氧肟酸类组蛋白去乙酰化酶抑制剂及其制备方法和用途的制作方法

专利名称：：氧肟酸类组蛋白去乙酰化酶抑制剂及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及药物化学领域，具体涉及一类氧肟酸类组蛋白去乙酰化酶抑制剂、其制备方法、含其的药物制剂及其医药用途。
背景技术：
：真核基因的表达受遗传调控(geneticregulation)和表观遗传调控(epigeneticregulation)双重调控。遗传调控包括基因转录、转录后加工、翻译以及翻译后修饰等环节；表观遗传调控是指转录前基因在染色质水平上的结构调K1，它是真核基因组一种独特的调控机制。表观遗传调控主要包括DNA甲基化、RNA干涉、组蛋白修饰三方面，可以在不改变DNA编码序列的前提下使基因发生可遗传的沉渠犬(Egger,Liang,AparicioandJones，Epigeneticsinhumandiseaseandprospectsforepigenetictherapy.Jow"a/2004，429:p.457-63.)。由组蛋白修饰所引起的染色体局部构象的改变(染色质重塑，chromatinremodeling),在真核生物基因表达调控中发挥着重要的作用。组蛋白的翻译后修饰，包括对组蛋白尾部的赖氨酸和精氨酸残基的乙酰化，甲基化，磷酸化，以及泛素化等，这些修饰构成了组蛋白密码(histonecode)。组蛋白密码作为一种DNA序列之外的基因信息的储存和补充机制，大大扩展了基因编码的信息量。其中，组蛋白的乙酰化修饰较为普遍，也是近年来研究最为深入的组蛋白密码。组蛋白的乙酰化修饰发生在N-端进化保守的赖氨酸残基的s-氨基上，在H3和H4上的修饰较H2A和H2B更为普遍，比较重要的乙酰化位点是H3上的Lys^卩Lys14，以及H4上的Lys5，Lys8，Lys12，Lys16。一般认为，基因的转录活性与染色体的局部构象密切相关。组蛋白的乙酰化/去乙酰化可以改变染色体的局部构象，影响DNA与转录调节的非核小体复合物之间的相互作用，进而调控特定基因的表达。在细胞核中，未经乙酰化的赖氨酸残基带正电荷，可以与碱性的DNA磷酸骨架紧密结合，转录因子，转录调节复合物以及RNA聚合酶不能与DNA结合，染色体处于异染色质(heterochromatin)状态，转录沉默；乙酰化后，组蛋白的赖氨酸残基处于中性，染色体的构象更为松散，染色体处于常染色质(euchromatin)状态，转录因子及相关的调节因子可以与DNA的启动子结合(Acharya，Sparreboom,VenitzandFigg,Rationaldevelopmentofhistonedeacetylaseinhibitorsasanticanceragents:areview.Jo簡a/2005,68:p.917-32.)。一般说来，在基因转录活跃区，组蛋白的乙酰化程度偏高，而在基因转录非活跃区，组蛋白的乙酰化程度偏低。组蛋白的乙酰化状态取决于组蛋白乙酰转移酶(histoneacetyltransferases,HATs)和组蛋白去乙酰化酶(histonedeacetylases，HDACs)之间的活性竞争。HATs能催化乙酰辅酶A上的乙酰基转移到组蛋白的N-端赖氨酸残基，中和正电荷，使DNA与组蛋白之间的相互作用减弱，染色体呈转录活性的松散结构，有利于转录因子与DNA结合，转录激活。反之，HDACs通过催化组蛋白N-端的去乙酰化，使组蛋白带正电荷，与带负电荷的DNA紧密结合，染色体结构聚集，转录因子不能接近目标DNA，转录抑制。HATs和HDACs活性失衡与肿瘤的发生密切相关，肿瘤细胞中通常发生由于染色体重塑而导致的基因转录调节异常(MahlknechtandHoelzer,Histoneacetylationmodifiersinthepathogenesisofmalignantdisease.Jbw"a/2000,6:p.623-44.)。染色体的重塑与肿瘤发生的关系有多种猜测，比较有代表性的有以下三种(Acharya，Sparreboom,VenitzandFigg,Rationaldevelopmentofhistonedeacetylaseinhibitorsasanticanceragents:areview.Jowmtf/2005,68:p.917-32.):1)组蛋白乙酰化水平异常偏高可能会激活某些通常情况下受抑制的启动子，导致蛋白质的异常表达；2)启动子区域乙酰化水平偏低可能会导致某一显型关键的基因转录沉默；3)HATs/HDACs的异常定位或募集可能会诱发肿瘤或其它疾病。尽管肿瘤细胞中编码HDACs的基因并未发生缺失或异常，但HDACs与多种原癌基因和肿瘤抑制基因密切相关，HDACs活性异常可能会导致肿瘤的发生(Kristeleit，Stimson，WorkmanandAheme,Histonemodificationenzymes:noveltargetsforcancerdrugs.Jowr朋/2004，9:p.135-54.)。通过抑制HDACs，某些重要基因得以转录，可以退出细胞周期，促进细胞分化，以及诱导细胞凋亡。HDACs抑制剂可以抑制白血病或实体肿瘤细胞增殖，并诱导肿瘤细胞分化(Kramer，GottlicherandHeinzel,Histonedeacetylaseasatherapeutictarget.Jiowraa/2001，12:p.294-300。。