专利名称：一种长春碱分子印迹聚合物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种有机高分子化合物，具体涉及一种生物碱的分子印迹聚合物，还涉及该聚合物的制备方法。
背景技术：
长春碱是从夹竹桃科植物长春花(Vinca rosea L.(Catharanthus roseus G.Don))中分离得到的具有明显抗肿瘤活性的二聚吲哚类生物碱，能够抑制微管蛋白装配，防止纺锤丝形成，从而使有丝分裂停止于中期。临床主要用于治疗何杰金氏病和绒毛上皮癌，对淋巴肉瘤、黑色素瘤、卵巢癌、白血病等也有一定疗效，是目前应用广泛的抗癌药物之一。长春碱的来源主要是天然植物，但在天然植物中的含量极低，仅为百万分之几至十万分之几，虽然利用化学合成和半合成的方法可以得到，但成本较高；组织培养、细胞培养仍不成熟；通过调控代谢途径的方法还处于研究阶段，所以从天然植物中提取分离仍是获取长春碱的主要途径。
从天然植物中获取长春碱，主要是采用溶剂法或超临界法提取后再经柱色谱法分离得到。Gunasekera等[Gunasekera SP.Method of isolating vinblastine[P].WO8803135，1988-05-05.(CA 1988，109134967)]将长春花全草用酸水浸提，酸水液经氨水碱化后用二氯甲烷萃取，总生物碱提取率为0.36％，其中长春碱为8.3％。Choi等[Choi YH，Yoo KP，Kim J.Supercritical fluid extraction and liquidchromatography-electrospray mass analysis of vinblastine from Catharanthus roseus.[J].Chem Pharm Bull，2002，50(9)1294-1296.]以甲醇、三乙胺作夹带剂用二氧化碳超临界萃取，能较好地提取长春花中的长春碱。用以上方法得到的提取物还需用柱色谱分离纯化，才能获得高纯度的长春碱。柱色谱分离常采用一次过柱、二次过柱及多次过柱。一次过柱选用碱性氧化铝为柱填料，一般用苯-石油醚、苯-氯仿、苯-二氯甲烷、二氯甲烷-氯仿、乙酸乙酯-石油醚等以不同比例等度或梯度洗脱，本法是目前用于大规模生产的方法，缺点是产品的纯度不理想[Gedeon R，Vegyeszeti GRT.Isolation of vinblastine and leurosine[P].Hung153200，1966-10-22.(CA 1967，66118854)]。二次过柱法是将粗提物先后用葡聚糖凝胶柱和硅胶柱处理，产品纯度较好[Gunasekera SP.Method of isolating vinblastine[P].WO8803135，1988-05-05.(CA 1988，109134967)]，但此法所用的葡聚糖凝胶价格较贵，且多次使用会造成不可逆吸附，分离效果变差。Atta-ur-Rahman等[Atta-ur-Rahman，Bashir M，Hafeez M，et al.A rapid procedure for the isolation of catharanthine，vindoline andvinblastine[J].Planta Med，1983，47(4)246-247.]将总生物碱依次经氧化铝柱、硅胶柱以及制备型HPLC分离后，能得到高纯度的长春碱，但本法步骤繁琐，收率非常低，不适合扩大制备。