专利名称：固定化枯草芽孢杆菌的制备方法及采用固定化枯草芽孢杆菌处理污水的方法
技术领域：
本发明涉及一种固定化枯草芽孢杆菌的制备方法及一种有机污水的处理方法。
背景技术：
固定化微生物是近些年的研究热点，如果微生物悬浮在模拟高浓度污水中，就会影响微生物的生长，并且微生物流失严重，而固定化微生物有利于微生物的生长且能够减少微生物的损失，便于进行连续型实验的操作。游离细菌生物量少，不能连续运行。枯草芽孢杆菌处理模拟高浓度有机污水的程度比较高，载体固定枯草芽孢杆菌，有利于菌种在载体上面的生长。固定化生物技术是指利用物理的或是化学的手段将游离的微生物固定在现有的空间区域内，使微生物不用悬浮在水中并还保留微生物的生物活性，也可以反复利用菌的方法手段。固定化生物技术所选的微生物需是降解效果明显的优势菌种，其需要符合的条件有(I)有很高的活性的菌体；(2)能高效率的处理目标污染物的菌体；(3)生存竞争能力强，能在系统中有很高数量的存活率。活性污泥处理污水的方法因活性污泥的成分复杂，成分里各种微生物处理污水的能力强弱不同，对有机物含量较高的污水降解能力不强，所以对高浓度有机污水的处理上存在一些问题。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有的处理污水的方法对有机物含量较高的污水降解能力不强的技术问题，提供了一种枯草芽孢杆菌固定化处理高浓度有机污水的方法。
固定化枯草芽孢杆菌的制备方法按照以下步骤进行:一、配制牛肉膏蛋白胨培养液:将0.5_2g牛肉膏、2_6g葡萄糖、0.5_3g氯化钠和2-4g蛋白胨混合加入到150-250ml蒸馏水中，调节pH值为7_8，然后在121 °C高压灭菌，得到牛肉膏蛋白胨培养液；二、活化枯草芽孢杆菌:在无菌的条件下取一环枯草芽孢杆菌接种到牛肉膏蛋白胨培养液中，在30°C恒温摇床培养18-26h，得到枯草芽孢杆菌菌悬液；三、将长为1-3臟、宽为l-3mm的远红外细菌屋用浓度为0.lmol/L的HCl浸泡4h，用去离子水冲洗至中性，烘干；四、将25-35g经过步骤三处理的远红外细菌屋放入80-120ml牛肉膏蛋白胨培养液中，取20ml步骤二得到的枯草芽孢杆菌菌悬液进行离心，获得菌体沉淀，然后在无菌的环境下将菌体沉淀加入到含有远红外细菌屋的牛肉膏蛋白胨培养液中，在30°C恒温培养箱中固定培养40-60h，得到固定化枯草芽孢杆菌。采用固定化枯草芽孢杆菌处理污水的方法按照以下步骤进行:将25_35g固定化枯草芽孢杆菌加入到80_120ml灭菌的有机污水中，在30°C恒温培养20-30h，即完成固定化枯草芽孢杆菌处理污水。采用本发明方法得到的远红外细菌屋固定枯草芽孢杆菌处理模拟高浓度有机污水的COD去除率为34%。同时，采用枯草芽孢杆菌固定化处理模拟高浓度有机污水的方法得到的细菌生物量多，能连续运行。
图1是试验一固定化枯草芽孢杆菌处理有机污水的实验结果；图2为没有固定枯草芽孢杆菌远红外细菌屋的扫描电镜照片；图3是固定化枯草芽孢杆菌的扫描电镜照片。
具体实施例方式本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式
，还包括各具体实施方式
间的任意组合。
具体实施方式
一:本实施方式中固定化枯草芽孢杆菌的制备方法按照以下步骤进行:一、配制牛肉膏蛋白胨培养液:将0.5_2g牛肉膏、2_6g葡萄糖、0.5_3g氯化钠和2-4g蛋白胨混合加入到150-250ml蒸馏水中，调节pH值为7_8，然后在121 °C高压灭菌，得到牛肉膏蛋白胨培养液；二、活化枯草芽孢杆菌:在无菌的条件下取一环枯草芽孢杆菌接种到牛肉膏蛋白胨培养液中，在30°C恒温摇床培养18-26h，得到枯草芽孢杆菌菌悬液；