HDACs抑制剂一般可使肿瘤细胞停滞于Gl期，但有时也会观察到G2期细胞增多(Qiu，Burgess,Fairiie，Leonard,ParsonsandGabrielli,HistonedeacetylaseinhibitorstriggeraG2checkpointinnormalcellsthatisdefectiveintumorcells.Jowr"a/2000,11:p.2069-83.)。几乎所有HDACs抑制剂都会激活周期蛋白依赖激酶抑制因子p21api/WAF1(由CDKN1A基因编码)的转录，p21OTi/WAFi可以与cydinE《DK2及cyciinA-CDK2复合物结合，使其失活；另外，很多HDACs抑制剂还能下调细胞内cyclinA和cycUriD的水平，阻止肿瘤抑制蛋白视网膜母细胞瘤蛋白Rb磷酸化，细胞不能进入S期，细胞周期无法进行(LipinskiandJacks,Theretinoblastomagenefamilyindifferentiationanddevelopment.Jowr朋,1999，18:p.7873-82.)。CDKNlA对于HDACs抑制剂介导的G1期抑制起关键作用，如果细胞缺失CDKN1A基因，则细胞进入S期，DNA复制，可以检测到细胞内的DNA为4n，细胞易于发生凋亡。HDACs抑制剂对p2ldPiWAH的激活作用是不依赖于p53的，这点尤为重要，因为肿瘤细胞普遍存在由于p53功能异常而导致的增殖失控(Xiao,HasegawaandIsobe,BothSplandSp3areresponsibleforp21waflpromoteractivityinducedbyhistonedeacetylaseinhibitorinNIH3T3cells.JowmaZ1999,73:p.291-302.)。HDACs抑制剂还能使人正常纤维原细胞以及某些肿瘤细胞产生一个G2期控制点，因此，正常细胞可以以一种安全的方式退出细胞周期，这也可能是HDACs抑制剂对正常细胞或组织几乎无毒副作用的原因之一。另外，很多研究都观察到HDACs诱导的凋亡是与蛋白质的合成相关的(HendersonandBrancolini,Apoptoticpathwaysactivatedbyhistonedeacetylaseinhibitors:implicationsforthedrug-resistantphenotype./owm"/2003,6:p.247-56.,Marks,Rifkind，Richon，Breslow，MillerandKelly,Histonedeacetylasesandcancer:causesandtherapies.Jowtw^2001,1:p.194-202.)。如果抑制蛋白质的合成，会拮抗HDACs诱导的凋亡。HDACs抑制剂促使细胞退出细胞周期，或者发生分化或者发生凋亡等不同的药理作用是与多种因素相关的。一般说来，细胞退出细胞周期是发生分化的前提，当用量较高时，HDACs抑制剂通常具有细胞毒作用，能够诱导细胞凋亡，而在低剂量时，则会将细胞阻滞于Gl期，使其退出细胞周期。另外，还与细胞的种类有关，同一剂量可能会促进某一种细胞分化，而诱导另一种细胞凋亡。这可能是由于药物在具体细胞内的吸收和代谢速度不同引起的；也可能是由于某些肿瘤细胞内会缺失调节细胞周期或发生凋亡所需的基因，例如，过量表达Bcl2的细胞不再会发生由HDACs抑制剂诱导的凋亡，但是却不会影响HDACs抑制剂对细胞周期的〈乍用(Johnstone,Histone-deacetylaseinhibitors:noveldrugsforthetreatmentofcancer.2002,1:p.287-99.)。通常情况下，HDACs抑制剂激活p21apiWAF1,使细胞停滞于G1期，如果细胞缺失CDKN1A基因，或者G1控制点丧失功能，细胞能够通过G1期控制点，DNA进一歩复制为4n，则这些细胞很可能会发生凋亡。除了促进细胞退出细胞周期，发生分化，诱导细胞凋亡之外，HDACs抑制剂还能通过其它方式影响肿瘤细胞的生长。HDACs抑制剂能够激活第I类和第II类组织相容性蛋白基因的转录，还能上调辅助刺激因子CD40，CD89禾卩CD86，细胞间粘附因子ICAM1，以及I型和H型干扰素的水平，因此可以放大免疫细胞的识别和激活。例如，HDACs抑制剂能够提高肿瘤细胞对异基因混合白细胞反应的敏感度(Maeda，Towatari,KosugiandSaito,Up-regulationofcostimulatory/adhesionmoleculesbyhistonedeacetylaseinhibitorsinacutemyeloidleukemiacells.Jrn/maZ2000，96:p.3847-56.)。另外，由于实体瘤的迅速增殖，需要新生血管提供肿瘤细胞所需的氧气和营养物质，HDACs抑制剂能够阻止组织缺氧导致的表皮生长因子(VEGF)的表达，从而抑制新生血管的形成(Sasakawa,Naoe,Noto，Inoue,Sasakawa,Matsuo，MandaandMutoh，AntitumorefficacyofFK228,anovelhistonedeacetylaseinhibitor,dependsontheeffectonexpressionofangiogenesisfactors.Jbwra"/2003,66:p.897-906.，Kim,Kwon,Lee,Baek,Jang,Lee,Moon,Kim，Lee，Chung,KimandKim，Histonedeacetylasesinduceangiogenesisbynegativeregulationoftumorsuppressorgenes.Jowna/2001,7:p.437-43.)。现有的HDACs抑制剂大多对HDACs的各个亚型不具有选择性。因此，找到一类能具有选择性的可以用作HDACs抑制剂的化合物具有非常重大的意义。
