专利名称：具有神经营养作用的硫酯类化合物及其它的合成方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明属于药物化学领域，具体地讲属于具有神经营养作用的芳香族硫酯类化合物，以及它的合成方法及作为药物的应用方法，特别是作为对抗大脑皮层神经元缺氧损伤的脑保护剂，预防和治疗脑中风等脑损伤和神经退行变性疾病等脑功能障碍药物，尤其是在改善认知能力和提高学习记忆的药物中应用。
背景技术：
神经生长因子对中枢神经的细胞特别是胆碱能神经元的存活及损伤保护起作非常重要的作用。神经生长因子被认为是最有希望的治疗老年性痴呆(AD型)的药物。但神经生长因子均为蛋白类，它们一是难以通过血脑屏障，二是在达到靶点前容易被分解。因此，寻找具有神经营养作用的非蛋白类的神经生长因子或拟神经生长因子小分子化合物是本领域研究的热点。
在天然产物中，有大量的硫酯类化合物存在，由于其结构的特异性，某些化合物具有特殊的生物活性，如化合物(I)可治疗帕金森症(Hamilton，G.S.，Li，J.H.，Chem.Abstr.1999，131，351237)。 (+)-Lactacystin由S.Omura等人于九十年代初从Streptomyces sp.OM-6159的培养基中分离和鉴定的一新颖含硫酯基团的吡咯烷酮-2类花合物(Omura，S.；Fujimoto，T.；Otoguro，K.；Matsuzaki，K.；Moriguchi，R.；Tanaka，H.；Sasaki，Y.J.Antibiot.1991，44，113-116.)，它具有神经营养作用的非蛋白神经生长因子特性。近年来在国外开展了(+)-Lactacystin全合成研究并正在进行大量的药理及药化临床前期研究工作，以期发展成为抗老年痴呆症的新型药物。
我们在开展(+)-Lactacystin的简化类似物的合成研究中发现合成的芳香族硫酯类化合物对PC12细胞没有明显的促分化作用(神经生长因子NGF有明显的分化作用)，但与NGF同样具有对PC12细胞缺氧损伤的保护作用。
本发明的目的在于基于此类化合物的结构特殊性、新颖性以及对神经细胞的显著缺氧保护作用，提供一种具有神经营养作用的硫酯类化合物及其它的合成方法和应用、。
发明内容
具有神经营养作用的硫酯类化合物，这种化合物的通式为 式中，R1代表氢、乙酰氨基(-NHAc)，R2代表氢、羧基及其甲酯、乙酯、乙酰氨基(-NHAc)，Ar代表(1)苯基、取代苯基，取代苯基包括邻、间、对位取代的氟、氯、溴原子以及羟基、甲氧基、乙氧基、N，N-二甲氨基，(2)萘环(α位和β位)、取代萘环，取代萘环包括4，5，6，7，8位取代羟基、甲氧基、乙氧基、氟、氯、溴原子，(3)五元杂环包括呋喃环(α位和β位)、噻吩环(α位和β位)及其取代羟基、甲氧基、乙氧基、氟、氯、溴原子衍生物；R1、R2取代碳原子为R构型、S构型以及消旋体(存在手性碳的情况)的全部异构体。具体地说这种化合物的结构式可以分别是以下结构 这种具有神经营养作用的硫酯类化合物的合成方法，由芳香族羧酸与含巯基化合物通过以BOPCl[Bis(2-oxo-3-oxazolidinyl)phosphinic Chloride]为脱水剂，在三乙胺的作用下，反应生成所述通式(I)的化合物；具体地说合成方法可在氮气保护下，芳香族羧酸与含巯基化合物在无水二氯甲烷中室温反应5～8小时即得通式(I)化合物。具有神经营养作用的硫酯类化合物的应用方法，是将所述的通式(I)的化合物作为药物应用；可以将所述的通式(I)化合物转化成适宜的给药剂型，如有必要，可使用惰性辅加剂和赋形剂；还可以将通式(I)的化合物作为神经细胞特别是大脑皮层神经元缺氧保护剂或脑保护剂；将所述的通式(I)的化合物作为在制备预防和治疗脑中风等脑损伤和神经退行变性疾病等脑功能障碍病药物中的应用，特别是在预防和治疗改善认知能力和提高学习记忆的药物中应用，其应用的方法可以是现行的常规方法。
为了达到更好的效果，本发明优选如下技术方案以无水二氯甲烷为溶剂，在氮气保护，将香酸或β-芳基丙烯酸、巯基化合物以及脱水剂BOPCl混合后，滴加有机碱三乙胺，室温下搅拌反应5-10小时后，即生成通式(I)的化合物。反应用试剂三乙胺为化学纯或分析纯，不须作处理可直接使用。二氯甲烷经氢化钙干燥后蒸出即可使用，该方法的特点是反应条件温和，方法简单易行，适于扩大规模，可用于批量生产。
上述合成路线的特点是按照本发明提供的合成途径，可以根据需要选择不同原料，很方便地构筑一系列硫酯类化合物；本发明提供的合成方法，反应条件温和，操着简单易行，适于扩大规模，易于实现工业化生产目的。
本发明提供的合成硫酯类化合物的方法，文献(E.J.Corey andGregory A.Reichard.J.Am.Chem.Soc.，1992，114，10677-10678)报道曾用于(+)-Lactacystin的合成中，即脂肪族的硫酯类化合物的合成。利用本方法开展芳香族硫酯类化合物如通式(I)所示的合成，未见报道。
利用本发明提供的方法和途径合成的硫酯类化合物[如通式(I)所示]，为结构特异、新颖的化合物，其活性研究特别是对神经元(大脑皮层细胞)的缺氧保护活性研究，尚未见报道。
通过本发明的技术方法合成的通式(I)的化合物具有PCl2细胞和大脑皮层神经元的缺氧保护作用，如化合物1(见实施例1)对PCl2细胞的缺氧保护有显著活性，即剂量为5μg/ml时，存活率为22.66％，而对照组仅为5.44％；又如，化合物5(见实施例5)对大脑皮层神经元的缺氧保护作用显著，即剂量为10μg/ml时，存活率为57.57％，而对照组仅为41.39％。
