设由于胆 固醇的作用，多肽能穿过细胞膜，在细胞胞吞的过程中进入胞内从而阻止禽流感病毒和细 胞的膜融合。本研究中的多肽能够通过抑制HA2在酸性条件下的构象变化，抑制流感病毒 进入宿主细胞。
【发明内容】
[0017] 本发明的目的在于提供一类兼具抗菌和抗流感病毒活性的融合肽衍生物。
[0018] 本发明所采取的技术方案是：
[0019] 一类兼具抗菌和抗流感病毒活性的融合肽衍生物，该类融合肽衍生物源于对流感 病毒中融合肽的修饰改造，具体包括以下修饰改造后的氨基酸序列：
[0020] GLFGAIAGFI_NGff_GMI_G ；GLFGAIAGFI_Gff_GMV_G ；
[0021] GLFGAIAGFI_GGff Q GMV_G ；GLFGAIAGFI_G GWP GLV_G ；
[0022] GLFGAIAGFI_GWP GLV_G ；GLFGAIAGFI_NGW_GMI_GWY ；
[0023] GLFGAIAGFI_GW_GMV_GWY；GLFGAIAGFI_GGffQGMV_GWY；
[0024] GLFGAIAGFI_GGWPGLV_GWY；GLFGAIAGFI_GWPGLV_GWY；
[0025] GLFGAIAGFI_NGW_GMI_GWYG；GLFGAIAGFI_GW_GMV_GWYG；
[0026] GLFGAIAGFI_GGffQGMV_GWYG；GLFGAIAGFI_GGWPGLV_GWYG；
[0027] GLFGAIAGFI_GWPGLV_GWYG；
[0028] I_NGW_GMI_GWYG；I_NGW_GMI_GWY；I_GW_GMV_GWYG；
[0029] I_GGffQGMV_GWYG；I_GW_GMV_GWY；I_GGffQGMV_GWY；
[0030] I_GGWPGLV_GWYG；I_GWPGLV_GWYG；I_GGWPGLV_GWY；
[0031] I_GWPGLV_GWY；
[0032] GLFGAIAGFI_NG；GLFGAIAGFI_G；GLFGAIAGFI_GG；
[0033] I_NGff_GMI_GWYG；I_NGff_GMI_GWY；I_GW_GMV_GWYG；
[0034] I_GGffQGMV_GWYG；I_GW_GMV_GWY；I_GGffQGMV_GWY；
[0035] I_GGWPGLV_GWYG；I_GWPGLV_GWYG；I_GGWPGLV_GWY；
[0036] I_GWPGLV_GWY；
[0037] 上述序列中横线位置独立为带正电荷的氨基酸、或其类似物、或其异构体、或其 盐、或其衍生物、或其络合物、或其水合物中的一种，所述异构体包括几何异构体和光学异 构体；
[0038] 上述斜体加阴影表示的甘氨酸G还可以独立替换成丙氨酸、D-丙氨酸、0 _丙氨 酸、N-甲基丙氨酸、亮氨酸、D-亮氨酸、高亮氨酸、D-高亮氨酸、N-甲基亮氨酸、正亮氨酸、 D-正亮氨酸（D-Nle)、N_甲基正亮氨酸中的一种，或者为前述氨其酸的异构体、盐、衍生物、 络合物、水合物中的一种，所述异构体包括几何异构体和光学异构体。
[0039] 进一步的，上述的带正电荷的a-氨基酸包括赖氨酸、D-赖氨酸、单甲基赖氨酸、 双甲基赖氨酸、三甲基赖氨酸、精氨酸、D-精氨酸、高精氨酸、单甲基精氨酸、对称双甲基精 氨酸、不对成双甲基精氨酸、鸟氨酸、D-鸟氨酸、2, 4-二氨基丁酸、2, 3-二氨基丙酸。
[0040] 一类兼具抗菌和抗流感病毒活性的融合肽衍生物该类融合肽衍生物为对上述所 述的融合肽衍生物进行脂化、糖基化、酰胺化、羧酸化、磷酸化、酯化、N-酰化、通过二硫键 环化、转化成酸加成盐、二聚体化、多聚体化或/和缀合化修饰后所得到的新的融合肽衍生 物。
[0041] 进一步的，上述脂化中所用到的脂质基团选自脂肪酸，磷脂基团，糖磷脂酰肌醇， 磷脂酰丝氨酸，磷脂酰乙醇胺，鞘磷脂，磷脂酰胆碱，心磷脂，磷脂酰肌醇，磷脂酸，溶血磷酸 甘油酯，胆固醇，五环三萜类基团中至少一种。
[0042] 进一步的，上述脂化中所用到的脂质基团为脂肪酸，所述脂肪酸为C6~C20脂肪 酸。
[0043] 进一步的，上述C6~C20脂肪酸为月桂酸、棕榈酸、肉豆蘧酸、硬脂酸、油酸、亚油 酸、亚麻酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、芥酸或花生酸。
[0044] -类兼具抗菌和抗流感病毒活性的融合肽衍生物，该类融合肽衍生物的序列分别 为：
[0045] HA-FP-1：GLFGAIAGFIKNGWKGMIKG(SEQIDN0:1)；
[0046] HA-FP-2 ：GLFGAIAGFIKGGWQGMVKG(SEQIDNO:2)；