发明内容本发明涉及基于组蛋白去乙酰化酶设计的一类氧肟酸类小分子化合物，药理试验证明本发明化合物对于组蛋白去乙酰化酶具有很好的选择性，本发明化合物及其药用制剂可以用于治疗由于组蛋白去乙酰化酶活性失调而导致的一系列疾病，或者可以用于治疗与细胞分化或增殖相关的疾病，例如实体瘤、白血病等疾病。本发明涉及下列通式I的化合物(I)通式I化合物的立体异构体、水合物或药学上可接受的盐也包括在本发明范围内。其中Ar表示芳香基，具体代表下列基团苯环、吡啶环或被1~4个X取代基取代的含有02个氮原子、硫原子或氧原子的五元或六元芳香环，其中取代基X是氢、卣素、氨基、羟基、硝基、氰基、C广C4的烃基、C-C4的烷氧基、d-C4的氨基烷基、C,-C4的烷基胺基、Q-C4的酰基、d-C4的酰胺基、Q-C4的垸氧基羰基、与苯环或含有12个氮原子或1个硫原子或1个氧原子的五元或六元杂环连接的d-d的烷基或烷氧基；R,表示氢、Q-Q的烃基、与Y取代的苯氧基连接的C2-C6的烃基，Y是氢、d-Q的烃基或d-C4的烃氧基。上述化合物中Ar优选表示对甲基苯基。R!优选乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、戊基、己基或辛基。Ri还可以优选2-(o-甲基苯氧基)乙基、2-苯氧基乙基、2-(p-甲基苯氧基)乙基、3-苯氧基丙基、3-&-甲基苯氧基)丙基、4-苯氧基丁基或4-(p-甲基苯氧基)丁基。本发明还涉及一类通式II的新中间体，II这类中间体是全新的，用于制备通式I化合物，其Ar，R,的定义同通式I。fc表示氢或CVQ的垸基。本发明还涉及这一类化合物的制备方法。本发明所述的化合物的合成方法如下-将化合物(III)与卤代烃(R,X)进行反应得到中间体(11)，中间体(n)再与羟胺溶液反应得到通式(I)化合物，(in)化合物(III)与卤代烃(R!X)进行反应的反应温度为03(TC，反应时间为212小时。反应所用的溶剂为常用溶剂，如DMF等，反应液中还需加入碱，如氢化钠，正丁基锂等。若R2为氢，通式(II)化合物转化为目标产物(I)的反应条件为以二氯甲烷或氯仿作为溶剂，在DMF的催化下，通式(II)化合物先与酰氯反应生成活性中间体，将此活性中间体滴加入盐酸羟胺溶液中，以三乙胺作为碱，盐酸羟胺溶液由盐酸羟胺，水和四氢呋喃配制。若R2为d-Q的垸基，通式(II)化合物转化为目标产物(I)的反应条件为将通式(II)化合物滴加入新鲜配制的羟胺溶液中，随即加入氢氧化钾调节反应液使成碱性。通式(I)所述的化合物，可以采用常见的分离方法进行纯化，如重结晶、柱层析等。药理学试验显示，本发明的化合物具有周期抑制和凋亡诱导活性，可以用于治疗由于组蛋白去乙酰化酶活性失调而导致的一系列疾病，例如实体瘤、血瘤以及神经退行性疾病等。本发明所述的化合物可以添加药学上可接受的载体制成常见的药用制剂，如片剂、胶囊、粉剂、糖浆、液剂、悬浮剂、针剂，可以加入香料、甜味剂、液体或固体填料或稀释剂等常用药用辅料。本发明所说的化合物在临床上的给药方式可以采用口服、注射等方式。本发明的化合物临床所用剂量为0.01mg500mg/天，也可根据病情的轻重或剂型的不同偏离此范围。本发明的优点在于，所述化合物及其药用制剂能有效调节组蛋白去乙酰化酶的活性，对于不同亚型的组蛋白去乙酰化酶(HDAC1和HDAC4)具有很好的选择性和抑制活性，其中一个化合物对HDAC1和HDAC4的选择性高达2282.8倍，是目前已报道的氧肟酸类HDAC抑制剂中对HDAC1和HDAC4选择性最好的化合物。这些化合物可以用于治疗基因表达异常引起的如肿瘤、内分泌紊乱、免疫系统疾病、遗传病和神经系统疾病。下面是本发明化合物部分药理学实验及结果，药理部分化合物用代号表示，其对应的结构式见实施例中相同代号所表示的结构式-一、本发明化合物对人白血病细胞U937细胞粒细胞分化的影响(参考Nebbioso，A.;Clarke,N.等人报道的方法，Nat.Med.2005，11,77-84.)将U937细胞悬浮于10nL连接有phycoerythrine的CDllc中(CDllc-PE),对照样品加入至IO^L连接有PE的鼠IgGl中，于黑暗中4'C孵育30分钟，再悬浮于500^L碘化丙吡的PBS溶液中(0.25吗/mL)。用FACS流式细胞仪检测样品，使用CellQuest软件(BectonDickinson)获取并分析数据。本发明化合物1116对人白血病细胞U937细胞粒细胞分化的影响数据图参见附图1。图1是药物浓度为5时，30小时内，对照化合物SAHA和本发明部分化合物对U937细胞的粒细胞分化诱导率，其中SAHA诱导率为42.25%，化合物ll，12,和16的分化诱导率达61.86%，62.06%和68.53%。