专利名称：保护细胞免受氧化损伤的酮类化合物、其制备方法及应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种酮类化合物，尤其涉及一种从植物连翘(Fw^决/fl ^^ema) 中提取得到的具有保护免遭细胞氧化受损活性的酮类化合物；本发明还涉及该 酮类化合物的制备方法以及该酮类化合物在医药中的应用，属于植物化学领域。
背景技术：
中药连翘(Fo^j^/a^^^"M)具有清热解毒、散结、消肿的功效，主治温热、 丹毒、斑疹、痈疡肿毒、瘰疬、小便淋闭等。中药连翘来源于木犀科连翘属植 物，该属植物约有7种，分布于欧洲至日本，我国有连翘F^^^ra"Vahl、金钟 花F v/n'cfow'ma Lindl.和秦翘F g/raWa"a Lingelsh.等4种，产西北至东北和 东部，为庭园观赏植物，前2种亦入药。多丛生于山野荒坡间，各地亦有栽培。 我国主要分布辽宁、河北、河南、山东、江苏、湖北、江西、云南、山西、陕 西、甘肃等地。根据文献报道，连翘属植物的化学成分主要有萜类、酚类和木 脂素类化合物，包括白桦脂酸、连翘酚、连翘酯苷等。发明内容本发明人在对中药连翘的有效成分的研究中分离出具有结构式(I)的新化 合物，在现有文献中从未报道过，于是对其又进一步进行了药理实验，发现具 有较强的细胞氧化保护活性，从而完成了本发明。本发明目的之一是提供一种下述式(I)的化合物 <formula>formula see original document page 6</formula>R2 式(I)其中，Ri、 R2 、 R3、 R4和R5彼此独立选自OH、 OCH3或烷氧基; 优选的Rq、 R4或Rs为OCH3; R2或R3为OH; 更优选的C-7为S构型；C-8为S构型；C-8'为R构型。 特别优选的，所述化合物的结构式为式(II)所示OH 式(II)。本发明的另外一个目的是提供一种制备上述式(I)化合物的方法。本发明的另外一个目的通过以下技术方案来实现的 一种制备上述式(I)化合物的方法，包括
(1) 将植物连翘的干燥果实的粗粉用乙醇回流提取，提取液减压回收溶剂， 得乙醇提取浸膏；(2) 乙醇提取浸膏加蒸馏水混悬后，用二氯甲垸萃取；回收溶剂，得二氯甲焼萃取物；(3) 将二氯甲烷萃取物上硅胶柱色谱，依次用5000毫升的50: 1体积比的氯 仿/甲醇、2500毫升的20: 1体积比的氯仿/甲醇、2500毫升10: 1体积比的氯 仿/甲醇、2500毫升5: 1体积比的氯仿/甲醇及1000毫升2: 1体积比的氯仿/ 甲醇作为洗脱液进行洗脱，按500毫升收集液为一个组分，依次收集洗脱液， 分别得到27个组分；(4) 将所收集到的第7组分制备柱色谱，用30: 70体积比的乙腈/水洗脱， 收集洗脱液，即得。上述制备方法中，步骤(l)中优选将连翘干燥果实的粗粉用90%乙醇回流 提取3次，3次回流提取的时间依次为2h、 2h和lh;合并提取液，提取液减压 回收溶剂，得乙醇提取浸膏；步骤(2)中优选将乙醇提取浸膏加IO倍重量的蒸馏水混悬，用二氯甲烷萃 取，回收溶剂后得二氯甲垸萃取物。本发明式①化合物具有较强的保护细胞氧化受损的活性，具体来说本发明 式(I)化合物对猪肾小管上皮细胞(LLC-PK, cell)具有明显的保护作用，用SIN-l(3-Morpholinosydnonimine)氧化猪肾小管上皮细胞，使LLC-PK^细胞生存率降到65.0%;本发明式(I)化合物在5pM浓度就能使LLC-PK!细胞生存率提高到83.7%，在25(iM浓度时几乎达到正常值，在天然产物中属于氧化保护活性较强的化合物，常用的氧化保护药物，例如维生素C，对LLC-PId细胞的氧化保护在5jiM浓度可恢复细胞生存率到85.2%。
