1?200:1，进一步优选120:1?160:1。
[0088] 在制备所述的保护比伐卢定20的固相合成方法步骤2中，所述的有机碱优选哌 啶。
[0089] 在制备所述的保护比伐卢定20的固相合成方法步骤2中，所述的有机碱与所述的 肽树脂19的摩尔比优选10:1?50:1，进一步优选20:1?30:1。
[0090] 在制备所述的保护比伐卢定20的固相合成方法步骤2中，所述的脱除脯氨酸芴甲 氧羰酰基氨基保护基的反应的温度优选22°C?28°C。
[0091] 所述的保护比伐卢定20的固相合成方法的步骤3可以为本领域中该类缩合的反 应的常规方法，本发明中特别优选以下反应方法和条件：
[0092] 在制备所述的保护比伐卢定20的固相合成方法步骤3中，所述的非质子极性溶剂 与所述的肽树脂19'的摩尔比优选100:1?200:1，进一步优选120:1?140:1。
[0093] 在制备所述的保护比伐卢定20的固相合成方法步骤3中，所述的缩合剂优选 N,N-二异丙基碳二亚胺、二环己基碳二亚胺、六氟憐酸苯并二唑-1-基-氧基二批咯烧基憐 和苯并三氮唑-N，N，N'，N' -四甲基脲六氟磷酸盐中的一种或多种。
[0094] 在制备所述的保护比伐卢定20的固相合成方法步骤3中，所述的缩合剂与所述的 R1-D-Phe-OH的摩尔比优选1:1?1:3,进一步优选1:2?1: 3。
[0095] 在制备所述的保护比伐卢定20的固相合成方法步骤3中，所述的催化剂优选 1-羟基苯并三氮唑和/或6-氯-1-羟基苯并三氮唑。
[0096] 在制备所述的保护比伐卢定20的固相合成方法步骤3中，所述的肽树脂19'与所 述的R1-D-Phe-OH的摩尔比优选1:1?1:5,进一步优选1:1?1: 2。
[0097] 在制备所述的保护比伐卢定20的固相合成方法步骤3中，所述的催化剂与所述的 R1-D-Phe-OH的摩尔比优选1:1?1:4,进一步优选1:2?1:3。
[0098] 在制备所述的保护比伐卢定20的固相合成方法步骤3中，所述的缩合反应的温度 优选22°C?28°C。
[0099] 在制备所述的保护比伐卢定20的固相合成方法步骤3中，所述的缩合反应的进程 可以采用本领域中的常规测试方法(如茚三酮检测显阴性和/或四氯苯醌检测显阴性)进行 监控，反应时间优选Ih?5h，进一步优选2h?3h。
[0100] 本发明还提供了一种比卢伐定的制备方法：步骤1，按照所述的制备保护比伐卢 定20的方法制得保护比伐卢定20 ;步骤2,将步骤1制得的保护比伐卢定20加入到三氟乙 酸、三异丙基硅烷和水的混合试剂中，反应2-3小时，抽滤，滤液通过减压蒸馏浓缩，加甲基 叔丁基醚沉淀，离心沉降收集比伐芦定粗品。粗肽经反相高效液相色谱纯化、冷冻干燥得到 纯品。
[0101] 在不违背本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳 实例。
[0102] 本发明所用试剂和原料均市售可得。
[0103] 本发明的积极进步效果在于：本发明的固相合成方法可促进大位阻的氨基酸 Fmoc-Arg(Pbf)-OH顺利完成缩合反应，实现了比伐芦定的高载样量合成，反应工艺简单、反 应条件温和、转化率高、收率高(收率比现有固相合成工艺提高4%?20%左右)、生产成本 低、适合于大规模工业化生产。
【具体实施方式】
[0104] 下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实 施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商 品说明书选择。
[0105] 在下列实施例中，实施例2?实施例20的反应原料肽树脂的投加量均是前一实施 例所得的全部肽树脂，其中各个实施例中所用的其他试剂的投加量均依具有具体摩尔量的 起始原料（Fmoc-Leu-Wang树脂，即肽树脂1)计算得到。
[0106] 实施例IFmoc-Leu-Wang树脂（肽树脂1)的制备