二、本发明化合物对人白血病细胞U937细胞细胞周期的影响(参考Nebbioso,A.;Clarke,N.等人报道的方法，NatMed.2005,11,77-84.)收集细胞(2.5X105),悬浮于500^L低渗缓冲溶液(0.1%TritonX-IOO，0."/。拧檬酸钠,5(Hig/mL碘化丙吡(PI)以及RNAseA)中。于黑暗中(C孵育30分钟，再悬浮于500碘化丙吡的PBS溶液中(0.25pg/mL)。用FACS流式细胞仪检测样品，使用CellQuest软件(BectonDickinson),及ModFitLT软件(第3版，Verity)获取并分析数据。所有试验均进行两次或两次以上。本发明化合物1116对人白血病细胞U937细胞细胞周期的影响数据图参见附图2。从图2中可以看出，浓度为5时，30小时内，对照化合物SAHA使U937细胞停滞于G2期，化合物1115使细胞周期停滞于G1期，而化合物16使细胞周期停滞于S期。三、本发明化合物对人白血病细胞U937细胞凋亡的影响(参考Altucci，L.;Rossin，A.等人报道的方法，Nat.Med.2001,7，680-68)以活化的caspase3作为检测细胞凋亡的指标(B-Bridge)。用FACS流式细胞仪检测样品，使用CellQuest软件(BectonDickinson)获取并分析数据。本发明化合物1116对人白血病细胞U937细胞凋亡的影响数据图参见附图2。从图2中可以看出，浓度为5pM时，30小时内，对照化合物SAHA对U937细胞的凋亡诱导率为18.65%，而化合物11对细胞凋亡的诱导率为16.69%。四、本发明化合物对p21蛋白表达水平的影响(参考Nebbioso，A.;Clarke,N.等人报道的方法，Nat,Med.2005,11,77-84.)约100|xg总蛋白提取物由15%聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，Westernblots检测。以tubulin作为等量蛋白上样内参。结果见图3。从图3中可以看出，本发明化合物均可不同程度的促进微管蛋白的乙酰化。五、本发明化合物化合物对a-微管蛋白乙酰化水平的影响(参考Mai,A.;Massa,A.等人报道的方法，J.Med.Chem.2005，48，3344-3353.)约50吗含有a-微管蛋白的总蛋白提取物由10%聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，Westernblots检测。以ERKs作为等量蛋白上样内参。结果见图3。从图3中可以看出，本发明化合物均可不同程度的促进微管蛋白的乙酰化。六、本发明化合物对HDACs的抑制作用(参考HeltwegB，JungM等所报道方法，AnalBiochem2002;302:175-83.)使用市售的HDACs抑制活性检测试剂盒(AK-500，BIOMOL)，以FlurordeLysTM作为底物，HeLa细胞的核提取物中含有不同亚型的HDACs，以及其它一些细胞核因子，这个核提取物可以用于检测化合物对HDACs的一般抑制活性。具体操作步骤为首先用适量DMSO配制化合物的原液，然后按梯度稀释化合物，每个化合物有5个不同浓度用于检测。试验是在96孔的白色聚苯乙烯微孔板上进行的，具体操作是将含有HDACs的HeLa核提取物与FlurordeLysTM底物以及不同浓度的待检测化合物混合，于25'C孵化，20分钟后，加入FlurordeLysTM显色剂，使用荧光检测器于360460nm检测微孔板内各个小孔的荧光强度，各个浓度的化合物重复3遍。试验结果见表1。表1本发明化合物对HDACs的抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>8>2.217160.057SAHA0.053--七、本发明化合物对HDAC1和HDAC4的抑制试验(参考LovelandBE,JohnsTG,MackayIR等人报道的方法，BiochemInt1992;27:501-10)ZR75.1细胞在IP缓冲液(50mMpH值为7.0的Tri-HCl，180mM氯化纳溶液，0.15%NP-40,10%甘油，1.5mM氯化镁溶液，1mM高锰酸钠溶液以及0.5mM氟化钠溶液)中裂解，裂解过程中加入蛋白酶抑制剂(Sigma)。加入lmMDTT，0.2mMPMSF，在冰浴中放置10分钟，于13000rmp离心30分钟。取1000吗提取物，加IP缓冲溶液至l毫升，再预先加入20^LA/Gplus琼脂糖(SantaCruz)于摇床上4'C下孵育30分钟至1小时。取上清液至新的试管中，加入抗体(约34吗)，于摇床上4'C下过夜使充分免疫共沉淀。HDACl的抗体购于Sigma。阴性对照为与纯化的IgG(SantaCruz)免疫共沉淀的等量蛋白提取物。次日，分别在各个免疫共沉淀物中加入20pLA/G和琼脂糖(SantaCruz)，继续孵育2小时。简单离心，并用冷的IP缓冲溶液多次洗涤以回收未结合的A/G。样品在PBS中洗涤两次，再悬浮至20(iL无菌PBS中。HDAC抑制试验按照试剂盒生产商(Upstate)的使用说明进行。即将与HDACl(或HDAC4)或纯化的IgG免疫共沉淀的样品分别混合均匀。