具体实施方式
实施例1 本发明化合物的制备连翘果实500 g用90%乙醇回流提取3次，时间分别为2h、 2h和lh。提 取液合并后减压回收溶剂，得90%乙醇提取浸膏85.3 g。取90%乙醇提取浸膏 50g加500mL蒸馏水混悬后，用二氯甲垸萃取3次。回收溶剂后得二氯甲烷萃 取物4.5g。 二氯甲垸萃取物4g经硅胶柱色谱，依次用5000毫升的50: 1体积 比的氯仿/甲醇、2500毫升的20: 1体积比的氯仿/甲醇、2500毫升10: 1体积 比的氯仿/甲醇、2500毫升5: 1体积比的氯仿/甲醇及1000毫升2: 1体积比的 氯仿/甲醇作为洗脱液进行洗脱，按500毫升收集液为一个组分，依次收集洗脱 液，分别得到27个组分。将所收集到的第7组分经制备柱色谱，用30: 70体 积比的乙腈/水洗脱，收集洗脱液，得到无色针状晶体(命名为连翘兰2)(7.8mg); 对所得到的化合物(连翘兰2)的结构鉴定波谱数据见下表1。表l分离化合物的&和13C NMR数据Positon13C &1132.32, qC2108.97， CH7.03,s3146.85, qC4114.04, CH6.88, s145.62， qC6120.11, CH6.88, s783.88, CH4.68, d (9.1)852.25, CH2.91, m961.42, CH2a: 3.67, dd (5.6,10.9) P: 3.78, dd (4.4， 10.9)r129.79, qC2,110.67, CH7.58， d (2.0)3,149.27, qC4,153.71, qC5,110.15, CH6.92, d (8.3)6,123.16, CH7.61, dd (2.0, 8.3)7,197.96, qC8,49.66, CH4.19, m9,70.8， CH2a: 4.19, m(3:4.29, bd(ll.O)OCH3 (3)56.01， CH33.93,sOCH3 (3')55.99, CH33.95,sOCH3 (4')56.12, CH33.97, s
从HNMR、 "CNMR和DEPT谱中，可推断该化合物含有2个亚甲基、 9个次甲基和7个季碳。在iHNMR中5 3.93(3H， s)、 3.95(3H， s)和3.97(3H， s)处的三个单峰质子信号提示该化合物结构中存在三个甲氧基。解析该化合物的 iHJHCOSY和HMQC谱可得出化合物中存在的各片断。片断I由1个亚甲基和 2个次甲基组成。片断II由1个亚甲基、l个次甲基和l个羰基组成。片断I与 苯环A的C-1相连，因为在HMBC谱中，H-2(S 7.03)、 H-6(S 6.88)和C-9(S 61.42) 远程相关；H-9(5 3.67， 3.78)和C-l远程相关。苯环B上的C-l'通过一个羰基碳 (C-7'(3))与C-8'(3)相连，因为H-2'(S)、 H-6'(5)和H-8'(S)都与C一7'有HMBC相 关。位于苯环B的C-3'和C-4'位的取代基应该位羟基，这从C-3邻C-4怖低场 化学位移可以证实。C-7、 C-8、 C-8'的立体构型可以通过NOESY可推定所分离 得到化合物连翘兰2为S、 S、 R构型。因此化合物连翘兰2鉴定为(4-羟基-3-甲氧基苯)[(38,4艮58)-5-(3-羟基-5-甲氧基苯)-4-(羟基甲基)-四氢呋喃]甲酮；[(4-hydroxy-3-methoxyphenyl ) (3S，4R，5S)-5-(3隱hydroxy-5画methoxyphenyl)一4-(hydroxymethyl)tetrahydrofliran-3-yl) methanone]。