1.一种核酶增强型shRNA,所述核酶增强型shRNA的核苷酸序列从5′端到3′端依次具有以下区域:
(a)5′端配对区域,所述5′端配对区域长度大于或等于19nt;
(b)顶端环区域,所述顶端环区域长度大于或等于2nt;
(c)3′端配对区域,所述3′端配对区域长度大于或等于19nt,并且所述5′端配对区域与3′端配对区域形成双链区域,所述双链区域长度大于或等于19bp;
(d)3′端未配对区域,所述3′端未配对区域长度为0-6nt;
(e)与3′端未配对区域相连的核酶区,所述核酶区编码具有自切割功能的核酶,
其中,所述核酶增强型shRNA产生siRNA,且所述siRNA的核苷酸序列对应于所述3′端配对区域或5′端配对区域。
2.如权利要求1所述的核酶增强型shRNA,其特征在于,所述核酶增强型shRNA中顶端环长度为2-10nt。
3.如权利要求1所述的核酶增强型shRNA,其特征在于,所述3′端未配对区域长度为1-6nt。
4.如权利要求1-3中任一项所述的核酶增强型shRNA,其特征在于,所述核酶选自下组:HDV核酶、发夹状核酶、锤头状核酶。
5.一种表达盒,所述表达盒包含权利要求1-4中任一项所述的核酶增强型shRNA的编码序列以及与所述编码序列操作性相连的启动子和终止信号。
6.一种构建物,所述构建物包含权利要求5所述的表达盒。
7.一种细胞,所述细胞包含权利要求1-4中任一项所述的核酶增强型shRNA或权利要求5所述的表达盒或权利要求6所述的构建物。
8.一种产生siRNA的方法,所述方法包括:
1)将权利要求1-4中任一项所述的核酶增强型shRNA或权利要求5所述的表达盒或权利要求6所述的构建物转入哺乳动物细胞;和
2)培养所述哺乳动物细胞,从而在所述哺乳动物细胞中产生siRNA。
9.一种在哺乳动物细胞中实施RNAi的方法,所述方法包括:
将权利要求1-4中任一项所述的核酶增强型shRNA或权利要求5所述的表达盒或权利要求6所述的构建物转入哺乳动物细胞。
10.一种组合或组合物,所述组合或组合物包含:
1)权利要求1-4中任一项所述的核酶增强型shRNA或权利要求5所述的表达盒或权利要求6所述的构建物;和
2)适合将1)所述的核酶增强型shRNA或表达盒或构建物导入哺乳动物细胞的其它试剂;
所述组合或组合物在导入哺乳动物细胞后产生siRNA或实施RNAi。