包含使用乙酰微小杆菌和凝结芽孢杆菌α-葡聚糖转移酶的组合物和方法与流程

文档序号:15102764发布日期:2018-08-04 16:09阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种分离的重组表达的GH70亚家族4,α-葡聚糖转移酶、其重组工程化变体或其活性片段,其中所述α-葡聚糖转移酶能够通过歧化麦芽低聚糖(MOS)样底物并引入α-(1→6)糖苷键来合成葡萄糖低聚糖的混合物,并进一步合成IMO,即具有α-(1→6)糖苷键的葡萄糖低聚糖。

2.一种来自乙酰微小杆菌(Exiguobacterium acetylicum)(α-GT-E)、凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)2-6(α-GT-S)或凝结芽孢杆菌2022696[杜邦培养物保藏中心](α-GT-L)的分离的重组表达的α葡聚糖转移酶。

3.如权利要求2所述的α-葡聚糖转移酶[(α-GT-E、α-GT-S、α-GT-E)],其包含由SEQ ID NO:2的氨基酸AA31-731[FAPS….KAPV]、SEQ ID NO:7的氨基酸AA33-736[YTSG….AATP]、SEQ ID NO:11的氨基酸AA22-726[YTSG….AATP]组成的多肽、其重组工程化变体或其活性片段,其中所述变体能够歧化麦芽低聚糖(MOS)并引入α-(1→6)糖苷键,并且其中所述变体与SEQ ID NO:2的氨基酸AA31-731[FAPS….KAPV]、SEQ ID NO:7的氨基酸AA33-736[YTSG….AATP]、SEQ ID NO:11的的氨基酸AA22-726[YTSG….AATP]具有至少60%的序列同一性。

4.如权利要求2所述的α-葡聚糖转移酶,其中所述α-GT-E、(α-GT-S)、(α-GT-L)能够进一步产生线性葡萄糖低聚糖。

5.如权利要求1所述的α-葡聚糖转移酶,其中包含由SEQ ID NO:2的氨基酸31-736、SEQ ID NO:7的氨基酸33-736和SEQ ID NO:11的氨基酸22-726组成的多肽的多肽包含通常不与天然存在的来自乙酰微小杆菌DSM20416(SEQ ID NO:2)的α-GT-E、来自凝结芽孢杆菌2-6的α-GT-S、来自凝结芽孢杆菌2022696的α-GT-L有关的至少一个氨基酸。

6.如权利要求1所述的α-葡聚糖转移酶,其中所述重组工程化变体与SEQ ID NO:2的氨基酸序列的氨基酸31-731、SEQ ID NO:7的氨基酸33-736和SEQ ID NO:11的氨基酸22-726具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%的序列同一性。

7.如权利要求5所述的α-葡聚糖转移酶,其中所述重组工程化变体与SEQ ID NO:2的氨基酸序列的氨基酸31-731、SEQ ID NO:7的氨基酸33-736和SEQ ID NO:11的氨基酸22-726具有至少99%或至少99.5%的序列同一性。

8.如权利要求1所述的α-葡聚糖转移酶,其中与SEQ ID NO:2的氨基酸31-731、SEQ ID NO:7的氨基酸33-736和SEQ ID NO:11的氨基酸22-726不同一的重组工程化变体的氨基酸残基选自保守氨基酸取代或者C-末端或N-末端的缺失。

9.如权利要求1所述的α-葡聚糖转移酶,其中所述重组工程化变体的氨基酸序列包含与SEQ ID NO:2的氨基酸31-731、SEQ ID NO:7的氨基酸33-736和SEQ ID NO:11的氨基酸22-726同一的序列。

10.一种包含如权利要求1所述的α-葡聚糖转移酶的组合物。

11.如权利要求9所述的组合物,其中所述α-葡聚糖转移酶处于冷冻干燥的粉末形式、包入胶囊内的形式、包衣形式、颗粒形式、或液体配制品。

12.如权利要求9所述的组合物,其进一步包含稀释剂。

13.一种编码如权利要求1所述的α-葡聚糖转移酶的合成核酸。

14.一种包含如权利要求12所述的合成核酸的载体。

15.如权利要求12所述的载体,所述载体是表达载体。

16.一种宿主细胞,其包含如权利要求12所述的合成核酸或如权利要求13所述的载体。

17.一种载体,其包含由SEQ ID NO:1、6和10的核苷酸序列组成的多核苷酸。

18.一种包含如权利要求16所述的载体的宿主细胞。

19.一种非乙酰微小杆菌的宿主细胞,所述宿主细胞包含SEQ ID NO:1、6和10的核苷酸序列。

20.一种组合物,其包含如权利要求15所述的宿主细胞和食品级、饲料级、工业级、或可药用的载体、稀释剂、或赋形剂。

21.一种使用如权利要求19所述的组合物的方法,所述方法包括将所述组合物施用于个体,其中所述组合物能够充当个体中的益生菌。

22.一种生产糖产物的方法,所述方法包括使如权利要求1所述的α-葡聚糖转移酶与MOS、淀粉、直链淀粉、支链淀粉、麦芽糖糊精源接触,并使所述α-葡聚糖转移酶与所述MOS、淀粉、直链淀粉、支链淀粉、麦芽糖糊精源在pH3-10和30℃-70℃进行反应以生产所述产物。

23.如权利要求21所述的方法,其中所述底物源选自由以下组成的列表:麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖、麦芽七糖、麦芽糖糊精DE4-7、麦芽糖糊精DE13-17、麦芽糖糊精、直链淀粉、支链淀粉、淀粉或葡聚糖。

24.一种使用α-GT-E、α-GT-S、α-GT-L制备饮料或食品的方法,所述方法包括向包含麦芽糖糊精的底物中添加α-GT-E、α-GT-S、α-GT-L以原位制备含有(1→6)键的葡萄糖、异麦芽低聚糖和麦芽低聚糖。

25.如权利要求19所述的方法,其中所述葡萄糖低聚糖或改性淀粉产物具有最小量10%的α-1,6糖苷键。

26.如权利要求19所述的方法,其中所述α-葡聚糖转移酶以包含宿主细胞的组合物提供,所述宿主细胞包含编码重组α-GT-E、α-GT-S、α-GT-L的核酸。

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