本发明同时提出了含有本发明通式(I)化合物的药物，将所述化合物转化为适宜的给药剂型，在必要时使用惰性辅助剂和赋形剂即可制成药物。同时提出了应用通式(I)化合物作为神经营养剂，在制备预防和治疗脑功能障碍药物中的应用。本发明的药物组合物可以是油膏、凝胶、糊剂、霜剂、喷雾剂、洗剂、悬浮剂、活性成分在水或非水稀释剂中的溶液或乳剂、糖浆、颗粒或粉剂。
应用本发明通式(I)化合物作为药物，可以采用的剂型是惯用的盖伦给药剂型，例如药膏，片剂，丸剂，胶囊剂，栓剂乳剂，输入液和注射液，这些制剂按众所周知的方法，使用传统的添加剂和赋形剂制得。由此制得的药物根据需要可以按局部，非肠道，口服等途径给药。
由本发明药用组合物形成的药片、糖衣丸、胶囊和药丸，能持有通常的包衣、包膜和保护性基质，它可含有遮光剂。它们可以配成这样的组成，使它们在一定时期内将活性成分仅在或优先在体内特殊部分释放。包衣、包裹和保护性基质可用如多聚物质或蜡之类制成。
活性成分亦可用一种或多种上述稀释剂一起制成微胶囊包形式，药用组合物或药物的生产可用在该技术中的任何已知方法进行，例如将一种或几种活性成分与一种或几种稀释剂混合形成药用组合物，再将组合物制成药物。
通过本发明所作的实验发现，通式(I)化合物作为脑保护剂，对脑缺血、缺氧等脑损伤和神经退行变性疾病等引起的脑功能障碍具有保护和预防作用，此作用适用于临床预防和治疗因缺氧及兴奋毒性损伤导致神经元损伤引起的脑中风、学习记忆低下、认知能力弱以及痴呆症等疾病。
下面用本发明合成的如下代表化合物的生物活性的实验结果来证实本发明的生物活性效果1.对PCl2细胞缺氧损伤的保护作用方法药物剂量5μg/ml，NGF为20ng/ml；缺氧时间12小时；PCl2细胞培养时间9天。实验结果见表1表1对PCl2细胞缺氧损伤的保护作用观察(X±s n＝30)组别 细胞数(视野) 存活率(％)常氧组 72.60±19.28 100.00对照组 3.95±3.46 5.44NGF20.35±5.48**28.03实施例116.45±5.26**22.66实施例27.89±3.72**10.88实施例37.20±5.43*9.92与对照组比较*P＜0.05**P＜0.012.对缺氧/复氧后体外培养中大鼠皮层神经元的保护作用材料和方法1)大脑皮层神经元培养取初生的Wistar大鼠，在无菌条件下分离出大脑皮层，用0.125％胰蛋白酶消化(37℃，30min.)分散后，制成5×105/ml密度的细胞悬液，接种于涂有小牛皮胶的35mm塑料培养器中，每皿2ml，置于36℃、含10％CO2
和空气的培养箱(美国FORMA)内进行培养。培养液由9.4g/L Eagle′sMEM，0.05L/L马血清，0.01L/LN3组合液和谷氨酰胺0.10g/L组成。于培养第3d，在培养液中分别加入细胞分裂抑制剂阿糖胞苷3mg/L以抑制非神经细胞的过度增殖，作用48h后更换新鲜培养液，以后每周换液2次，每次更换一半新鲜培养液。直至培养12d。
2.缺氧-复氧实验培养12d的皮层神经元。按实验分为正常组，对照组，供试品(实施例4-8)各组。供试品各组缺氧前12h在培养液中分别加入50μg、20μg和10μg；正常组和对照组加入等量二甲基亚砜。然后将对照组和供试品各组神经元同时移至2000cm3的恒温(36℃)密闭容器内，连续充以无氧气体(90％N2、10％CO2)，在缺氧条件下继培养6 h后取出，再置含10％CO2和空气的培养箱内复氧培养24h。正常组神经元在常条件下继续培养24h。
3.形态学和神经元存活数的观察用倒置相差显微镜分别观察正常组、对照组和供试品(实施例4-8)各组缺氧/复氧后24h时神经元的形态变化，并在倒置相差显微镜(400×)下每皿按Z字顺序计数相邻视野(0.16mm2/视野)的存活神经元(所计数的神经元必须有晕光，长有突起，经3g/L台盼蓝浸染3min不着色)数作比较。每皿细胞观察20个视野，每个实验观察2皿细胞，实验重复2次。
三.结果供试品(实施例4-8)的较适宜浓度为10μg/mL。
当剂量为50μg/mL时，实施例4对缺氧/复氧后体外培养的大鼠皮层神经元具有明显保护作用(见表2)。当剂量为20μg/mL时，实施例4和实施例5对缺氧/复氧后体外培养的大鼠皮层神经元具有明显保护作用(见表3)。当剂量为10μg/mL时，实施例4-8对缺氧/复氧后体外培养的大鼠皮层神经元具有明显保护作用(见表4)。
表2对缺氧/复氧后体外培养中大鼠皮层神经元的保护作用
(X±s n＝80/视野)组别 神经元数(视野) 存活率(％)常氧组31.95±5.27 100.00对照组13.73±2.77 42.93实施例4 17.00±3.81**53.21实施例5 13.75±2.20 43.03实施例6 15.45±4.31 48.36实施例7 12.55±2.04 39.28实施例8 14.85±2.32 46.48**P＜0.01与对照组比较表3对缺氧/复氧后体外培养中大鼠皮层神经元的保护作用(X±s n＝80/视野)组别 神经元数(视野) 存活率(％)常氧组32.90±4.96 100.00对照组12.92±3.09 39.27实施例4 18.79±3.99**57.11实施例5 16.80±2.62**51.06实施例6 14.31±5.54 43.49实施例7 15.88±3.42 48.27实施例8 14.51±2.14 44.10**P＜0.01与对照组比较表4对缺氧/复氧后体外培养中大鼠皮层神经元的保护作用(X±s n＝80/视野)组别 神经元数(视野) 存活率(％)常氧组33.70±6.23 100.00对照组13.95±3.65 41.39实施例4 17.30±2.74**51.34.