Renault等[Renault JH，Nuzillard JM，Le CG，et al.Isolation of indole alkaloids from Catharanthus roseus by centrifugalpartition chromatography in the pH-zone refining mode[J].J Chromatogr A，1999，849(2)421-431.]用高效逆流色谱法分离长春花总生物碱，以甲基叔丁基醚-乙腈-水(4∶1∶5)静置得到的有机相和水相作为逆流的两相，可将长春碱和杂质完全分离，但分离量小，且难以保持柱效的长期稳定。
综上所述，采用氧化铝、硅胶等常规填料的柱色谱法仍是目前分离纯化长春碱的主要方法。但由于长春碱在植物体内含量极低，同时又存在大量化学结构和性质相近的化合物，用常规的柱色谱分离，不仅难度大，而且在纯化过程中损失也多，难以同时得到高纯度、高收率的产品，因此寻找更有效的分离材料极为必要。
分子印迹聚合物(MIP)是一种对模板分子具有高度选择性的高分子聚合物，可使用分子印迹技术制备，关键步骤包括(1)使模板分子与所选择的功能单体通过非共价键结合，从而形成空间结构上互补的模板-单体复合物；(2)使模板-单体复合物与交联剂共聚，从而形成交联的多孔网状聚合物(也称分子聚合物)；(3)从分子聚合物中提取模板分子，从而得到具有模板分子结合位点的分子印迹聚合物。在分子印迹聚合物上的这些结合位点，类似抗体-抗原，能以高的亲和性和特异的选择性再结合相应的模板分子，或近似结构的类似物。目前尚未见长春碱分子印迹聚合物的有关报道。
发明内容
鉴于现有技术存在上述不足，本发明所要解决的技术问题是提供一种长春碱分子印迹聚合物。该聚合物对长春碱具有特殊亲和性和高度选择性。
本发明解决上述技术问题的技术方案为一种长春碱分子印迹聚合物，该聚合物具有模板分子长春碱的印迹位点，它由下述摩尔份单体组分在40～80℃下热引发聚合反应10～24小时制得模板分子长春碱1份，功能单体甲基丙烯酸或甲基丙烯酸甲酯3～10份，交联剂乙二醇二甲基丙烯酸酯或三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯10～50份。
制得本发明长春碱分子印迹聚合物的聚合反应中，所用的功能单体优选甲基丙烯酸；所用的交联剂优选乙二醇二甲基丙烯酸酯。
本发明所述长春碱分子印迹聚合物的制备方法由以下步骤组成1)将长春碱、功能单体按1∶3～10摩尔比混匀于致孔剂甲苯、乙腈或氯仿中，再按长春碱∶交联剂∶引发剂＝1∶10～50∶0.9加入交联剂和引发剂偶氮二异丁腈，混均，除氧，抽真空，然后在40～80℃下热引发聚合反应10～24小时，得到含有长春碱的高分子聚合物；2)步骤1)所得聚合物研磨成细粉，再用丙酮反复沉降除去细小粒子，然后依次用10～40％冰醋酸甲醇、甲醇溶液洗涤去除长春碱分子，真空干燥，得到长春碱分子印迹聚合物。
本发明所述长春碱分子印迹聚合物的制备方法中，所述的致孔剂优选甲苯或乙腈。
本发明长春碱分子印迹聚合物可作为分离填料用于从天然植物中提取长春碱，还可用于分析样品的预处理、色谱技术中的制备性分离等。本发明长春碱分子印迹聚合物用于提取、分离、富集长春碱分子具有亲和性高、选择性强的优点。
图1为长春碱对照品配制的待测样品的浓度C与吸光度A的关系曲线；图2为长春碱对照品配制的溶液的高效液相色谱图；图3为长春新碱对照品配制的溶液的高效液相色谱图；图4为下述实验三中淋洗液的高效液相色谱图；图5为下述实验三中洗脱液的高效液相色谱图；图6是下述实验四所制备的非印迹聚合物的红外光谱图；图7是制备例1所得长春碱分子印迹聚合物的红外光谱图。