再取10免疫共沉淀物与事先放射标记并连接有strep加vidine琼脂头(Upstate)的"H-组蛋白H4共同孵育。每个试管中需要加入120,000cpm乙酰化的3H-组蛋白H4多肽，1XHDAC缓冲溶液，10nL免疫共沉淀物，再加入HDAC抑制剂(或不加抑制剂作为对照)，最终体积约为200pL。样品在缓慢旋转的状态下于37'C孵育过夜。次日，加入50nL反应终止溶液，取100pL样品，经简单离心后用计数器检测，重复两次检测。试验共进行4组。结果见表2。表2是本发明化合物对HDAC1和HDAC4的抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>从表2可以看出，本发明化合物对HDAC1的抑制活性比SAHA弱，但化合物12，15和16对HDAC4的抑制活性远远强于SAHA，化合物12对HDAC1和HDAC4的选择性高达2282.8倍，化合物15和16对HDAC1禾BHDAC4的选择性分别为201.46和716.72,而SAHAHDAC1和HDAC4的选择性仅为1.09。八、本发明化合物对肿瘤细胞的抑制试验共选用四种肿瘤细胞，分别为HCT116，A549，PC3和HEPG2。将细胞接种于96孔的平板中(每孔约有4000个细胞)，24小时后，将不同浓度的化合物加入至细胞中，48小时后，各小孔中分别加入MTT的PBS溶液(浓度为5mg/ml),于37卩孵育4小时，除去MTT，每个小孔中分别加入100nlDMSO(含量为100%)，于570nm下检测(采用ThermoMultiskanSpectrum)。化合物110对肿瘤细胞的的抑制活性数据参见表3，化合物1116对肿瘤细胞的抑制活性数据参见表4。可以看出，化合物对不同株肿瘤细胞具有选择性，化合物对HCT119细胞的细胞毒作用普遍较强。表3本发明化合物对肿瘤细胞的抗增殖作用<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>表4本发明化合物对肿瘤细胞的抗增殖作用<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>图1是本发明化合物对人白血病细胞U937细胞粒细胞分化的影响。图2是本发明化合物对人白血病细胞U937细胞细胞周期和凋亡的影响(图中每个化合物所对应柱状图中从左至右四个柱子依次代表G1、S、G2、Apo)。图3是本发明化合物对p21蛋白表达水平以及a-微管蛋白乙酰化水平的影响具体实施方式移取10.6mL甲苯(0.1mol)，溶于150mLCH2Cl2中，再移取7.96mL氯乙酰氯(O.lmol)，冰浴冷却至0。C，缓慢加入26.7gA1C13(0.2mol),加毕，加热至微沸，8小时后，停止加热，室温搅拌过夜。将所得混合物倾倒入200g碎冰中，分液，取有机层，水层再用CH2Cl2(50mLx2)萃取，合并有机层，用饱和食盐水(20mL)洗涤，干燥。浓縮得2-氯-p-甲基苯乙酮粗品，直接进行下一步反应。将该粗品用95X乙醇溶解(100mL)，加入硫脲11.4g(0.15mol)，搅拌使充分溶解，加热回流2h，冷却至室温。所得的灰白色沉淀过滤，加少量水得浊液，再用2NKOH调节pH至碱性，用乙酸乙酯(100mLx3)萃取，合并萃取液，用饱和食盐水(20mL)洗涤，干燥。浓縮得粗品，重结晶后得12.3g，产率为69.3%。取5-p-甲基苯基噻唑-2-氨基A5.0g(26.3mmol)和对甲酰基苯甲酸甲酯5.2g(31.6mmol)溶于无水甲苯中，加热回流，反应过程中生成的水用分水器去除，反应2h后，将反应液冷却至室温。将析出的黄色沉淀.抽滤，用少量冷的甲苯洗涤，置入反应瓶中，加入甲醇(50mL)，于室温搅拌10min.，缓慢加入NaBH41.2gG1.6mmol)，随后，室温搅拌30min。将反应液浓縮至千，加入50mL水，再用乙酸乙酯(30mLx2)萃取，合并乙酸乙酯液，用10mL饱和食盐水洗涤。在乙酸乙酯液中滴加浓盐酸使仲胺成盐，抽滤得产品盐酸盐。将盐酸盐用2NNaOH溶液游离后，乙酸乙酯(30mLx2)萃取，合并乙酸乙酯液，用lOmL饱和食盐水洗漆，无水NaS04干燥，蒸除溶剂后得粗品，重结晶得5.47g，产率为61.3%。实施例15-，甲基苯基噻唑-2-氨基的制备实施例24-((5-p-甲基苯基噻唑-2-胺基)甲基傳甲酸甲酯的制备实施例34-((乙基(5-p-甲基苯基噻唑-2-基)胺基)甲基傳甲酸甲酯的制备4-((5-p-甲基苯基噻唑-2-胺基)甲基)苯甲酸甲酯1.3g(3.85mmol)溶于无水DMF中，冰浴冷却至0。C，缓慢加入60%NaH0.185g(4.62mmol)，加毕，于室温搅30min。移取溴乙烷0.56mL(7.7mmo1)，用2mL无水DMF稀释后，缓慢地加入反应液中，加毕，室温搅拌3h。在反应液中加入20mL水，再用乙酸乙酯(50mLx2)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(lOmL)洗涤，干燥，浓縮至干，柱层析得浅黄色油状物0.84g，产率为59.8%。将(￡)-3-(5-((苄基(乙基)胺基)甲基)呋喃-2-基)丙烯酸乙酯0.35g(1.0mmol)加入至新鲜配制的羟胺溶液中，随即加入0.03g(0.5mmol)氢氧化钾，室温搅拌2h。