[0107] 称量Wang树脂IOOg(100-200目，I. 23mmol/g)，装入砂芯反应器，用 IOOOmL DMF洗涤一次，抽干，再用IOOOmL二氯甲烷使树脂充分溶胀，抽干。力口 Fmoc-Leu-OH(184. 5mmoI)65. 2g，1_轻基苯并三氣唑（123mmol) 24. 9g，N,N-二异丙基碳二 亚胺（123mmol)29. 0mL，500mL DMF，缓慢加入4-二甲氨基吡啶（24. 6mmol)3. 0g，将混合物 在27°C搅拌5小时。真空抽干，DMF洗涤两次，真空抽干。加吡啶（1230mmol)99. OmL，醋酸 酐（1230mmol) 116. 3mL，800mL DMF，将混合物在27°C搅拌3小时，真空抽干，用DMF、甲醇、 DMF、甲醇依次洗涤，再用甲醇洗涤2遍。真空抽干至恒重。测得Fmoc-Leu-Wang树脂的替 代度为〇. 63mmol/g (Fmoc-Leu-Wang树脂总重131. 3g，保护氨基酸总摩尔数82. 7mmol)。
[0108] 替代度检测方法：a.用I. 5mL离心管称量3份10 ±ImgFmoc-Phe-Wang树脂，各加 入新配置的lmL20%哌啶/DMF震荡20分钟后，静置使树脂沉降。b.分别取a中100iiL上 清液转移至装有5mLDMF的3个试管中，混合均匀。c.取200iiL新配置的20%哌啶/DMF 转移至装有IOmLDMF的试管中，混合均匀做空白对照。d.取b、c溶液于比色皿中，测样品 吸光值八29〇11111，扣除空白值。6.替代度（51113)的计算 ：5油=51\429〇11111/(5.8\￥)，单位： mm〇l/g，式中：A290nm为样品在290nm下的吸光值；w=树脂的质量（mg)。f. 3次替代度的 计算值的平均值即为Fmoc-Phe-Wang树脂的替代度。
[0109] 实施例2:Fmoc-Tyr(tBu)-Leu-Wang树脂（肽树脂2)的制备
[0110] 实施例1制得的Fmoc-Leu-Wang树脂（1)中加入1000mL20%哌啶/DMF溶液，在 25°C搅拌10分钟，真空抽干，再加入1000mL20%哌啶/DMF溶液，在25°C搅拌20分钟，真空 抽干，用DMF洗涤一次，甲醇洗涤两次，DMF洗涤一次，二氯甲烷洗涤一次，真空抽干。加Fm oc-Tyr(tBu)-0H(165. 4mmol)76.Og，1-羟基苯并三氮唑（330. 8mmol)44. 7g，800mLDMF，力口 入N，N-二异丙基碳二亚胺（330. 8mmol) 51. 8mL，将混合物在25°C搅拌2. 5小时，茚三酮检 测呈阴性，真空抽干，甲醇洗涤一次，DMF洗涤两次，真空抽干。tBu为叔丁基。
[0111] 茚三酮检测方法：a.取约100粒树脂于检测试管中，用甲醇洗涤两遍，吸干甲醇。 b.向试管中加入5%茚三酮/乙醇溶液、80%苯酚/乙醇溶液、重蒸吡啶各3滴，震荡混合后 将试管置于105-1KTC加热3分钟，观察试管中树脂的颜色。c.检测结果：树脂显深蓝色或 深红色为阳性；树脂显淡蓝色或淡红色表明为偶联不完全；树脂显无色透明为阴性，表明 偶联完全。
[0112] 实施例 3:Fmoc-Glu (OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-Wang树脂（肽树脂 3)的制备
[0113] 实施例2制得的肽树脂⑵中加入1000mL20%哌啶/DMF溶液，在25°C搅拌10分 钟，真空抽干，再加入1000mL20%哌啶/DMF溶液，在25°C搅拌20分钟，真空抽干，用DMF洗 漆一次，甲醇洗漆两次，DMF洗漆一次，二氯甲烧洗漆一次，真空抽干"WFmoc-Glu(0tBu)-OH(165.4mmol)70. 4g，1-羟基苯并三氮唑（330.8mmol) 44.7g，800mLDMF，加入N,N-二异丙 基碳二亚胺（330. 8mm〇l)51. 8mL，将混合物在26°C搅拌2小时，茚三酮检测呈阴性，真空抽 干，甲醇洗涤一次，DMF洗涤两次，真空抽干。OtBu为叔丁酯。
[0114]实施例 4:Fmoc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu) -Leu-Wang树脂（肽树脂 4)的制 备
