂的应用。
【背景技术】
[0002] 从2006年1月1日起，欧盟已全面禁止畜禽使用抗生素类饲料添加剂。抗生素的 滥用，更是近几年来我国社会各界关注和热议的焦点问题之一。随着人们生活水平的不断 提高，人们对食物安全的要求也越来越高，研宄开发抗生素的替代品成为必然趋势。
[0003] 随着科学的发展与时代的进步，人们逐渐认识到抗生素的大量使用，特别是滥用 后会引起如内源性感染或二重感染、耐药菌株的产生，畜禽细胞免疫、体液免疫功能的下降 及药物残留等诸多问题。在饲料及添加剂开发领域，高效、低毒且低残留无公害饲料添加剂 的研宄日益为人们所重视，益生菌、植物多糖提取物、中草药添加剂和酶制剂等绿色饲料添 加剂应运而生。
[0004] 作为抗生素的潜在替代者，益生菌体现出许多优越性，例如可以克服滥用抗生素 引起的动物内源性感染或二重感染、动物抗药性的产生和免疫功能下降等种种弊端，且具 有显著抗病、促生长、提高饲料利用率、无毒、无不良反应及无残留等特点，是一种天然的生 长促进剂。但以单一制剂形式使用益生菌，其功效存在一些缺憾，故畜牧科技工作者们从未 懈怠对新型效用更强之饲料添加剂的开发。
[0005] 研宄表明，将植物多糖提取物与有益微生物结合使用，植物多糖提取物为有益微 生物提供营养物质，与益生素间有加和效应，从而产生协同作用，共同维持肠道微生态区系 的平衡和稳定，提高动物生产性能，提高动物免疫力，改善畜产品品质。潘宝海等研宄表明， 在益生素中加入天然植物多糖提取物的复合产品枯草芽孢杆菌可以提高益生素的作用效 果，取得与抗生素相似的促生长和防止仔猪断奶后腹泻的效果。边连全等（2012)研宄枯草 芽孢杆菌一菊糖合生元对断奶仔猪生长性能及体液免疫功能的影响，与其他组对比显著提 高断奶仔猪生长性能及体液免疫功能。
[0006] 合生元在动物体上的作用效果要优于益生菌和益生元单独使用的效果，然而，市 面上的合生元制品大多是益生菌和益生元的复合添加，即直接将益生菌和益生元混合制 备，没有完全发挥合生元产品的潜能，并且得到的产品中益生菌活菌数下降很快，因而无法 确保合生元产品的使用效果。
【发明内容】
[0007] 有鉴于此，本发明的目的在于提供一种枯草芽孢杆菌-刺五加多糖合生元、其制 备方法及其作为饲料添加剂的应用，本发明提供的枯草芽孢杆菌-刺五加多糖合生元中活 菌数和芽孢率均较高，作为动物饲料添加剂具有良好的使用效果。
[0008] 本发明提供了一种枯草芽孢杆菌-刺五加多糖合生元，由枯草芽孢杆菌在含有刺 五加多糖的培养基中进行培养后加入麸皮吸附烘干后得到。
[0009] 优选的，所述合生元的活菌数为109CFU/g以上，芽孢率为90%以上。
[0010] 本发明还提供了一种枯草芽孢杆菌-刺五加多糖合生元的制备方法，包括：
[0011] 向含有刺五加多糖的培养基中接种活化的枯草芽孢杆菌进行培养，得到菌液；
[0012] 向所述菌液中加入麸皮进行吸附，烘干后得到枯草芽孢杆菌-刺五加多糖合生 J Ll 〇
[0013] 优选的，所述培养基为LB培养基，所述刺五加多糖的含量为0. 4mg/mL?10mg/mL。
[0014] 优选的，所述枯草芽孢杆菌的接种量为1 %?10% ;所述培养基的初始pH值为 5. 5 ~ 8. 5〇
[0015] 优选的，所述培养为摇床培养，所述摇床的转速为120r/min?170r/min。
[0016] 优选的，所述培养的温度为30 °C?40 °C，所述培养的时间为24h?48h。
[0017] 优选的，所述菌液和麸皮的体积质量比为IL :0. 2kg?0. 8kg。
[0018] 本发明还提供了一种上述技术方案所述的枯草芽孢杆菌-刺五加多糖合生元或 者上述技术方案所述的方法制备得到的枯草芽孢杆菌-刺五加多糖合生元作为动物饲料 添加剂的应用。
[0019] 优选的，所述枯草芽孢杆菌-刺五加多糖合生元的添加量为0. lwt%?lwt%。