将反应液倾倒至20mL水中，用2N的盐酸调节pH至7，加乙酸乙酯萃取(15mLx2)，合并乙酸乙酯液，依次用饱和NaHC03溶液，水，饱和食盐水洗涤，无水NaSCV千燥，浓縮，重结晶得产品0.15g，产率为41.7%。lH画R(DMSO-A，300MHz，J，ppm)1.18(t，3H)，2.26(s，3H),3.51(q,2H),4.74(s,2H)，7.00(s,1H),7.17(d,2H,J=7.9)，734(d,2H，J=8.0)，7.73(d,4H,J=8.0);MS(ESI)m/z366(M-l);IR(KBr)v(cm-1)=3449,3253,2975,1609,1547。羟胺溶液的配制方法为取盐酸羟胺1.28g(18.4mmol)，加入3.2mL甲醇，加热至4(TC，另取1.03g(18.4mmol)氢氧化钾，加入6.0mL甲醇充分溶解后，倾倒于盐酸羟胺的甲醇溶液中，搅拌2min，冷却至0'C,抽滤除去无机盐，即得羟胺溶液。制备方法将实施例3中的溴乙烷用溴丙烷替换，其它制备方法同实施例3和4。Yield:40.2%;&NMR(DMSO-4300MHz,3,ppm)0.88(t,3H)，1.64(m，2H)，3.43(t，2H)，4.78实施例4A^羟基-4-((乙基(5-，甲基苯基噻唑-2-基)胺基)甲基)苯甲酰胺(1)的制备实施例5JV-羟基-4-((丙基(5-化甲基苯基噻唑-2-基)胺基)甲基)苯甲酰胺(2)的制备(s,2H),7.07(s,1H)，7.17(d,2H,J-7.9),7.40(d,2H，J=8.0)，7.71(d,4H,J=8.0)，8.98(s，1H)，11.13(s,1H);MS(ESI)m/z380(M-l);IR(KBr)v(cm1)=3462，2954,1630,1550。实施例6iV-羟基-4-((异丙基(5-,甲基苯基噻唑-2-基)胺基)甲基)苯甲酰胺(3)的制备<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>制备方法将实施例3中的溴乙烷用2-溴丙烷替换，其它制备方法同实施例3和4。Yield:38.5%;'H薩R(DMSO-4300MHz,<5，ppm)1.23(s,3H)，1.26(s，3H),2.29(s,3H),4.36(m，1H)，4.67(s，2H),7.05(s，1H),7.16(d，2H,J=8.0)，7.42(d,2H,J=8.3),7.68(d,2H,J=8.1),7.70(d,2H，J=8.3),8.90(s，1H)，11.08(s,1H);MS(ESI)m/z382(M+1);IR(KBr)v(cm")=3439:2975,1658,1644。实施例7W-羟基-4-((丁基(5-p-甲基苯基噻唑-2-基)胺基)甲基)苯甲酰胺(4)的制备<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>制备方法将实施例3中的溴乙烷用溴丁烷替换，其它制备方法同实施例3和4。Yield:40.5%;'H丽R(DMSCW6,300MHz,J，ppm)0.89(t，3H),1.33(m,2H)，1.61(m，2H)，2.29(s,3H)，3,46(t,2H),4.77(s,2H)，7.07(s，1H),7.17(d,2H，J=8.1)，7.40(d，2H，J=8.1),7.72(d:4H,J=7.2),9.04(s,1H)，U.20(s，1H);MS(ESI)m/z418(M+Na);IR(KBr)v(cm")=3288，292，2854,1687。实施例8W-羟基-4-((异丁基(5卞-甲基苯基噻唑-2-基)胺基)甲基)苯甲酰胺(5)的制备<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>制备方法将实施例3中的溴乙垸用异溴丁烷替换，其它制备方法同实施例3和4。Yield:41.7%;&NMR(DMSO-4300MHz,3,ppm)0.90(s，3H),0.92(s,3H)，2.16(m，1H),2.3(s,3H)，4.81(s，2H),5.75(s,2H),7.07(s,1H),7.18(d,2H，J=8.1)，7.39(d，2H，J=8.4),7.71(d，4H,J=8.1)，9.0(s,1H),11.14(s,IH);MS(ESI)m/z3%(M+l);IR(KBr)v(cm。=3286,2922,2850,1627。实施例9AL羟基-4-((戊基(5-p-甲基苯基噻唑-2-基)胺基)甲基)苯甲酰胺(6)的制备<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>制备方法将实施例3中的溴乙垸用溴戊烷替换，其它制备方法同实施例3和4。Yield:42.4%;丄HNMR(DMSO-A,300MHz，&ppm)0.85(t,3H),1.27(m,4H)，1.63(m,2H),2.3(s,3H)，3.46(t,2H)，4,78(s，2H)，7.08(s，IH)，7.1(d，2H，J=8.1),7.4(d，2H，J=7.8)，7.71(d，4H，J=8.1),9.02(s,IH),lU9(s,IH);MS(ESI)m/z410(M+l);IR(KBr)v(cm-1)=3281,2960，2946,1619，1639。