具体实施例方式
一、制备例制备例1先将0.1mmol长春碱加入安瓿瓶中，加入甲基丙烯酸0.5mmol及甲苯1.5ml，在振荡器上反复振荡60分钟。再加入乙二醇二甲基丙烯酸酯4.5mmol和偶氮二异丁腈15mg，超声10分钟混合均匀后，用氮气吹扫5分钟，抽真空并使用酒精喷灯封管。热引发该聚合反应，并使之在60℃水浴中聚合反应18小时。聚合反应完成后，在聚合管内获得整料，击破该管并将该整料粉碎成较小的颗粒，并将所得的不规则形状颗粒筛分为25～75微米。为了除去25～75微米部分内的细颗粒(＜25微米)，使用丙酮反复沉降该材料，直到上层清液变得透明。然后将得到的颗粒转移到纸制套管中并放置在索氏提取器装置内，依次用10％冰醋酸甲醇洗涤48小时、甲醇溶液洗涤4小时，直到洗出液经UV(美国惠普公司生产，HP8453型紫外-可见分光光度仪，检测波长为264nm)检测，未见有长春碱的吸收峰为止，真空干燥，即得本发明所述的长春碱分子印迹聚合物。
制备例2先将0.1mmol长春碱加入安瓿瓶中，加入甲基丙烯酸0.5mmol及甲苯1.5ml，在振荡器上反复振荡60分钟。再加入乙二醇二甲基丙烯酸酯4.5mmol和偶氮二异丁腈15mg，超声10分钟混合均匀后，用氮气吹扫5分钟，抽真空并使用酒精喷灯封管。热引发该聚合反应，并使之在40℃水浴中聚合反应24小时。聚合反应完成后，在聚合管内获得整料，击破该管并将该整料粉碎成较小的颗粒，并将所得的不规则形状颗粒筛分为25～75微米。为了除去25～75微米部分内的细颗粒(＜25微米)，使用丙酮反复沉降该材料，直到上层清液变得透明。然后将得到的颗粒转移到纸制套管中并放置在索氏提取器装置内，依次用10％冰醋酸甲醇洗涤48小时、甲醇溶液洗涤4小时，直到洗出液经UV检测，未见有长春碱的吸收峰为止，真空干燥，即得本发明所述的长春碱分子印迹聚合物。
制备例3先将0.1mmol长春碱加入安瓿瓶中，加入甲基丙烯酸0.5mmol及甲苯1.5ml，在振荡器上反复振荡60分钟。再加入乙二醇二甲基丙烯酸酯4.5mmol和偶氮二异丁腈15mg，超声10分钟混合均匀后，用氮气吹扫5分钟，抽真空并使用酒精喷灯封管。热引发该聚合反应，并使之在80℃水浴中聚合反应10小时。聚合反应完成后，在聚合管内获得整料，击破该管并将该整料粉碎成较小的颗粒，并将所得的不规则形状颗粒筛分为25～75微米。为了除去25～75微米部分内的细颗粒(＜25微米)，使用丙酮反复沉降该材料，直到上层清液变得透明。然后将得到的颗粒转移到纸制套管中并放置在索氏提取器装置内，依次用10％冰醋酸甲醇洗涤48小时、甲醇溶液洗涤4小时，直到洗出液经UV检测，未见有长春碱的吸收峰为止，真空干燥，即得本发明所述的长春碱分子印迹聚合物。
制备例4先将0.1mmol长春碱加入安瓿瓶中，加入甲基丙烯酸0.3mmol及甲苯1.5ml，在振荡器上反复振荡60分钟。再加入乙二醇二甲基丙烯酸酯3.0mmol和偶氮二异丁腈15mg，超声10分钟混合均匀后，用氮气吹扫5分钟，抽真空并使用酒精喷灯封管。热引发该聚合反应，并使之在60℃水浴中聚合反应24小时。聚合反应完成后，在聚合管内获得整料，击破该管并将该整料粉碎成较小的颗粒，并将所得的不规则形状颗粒筛分为25～75微米。为了除去25～75微米部分内的细颗粒(＜25微米)，使用丙酮反复沉降该材料，直到上层清液变得透明。然后将得到的颗粒转移到纸制套管中并放置在索氏提取器装置内，依次用25％冰醋酸甲醇洗涤48小时、甲醇溶液洗涤4小时，直到洗出液经UV检测，未见有长春碱的吸收峰为止，真空干燥，即得本发明所述的长春碱分子印迹聚合物。