实施例5 17.90±3.28**53.12实施例6 18.85±3.50**55.93实施例7 21.75±4.42**64.54实施例8 22.35±2.83**66.32**P＜0.01与对照组比较与现有技术相比，本发明的有益效果在于1.本发明提供的硫酯类化合物为结构特异、新颖的化合物。
2.本发明提供的合成途径，可以根据需要选择不同原料，很方便地构筑一系列芳香族硫酯类化合物。
3.本发明提供的合成方法，反应条件温和，操着简单易行，适于扩大规模，易于实现工业化生产目的。
4.本发明涉及的芳香族硫酯类化合物[如通式(I)所示]，其活性特别是对神经元(大脑皮层细胞)的缺氧保护活性研究，尚未见报道，通式(I)所述的化合物作为脑保护剂，对脑缺血、缺氧等脑损伤和神经退行变性疾病等引起的脑功能障碍具有保护和预防作用，此作用适用于临床预防和治疗因缺氧及兴奋毒性损伤导致神经元损伤引起的脑中风、学习记忆低下、认知能力弱以及痴呆症等疾病。
具体实施例方式下面所给出的优选实施例，旨在进一步阐明本发明的化合物及其合成方法，而并非限定所举例的化合物的范围，也并非限定本发明权利要求中提出的技术方法，即是说通过这些实施例所述的方法可很容易地制得通式(I)化合物。
本发明的实施例1化合物名称3，4，5-三甲氧基苯甲酸-(3-巯基丙烯酸乙酯)-硫酯，结构式 制备方法将3，4，5-三甲氧基苯甲酸30mg(0.142mmol)、3-巯基丙酸乙酯19mg(0.142mmol)和二(2-氧代-3-恶烷基)磷酰氯(BOPCl)46.9mg(0.184mmol)用无水CH2Cl2(5ml)三者混溶于三口园底烧瓶中，在磁力搅拌、室温下加入Et3N30μL(0.213mmol)，继续反应12小时(TLC检测反应进程)，经乙酸乙酯萃取后，柱层析分离得37mg产品，产率为80.4％。
无色稠状物光谱数据IR maxcm-1(CHCl3)3025，1730，1660，1587，1502，1464，1416，1322，1205，1107；1HNMR(400MHz，CDCl3)δppm7.22(2H，s，Ar-H)，4.19(2H，q，J1＝7.2Hz，J2＝14.4Hz，CO2CH2)，3.92(9H，m，OCH3×3)，3.32(2H，t，J＝6.8Hz，SCH2)，2.73(2H，t，J＝6.8Hz，CH2CO)，1.28(3H，t，J＝7.2Hz，CH2CH3)；13CNMR(100.6MHz，CDCl3)δppm190.3(s)，171.5(s)，152.9(s×2)，142.5(s)，131.8(s)，104.3(d×2)，60.7(q×2)，60.1(t)，56.1(q)，34.3(t)，24.1(t)，14.0(q)；EI-M(m/z)328[M]+，300，283，257，228，195，179，167，152，137，122，109。
本发明的实施例2化合物名称3，4-二甲氧基苯丙烯酸-(3-巯基丙烯酸乙酯)-硫酯，结构式 制备方法依据实施例1，将3，4-二甲氧基苯基丙稀酸50mg(0.240mmol)、3-巯基丙酸乙酯32mg(0.240mmol)和二(2-氧代-3-恶烷基)磷酰氯(BOPCl)76mg(0.300mmol)用无水CH2Cl2(5ml)三者混溶于三口园底烧瓶中，在磁力搅拌、室温下加入Et3N51μL(0.360mmol)，继续反应12小时(TLC检测反应进程)，经乙酸乙酯萃取后，柱层析分离得64mg产品，产率为82.1％。
无色晶体(石油醚/乙酸乙酯)，mp51.0-52.0℃光谱数据IRKBrυmaxcm-13019，1733，1662，1590，1514，1464，1437，1354，1267，1234，1135；1HNMR(400MHz，CDCl3)δppm7.56(1H，d，J＝15.6Hz，ArCH＝)，7.05～7.14(3H，m，Ar-H)，6.58(1H，d，J＝15.6Hz，SCOCH＝)，4.17(2H，q，J1＝7.2Hz，J2＝14.4Hz，COOCH2)，3.93(6H，m，OCH3×2)，3.52(2H，t，J＝6.8Hz，SCH2)，2.69(2H，t，J＝5.6Hz，CH2CO2)，1.27(3H，t，J＝7.2Hz，CH3CH2)；13CNMR(100.6MHz，CDCl3)δppm189.1(s)，171.6(s)，151.4(s)，149.1(s)，140.8(d)，126.7(s)，123.2(d)，122.5(d)，110.9(d)，109.6(d)，60.7(t)，55.9(q)，55.8(q)，34.5(t)，23.8(t)，14.1(q)；EI-MS(m/z)324，296，279，266，224，191，163，148，133，119。
本发明的实施例3化合物的名称为3，4，5-三甲氧基苯丙烯酸-(3-巯基丙烯酸乙酯)-硫酯，结构式
制备方法依据实施例1，将3，4，5-三甲氧基苯基丙稀酸100mg(0.45mmol)、3-巯基丙酸乙酯63mg(0.470mmol)和二(2-氧代-3-恶烷基)磷酰氯(BOPCl)143mg(0.560mmol)用无水CH2Cl2(5ml)混溶于三口园底烧瓶中，在磁力搅拌、室温下加入Et3N94μL(0.680mmol)，继续反应12小时(TLC检测反应进程)，经乙酸乙酯萃取后，柱层析分离得83mg产品，产率为52.2％。