试验例1本发明化合物(连翘兰2)的保护细胞氧化的活性实验1) 实验材料细胞猪肾小管上皮细胞(LLC-PK, cell)。2) 实验方法LLC-PKq活性测定采用MTT法。3) 供试化合物实施例1所制备的化合物(连翘兰2)。4) 实验结果实验结果见表2。表2本发明化合物(连翘兰2)的抗细胞氧化活性测定结果样品处理(Tg/mL)细胞生存率(%)连翘兰2 连翘苷SIN-1处理组65. 0% 65. 0%正常细胞组100%583. 7% 43. 3%1091.4% 47.5%25%. 1% 56. 2%10097. 1% 57. 6%结果+ —注+表示有效；-表示无效。实验结果表明本发明式(I)化合物具有较强的保护细胞免受氧化损伤的活
权利要求
1、下述式(I)化合物其中，R1、R2、R3、R4或R5彼此独立选自OH、OCH3或烷氧基。
2、 按照权利要求1的式(I)化合物，其特征在于Ri、 R4或Rs为OCH3; R2或R3为OH。
3、 按照权利要求2的式(I)化合物，其特征在于C-7为S构型，C-8为S 构型，C-8'为R构型。
4、 按照权利要求3的式(I)化合物，其特征在于，该化合物的结构式为式(n)所示<formula>formula see original document page 3</formula>OH 式(II)。
5、 一种制备权利要求1所述式(I)化合物的方法，包括(1) 将植物连翘的干燥果实用乙醇回流提取，提取液减压回收溶剂，得乙醇 提取浸膏；(2) 乙醇提取浸膏加蒸馏水混悬后，用二氯甲垸萃取；回收溶剂，得二氯甲 烷萃取物；(3) 将二氯甲垸萃取物上硅胶柱色谱，依次用5000毫升的50: 1体积比的氯 仿/甲醇、2500毫升的20: 1体积比的氯仿/甲醇、2500毫升10: 1体积比的氯 仿/甲醇、2500毫升5: 1体积比的氯仿/甲醇及1000毫升2: 1体积比的氯仿/ 甲醇作为洗脱液进行洗脱，按500毫升收集液为一个组分，依次收集洗脱液， 分别得到27个组分；(4) 将其中所收集到的第7组分制备柱色谱，用30: 70体积比的乙腈/水洗 脱，收集洗脱液，即得。
6、 按照权利要求5的方法，其特征在于步骤(l)中将连翘干燥果实用90 0^乙醇回流提取3次，3次回流提取的时间依次为2h、 2h和lh;合并提取液， 提取液减压回收溶剂，得乙醇提取浸膏。
7、 按照权利要求5的方法，其特征在于步骤(2)中将乙醇提取浸膏加10 倍重量的蒸馏水混悬，用二氯甲垸萃取，回收溶剂后得二氯甲烷萃取物。
8、 权利要求l-4任何一项的化合物在制备治疗或预防细胞遭受氧化损伤的药物中的用途。
9、 按照权利要求8所述的用途，其特征在于所述的细胞是肾小管上皮细胞。
全文摘要
本发明公开了一种从连翘(Forsythia suspensa)中提取得到的对SIN-1诱导氧化受损的LLC-PK<sub>1</sub>细胞具有保护作用的式(I)化合物、其制备方法以及该化合物在医药中的应用，属于植物化学领域。本发明式(I)化合物的制备方法包括以下步骤将植物连翘的干燥果实用乙醇回流提取，提取液减压回收溶剂，得乙醇提取浸膏；乙醇提取浸膏加蒸馏水混悬后，用二氯甲烷萃取；回收溶剂，得二氯甲烷萃取物；将二氯甲烷萃取物上硅胶柱色谱，用50∶1～2∶1体积比的氯仿/甲醇洗脱，分段收集洗脱液得到27个组分，将其中的第7组分制备柱色谱，用30∶70体积比的乙腈/水洗脱，收集洗脱液，即得。药效学试验表明，本发明式(I)化合物具有较强的保护细胞免受氧化损伤的活性。
文档编号C07D307/00GK101161646SQ20071016407
公开日2008年4月16日 申请日期2007年10月18日 优先权日2007年10月18日
发明者箭 崔, 朴香兰, 朴香淑 申请人:中央民族大学