% ;作为实施方案之一，当为凝胶或软膏剂时，作为示例性的说明，所述单 位凝胶或软膏剂中含尿多酸肽的量可以为0. 2~12. 8mg/ml，作为示例性的说明，可以为如 0.2、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4或12.811^/1111的尿多酸肽。
[0021] 本发明尿多酸肽制备治疗瘢痕药物的应用中，所述尿多酸肽可以是本领域任何来 源的尿多酸肽，作为实施方案之一，所述尿多酸肽包括马尿酸、苯乙酰谷氨酰胺、4-羟基苯 乙酸和5-羟基吲哚乙酸；作为实施方案之一，本发明所述尿多酸肽中马尿酸、苯乙酰谷氨 酰胺、4-羟基苯乙酸和5-羟基吲哚乙酸量占总质量的百分比为28. 5%~37. 75% ;作为 实施方案之一，本发明所述lmg尿多酸肽中含马尿酸0. 10mg~0. 15mg、苯乙酰谷氨酰胺 0· 15mg~0· 20mg、4_羟基苯乙酸10yg~20yg、5_羟基Π 引噪乙酸2.5yg~7.5yg。
[0022] 可以采用本领域常规的方法制备本发明所述尿多酸肽，作为实施方案之一，所述 方法包括但不限于如下方法制备：
[0023] 1)取新鲜尿液，加入HC1调节pH值，进行超滤，收集分子量低于10kD的滤液；然后 将滤液以1. 51/min流速上XAD-8硅胶柱，之后先用20L蒸馏水以31/min吸附柱，再用15L 乙醇以1. 01/min的流速加入XAD-8柱中，收集有色部分的洗脱液；真空干燥处理，缓慢升温 至50°C，直到溶剂全部蒸发；此后进行冷冻干燥，得到尿多酸肽组合物的干品；
[0024] 2)用蒸馏水溶解干品至浓度为40mg/ml，用NaOH调节pH值，即得尿多酸肽粗品溶 液；将粗品溶液置4°C低温条件120hr，取上清液进行微孔滤膜过滤，滤液用超滤膜超滤，除 去热源和病毒。
[0025] 本发明尿多酸肽在制备治疗瘢痕的药物的应用中，作为实施方案之一，所述步骤 1) 中的pH值为1.5-3. 0。
[0026] 本发明尿多酸肽在制备治疗瘢痕的药物的应用中，作为实施方案之一，所述步骤 2) 中的pH值为6. 5-7. 5。
[0027] 本发明尿多酸肽在制备治疗瘢痕的药物的应用中，作为实施方案之一，所述尿多 酸肽采用如下方法制备：
[0028] 1)取新鲜尿液，加入Imol/lHCl调节其pH至2. 0,用尼龙布过滤收集尿液，超滤设 备进行超滤，在超滤设备中加入去离子水，洗泡超滤膜，将收集的尿液倒入加料桶中，开启 纳滤，收集分子量低于10kD的滤液；取XAD-8硅胶，用95%乙醇浸泡，装入袋中放置于塑桶 内，制成吸附柱，用95%乙醇冲洗柱子，之后用同样体积的去离子水洗涤吸附柱；然后将过 滤后的尿液以1. 51/min的流速加入柱中，加完后先用蒸馏水以31/min流速加入吸附柱，再 用95%乙醇以1. 01/min的流速加入XAD-8柱中，收集有色部分洗脱液；经真空干燥处理， 缓慢升温并控制料液温度为50°C至溶剂全部蒸发；冷冻干燥，得到尿多酸肽组合物的干 品；
[0029] 2)用蒸馏水溶解干燥残留物，使其浓度为40g/ml，用2mol/l NaOH调节尿多酸肽 粗品的pH值到7. 4后，于4°C低温条件放置120hr，取上清液，依次用1 μ m和0. 45 μ m的微 孔滤膜过滤，然后用10000分子量的超滤膜超滤，除去热源，再经Ultipor VF?DV50(PALL公 司）过滤器除病毒，即得。
[0030] 本发明所述尿多酸肽治疗瘢痕的应用，可以有效地治疗瘢痕，解决目前市场上大 部分瘢痕治疗药物疗效不显著的问题。
[0031] 经人体皮肤成纤维细胞体外实验和动物实验，尿多酸肽对皮肤瘢痕成纤维细胞具 有明显的诱导凋亡作用，且对兔耳瘢痕治疗疗效显著，因而可以用于制备治疗皮肤瘢痕的 药物。体外细胞实验与动物实验证实，尿多酸肽除了具有抗癌作用，还能够诱导成纤维细胞 凋亡，抑制其增殖，抑制程度随尿多酸肽浓度的增加而增大，成明显的量效关系，且抑制率 高达88. 45%，而目前临床治疗瘢痕常用药物的有效成分-积雪草甙、姜黄素、以及维甲酸 几种药物的最高抑制率为52. 99%~75. 69%。
[0032] 此外、动物实验也表明，含尿多酸肽的药物涂抹于兔耳瘢痕处，经28天后，瘢痕明 显减小，瘢痕增生块生长抑制率达89. 28%，而常用的药物积雪苷霜和复方肝素钠尿囊素 凝胶以及含积雪草甙、姜黄素、维甲酸和尿囊素的药膏对瘢痕增生块抑制率为50. 46%~ 76. 68%，瘢痕中胶原纤维面密度和胶原纤维I与III的比例较其他几种药物明显增大。