无色晶体(石油醚/乙醚)，mp47.0-48.5℃光谱数据IRKBrυmaxcm-13029，1728，1668，1629，1591，1498，1459，1404，1289，1245，1086；1HNMR(400MHz，CDCl3)δppm7.534(1H，d，J＝15.6Hz，ArCH＝)，6.761(2H，s，Ar-H，6.611(1H，d，J＝16.0Hz，＝CHCO)，4.166(2H，q，J1＝7.0Hz，J2＝14Hz，H-16)，3.894(9H，s，CH3O)，3.261(2H，t，J＝6.8Hz，SCH2)，2.701(2H，t，J＝6.8Hz，CH2CO)，1.276(3H，t，J＝7.2Hz，CH2CH3)；13CNMR(100.6MHz，CDCl3)δppm189.1(s)，171.7(s)，153.4(s)，140.8(d×2)，129.4(s)，123.9(d)，105.4(d)，60.9(q)，60.8(t)，56.1(q)，34.5(t)，23.9(t)，14.2(q)；EI-MS(m/z)354[M]+，309，236，221，190，178，163。
本发明的实施例4化合物名称为2-呋喃甲酸-(3-巯基丙烯酸乙酯)-硫酯，结构式为 制备方法依据实施例1，将呋喃甲酸50mg(0.446mmol)、3-巯基丙酸乙酯59.8mg(0.446mmol)和二(2-氧代-3-恶烷基)磷酰氯(BOPCl)147mg(0.579mmol)用无水CH2Cl2(5ml)混溶于三口园底烧瓶中，在磁力搅拌、室温下加入Et3N93.8μL(0.669mmol)，继续反应12小时(TLC检测反应进程)，经乙酸乙酯萃取后，柱层析分离得54mg产品，产率为52.9％。
无色稠状物光谱数据IR maxcm-1(CHCl3)3024，1723，1651，1568，1469，1375，1349，1253，1228，1204，1160；1HNMR(400MHz，CDCl3)δppm7.59(1H，d，J＝0.4Hz，Ar-H)，7.20(1H，t，J＝0.4Hz，Ar-H)，6.55(1H，p，J＝1.2Hz，Ar-H)，4.16(2H，p，J＝12.8Hz，J2＝12.4Hz，CO2CH2)，3.30(2H，t，J＝7.2Hz，SCH2)，2.72(2H，t，J＝6.8Hz，CH2CO)，1.27(3H，t，J＝6.8Hz，CH2CH3)；13CNMR(100MHz，CDCl3)δppm179.9(s)，171.5(s)，150.5(s)，146.2(d)，115.2(d)，112.2(d)，60.7(t)，34.4(t)，23.0(t)，14.0(q)；EI-MS(m/z)228[M]+，182，149，135，126，95，57。
本发明的实施例5化合物名称对甲氧基苯甲酸-(3-巯基丙烯酸乙酯)-硫酯，结构式 制备方法依据实施例1，将4-甲氧基苯甲酸50mg(0.329mmol)、3-巯基丙酸乙酯44mg(0.329mmol)和二(2-氧代-3-恶烷基)磷酰氯(BOPCl)108mg(0.428mmol)用无水CH2Cl2(5ml)混溶于三口园底烧瓶中，在磁力搅拌、室温下加入Et3N69μL(0.494mmol)继续反应12小时(TLC检测反应进程)，经乙酸乙酯萃取后，柱层析分离得50mg产品，产率为56.8％。
无色稠状物光谱数据IR maxcm-1(CHCl3)3029，1730，1655，1630，1508，1260，1227，1168，1031，915；1HNMR(400MHz，CDCl3)δppm7.93(2H，d，J＝7.6Hz，Ar-H)，6.92(2H，d，J＝7.6Hz，Ar-H)，4.17(2H，q，J1＝7.2Hz，J2＝10.0Hz，CO2CH2)，3.86(3H，s，OCH3)，3.298H，t，J＝5.6Hz，SCH2)，2.73(2H，t，J＝6.0Hz，CH2CO)，1.27(3H，t，J＝7.2Hz，CH2CH3)；13CNMR(100.6MHz，CDCl3)δppm189.9(s)，171.8(s)，163.7(s)，129.6(s)，129.3(d×2)，113.7(d×2)，60.7(t)，55.4(q)，34.6(t)，23.8(t)，14.1(q)；EI-MS(m/z)268[M]+，239，223，149，135，107，92，77。
本发明的实施例6化合物名称3，5-二甲氧基苯甲酸-(N-乙酰半胱氨)-硫酯，具体的结构式 制备方法依据实施例1，将3，5-二甲基苯甲酸68mg(0.336mmol)、N-乙酰半胱氨40mg(0.336mmol)和二(2-氧代-3-恶烷基)磷酰氯(BOPCl)111mg(0.423mmol)用无水CH2Cl2(5ml)混溶于三口园底烧瓶中，在磁力搅拌、室温下加入Et3N71μL(0.504mmol)继续反应12小时(TLC检测反应进程)，经乙酸乙酯萃取后，柱层析分离得80mg产品，产率为83.5％、无色晶体(石油醚/乙酸乙酯)，mp107.5-109.0℃光谱数据IRKBrυmaxcm-13025，1678，1651，1590，1541，1515，1470，1420，1261，1146，1047；1HNMR(400MHz，CDCl3)δppm7.08(2H，s，Ar-H)，6.66(1H，s，Ar-H)，6.50(1H，s，NH)，3.83(6H，s，CH3O)，3.52(2H，d，5.6Hz，CH2)，3.22(2H，t，J＝6.0，SCH2)，2.00(3H，s，COCH3)；13CNMR(100.6MHz，CDCl3)δppm191.9(s)，170.9(s)，60.6(s×2)，138.4(s)，105.8(d)，104.8(d×2)，55.5(q×2)，39.5(t)，28.5(t)，22.9(q)；EI-MS(m/z)283[M]+，240，224，198，165，137，122，107，92，97。