制备例5先将0.1mmol长春碱加入安瓿瓶中，加入甲基丙烯酸0.6mmol及甲苯1.5ml，在振荡器上反复振荡60分钟。再加入乙二醇二甲基丙烯酸酯5.0mmol和偶氮二异丁腈15mg，超声10分钟混合均匀后，用氮气吹扫5分钟，抽真空并使用酒精喷灯封管。热引发该聚合反应，并使之在60℃水浴中聚合反应24小时。聚合反应完成后，在聚合管内获得整料，击破该管并将该整料粉碎成较小的颗粒，并将所得的不规则形状颗粒筛分为25～75微米。为了除去25～75微米部分内的细颗粒(＜25微米)，使用丙酮反复沉降该材料，直到上层清液变得透明。然后将得到的颗粒转移到纸制套管中并放置在索氏提取器装置内，依次用40％冰醋酸甲醇洗涤48小时、甲醇溶液洗涤4小时，直到洗出液经UV检测，未见有长春碱的吸收峰为止，真空干燥，即得本发明所述的长春碱分子印迹聚合物。
制备例6先将0.1mmol长春碱加入安瓿瓶中，加入甲基丙烯酸1.0mmol及乙腈1.5ml，在振荡器上反复振荡60分钟。再加入乙二醇二甲基丙烯酸酯1.2mmol和偶氮二异丁腈15mg，超声10分钟混合均匀后，用氮气吹扫5分钟，抽真空并使用酒精喷灯封管。热引发该聚合反应，并使之在60℃水浴中聚合反应24小时。聚合反应完成后，在聚合管内获得整料，击破该管并将该整料粉碎成较小的颗粒，并将所得的不规则形状颗粒筛分为25～75微米。为了除去25～75微米部分内的细颗粒(＜25微米)，使用丙酮反复沉降该材料，直到上层清液变得透明。然后将得到的颗粒转移到纸制套管中并放置在索氏提取器装置内，依次用10％冰醋酸甲醇洗涤48小时、甲醇溶液洗涤4小时，直到洗出液经UV检测，未见有长春碱的吸收峰为止，真空干燥，即得本发明所述的长春碱分子印迹聚合物。
制备例7先将0.1mmol长春碱加入安瓿瓶中，加入甲基丙烯酸甲酯0.7mmol及甲苯1.5ml，在振荡器上反复振荡60分钟。再加入乙二醇二甲基丙烯酸酯4.5mmol和偶氮二异丁腈15mg，超声10分钟混合均匀后，用氮气吹扫5分钟，抽真空并使用酒精喷灯封管。热引发该聚合反应，并使之在60℃水浴中聚合反应24小时。聚合反应完成后，在聚合管内获得整料，击破该管并将该整料粉碎成较小的颗粒，并将所得的不规则形状颗粒筛分为25～75微米。为了除去25～75微米部分内的细颗粒(＜25微米)，使用丙酮反复沉降该材料，直到上层清液变得透明。然后将得到的颗粒转移到纸制套管中并放置在索氏提取器装置内，依次用10％冰醋酸甲醇洗涤48小时、甲醇溶液洗涤4小时，直到洗出液经UV检测，未见有长春碱的吸收峰为止，真空干燥，即得本发明所述的长春碱分子印迹聚合物。
制备例8先将0.1mmol长春碱加入安瓿瓶中，加入甲基丙烯酸0.5mmol及甲苯1.5ml，在振荡器上反复振荡60分钟。再加入三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯3.5mmol和偶氮二异丁腈15mg，超声10分钟混合均匀后，用氮气吹扫5分钟，抽真空并使用酒精喷灯封管。热引发该聚合反应，并使之在60℃水浴中聚合反应24小时。聚合反应完成后，在聚合管内获得整料，击破该管并将该整料粉碎成较小的颗粒，并将所得的不规则形状颗粒筛分为25～75微米。为了除去25～75微米部分内的细颗粒(＜25微米)，使用丙酮反复沉降该材料，直到上层清液变得透明。然后将得到的颗粒转移到纸制套管中并放置在索氏提取器装置内，依次用10％冰醋酸甲醇洗涤48小时、甲醇溶液洗涤4小时，直到洗出液经UV检测，未见有长春碱的吸收峰为止，真空干燥，即得本发明所述的长春碱分子印迹聚合物。