[0033] 相比其他治疗瘢痕的药物，本发明尿多酸肽疗效更加显著，将是用于临床治疗皮 肤瘢痕较好的药物之一。
【附图说明】
[0034] 图1 :为实验所用的5种药物随药物浓度对人瘢痕成纤维细胞增殖抑制率变化曲 线，A :积雪草苷对人瘢痕成纤维细胞增殖抑制率变化曲线；B :姜黄素对人瘢痕成纤维细胞 增殖抑制率变化曲线；C :维甲酸对人瘢痕成纤维细胞增殖抑制率变化曲线；D :尿囊素对人 瘢痕成纤维细胞增殖抑制率变化曲线；E :尿多酸肽对人瘢痕成纤维细胞增殖抑制率变化 曲线；
[0035] 图2为细胞增殖抑制率最大时，5种药物各自的抑制率差异显著性分析柱状图； (其中 *P < 0· 5, **P < 0· 01，η = 3);
[0036] 图3为实验所用的5种药物随药物含量对兔耳瘢痕增生块抑制率变化曲线，A :积 雪草苷对兔耳瘢痕增生块抑制率变化曲线；B :姜黄素对兔耳瘢痕增生块抑制率变化曲线； C :维甲酸对对兔耳瘢痕增生块抑制率变化曲线；D :尿囊素对兔耳瘢痕增生块抑制率变化 曲线；E :尿多酸肽对兔耳瘢痕增生块抑制率变化曲线；
[0037] 图4为兔耳瘢痕增生块抑制率最大时，8种药物各自的差异显著性分析柱状图。 (其中 *P < 0· 5, **P < 0· 01，**P < 0· 001，η = 4)。
【具体实施方式】
[0038] 以下实施例用于进一步阐述本发明，但不以任何的方式限制本发明的有效范围。
[0039] 实施例1、尿多酸肽的制备与鉴定
[0040] 1.尿多酸肽组合物的制备
[0041] 取20L新鲜尿液，加入1L Imol/lHCl调节其pH至2.0,用尼龙布过滤收集尿液。超 滤设备进行超滤，在超滤设备中加入去离子水，洗泡超滤膜，将收集的尿液倒入加料桶中， 开启纳滤，收集分子量低于10kD的滤液。
[0042] 取XAD-8硅胶10kg，用25L95%乙醇浸泡20min，装入袋中放置于塑桶内，制成吸附 柱，用95%乙醇（V/W=乙醇/硅胶=2)冲洗柱子，之后用同样体积的去离子水洗涤吸附 柱2次，除净柱子中的乙醇；然后将过滤后的尿液以1. 51/min的流速加入柱中，加完后先用 20L蒸馏水以31/min流速加入吸附柱，再用15L95%乙醇以1. 01/min的流速加入XAD-8柱 中，使吸附的有效成分解离下来，收集有色部分即为有效洗脱液；将收集的有效成分经真空 干燥处理，缓慢升温并控制料液温度为50°C，直到溶剂全部蒸发；此后进行冷冻干燥，得到 尿多酸肽组合物的干品。
[0043] 用蒸馏水溶解干燥残留物，使其浓度为40mg/ml，用2mol/l NaOH调节尿多酸肽粗 品的pH值到7. 4后，即得尿多酸肽粗品溶液；将粗品置4°C低温条件120hr，去处理后粗品 的上清液，依次用1 μ m和0. 45 μ m的微孔滤膜过滤，滤液即为尿多酸肽溶液；用10000分子 量的超滤膜超滤，除去热源，再经Ultipor VF?DV50(PALL公司）过滤器除病毒，回收率约为 2. 5% (体积比）。
[0044] 2.尿多酸肽组合物中各成分结构确证与含量检测
[0045] 本发明中从健康人尿中提取的尿多酸肽组合物含四种有机酸（马尿酸、苯乙酰谷 氨酰胺、4-羟基苯乙酸、5-羟基吲哚乙酸）及一系列小分子肽等活性成分，结构确证试验主 要针对上述两大类物质。四种有机酸用高效液相色谱法。采用加样确认并分离测定以及质 谱法测定分子量；小分子肽采用液-质联用，测定肽的分子量范围，并确定了其中两个主要 肽的序列。
[0046] 2. 1尿多酸肽中四种有机酸结构确证
[0047] 2. L 1仪器分析型HPLC，日本岛津公司LC-10AVP。色谱柱：DikMA公司，Luna 5 μ 18 (Ζ), 250 X 4. 6mm (dm) 〇
[0048] 2. 1. 2标准品4-羟基苯乙酸；5-羟基吲哚乙酸；马尿酸；苯乙酰谷氨酰胺均购置 Sigma公司。
[0049] 2. 1. 3色谱条件流动相：甲醇：水：冰醋酸=50 : 15 : 1 ;流速：lml/min ;进样 量20ul ;检测波长：260nm。
[0050] 2. 1. 4对照品溶液的制备
[0051 ] 分别精密称取4-羟基苯乙酸、5-羟基吲哚乙酸、马尿酸、苯乙酰谷氨酰胺45mg、 5. 0mg、45mg、60mg置4个50ml的量瓶中，加水约40ml，超声30min溶解完全，之后定容到刻 度，混匀。
[0052] 2. 1. 5供试样品溶液的制备
[0053] 取尿多酸肽粗品适量，制成每1ml中含8mg的溶液。
[0054] 2.