本发明的实施例7化合物名称3，5-二甲氧基苯甲酸-(3-巯基丙烯酸乙酯)-硫酯，结构式 制备方法依据实施例1，将3，5-二甲氧基苯甲酸250mg(0.275mmol)、3-巯基丙酸乙酯37mg(0.275mmol)和二(2-氧代-3-恶烷基)磷酰氯(BOPCl)91mg(0.378mmol)用无水CH2Cl2(5ml)混溶于三口园底烧瓶中，在磁力搅拌、室温下加入Et3N58μL(0.413mmol)，继续反应12小时(TLC检测反应进程)，经乙酸乙酯萃取后，柱层析分离得51mg产品，产率为62.2％。
无色稠状物光谱数据IR maxcm-1(CHCl3)3029，1729，1662，1595，1465，1437，1349，1298，1224，1205，1159；1HNMR(400MHz，CDCl3)δppm7.03(2H，s，Ar-H)，6.60(1H，s，Ar-H)，4.12(2H，p，J＝7.2Hz，J2＝14.4Hz)，3.77(6H，s，CH3O)，3.25(2H，t，J＝6.8Hz，SCH3)，2.67(2H，t，J＝7.2Hz，CH2CO)，1.22(3H，t，J＝7.2Hz，CH2CH3)；13CNMR(100.6MHz，CDCl3)δppm191.3(s)，171.6(s)，160.7(s×2)，138.6(s)，105.8(d)，104.7(d×2)，60.7(t)，55.5(q×2)，34.3(t)，24.1(t)，14.1(q)；EI-MS(m/z)298[M]+，253，165，137，122，107。
本发明的实施例8化合物的名称是1-萘甲酸-(3-巯基丙烯酸乙酯)-硫酯，结构式 制备方法依据实施例1，将α-奈甲酸50mg(0.291mmol)、3-巯基丙酸乙酯40mg(0.291mmol)和二(2-氧代-3-恶烷基)磷酰氯(BOPCl)96mg(0.378mmol)用无水CH2Cl2(5ml)混溶于三口园底烧瓶中，在磁力搅拌、室温下加入Et3N61μL(0.437mmol)，继续反应12小时(TLC检测反应进程)，经乙酸乙酯萃取后，柱层析分离得78mg产品，产率为92.8％。
无色稠状物光谱数据IRυmaxcm-1(CHCl3)3012，1730，1655，1509，1371，1251，1027，1173，1060；1HNMR(400MHz，CDCl3)δppm8.52～8.24(7H，m，Ar-H)，4.17(2H，q，J1＝7.2Hz，J2＝14.0Hz，CO2CH2)，3.36(2H，t，J＝6.4Hz，SCH2)，2.78Hz(2H，t，J＝7.2Hz，CH2CO)，1.24(3H，t，J＝4.8Hz，CH2CH3)；1 3CNMR(100.6MHz，CDCl3)δppm193.8(s)，171.7(s)，135.0(s)，133.7(s)，133.0(d)，129.1(s)，128.3(d)，128.0(d)，127.8(d)，126.6(d)，125.1(d)，124.4(d)，60.8(t)，34.4(t)，24.9(t)，14.2(q)；EI-MS(m/z)288[M]+，243，213，187，155，127，115，101，87。
本发明的实施例9化合物名称对甲氧基苯甲酸-(N-乙酰半胱氨)-硫酯，具体地结构式 制备方法依据实施例1，将4-甲氧基苯甲酸56mg(0.370mmol)、N-乙酯半胱氨40mg(0.336mmol)和二(2-氧代-3-恶烷基)磷酰氯(BOPCl)111mg(0.423mmol)用无水CH2Cl2(5ml)混溶于三口园底烧瓶中，在磁力搅拌、室温下加入Et3N71μL(0.504mmol)，继续反应12小时(TLC检测反应进程)，经乙酸乙酯萃取后，柱层析分离得49mg产品，产率为57.6％。
无色晶体(石油醚/乙酸乙酯)，mp110.5-112.0oC光谱数据IR KBrυmaxcm-13021，1660，1602，1514，1311，1263，1169，917，833；1HNMR(400MHz，CDCl3)δppm7.93(1H，d，J＝2.8Hz，Ar-H)，6.93(1H，d，J＝4.0Hz，Ar-H)，6.50(1H，s，NH)，4.87(3H，s，OCH3)，3.52(2H，m，CH2N)，3.20(2H，t，J＝6.4Hz，SCH2)，1.89(3H，s，CH2CH3)；13CNMR(100.6MHz，CDCl3)δppm190.5(s)，170.5(s)，163.8(s×2)，129.3(d×2)，113.7(d×2)，55.4(q)，39.6(t)，28.2(t)，23.0(q)；EI-MS(m/z)253[M]+194，168，152，135，107，92，77。
本发明的实施例10化合物名称3，4，5-三甲氧基苯甲酸-(N-乙酰半胱氨)-硫酯，结构式 制备方法依据实施例1，将3，4，5-三甲氧基苯甲酸78mg(0.370mmol)、N-乙酯半胱氨40mg(0.2336mol)和二(2-氧代-3-恶烷基)磷酰氯(BOPCl)111mg(0.437mmol)用无水CH2Cl2(5ml)混溶于三口园底烧瓶中，在磁力搅拌、室温下加入Et3N71μL(0.504mmol)，继续反应12小时(TLC检测反应进程)，经乙酸乙酯萃取后，柱层析分离得70mg产品，产率为66.7％。