制备例9先将0.1mmol长春碱加入安瓿瓶中，加入甲基丙烯酸0.5mmol及氯仿1.5ml，在振荡器上反复振荡60分钟。再加入乙二醇二甲基丙烯酸酯4.5mmol和偶氮二异丁腈15mg，超声10分钟混合均匀后，用氮气吹扫5分钟，抽真空并使用酒精喷灯封管。热引发该聚合反应，并使之在60℃水浴中聚合反应18小时。聚合反应完成后，在聚合管内获得整料，击破该管并将该整料粉碎成较小的颗粒，并将所得的不规则形状颗粒筛分为25～75微米。为了除去25～75微米部分内的细颗粒(＜25微米)，使用丙酮反复沉降该材料，直到上层清液变得透明。然后将得到的颗粒转移到纸制套管中并放置在索氏提取器装置内，依次用10％冰醋酸甲醇洗涤48小时、甲醇溶液洗涤4小时，直到洗出液经UV检测，未见有长春碱的吸收峰为止，真空干燥，即得本发明所述的长春碱分子印迹聚合物。
二、本发明长春碱分子印迹聚合物对长春碱吸附效果检测实验(一)实验器材及其工作参数本实验中所用的光度计为美国惠普公司生产的HP8453型紫外-可见分光光度仪，检测波长为264nm。
(二)实验方法先建立长春碱对照品浓度对吸光度的标准曲线方程，然后分别以本发明的长春碱分子印迹聚合物为吸附剂对目标化合物长春碱进行固相萃取，然后测定萃取后淋洗液和洗脱液的吸光度，再代入标准曲线方程算出淋洗液和洗脱液中长春碱的浓度，进而算出吸附剂的吸附率。
具体操作步骤如下所述1、建立标准曲线方程称量长春碱对照品25mg，置于25ml容量瓶中，加氯仿溶解，定容，配成1mg/ml的溶液，再分别移取1、2、3、4、5ml于100ml容量瓶中，用氯仿定容，作为待测样品。然后，对所述待测样品依次进行吸光度检测，得吸光度分别为0.14859、0.30959、0.47659、0.63454、0.78538。得到各待测样品的吸光度后，以吸光度A为纵坐标，浓度C(μg/ml)为横坐标，建立坐标系，找出每一待测样品所对应的坐标，连接各坐标点并进行线性回归，得到图1中所示的直线。该直线的线性回归方程C＝0.5486+62.5370A，相关系数R＝0.99984。
2、吸附率的测算(1)将制备例1所得的长春碱分子印迹聚合物400mg填充于内径为1.5cm的聚丙烯外壳固相萃取小柱中，用甲苯20ml润湿、平衡；将长春碱用甲苯配成浓度为0.2mg/ml的溶液，取1ml该溶液上样。上样后的固相萃取小柱先用3ml氯仿淋洗1次，收集淋洗液；萃取小柱再用10％冰醋酸甲醇溶液洗脱2次，每次3ml，流速为0.5ml/min，收集洗脱液。
(2)用光度计分别测定淋洗液、洗脱液的吸光度，结果氯仿淋洗液没有吸收峰，而10％冰醋酸甲醇的洗脱液吸收峰明显，吸光度为0.4297，说明洗脱液里含有长春碱。将所得到的10％冰醋酸甲醇的洗脱液的吸光度0.4297值代入步骤1中的线性回归方程，便得到10％冰醋酸甲醇的洗脱液的长春碱浓度为27.42μg/ml，再进一步算得10％冰醋酸甲醇的洗脱液中长春碱的含量为164.54μg。据此，采用常规的计算方法，即吸附率＝洗脱液中长春碱的量/上样液中长春碱的量，计算得吸附率为82.27％。
采用上述方法对制备例2～9所得的长春碱分子印迹聚合物逐一进行测算，其结果为制备例2所得长春碱分子印迹聚合物的吸附率为70.94％；制备例3所得长春碱分子印迹聚合物的吸附率为68.20％；制备例4所得长春碱分子印迹聚合物的吸附率为51.33％；制备例5所得长春碱分子印迹聚合物的吸附率为82.63％；制备例6所得长春碱分子印迹聚合物的吸附率为86.70％；制备例7所得长春碱分子印迹聚合物的吸附率为42.35％；制备例8所得长春碱分子印迹聚合物的吸附率为78.23％；制备例9所得长春碱分子印迹聚合物的吸附率为73.68％。