三、将长为l_3mm、宽为l_3mm的远红外细菌屋用浓度为0.lmol/L的HCl浸泡4h，用去离子水冲洗至中性，烘干；四、将25_35g经过步骤三处理的远红外细菌屋放入80_120ml牛肉膏蛋白胨培养液中，取20ml步骤二得到的枯草芽孢杆菌菌悬液进行离心，获得菌体沉淀，然后在无菌的环境下将菌体沉淀加入到含有远红外细菌屋的牛肉膏蛋白胨培养液中，在30°C恒温培养箱中固定培养40-60h，得到固定化枯草芽孢杆菌。本实施方式中所述枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)为购买得到，保藏编号为CGMCC 1.836。远红外细菌屋购自于上海市徐汇区宠鑫综合营业部，枯草芽孢杆菌为市售。本实施方式中固定化枯草芽孢杆菌处理污水，有机污水的COD去除率可达34%。
具体实施方式
二:本实施方式与具体实施方式
一不同的是步骤一中将0.5g牛肉膏、2g葡萄糖、0.5g氯化钠和2g蛋白胨混合加入到150ml蒸馏水中。其它与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
三:本实施方式与具体实施方式
一或二之一不同的是步骤一中将
0.8g牛肉膏、3g葡萄糖、Ig氯化钠和2g蛋白胨混合加入到180ml蒸馏水中。其它与具体实施方式
一或二之一不相同。
具体实施方式
四:本实施方式与具体实施方式
一至三之一不同的是步骤一中将
1.5g牛肉膏、4g葡萄糖、1.5g氯化钠和2.5g蛋白胨混合加入到200ml蒸懼水中。其它与具
体实施方式一至三之一相同。
具体实施方式
五:本实施方式与具体实施方式
一至四之一不同的是步骤一中将2g牛肉膏、6g葡萄糖、2g氯化钠和3g蛋白胨混合加入到250ml蒸馏水中。其它与具体实施方式
一至四之一相同。
具体实施方式
六:本实施方式与具体实施方式
一至五之一不同的是步骤二中在30°C恒温摇床培养19_25h。其它与具体实施方式
一至五之一相同。
具体实施方式
七:本实施方式与具体实施方式
一至六之一不同的是步骤二中在30 °C恒温摇床培养21h。其它与具体实施方式
一至六之一相同。
具体实施方式
八:本实施方式与具体实施方式
一至七之一不同的是步骤四中将26-32g经过步骤三处理的远红外细菌屋放入90-1 IOml牛肉膏蛋白胨培养液中。其它与具体实施方式
一至七之一相同。
具体实施方式
九:本实施方式与具体实施方式
一至八之一不同的是步骤四中将30g经过步骤三处理的远红外细菌屋放入IlOml牛肉膏蛋白胨培养液中。其它与具体实施方式
一至八之一相同。
具体实施方式
十:本实施方式采用具体实施方式
一的采用固定化枯草芽孢杆菌处理污水的方法按照以下步骤进行:将25_35g固定化枯草芽孢杆菌加入到80_120ml灭菌的有机污水中，在30°C恒温培养20-30h，即完成固定化枯草芽孢杆菌处理污水。本实施方式中固定化枯草芽孢杆菌处理污水，有机污水的COD去除率可达34%。采用下述试验验证本发明效果:试验一: 固定化枯草芽孢杆菌的制备方法按照以下步骤进行:一、配制牛肉膏蛋白胨培养液:将2g牛肉膏、6g葡萄糖、3g氯化钠和4g蛋白胨混合加入到200ml蒸馏水中，调节pH值为7，然后在121°C高压灭菌，得到牛肉膏蛋白胨培养液；二、活化枯草芽孢杆菌:在无菌的条件下将枯草芽孢杆菌接种到牛肉膏蛋白胨培养液中，在30°C恒温摇床培养20h，得到枯草芽孢杆菌菌悬液，枯草芽孢杆菌菌悬液中枯草芽孢杆菌的接种量为I X 108g/L ；三、将长为3mm、宽为3mm的远红外细菌屋用浓度为0.lmol/L的HCl浸泡4h，用去离子水冲洗至中性，烘干；四、将30g经过步骤三处理的远红外细菌屋放入IOOml牛肉膏蛋白胨培养液中，然后在无菌的环境下加入枯草芽孢杆菌菌悬液，在30°C恒温培养箱中固定培养48h，得到固定化枯草芽孢杆菌。配制高浓度有机污水:将4.0g葡萄糖、1.0g洗衣粉、1.0g硝酸铵、1.0g磷酸二氢钾和0.2g维生素B1加入到900ml去离子水中，调节pH值为6.5-7.5。将30g固定化枯草芽孢杆菌和远红外细菌屋载体分别加入到120ml灭菌的有机污水中，在30°C恒温培养24h，测定有机污水COD值。采用远红外细菌屋载体处理有机污水的结果如表1，采用固定化枯草芽孢杆菌处理有机污水的结果如表2。表I