无色晶体(石油醚/乙醚)，mp108-110oC光谱数据IR KBrυmaxcm-13021，1590，1497，1464，1415，1327，1157，1124；1HN(400Hz，CDCl3)δppm7.21((2H，s，Ar-H)，6.71(1H，s，NH)，3.93(9H，s，OCH3×3)，3.53(2H，m，CH2N)，3.23(2H，t，J＝6.0Hz，SCH2)，2.05(3H，s，COCH3)；13CNMR(100.6MHz，CDCl3)δppm191.0(s)，171.6(s)，163.1(s)，152.8(s×2)，142.6(s)，131.6(s)，104.4(d×2)，60.8(q)，56.1(q)，39.6(t)，28.3(t)，22.7(q)；EI-MS(m/z)313[M]+，270，256，195，179，167，152，137，122，109。
本发明的实施例11化合物的名称3-吡啶甲酸-(3-巯基丙烯酸乙酯)-硫酯，结构式 制备方法依据实施例1，将3-吡啶甲酸50mg(0.406mmol)、3-巯基丙酸乙酯54mg(0.406mmol)和二(2-氧代-3-恶烷基)磷酰氯(BOPCl)134mg(0.528mmol)用无水CH2Cl2(5ml)混溶于三口园底烧瓶中，在磁力搅拌、室温下加入Et3N85μL(0.609mmol)，继续反应12小时(TLC检测反应进程)，经乙酸乙酯萃取后，柱层析分离得65mg产品，产率为67％。
无色稠状物光谱数据IR maxcm-1(CHCl3)3023，1730，1666，1586，1419，1399，1234；1HNMR(400MHz，CDCl3)δppm7.43～9.17(4H，m，Ar-H)，4.19(2H，q，J1＝6.8Hz，J2＝11.2Hz，CO2CH2)，3.38(2H，t，J＝6.8Hz，SCH2)，2.77(2H，t，J＝10.8Hz，CH2CO2)，1.29(3H，t，J＝7.2Hz，CH2CH3)；13CNMR(100.6MHz，CDCl3)δppm189.9(s)，171.3(s)，153.7(d)，148.2(d)，134.3(d)，132.1(s)，123.3(d)，60.7(t)，34.0(t)，23.9(t)，13.9(q)；EI-MS(m/z)239[M+]，211，194，165，139，106，78。本发明的实施例12化合物名称苯甲酸-(3-巯基丙烯酸乙酯)-硫酯，结构式 制备方法依据实施例1，将苯甲酸50mg(0.347mmol)、3-巯基丙酸乙酯46mg(0.347mmol)和二(2-氧代-3-恶烷基)磷酰氯(BOPCl)114.6mg(0.451mmol)用无水CH2Cl2(5ml)混溶于三口园底烧瓶中，在磁力搅拌、室温下加入Et3N95μL(0.676mmol)，继续反应12小时(TLC检测反应进程)，经乙酸乙酯萃取后，柱层析分离得90mg产品，产率为92.8％。
无色稠状物光谱数据IRmaxcm-1(CHCl3)1728，1668，1449，1374，1349，1229，1201，1017，910；1HNMR(400MHz，CDCl3)δppm7.36～7.89(5H，m，Ar-H)，4.10(2H，q，J1＝7.2Hz，J2＝14.4Hz，CO2CH2)，3.26(2H，t，J＝7.6Hz，SCH2)，2.67(2H，t，J＝6.8Hz，CH2CO)，1.20(3H，t，J＝7.6Hz，CH2CH3)；13CNMR(100.6MHz，CDCl3)δppm191.4(s)，171.6(s)，136.7(s)，133.4(d)，128.5(d×2)，127.0(d×2)，60.7(t)，34.3(t)，23.9(t)，14.1(q)；EI-MS(m/z)238[M]+，209，193，164，138，105，77。
本发明的实施例1 3化合物名称对(N，N-二甲氨基)苯甲酸-(3-巯基丙烯酸乙酯)-硫酯，结构式 制备方法依据实施例1，将4-[N，N-二甲基]苯甲酸50mg(0.303mmol)、3-巯基丙酸乙酯40.6mg(0.303mmol)和二(2-氧代-3-恶烷基)磷酰氯(BOPCl)100mg(0.394mmol)用无水CH2Cl2(5ml)混溶于三口园底烧瓶中，在磁力搅拌、室温下加入Et3N63μL(0.454mmol)，继续反应12小时(TLC检测反应进程)，经乙酸乙酯萃取后，柱层析分离得34mg产品，产率为40％。
无色晶体(石油醚/乙酸乙酯)，mp52.0-53.5oC光谱数据IRKBrυmaxcm-13023，1722，1651，1596，1525，1448，1373，1244，1223，1168；1HNMR(400MHz，CDCl3)δppm7.85(2H，d，J＝4.8Hz，Ar-H)，6.61(2H，d，J＝5.2Hz，Ar-H)，4.16(2H，q，J1＝7.2Hz，J2＝14.4Hz，CO2CH2)，3.27(2H，t，J＝6.4Hz，SCH2)，3.04(6H，s，CH3N)，2.70(2H，t，J＝6.8Hz，CH2CO)，1.25(3H，t，J＝7.2Hz，CH2CH3)；13CNMR(100.6MHz，CDCl3)δppm189.4(s)，171.2(s)，153.6(s)，129.3(d×2)，124.3(s)，110.5(d×2)，60.6(t)，39.9(q×2)，34.8(t)，23.5(t)，14.2(q)；EI-MS(m/z)281[M]+，236，208，181，148，119，105，91，77。
