检测人FGFR3基因突变的引物组及其试剂盒的制作方法

文档序号:11126311阅读:来源:国知局

技术特征:

1.检测人FGFR3基因突变的引物组,该引物组包括12对特异性扩增FGFR3基因第2至第7外显子以及第9至第19外显子的引物;

所述的FGFR3基因外显子2的PCR扩增引物,包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的引物FP1与核苷酸序如SEQ ID NO.2所示的引物RP1;

所述的FGFR3基因外显子3的PCR扩增引物,包括核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的引物FP2与核苷酸序如SEQ ID NO.4所示的引物RP2;

所述的FGFR3基因外显子4的PCR扩增引物,包括核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的引物FP3与核苷酸序如SEQ ID NO.6所示的引物RP3;

所述的FGFR3基因外显子5与外显子6的PCR扩增引物,包括核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示的引物FP4与核苷酸序如SEQ ID NO.8所示的引物RP4;

所述的FGFR3基因外显子7的PCR扩增引物,包括核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示的引物FP5与核苷酸序如SEQ ID NO.10所示的引物RP5;

所述的FGFR3基因外显子9的PCR扩增引物,包括核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示的引物FP6与核苷酸序如SEQ ID NO.12所示的引物RP6;

所述的FGFR3基因外显子10的PCR扩增引物,包括核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示的引物FP7与核苷酸序如SEQ ID NO.14所示的引物RP7;

所述的FGFR3基因外显子11的PCR扩增引物,包括核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示的引物FP8与核苷酸序如SEQ ID NO.16所示的引物RP8;

所述的FGFR3基因外显子12与外显子13的PCR扩增引物,包括核苷酸序列如SEQ ID NO.17所示的引物FP9与核苷酸序如SEQ ID NO.18所示的引物RP9;

所述的FGFR3基因外显子14与外显子15的PCR扩增引物,包括核苷酸序列如SEQ ID NO.19所示的引物FP10与核苷酸序如SEQ ID NO.20所示的引物RP10;

所述的FGFR3基因外显子16与外显子17的PCR扩增引物,包括核苷酸序列如SEQ ID NO.21所示的引物FP11与核苷酸序如SEQ ID NO.22所示的引物RP11;

所述的FGFR3基因外显子18与外显子19的PCR扩增引物,包括核苷酸序列如SEQ ID NO.23所示的引物FP12与核苷酸序如SEQ ID NO.24所示的引物RP12。

2.一种用于检测FGFR3基因突变的测序引物组,该引物组包括12条第2至第7外显子以及第9至第19外显子的测序引物;包括:

外显子2的PCR测序引物核苷酸序列为SEQ ID NO.1的引物FP1;

外显子3的PCR测序引物核苷酸序列为SEQ ID NO.3的引物FP2;

外显子4的PCR测序引物核苷酸序列为SEQ ID NO.5的引物FP3;

外显子5与外显子6的PCR测序引物核苷酸序列为SEQ ID NO.7的引物FP4;

外显子7的PCR测序引物核苷酸序列为SEQ ID NO.9的引物FP5;

外显子9的PCR测序引物核苷酸序列为SEQ ID NO.11的引物FP6;

外显子10的PCR测序引物核苷酸序列为SEQ ID NO.14的引物RP7;

外显子11的PCR测序引物核苷酸序列为SEQ ID NO.15的引物FP8;

外显子12与外显子13的PCR测序引物核苷酸序列为SEQ ID NO.17的引物FP9;

外显子14与外显子15的PCR测序引物核苷酸序列为SEQ ID NO.19的引物FP10;

外显子16与外显子17的PCR测序引物核苷酸序列为SEQ ID NO.21的引物FP11;

外显子18与外显子19的PCR测序引物核苷酸序列为SEQ ID NO.24的引物RP14。

3.一种用于检测FGFR3基因突变的试剂盒,其特征在于,包括:

权利要求1所述用于检测FGFR3基因突变的由第2至第7外显子以及第9至第19外显子的PCR扩增引物组成的引物组;

PCR扩增试剂;

PCR产物纯化试剂;

含有权利要求2所述用于检测FGFR3基因突变的测序引物组的DNA测序试剂。

4.如权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,所述PCR扩增试剂包括:2.5mM dNTP,含Mg2+的10×PCR缓冲液,5U/μl Taq DNA聚合酶,去RNase与DNase水;

所述PCR扩增体系中各组分的工作浓度为:200μM dNTP,1×PCR缓冲液,0.025U/μl Taq DNA聚合酶,上游引物和下游引物均为0.4μM,模板浓度为2.5~5ng/μl。

5.如权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,所述PCR产物纯化试剂包括:1U/μl SAP酶、10U/μl ExoI酶、去RNase与DNase水;

PCR产物纯化体系中各组分的工作浓度为:0.05U/μl SAP酶、0.5U/μlExoI酶。

6.如权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,所述DNA测序试剂包括:权利要求2所述用于检测FGFR3基因突变的测序引物组、BigDye 3.1混合液、0.125M EDTA溶液、无水乙醇、体积百分比75%乙醇溶液、Hi-Di甲酰胺溶液、去RNase与DNase水。

7.如权利要求6所述的试剂盒,其特征在于,所述测序引物组中的测序引物工作浓度为0.64pMol/L。

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