[0020] 本发明提供了一种枯草芽孢杆菌-刺五加多糖合生元，由枯草芽孢杆菌在含有刺 五加多糖的培养基中进行培养后加入麸皮吸附烘干后得到。本发明将枯草芽孢杆菌在含有 适量刺五加多糖的培养基中进行培养后加入一定量的麸皮进行吸附烘干，得到的合生元产 品中枯草芽孢杆菌的活菌数和芽孢率均较高，在加入麸皮烘干后，活菌数为l〇 9CFU/g以上， 芽孢率为90%以上，可以作为动物饲料添加剂使用，且具有良好的使用效果。本发明提供的 枯草芽孢杆菌-刺五加多糖合生元具有活菌数高、芽孢率高、保留了发酵产物及未利用完 的刺五加多糖等优点，可以作为饲料添加剂使用，作为动物饲料添加剂用于饲喂动物时，能 够显著提高动物的日增重，降低料重比和死淘率，并能够提高动物的免疫力，对动物的生长 性能和机体免疫力有显著改善作用。
【附图说明】
[0021] 图1为枯草芽孢杆菌24h的生长曲线；
[0022] 图2为本发明提供的枯草芽孢杆菌在不同温度和转速下的生长曲线；
[0023] 图3为枯草芽孢杆菌在Omg/mL刺五加多糖培养基培养36h显微镜下的图片；
[0024] 图4为枯草芽孢杆菌在I. 6mg/mL刺五加多糖培养基培养36h显微镜下的图片。
【具体实施方式】
[0025] 本发明提供了一种枯草芽孢杆菌-刺五加多糖合生元的制备方法，包括：
[0026] 向含有刺五加多糖的培养基中接种活化的枯草芽孢杆菌进行培养，得到菌液；
[0027] 向所述菌液中加入麸皮吸附，烘干后得到枯草芽孢杆菌-刺五加多糖合生元。
[0028] 本发明将枯草芽孢杆菌在含有刺五加多糖的培养基中进行培养后加入麸皮进行 吸附烘干，得到的合生元产品中枯草芽孢杆菌的活菌数和芽孢率均较高，在加入麸皮吸附 烘干后，活菌数为l〇 9CFU/g以上，芽孢率为90%以上，可以作为动物饲料添加剂使用，且具 有良好的使用效果。
[0029] 本发明对所述枯草芽孢杆菌没有特殊限制，可以为枯草芽孢杆菌ACCCl 1025等本 领域技术人员熟知的菌种。本发明按照本领域技术人员熟知的方法将其活化，得到活化后 的菌液，即可进行培养。
[0030] 在本发明中，所述培养基优选为LB培养基；所述培养优选为摇床培养。
[0031] 本发明根据枯草芽孢杆菌的生长曲线，确定枯草芽孢杆菌的培养最佳培养温度、 转速；利用菌液OD值，确定培养基pH值、装液量、接种量；根据活菌数和芽胞产率确定刺五 加多糖适宜的添加量、枯草芽孢杆菌合生元的最佳培养时间，最终确定枯草芽孢杆菌-刺 五加多糖合生元的最佳制备工艺，具体方法如下：
[0032] 1、绘制枯草芽孢杆菌生长曲线：在大多数细菌适宜的温度37°C和转速120r/min 的条件下绘制枯草芽孢杆菌24h的生长曲线。2、培养温度、转速的确定：采用4X2设计， 在无菌实验室中，将活化24h后的枯草芽孢杆菌ACCC11025种子液以1 %的接种量接种于 50mL市售LB培养基中，置于不同温度（30°C、34°C、37°C、40°C)和不同转速（120r/min、 170r/min)的摇床中培养。从 Oh 开始第 2、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、 19、20、22、24h各取样1次，在600nm分光光度计下测定其菌悬液的吸光度OD值，同时取无 菌的LB培养液作对照，每组数据3个重复。以时间（h)为横坐标，OD值为纵坐标，通过绘 制生长曲线，筛选适宜的温度转速。
[0033] 在本发明中，所述培养的温度优选为30°C?40°C，更优选为37°C ;所述摇床培养 的转速优选为120r/min?170r/min，更优选为170r/min。
[0034] 2、接种量、装液量、初始pH值的确定：单因素筛选接种量、培养基装液量和初始pH 值。接种量分别设为1%、2%、4%、6%、8% ;250ml锥形瓶的装液量分别设为50ml、100ml ; 初始pH值分别设为5. 5、6、6. 5、7、7. 5、8、8. 5。在37°C、170r/min摇床上培养24h测菌液的 OD值，根据OD值的大小，确定适宜的接种量、装液量、初始pH值。
[0035] 在本发明中，所述枯草芽孢杆菌的接种量优选为Iwt %?IOwt %，更优选为 1界1:%?8￥1:%，最优选为4￥1:%;所述装液量优选为5〇1]117/25〇1]11^?10〇1]117 /25〇1]11^更优选为 50mL/250mL ;所述培养基的初始pH值优选为5. 5?8. 5,更优选为7. 0。
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