[0115] 实施例3制得的肽树脂⑶中加入1000mL20%哌啶/DMF溶液，在25°C搅拌10分 钟，真空抽干，再加入1000mL20%哌啶/DMF溶液，在25°C搅拌20分钟，真空抽干，用DMF洗 漆一次，甲醇洗漆两次，DMF洗漆一次，二氯甲烧洗漆一次，真空抽干"WFmoc-Glu(0tBu)-0H(165. 4mmol)70. 4g，1-羟基苯并三氮唑（330. 8mmol)44. 7g，800mLDMF，加入N,N-二异丙 基碳二亚胺（330. 8mmol)51. 8mL，将混合物在26°C搅拌2. 5小时，茚三酮检测呈阴性，真空 抽干，甲醇洗涤一次，DMF洗涤两次，真空抽干。
[0116]实施例 5:Fmoc-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu) -Leu-Wang树脂（肤树脂 5) 的制备
[0117] 实施例4制得的肽树脂⑷中加入1000mL20%哌啶/DMF溶液，在25 °C搅 拌10分钟，真空抽干，再加入l〇〇〇mL20%哌啶/DMF溶液，在25°C搅拌20分钟，真空抽 干，用DMF洗涤一次，甲醇洗涤两次，DMF洗涤一次，二氯甲烷洗涤一次，真空抽干。加 Fmoc-Pr〇-0H(165. 4mmol)55. 8g，1-羟基苯并三氮唑（330.8mmol)44. 7g，800mL DMF，加入 N，N-二异丙基碳二亚胺（330.8mmol) 51. 8mL，将混合物在27°C搅拌2. 5小时，茚三酮检测呈 阴性,真空抽干，甲醇洗涤一次，DMF洗涤两次，真空抽干。
[0118]实施例 6:Fmoc-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-Wang树脂（肤树 脂6)的制备
[0119] 实施例5制得的肽树脂（5)中加入1000mL20%哌啶/DMF溶液，在25 °C搅 拌10分钟，真空抽干，再加入l〇〇〇mL20%哌啶/DMF溶液，在25°C搅拌20分钟，真空抽 干，用DMF洗涤一次，甲醇洗涤两次，DMF洗涤一次，二氯甲烷洗涤一次，真空抽干。加 Fmoc-Ile-0H(165. 4mmol)58. 5g，1-羟基苯并三氮唑（330. 8mmol)44. 7g，800mLDMF，加入 N，N-二异丙基碳二亚胺（330. 8mmol) 51. 8mL，将混合物在25°C搅拌5. 5小时，茚三酮检测和 四氯苯醌检测均呈阴性，真空抽干，甲醇洗涤一次，DMF洗涤两次，真空抽干。
[0120] 四氯苯醌检测方法：a.取约100粒树脂于检测试管中，用DMF洗涤两遍，吸干甲 醇。b.向试管中加入2%四氯苯醌/DMF溶液、2%乙醛/DMF溶液各3滴，震荡混合5分钟后， 观察试管中树脂的颜色。c.检测结果：树脂显深绿色为呈阳性；树脂显淡蓝色或淡绿色表 明为偶联不完全；树脂显无色透明为阴性，表明偶联完全。
[0121] 实施例7:
[0122]Fmoc-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-Wang树脂（肤 树脂7)的制备
[0123] 实施例6制得的肽树脂（6)中加入1000mL20%哌啶/DMF溶液，在25°C搅拌10分 钟，真空抽干，再加入1000mL20%哌啶/DMF溶液，在25°C搅拌20分钟，真空抽干，用DMF洗 漆一次，甲醇洗漆两次，DMF洗漆一次，二氯甲烧洗漆一次，真空抽干"WFmoc-Glu(0tBu)-0H(165. 4mmol)70. 4g，1-羟基苯并三氮唑（330. 8mmol)44. 7g，800mLDMF，加入N,N-二异丙 基碳二亚胺（330. 8mm〇l)51. 8mL，将混合物在26°C搅拌2小时，茚三酮检测呈阴性，真空抽 干，甲醇洗涤一次，DMF洗涤两次，真空抽干。
[0124] 实施例8:
[0125]Fmoc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-ffan g树脂（肽树脂8)的制备
[0126] 实施例7制得的肽树脂（7)中加入1000mL20%哌啶/DMF溶液，在25°C搅拌10分 钟，真空抽干，再加入1000mL20%哌啶/DMF溶液，在25°C搅拌20分钟，真空抽干，用DMF洗 漆一次，甲醇洗漆两次，DMF洗漆一次，二氯甲烧洗漆一次，真空抽干"WFmoc-Glu(0tBu)-0H(165. 4mmol)70. 4g，1-羟基苯并三氮唑（330. 8m