本发明的实施例14化合物名称邻氯苯甲酸-(3-巯基丙烯酸乙酯)-硫酯，具体地结构式 制备方法依据实施例1，将2-氯苯甲酸50mg(0.319mmol)、3-巯基丙酸乙酯42.8mg(0.319mmol)和二(2-氧代-3-恶烷基)磷酰氯(BOPCl)105mg(0.415mmol)用无水CH2Cl2(5ml)混溶于三口园底烧瓶中，在磁力搅拌、室温下加入Et3N65μL(0.479mmol)，继续反应12小时(TLC检测反应进程)，经乙酸乙酯萃取后，柱层析分离得57mg产品，产率为65.6％。
无色稠状物光谱数据IR maxcm-1(CHCl3)3023，1730，1677，1580，1465，1375，1227，1201，1063；1HNMR(400MHz，CDCl3)δppm7.30～7.65(4H，m，Ar-H)，4.18(2H，q，J1＝7.2Hz，J2＝14.4Hz，CO2CH2)，3.32(2H，t，J＝7.2Hz，SCH2)，2.76(2H，t，J＝6.8Hz，CH2CO2)，1.28(3H，t，J＝7.2Hz，CH2CH3)；13CNMR(100.6MHz，CDCl3)δppm191.5(s)，171.5(s)，137.0(s)，132.3(d)，130.8(d)，130.7(s)，129.1(d)，126.6(d)，60.7(t)，34.1(t)，24.8(t)，14.1(q)；EI-MS(m/z)272[M]+，227，172，139，111。
本发明的实施例15化合物名称邻氯苯甲酸-(N-乙酰半胱氨)-硫酯，结构式 制备方法依据实施例1，将2-氯苯甲酸43mg(0.277mmol)、N-乙酯半胱氨30mg(0.252mmol)和二(2-氧代-3-恶烷基)磷酰氯(BOPCl)83mg(0.328mmol)用无水CH2Cl2(5ml)混溶于三口园底烧瓶中，在磁力搅拌、室温下加入Et3N53μL(0.378mmol)，继续反应12小时(TLC检测反应进程)，经乙酸乙酯萃取后，柱层析分离得61mg产品，产率为95.3％。
无色稠状物光谱数据IRmaxcm-1(CHCl3)3452，3018，2927，1673，1589，1518，1467，1434，1373，1265，1212，1064；1HNMR(400MHz，CDCl3)δppm7.33～7.65(4H，m，Ar-H)，6.55(1H，s，NH)，3.55(2H，m，CH2N，3.24(2H，t，J＝6.8Hz，SCH2)，2.00(3H，s，COCH3)；13CNMR(100.6MHz，CDCl3)δppm192.2(s)，170.5(s)，136.9(s)，132.4(d)，130.7(d)，130.4(s)，129.1(d)，126.7(d)，39.2(t)，29.3(t)，23.0(q)；EI-MS(m/z)256[M-1]+，198，171，139，111。
本发明的实施例16化合物名称3，4，5-三甲氧基苯甲酸-(N-乙酰半胱胺酸甲酯)-硫酯，具体的结构式 制备方法依据实施例1，将2，3，4-三甲氧基苯甲酸155mg(0.734mmol)、N-乙酰半胱氨酸甲酯156mg(0.881mmol)和二(2-氧代-3-恶烷基)磷酰氯(BOPCl)233mg(0.917mmol)用无水CH2Cl2(5ml)混溶于三口园底烧瓶中，在磁力搅拌、室温下加入Et3N154μL(1.101mmol)，继续反应12小时(TLC检测反应进程)，经乙酸乙酯萃取后，柱层析分离得100mg产品，产率为58.1％。
无色晶体(石油醚-乙酸乙酯)，mp169.0-170.5oC光谱数据IRmaxcm-1(CHCl3)3685，3017，1711，1598，1578，1522，1476，1423，1363，1227，1016；1HNMR(400MHz，CDCl3)δppm7.21(2H，s，Ar-H)，6.35(1H，d，J＝7.2Hz，NH)，4.90(1H，m，CHCO)，3.92(9H，m，OCH3×3)，3.79(3H，s，COOCH3)，3.57(2H，m，SCH2)，2.02(3H，s，COCH3)；13CNMR(100.6MHz，CDCl3)δppm190.2(s)，170.7(s)，169.9(s)，153.1(s×2)，143.0(s)，131.4(s)，104.7(d×2)，60.0(q)，56.3(q×2)，52.8(q)，52.2(d)，30.8(t)，23.1(q)；EI-MS(m/z)371[M]+，355，327，312，281，253，228，195，167，152，137，122。
本发明的实施例17化合物名称为2，3，4-三甲氧基苯甲酸-(3-巯基丙烯酸乙酯)-硫酯，结构式 制备方法依据实施例1，将2，3，4-三甲氧基苯甲酸30mg(0.142mmol)、3-巯基丙酸乙酯19mg(0.142mmol)和二(2-氧代-3-恶烷基)磷酰氯(BOPCl)46.9mg(0.184mmol)用无水CH2Cl2(5ml)混溶于三口园底烧瓶中，在磁力搅拌、室温下加入Et3N30μL(0.213mmol)，继续反应12小时(TLC检测反应进程)，经乙酸乙酯萃取后，柱层析分离得34mg产品，产率为73.9％。
无色稠状物光谱数据IRmaxcm-1(CHCl3)3021，1729，1690，1591，1503，1549，1421，1382，1349，1227，1130；1HNMR(400MHz，CDCl3)δppm7.61(1H，d，J＝8.8Hz，Ar-H)，6.72(1H，d，J＝8.8Hz，Ar-H)，4.16(2H，q，J1＝5.2Hz，J2＝12.4Hz，CO2CH2)，3.92(9H，m，OCH3×3)，3.25(2H，t，J＝5.2Hz，SCH2)，2.72(2H，t，J＝6.4Hz，CH2CO)，1.27(3H，t，J＝5.2Hz，CH2CH3)；13CNMR(100.6MHz，CDCl3)δppm189.0(s)，171.9(s)，157.5(s)，153.6(s)，142.2(s)，124.8(d)，124.0(s)，106.8(d)，61.4(q)，60.8(q)，60.1(t)，56.1(q)，34.4(t)，24.2(t)，14.1(q)；EI-M S(m/z)