权利要求
1.固定化枯草芽孢杆菌的制备方法，其特征在于固定化枯草芽孢杆菌的制备方法按照以下步骤进行: 一、配制牛肉膏蛋白胨培养液:将0.5-2g牛肉膏、2-6g葡萄糖、0.5-3g氯化钠和2_4g蛋白胨混合加入到150-250ml蒸馏水中，调节pH值为7_8，然后在121°C高压灭菌，得到牛肉膏蛋白胨培养液； 二、活化枯草芽孢杆菌:在无菌的条件下取一环枯草芽孢杆菌接种到牛肉膏蛋白胨培养液中，在30°C恒温摇床培养18-26h，得到枯草芽孢杆菌菌悬液； 三、将长为1-3臟、宽为l-3mm的远红外细菌屋用浓度为0.lmol/L的HCl浸泡4h，用去离子水冲洗至中性，烘干； 四、将25-35g经过步骤三处理的远红外细菌屋放入80-120ml牛肉膏蛋白胨培养液中，取20ml步骤二得到的枯草芽孢杆菌菌悬液进行离心，获得菌体沉淀，然后在无菌的环境下将菌体沉淀加入到含有远红外细菌屋的牛肉膏蛋白胨培养液中，在30°C恒温培养箱中固定培养40-60h，得到固定化枯草芽孢杆菌。
2.根据权利要求1所述固 定化枯草芽孢杆菌的制备方法，其特征在于步骤一中将0.5g牛肉膏、2g葡萄糖、0.5g氯化钠和2g蛋白胨混合加入到150ml蒸懼水中。
3.根据权利要求1所述固定化枯草芽孢杆菌的制备方法，其特征在于步骤一中将0.Sg牛肉膏、3g葡萄糖、Ig氯化钠和2g蛋白胨混合加入到180ml蒸懼水中。
4.根据权利要求1所述固定化枯草芽孢杆菌的制备方法，其特征在于步骤一中将1.5g牛肉膏、4g葡萄糖、1.5g氯化钠和2.5g蛋白胨混合加入到200ml蒸懼水中。
5.根据权利要求1所述固定化枯草芽孢杆菌的制备方法，其特征在于步骤一中将2g牛肉膏、6g葡萄糖、2g氯化钠和3g蛋白胨混合加入到250ml蒸懼水中。
6.根据权利要求1所述固定化枯草芽孢杆菌的制备方法，其特征在于步骤二中在30°C恒温摇床培养19-25h。
7.根据权利要求1所述固定化枯草芽孢杆菌的制备方法，其特征在于步骤二中在30°C恒温摇床培养21h。
8.根据权利要求1所述固定化枯草芽孢杆菌的制备方法，其特征在于步骤四中将26-32g经过步骤三处理的远红外细菌屋放入90-110ml牛肉膏蛋白胨培养液中。
9.根据权利要求1所述固定化枯草芽孢杆菌的制备方法，其特征在于步骤四中将30g经过步骤三处理的远红外细菌屋放入IOOml牛肉膏蛋白胨培养液中。
10.采用权利要求1所述固定化枯草芽孢杆菌处理污水的方法，其特征在于采用固定化枯草芽孢杆菌处理污水的方法按照以下步骤进行: 将25-35g固定化枯草芽孢杆菌加入到80-120ml灭菌的有机污水中，在30°C恒温培养20-30h，即完成固定化枯草芽孢杆菌处理污水。
全文摘要
固定化枯草芽孢杆菌的制备方法及采用固定化枯草芽孢杆菌处理污水的方法，它涉及一种固定化枯草芽孢杆菌的制备方法及一种有机污水的处理方法。固定化枯草芽孢杆菌的制备方法一、配制牛肉膏蛋白胨培养液；二、活化枯草芽孢杆菌；三、将经过处理的远红外细菌屋放入牛肉膏蛋白胨培养液中，然后在无菌的环境下加入枯草芽孢杆菌菌悬液，在30℃恒温培养箱中固定培养，即得。处理污水的方法将25-35g固定化枯草芽孢杆菌加入到灭菌的有机污水中，在恒温培养，即完成。采用本发明方法得到的远红外细菌屋固定枯草芽孢杆菌处理模拟高浓度有机污水的COD去除率为34％。本发明属于水处理领域。
文档编号C02F3/34GK103160492SQ20131012317
公开日2013年6月19日 申请日期2013年4月10日 优先权日2013年4月10日
发明者秦智, 于松翠, 刘波, 张琪 申请人:哈尔滨理工大学