三、本发明分子印迹聚合物选择性吸附作用实验(一)实验器材及条件1、高效液相色谱系统，生产厂家美国惠普公司；型号HP 1100。
2、色谱条件选用Agilent C18色谱柱(250×4.6mm，5μm)；按甲醇∶乙腈∶1％三乙胺水溶液＝60∶25∶15的比例配制流动相，再用磷酸将其pH值调节为7.2；检测波长为262nm，流速为1.0ml/min，进样量为5μl。
(二)实验方法先将对照品进行高效液相色谱分析，得到对照品的标准色谱，再用本发明长春碱分子印迹聚合物作吸附剂对含目标化合物的混合物进行固相萃取，并将所得到的固相萃取液进行高效液相色谱分析，得到目标化合物的色谱，最后将目标化合物的色谱与对照品的标准色谱进行特征比较，判断所得目标化合物的色谱是否与对照品相同。
具体实验步骤如下1、取市售的长春碱和长春新碱为对照品，以甲苯为溶剂分别配制出浓度为0.1mg/ml的长春碱溶液和长春新碱溶液，并进行高效液相色谱分析，得到长春碱溶液的高效液相色谱(见图2)和长春新碱溶液的高效液相色谱(见图3)。长春碱对照品(0.1mg/ml)的保留时间为8.76min，长春新碱对照品(0.1mg/ml)的保留时间为7.36min。
2、取制备例1所得的长春碱分子印迹聚合物400mg填充于聚丙烯外壳内径为1.5cm的固相萃取小柱中，用甲苯20ml润湿、平衡。将长春花提取物(主要含长春碱和长春新碱)用甲苯配成浓度为0.1mg/ml的溶液，取1ml上样。上样后的固相萃取小柱先用氯仿淋洗2次(每次2ml，流速为0.5ml/min)，收集淋洗液；再用10％冰醋酸甲醇溶液洗脱2次(每次2ml，流速为0.5ml/min)，收集洗脱液。将收集的淋洗液、洗脱液进行高效液相色谱分析，得到淋洗液的高效液相色谱(见图4)和洗脱液的高效液相色谱(见图5)。
3、将图4与图2、图3相比，可见图3和图4均在保留时间为7.36min处有明显的色谱峰，且波形相似；再将图5与图2、图3相比，可见图5和图2均在保留时间为8.76min处有明显的色谱峰，且波形相似。因此可断定，淋洗液中所含物质为长春新碱，而洗脱液中所含物质为长春碱，进而证明本发明分子印迹聚合物对长春碱具有选择性吸附作用。
四、本发明长春碱分子印迹聚合物与非印迹聚合物对长春碱吸附作用的比较实验(一)非印迹聚合物的制备将甲基丙烯酸0.5mmol及甲苯1.5ml加入安瓿瓶中，在振荡器上反复振荡60分钟，再加入乙二醇二甲基丙烯酸酯4.5mmol和偶氮二异丁腈15mg，超声10分钟混合均匀后，用氮气吹扫5分钟，抽真空并使用酒精喷灯封管。热引发该聚合反应，并使之在60℃水浴中聚合反应18小时。聚合反应完成后，在聚合管内获得整料，击破该管并将该整料粉碎成较小的颗粒，并将所得的不规则形状颗粒筛分为25～75微米。为了除去25～75微米部分内的细颗粒(＜25微米)，使用丙酮反复沉降该材料，直到上层清液变得透明。然后将得到的颗粒转移到纸制套管中并放置在索氏提取器装置内，依次用10％冰醋酸甲醇溶液洗涤48小时、甲醇溶液洗涤4小时后，真空干燥，即得非印迹聚合物。