[0047] HA-FP-2-1 ：GLFGAIAGFIKKGWKGMVKG(SEQ ID NO:3)；
[0048] HA-FP-3 ：GLFGAIAGFIKGGWP GLVKG(SEQ ID NO:4)；
[0049] HA-FP-3-1 ：GLFGAIAGFIKGGWP GL VKG(SEQ ID NO:5)；
[0050] HA-FP-1-22 ：GLFGAIAGFIKNGWKGMI KGWY(SEQ ID NO:6)；
[0051] HA-FP-1-13:IKNGWKGMI KGWY(SEQ ID NO:7)；
[0052] HA-FP-1-13-1:IKNAWKAMI KAWY(SEQ ID NO:8)；
[0053] HA-FP-1-13-2:IKNLWKLMI KLWY(SEQ ID N0:9)〇
[0054] 本发明的有益效果是：
[0055] 本发明修饰改造得到的融合肽衍生物在测试范围内对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性 菌均有抑制作用，成其是HA-FP-l、HA-FP-2、HA-FP-3-l表现出很好的抗菌活性。而且这些 融合肽衍生物具有抗流感病毒活性，能够通过抑制流感病毒HA2亚基在酸性条件下构象变 化，达到阻断流感病毒进入宿主细胞内。这些多功能抗微生物多肽在病毒性感冒合并细菌 感染存在潜在的应用的前景。
【附图说明】
[0056]图1为相关多肽二级结构的预测（A)和螺旋轮投影（B)，其中肽二级结构的预测使 用http: //bioserv. robs, univ-paris-diderot. fr/PEP-FOLD/中的工具；
[0057] 图2为融合肽衍生物的杀菌速率；
[0058] 图3为融合肽衍生物在中性和酸性条件下的圆二色谱CD光谱曲线，圆二色谱CD 检测实验中各融合肽衍生物的浓度为0.02mM，溶剂为50% (v/v)TFE(pH 7)或50%TFE(pH 5)，每次检测重复4次；
[0059] 图4为PI吸收实验；A表示在有HA-FP-1存在的条件下，PI荧光染料进入细菌 S. aureus内与细菌DNA结合，发出红色荧光；B为TritonX-100阳性对照，PI荧光染料进入 细菌体内；C为PBS阴性对照PI荧光染料未能进入细菌体内；
[0060] 图5为融合肽衍生物对MDCK细胞的细胞毒性实验结果（A)及溶血活性检测结果 (B)；
[0061] 图6为融合肽衍生物抑制H5N1假病毒感染MDCK细胞的能力检测；
[0062] 图7为融合肽衍生物抑制VSVG假病毒感染MDCK细胞的检测；
[0063] 图8为qRT-PCR检测融合肽衍生物对活毒A/PR8/34(H1N1)HA基因复制的影响情 况；其中cell表示MDCK细胞，virus表示活毒A/PR8/34(H1N1);
[0064] 图9为融合肽衍生物对HA抗原引发凝血现象的影响情况；" + "表示阳性对照组， 加入HA1抗体；表示阴性对照组，加入PBS ;浓度200 y g/mL~0. 39 y g/mL表示融合肽 衍生物的浓度；每一个孔都加有HA抗原和鸡红细胞；
[0065] 图10为不同比例的HA-FP-1和HA-FP-0混合物对H5N1假病毒进入细胞的抑制 作用；其中，HA-FP-1曲线表示只有25ii g/mL HA-FP-1对病毒的抑制率；HA-FP-0曲线表示 只有HA-FP-0存在时，对病毒的抑制率；HA-FP-1+HA-FP-0曲线表示HA-FP-1与不同浓度 HA-FP-0对病毒的抑制率，横坐标的比例表示HA-FP-1与HA-FP-0的浓度比；
[0066] 图11为计算机模拟模型展示融合肽衍生物与HA的相互作用，A表示在酸性条件 下HA2发生了构象变化，摸拟了流感病毒通过HA进行隔膜的过程；B表示在有本发明融合 肽衍生物存在的条件下，本发明融合肽衍生物能与HA2N端的多肽相互结合，HA2在酸性条 件下的构象变化将被阻断，即流感病毒的隔膜过程被抑制；C- I表示HA-FP-1和HA2N端的 结合；C- II表示HA-FP-0和HA2N端的结合。
【具体实施方式】
[0067] 下面结合具体实施例对本发明做进一步的说明，但并不局限于此。
[0068] 实施例1 一类兼具抗菌和抗流感病毒活性的融合肽衍生物
[0069] 本发明将流感病毒不同HA亚型中N端的融合肽进行修饰改造获得相应的兼具抗 菌和抗流感病毒活性的融合肽衍生物。
[0070] -、基于截取融合肽的N端20位氨基酸序列设计的融合肽衍生物
[0071](1)、基于H3亚型的融合肽得到融合肽衍生物
[0072] H3