实施例10AL羟基-4-((己基(5-，甲基苯基噻唑-2-基)胺基)甲基)苯甲酰胺(7)的制备<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>制备方法将实施例3中的溴乙烷用溴己烷替换，其它制备方法同实施例3和4。Yield:44.1%;'HNMR(DMSO-^,300MHz,<5，ppm)0.84(t,3H),1.27(m，6H),1.61(m,2H),2.3(s,3H)，3.46(t，2H),4.77(s,2H)，7.07(s，IH)，7.17(d,2H,J=8.1)，7.39(d，2H,J=8.1)，7.72(t，4H,J=8.1)，9.01(s，IH)，11.18(s，IH);MS(ESI)ra/z424(M+l);IR(KBr)v(cm")=3217，2932，2854,1687。实施例11iV-羟基-4-((辛基(5-p-甲基苯基噻唑-2-基)胺基)甲基)苯甲酰胺(8)的制备制备方法将实施例3中的溴乙烷用溴辛烷替换，其它制备方法同实施例3和4。Yield:44.6%;'HNMR(DMSO-c4，300MHz,&ppm)0.84(t,3H)，1.25(m,10H),1.61(m,2H)，2.3(s,3H)，3.46(t，2H)，4.77(s，2H),7.08(s,1H),7.17(d,2H，J-7.8),7.39(d,2H，J=7.8)，7.71(d,4H,J=7.8),9.0(s，1H),1.7(s,1H);MS(ESI)m/z450(M-1);IR(KBr)v(cm")=3288，2932,2847，1616,1538。实施例12A^羟基-4-((苯甲基(5-，甲基苯基噻唑-2-基)胺基)甲基)苯甲酰胺(9)的制备制备方法将实施例3中的溴乙烷用溴苄替换，其它制备方法同实施例3和4。Yield:42.5%;NMR(DMSO-《，300MHz,&ppm)2.3(s,3H),4.77(s,2H),4.80(s,2H)，7.09(s:1H)，7.18(d，2H，J=8.0)，7;287.36(m，5H),7.39(d，2H，J=8.1),7.71(d,2H,J=7.9),7.73(d,2H,J=7.9)，8,99(s，1H),11.16(s，1H);MS(ESI)m/z428(M-1);IR(KBr)v(cm")=3443，2925，2847,1634。实施例13^-羟基-4-(((2-(0-甲基苯氧基)乙基)(4-/7-甲基苯基噻唑-2-基)胺基)甲基)苯甲酰胺(10)的制备制备方法将实施例3中的溴乙烷用2-(o-甲基苯氧基)乙基溴替换，其它制备方法同实施例3和4。Yield:41.9%;'HNMR(DMSO-^，300MHz,&ppm)2.1(s,3H)，2.3(s,3H),3.98(t,2H),4.27(t,2H),4.88(s,2H)，6.83(t,1H),6.97(d，1H,J=7.8),7.09(s,1H),7.09~7.13(m,2H),7.17(d,1H,J-8.0),7.41(d,1H，J=8.0),7.71(dd，4H,J-6.7),8.96(s，1H),11.14(s,IH);MS(ESI)m/z472(M-1);IR(KBr)v(cm-1)=3438,2932，1648，1541。实施例14iV-羟基-4-(((2-苯氧基乙基)(4，甲基苯基噻唑-2-基)胺基)甲基)苯甲酰胺(11)的制备制备方法将实施例3中的溴乙烷用2-苯氧基乙基溴替换，其它制备方法同实施例3和4。Yield:41.2%;'HNMR(DMSO-^，300MHz,<5，ppm)2.31(s,3H),3.94(t，2H)，4.28(t，2H)，4.86(s,2H),6.91~6.97(m，3H),7.12(s,IH)，7.18(d，2H,J=8.1),7.25~7.31(m,2H)，7.42(d,2H,J=8.1):7.71(d,2H，J=8.1)，7.72(d,2H,J=7.8)，9.02(s，1H)，lU8(s,IH);MS(ESI)m/z458(M-1);IR(KBr)v(cm4)=3447,2925,1638,1541。实施例15;V-羟基-4-(((2-(p-甲基苯氧基)乙基)(4，甲基苯基噻唑-2-基)胺基)甲基)苯甲酰胺(12)的制备制备方法将实施例3中的溴乙烷用2-(p-甲基苯氧基)乙基溴替换，其它制备方法同实施例3和4。Yield:45.2%;^NMR(DMSO-^，300MHz,5,ppm)2.22(s，3H)，2.25(s,3H),3.91(t,2H),4.24(t,2H)，4.84(s,3H),6.84(d,2H,J=8.4)，7.07(d,2H，J=8.1),7.12(s,1H),7.18(d，2H,J=8.1),7.41(d,2H,J=8.1),7.72(d,2H,J=8.1)，7.73(d，2H，J=8.1),9.05(s,1H),11.17(s，IH);MS(ESI)m/z472(M-1);IR(KBr)v(cm-1)=3615，3566,3459,2911，1648。实施例16W-羟基-4-(((3-苯氧基丙基)(4，甲基苯基噻唑-2-基服基)甲基)苯甲酰胺(13)的制备制备方法将实施例3中的溴乙烷用3-苯氧基丙基溴替换，其它制备方法同实施例3和4。