用德国Bruker公司生产的EQUINOX 55型傅里叶变换红外光谱-红外显微镜联用仪对非印迹聚合物进行检测得如图6所示的红外光谱，再用同样的仪器、同样的条件对实施例1所得的长春碱分子聚合物进行检测，得如图7所示的红外光谱图。由图6和图7可见，与非印迹聚合物相比，长春碱分子印迹聚合物有明显的长春碱分子官能团的吸收峰3540cm-1为仲胺的吸收峰，3000cm-1为双键不饱和碳上质子的吸收峰，1740cm-1为酯羰基的吸收峰，1480cm-1为苯环的骨架振动吸收，1250cm-1为碳氧键和碳氮键的伸缩振动吸收，1000-700cm-1为苯环和胺基的面外变形振动的吸收。
(二)非印迹聚合物对长春碱吸附作用的测定本测定过程中所使用的光度计及其工作参数与上述“吸附效果检测”实验相同。
取步骤(一)所制备的非印迹聚合物400mg填充于内径为1.5cm的聚丙烯外壳固相萃取小柱中，用甲苯20ml润湿、平衡；将长春碱用甲苯配成浓度为0.2mg/ml的溶液，取1ml分别上样。上样后的固相萃取小柱先用3ml氯仿淋洗1次，收集淋洗液；萃取小柱再用10％冰醋酸甲醇溶液洗脱2次，每次3ml，流速为0.5ml/min，收集洗脱液。将收集的淋洗液、洗脱液，分别用光度计进行吸光度测定(实验仪器和方法与实验二相同)，结果氯仿淋洗液吸收峰明显，而10％冰醋酸甲醇的洗脱液则没有吸收峰。
由于本实验中所用的非印迹聚合物与本发明长春碱分子印迹聚合物相比，二者的合成方法和条件相同，唯一的区别就是合成时没有加入模板分子——长春碱，因此据本实验并结合上述实验二和三的结果，可证明本发明长春碱分子印迹聚合物具有模板分子长春碱的印迹位点，对长春碱有很好的识别和吸附能力。
权利要求
1.一种长春碱分子印迹聚合物，该聚合物具有模板分子长春碱的印迹位点，它由下述摩尔份单体组分在40～80℃下热引发聚合反应制得模板分子长春碱1份，功能单体甲基丙烯酸、甲基丙烯酸甲酯3～10份，交联剂乙二醇二甲基丙烯酸酯或三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯10～50份。
2.根据权利要求1所述的一种长春碱分子印迹聚合物，其特征是制得该聚合物的聚合反应中所用的功能单体是甲基丙烯酸。
3.根据权利要求1所述的一种长春碱分子印迹聚合物，其特征是制得该聚合物的聚合反应中所用的交联剂是乙二醇二甲基丙烯酸酯。
4.权利要求1、2或3所述的一种长春碱分子印迹聚合物的制备方法由以下步骤组成1)将长春碱、功能单体按1∶3～10摩尔比混匀于致孔剂甲苯、乙腈或氯仿中，再按长春碱∶交联剂∶引发剂＝1∶10～50∶0.9加入交联剂和引发剂偶氮二异丁腈，混均，除氧，抽真空，然后在40～80℃下热引发聚合反应10～24小时，得到含有长春碱的高分子聚合物；2)步骤1)所得聚合物研磨成细粉，再用丙酮反复沉降除去细小粒子，然后依次用10～40％冰醋酸甲醇、甲醇溶液洗涤去除长春碱分子，真空干燥，得到长春碱分子印迹聚合物。
5.根据权利要求4所述的一种长春碱分子印迹聚合物的制备方法，其特征的所述的致孔剂是甲苯或乙腈。
全文摘要
本发明公开一种长春碱分子印迹聚合物，该印迹聚合物具有模板分子长春碱的印迹位点，由1摩尔份模板分子长春碱、3～10摩尔份功能单体和10～50摩尔份交联剂再加入适量的致孔剂和引发剂在40～80℃下热引发聚合反应制得。本发明长春碱分子印迹聚合物对长春碱具有特殊亲和性、高度选择性及卓越的分子识别性能，可作为分离填料用于从天然植物或生物样品中提取、分离、富集模板分子——长春碱。
文档编号C08K5/00GK1958650SQ200610123060
公开日2007年5月9日 申请日期2006年10月30日 优先权日2006年10月30日
发明者朱全红, 冯建涌, 杨卫东 申请人:南方医科大学