328[M]+，283，226，195，180，152，137，109。
以上提供了合成方法及原料等，在应用过程中将本化合物按照现有的常规方法制作成为药物组合物对患者给药即可，所述的药物组合物可以是油膏、凝胶、糊剂、霜剂、喷雾剂、洗剂、悬浮剂、活性成分在水或非水稀释剂中的溶液或乳剂、糖浆、颗粒或粉剂等。如药膏，片剂，丸剂，胶囊剂，栓剂乳剂，输入液和注射液，这些制剂按众所周知的方法，使用传统的添加剂和赋形剂制得，由此制得的药物根据需要可以按局部，非肠道，口服等途径给药；由本发明药用组合物形成的药片、糖衣丸、胶囊和药丸，能持有通常的包衣、包膜和保护性基质，它可含有遮光剂，它们可以配成这样的组成，使它们在一定时期内将活性成分仅在或优先在体内特殊部分释放，使用的包衣、包裹和保护性基质可用如多聚物质或蜡之类制成；活性成分亦可用一种或多种上述稀释剂一起制成微胶囊包形式，药用组合物或药物的生产可用在该技术中的任何已知方法进行，例如将一种或几种活性成分与一种或几种稀释剂混合形成药用组合物，再将组合物制成药物。可以作为神经细胞特别是大脑皮层神经元缺氧保护剂或脑保护剂、它能够在制备预防和治疗脑中风等脑损伤和神经退行变性疾病等脑功能障碍病药物中得到应用，特别是能够在预防和治疗改善认知能力和提高学习记忆的药物中得到重要的应用。
权利要求
1.一种具有神经营养作用的硫酯类化合物，其特征在于这种化合物的通式为 式中，R1代表氢、乙酰氨基(-NHAc)，R2代表氢、羧基及其甲酯、乙酯、乙酰氨基(-NHAc)，Ar代表(1)苯基、取代苯基，取代苯基包括邻、间、对位取代的氟、氯、溴原子以及羟基、甲氧基、乙氧基、N，N-二甲氨基，(2)萘环(α位和β位)、取代萘环，取代萘环包括4，5，6，7，8位取代羟基、甲氧基、乙氧基、氟、氯、溴原子，(3)五元杂环包括呋喃环(α位和β位)、噻吩环(α位和β位)及其取代羟基、甲氧基、乙氧基、氟、氯、溴原子衍生物；R1、R2取代碳原子为R构型、S构型以及消旋体(存在手性碳的情况)的全部异构体。
2.按照权利要求1所述的这种具有神经营养作用的硫酯类化合物，其特征在于这种化合物的结构式为3，4，5-三甲氧基苯甲酸-(3-巯基丙烯酸乙酯)-硫酯
3.按照权利要求1所述的这种具有神经营养作用的硫酯类化合物，其特征在于这种化合物的结构式为2-呋喃甲酸-(3-巯基丙烯酸乙酯)-硫酯
4.按照权利要求1所述的这种具有神经营养作用的硫酯类化合物，其特征在于这种化合物的结构式为对甲氧基苯甲酸-(3-巯基丙烯酸乙酯)-硫酯
5.按照权利要求1所述的这种具有神经营养作用的硫酯类化合物，其特征在于这种化合物的结构式为3，5-二甲氧基苯甲酸-(N-乙酰半胱氨)-硫酯
6.按照权利要求1所述的这种具有神经营养作用的硫酯类化合物，其特征在于这种化合物的结构式为3，5-二甲氧基苯甲酸-(3-巯基丙烯酸乙酯)-硫酯
7.按照权利要求1所述的这种具有神经营养作用的硫酯类化合物，其特征在于这种化合物的结构式为1-萘甲酸-(3-巯基丙烯酸乙酯)-硫酯
8.具有神经营养作用的硫酯类化合物的合成方法，其特征在于由芳香族羧酸与含巯基化合物通过以BOPCl[Bis(2-oxo-3-oxazolidinyl)phosphinic Chloride]为脱水剂，在三乙胺的作用下，反应生成权利要求书1所述的通式(I)化合物。
9.根据权利要求8所述的具有神经营养作用的硫酯类化合物的合成方法，其特征是在氮气保护下，芳香族羧酸与含巯基化合物在无水二氯甲烷中室温反应5～8小时即得通式(I)化合物。
10.具有神经营养作用的硫酯类化合物的应用方法，其特征是将权利要求书1所述的通式(I)化合物作为药物应用。
11.按照权利要求10所述的这种具有神经营养作用的硫酯类化合物的应用方法，其特征是将所述的通式(I)化合物转化成适宜的给药剂型，如有必要，可使用惰性辅加剂和赋形剂。
12.根据权利要求10、11所述的这种具有神经营养作用的硫酯类化合物的应用方法，其特征是将权利要求书1所述的通式(I)化合物作为神经细胞特别是大脑皮层神经元缺氧保护剂或脑保护剂。
13.根据权利要求10、11或12所述的这种具有神经营养作用的硫酯类化合物的应用方法，其特征是将权利要求书1所述的通式(I)化合物作为在制备预防和治疗脑中风等脑损伤和神经退行变性疾病等脑功能障碍病药物中的应用，特别是在预防和治疗改善认知能力和提高学习记忆的药物中应用，其应用的方法可以是现行的常规方法。
全文摘要
本发明提供一种通式(I)的化合物，它是具有神经营养作用的芳香族硫酯类化合物，本发明还提供了它的合成方法及作为药物的应用方法，式(I)所示化合物具有神经营养(NTF)作用，即对PC12细胞和大脑皮层神经元缺氧保护有显著活性。
文档编号C07C327/28GK1439632SQ0213415
公开日2003年9月3日 申请日期2002年11月22日 优先权日2002年11月22日
发明者杨小生, 范明, 杨占南, 丁爱石, 郝小江, 吴燕, 赵超, 李海生 申请人:贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室, 中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所