新型shRNA表达载体及其制备和应用的制作方法

文档序号:11145232阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种核酶增强型shRNA,所述核酶增强型shRNA的核苷酸序列从5′端到3′端依次具有以下区域:

(a)5′端配对区域,所述5′端配对区域长度大于或等于19nt;

(b)顶端环区域,所述顶端环区域长度大于或等于2nt;

(c)3′端配对区域,所述3′端配对区域长度大于或等于19nt,并且所述5′端配对区域与3′端配对区域形成双链区域,所述双链区域长度大于或等于19bp;

(d)3′端未配对区域,所述3′端未配对区域长度为0-6nt;

(e)与3′端未配对区域相连的核酶区,所述核酶区编码具有自切割功能的核酶,

其中,所述核酶增强型shRNA产生siRNA,且所述siRNA的核苷酸序列对应于所述3′端配对区域或5′端配对区域。

2.如权利要求1所述的核酶增强型shRNA,其特征在于,所述核酶增强型shRNA中顶端环长度为2-10nt。

3.如权利要求1所述的核酶增强型shRNA,其特征在于,所述3′端未配对区域长度为1-6nt。

4.如权利要求1-3中任一项所述的核酶增强型shRNA,其特征在于,所述核酶选自下组:HDV核酶、发夹状核酶、锤头状核酶。

5.一种表达盒,所述表达盒包含权利要求1-4中任一项所述的核酶增强型shRNA的编码序列以及与所述编码序列操作性相连的启动子和终止信号。

6.一种构建物,所述构建物包含权利要求5所述的表达盒。

7.一种细胞,所述细胞包含权利要求1-4中任一项所述的核酶增强型shRNA或权利要求5所述的表达盒或权利要求6所述的构建物。

8.一种产生siRNA的方法,所述方法包括:

1)将权利要求1-4中任一项所述的核酶增强型shRNA或权利要求5所述的表达盒或权利要求6所述的构建物转入哺乳动物细胞;和

2)培养所述哺乳动物细胞,从而在所述哺乳动物细胞中产生siRNA。

9.一种在哺乳动物细胞中实施RNAi的方法,所述方法包括:

将权利要求1-4中任一项所述的核酶增强型shRNA或权利要求5所述的表达盒或权利要求6所述的构建物转入哺乳动物细胞。

10.一种组合或组合物,所述组合或组合物包含:

1)权利要求1-4中任一项所述的核酶增强型shRNA或权利要求5所述的表达盒或权利要求6所述的构建物;和

2)适合将1)所述的核酶增强型shRNA或表达盒或构建物导入哺乳动物细胞的其它试剂;

所述组合或组合物在导入哺乳动物细胞后产生siRNA或实施RNAi。

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