Yield:43.3%;NMR(DMSO-t/6，300MHz,&ppm)2.11(m,2H),2.30(s,3H)，3.67(t,2H),4.02(t，2H)，4.79(s，3H)，6.90~6.93(m，3H)，7.09(s,1H),7.16(d,2H，J-7.8),7.25~7.30(m，2H)，7.40(d,2H，J=7.8),7.72(t,4H),9.0(s，1H)，1L17(s,1H);MS(ESI)m/z472(M-l);IR(KBr)v(cm—1)=3459，1633,1548。实施例17W-羟基-4-(((3-(p-甲基苯氧基)丙基)(4，甲基苯基噻唑-2-萄胺基)甲基)苯甲酰胺(14)的制备制备方法将实施例3中的溴乙垸用3-(p-甲基苯氧基)丙基溴替换，其它制备方法同实施例3和4。Yield:46.1%;!HNMR(DMSO-cf6，300MHz，&ppm)2.06(m，2H)，2.22(s,3H),2.30(s,3H),3.66(t,2H)，3.98(t,2H),4.78(s,2H),6.81(d,2H,J=8.7),7.65(d,2H,J=8.4)，7.09(s，1H),7.16(d，2H,J=8.1),7.39(d，2H，〗=8.1),7.71(d,2H,J=8.1)，7.72(d，2H，J=8.1),9.10(s,1H),11.2(s，1H);MS(ESI)m/z486(M-l);IR(KBr)v(cm—1)=3444,2918,1634,1548。实施例18^-羟基-4-(((4-苯氧基丁基)(4-/;-甲基苯基噻唑-2-基)胺基)甲基)苯甲酰胺(15)的制备<formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula>制备方法将实施例3中的溴乙垸用4-苯氧基丁基溴替换，其它制备方法同实施例3和4。Yield:43.5%;'H画R(DMSO-rf6，300MHz,J,ppm)1.62(m，4H)，2.14(s，3H)，3.41(t，2H),3,84(s,2H),4.63(s,2H)，6.73~6.78(m，3H),6.93(s,1H),6.99(d,2H，J=8.1),7.03~7.14(m，2H),7.25(d,2H，J=8.1)，7.56(d,4H，J=8.2)，8.86(s，1H)，11.02(s,1H);MS(ESI)m/z488(M+1);IR(KBr)v(cm')=3594,3416,2847,1644。实施例19^-羟基-4-(((4-0>甲基苯氧基)丁基)(4，甲基苯基噻唑-2-基)胺基)甲基)苯甲酰胺(16)的制备制备方法将实施例3中的溴乙烷用4-(/7-甲基苯氧基)丁基溴替换，其它制备方法同实施例3和4。Yield:41.3%;NMR(DMS0-4，300MHz,(5,ppm)1.76(m,4H),2.22(s,3H),2.97(s,3H)，3.57(t,2H),3.95(t,2H)，4.78(s,2H),6.84(d,2H,J=8.4)，7.06(d，2H,J=8.4),7.08(s，1H)，7.15(d，2H,J=8.1),7.39(d，2H，J-8.1)，7,71(d，2H,J=8.1)，7.72(d,2H,J=8.1)，9.07(s，1H)，11.19(s，1H);MS(ESI)m/z502(M+1);IR(KBr)v(cm-1)=3594,3409,2932,2678,1633。权利要求1、通式(I)的化合物、其立体异构体、水合物或药学上可接受的盐其中Ar表示苯环、吡啶环或被1～4个X取代基取代的含有0～2个氮原子、硫原子或氧原子的五元或六元芳香环，其中取代基X是氢、卤素、氨基、羟基、硝基、氰基、C1-C4的烃基、C1-C4的烷氧基、C1-C4的氨基烷基、C1-C4的烷基胺基、C1-C4的酰基、C1-C4的酰胺基、C1-C4的烷氧基羰基、与苯环或含有1～2个氮原子或1个硫原子或1个氧原子的五元或六元杂环连接的C1-C4的烷基或烷氧基；R1表示氢、C1-C8的烃基、与Y取代的苯氧基连接的C2-C6的烃基，Y是氢、C1-C4的烃基或C1-C4的烃氧基。2、权利要求l的化合物，其中Ar表示对甲基苯基。3、权利要求1的化合物，其中R,表示乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、戊基、己基或辛基。4、权利要求l的化合物，其中R!表示2-(o-甲基苯氧基)乙基、2-苯氧基乙基、2-(p-甲基苯氧基)乙基、3-苯氧基丙基、3-(p-甲基苯氧基)丙基、4-苯氧基丁基或4-(p-甲基苯氧基)丁基。5、一种通式UI)的化合物中间体<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>(II)其中Ar、R!的定义同权利要求l;R2表示氢或d-Q的烷基。6、一种药物组合物，其中含有权利要求1的化合物和药学上可接受的载体。7、权利要求l的化合物用于制备治疗与细胞分化或增殖相关的疾病的药物的用途。8、权利要求7的用途，其中与细胞分化或增殖相关的疾病是实体瘤或白血病。全文摘要本发明涉及药物化学领域，具体涉及一类氧肟酸类组蛋白去乙酰化酶抑制剂(I)，本发明还公开了这些化合物的制备方法、含其的药物制剂及其医药用途。文档编号A61K31/426GK101230049SQ20081002020公开日2008年7月30日申请日期2008年2月27日优先权日2008年2月27日发明者卢塞尔·安徒生,安吉拉·奈伯逊,尤启冬,波杨,红苏申请人:中国药科大学