一种杂交瘤细胞株、及其分泌单克隆抗体和应用_3

文档序号:8375911阅读:来源:国知局
受体可以通过化合物 与单线态氧反应形成荧光化合物而形成,或通过化合物与一辅助化合物反应并将其转化为 荧光化合物而形成。这类化合物可以包括于本发明装置中的缓冲液中。在其它的实施方式 中,荧光能量受体可以是包括化学发光剂或基团的化合物的一部分,例如,荧光能量受体可 以包括稀土金属如铕、钐、碲等金属络合物。这些材料因其具有尖锐的发光谱带而较受青 睐;而且,镧系标记物如铕(III)可以提供有效的长时间的信号发射,同时不易光漂白,因 而可以使得含有处理/反应样品的测试装置在需要的情况下可以放置较长一段时间。在 各种异源和同源免疫测定法中,已经使用长寿命的荧光铕(III)络合物纳米微粒作为标记 物,例如可以参见Huhtinonetal.Clin.Chem.20040ct;50(10) :1935-6。但这些内部标记 的纳米微粒与时间分辨荧光检测一起使用时,测定性能可以改善。在异源测定中,低浓度下 测定的动态范围可以扩展;而且,通过使用检测抗体涂敷的高特异活性纳米微粒标记物,而 不是使用常规标记的检测抗体,测定的动力学特性也可以改善。在同源测定中,对于荧光共 振能量转移来说,铕(III)纳米微粒是很有效的供体,从而可以进行简单、快速和高效的筛 选。在一实施方式中,标记物如此处披露的荧光标记物,包括与生物分子偶联的纳米微粒标 记物。换句话说,纳米微粒可以用作检测或捕捉探针。例如,本发明中,可以利用连接到单 克隆抗体或链霉抗生物素蛋白(SA)的铕(III)-标记的纳米微粒来检测样品中特定的分析 物,如纳米微粒基的免疫测定。纳米微粒可以作为附着特定结合剂的底物,这些特定结合 剂是针对分析物和检测(如标记物)或捕捉成分的。有关标记物的实例可以参见美国专 利U.S.P4695554、U.S.P4863875、U.S.P4373932 和U.S.P4366241。U.S.P4313734 和 U.S.P4373932中则披露了胶体金属和染色颗粒。而U.S.P4954452中则披露了如何制备 和使用非金属的胶体;U.S.P4252459中披露了用作标记物的有机聚合物乳胶颗粒。
[0028] 把标记物结合到抗原或抗体上的方法,可以通过顺丁烯二酰亚胺法(J.Biochem. (1976),79, 233)、生物素活化法(J.Am.Chem.Soc. (1978),100, 3585)、疏水结合法、酯活化 法或异氰酸醋法("Enzyme免疫测定techniques",由IgakuShoin发表于1987年)。如果 上述标记物为放射性同位素,则需使用好的防辐射的工作台面或液体防护设备。如果上述 标记物为酶,需加入底物,酶的活性通过比色法或荧光计测定。如果上述标记物为荧光物 质、发光物质或有色物质,测定方法可以相应的使用本领域熟知的方法进行测定。
[0029] 术语"检测样品"包括但不限于动物或患者的排泄物、口鼻腔分泌物、动物细胞培 养的完整病毒或裂解病毒液等。
[0030] 本发明的第六方面在于提供所述单克隆抗体或其活性片段或其保守性变异体或 上述的组合,用于诊断、预防和/或治疗猪流行性腹泻病毒感染的药物的用途。
[0031] 本发明的第七方面在于提供所述的杂交瘤细胞8A3A10株分泌表达的单克隆抗体 在制备预防和治疗猪流行性腹泻的药物中的应用;或是所述的单克隆抗体制备的药物组合 物在制备预防和治疗猪流行性腹泻的药物中的应用。
[0032] 作为本发明的一种实施方式,本发明制备的药物经口服给药。
[0033] 术语"预防和/或治疗"在涉及猪流行性腹泻病毒感染时是指抑制猪流行性腹泻 病毒的复制、抑制猪流行性腹泻病毒的传播或防止猪流行性腹泻病毒在其宿主体内定居, 以及减轻猪流行性腹泻病毒感染的疾病或病症的症状。若病毒荷载量减少、病症减轻和/ 或摄食量和/或生长增加,那么就可以认为所述治疗达到了治疗效果。
[0034] 术语"猪"是指任何属于猪科(Suidae)成员的动物,如猪。
[0035] 在本发明的一种优选实施方式中,所述单克隆抗体或其活性片段或保守性变异体 的形式包括但不限于粉末剂、丸剂、片剂、胶囊剂。
[0036] 本发明的包含杂交瘤细胞8A3A10株分泌表达的单克隆抗体的药物能够有效预防 和治疗猪流行性腹泻病毒相关的疾病。
[0037] 术语"猪流行性腹泻病毒"为临床使用的PEDV活疫苗毒株或与疫苗毒株相似的临 床流行的PEDV毒株,如:CV777株(保藏号为CCTCC-V200608,保藏单位为中国典型培养物 保藏中心,保藏地址为中国武汉市?武汉大学,保藏日期为2006年11月16日,该毒株已在 中国专利CN101117627A中公开);ZJ08株(保藏号为CGMCCNo. 7806,该毒株已在中国专 利CN103725651A中公开);韩国DR13 株、CPF1074 株、PFF513 株、KPD-9F株、SM98 株;比利 时Brl/87株和日本JMe2株、P-5V株(韩国DR13株、CPF1074株、PFF513株公开于猪流行 性腹泻病毒FJ-11A株的分离与0RF3基因序列分析,陈如敬,吴学敏,车勇良等,福建农业学 报,2011,26 (6) : 947-951 ;韩国KPD-9F株、比利时Brl/87株和日本JMe2株公开于专利申请 抗猪流行性腹泻病毒高免血清及其制备方法,CN103705918A;SM98株公开于2010-2012年 中国猪流行性腹泻病毒的遗传变异分析,王晓梦等,第八届全国会员代表大会暨第十五次 学术研讨会论文集;P-5V株公开于2014年流行性腹泻最新防控,浙江诺倍威生物技术有限 公司技术期刊,2014,3);圆1301株(保藏号为0^0:勵 :¥201341,保藏单位为中国典型培 养物保藏中心,保藏地址为中国武汉市?武汉大学,保藏日期为2013年9月16日);AH2012 株、BJ-2011-1株、⑶YG株(AH2012株、BJ-2011-1株、⑶YG株公开于猪流行性腹泻病毒变 异株N基因的克隆及原核表达,孙冰等,畜牧与兽医,2014, 46 (5) : 72-76)等。
[0038] 本发明的第八方面在于提供单克隆抗体在鉴别检验含猪流行性腹泻病毒抗原和 其他抗原的疫苗组合物中的应用。
[0039] 作为本发明的一种实施方式,所述其他抗原包括猪传染性胃肠炎病毒抗原、猪轮 状病毒抗原、猪圆环病毒抗原、猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原、副猪嗜血杆菌抗原、猪细小 病毒抗原、大叶性肺炎放线杆菌抗原、大肠杆菌抗原、猪萎缩性鼻炎抗原、猪伪狂犬病病毒 抗原、猪霍乱病抗原、猪流感病毒抗原中的一种或多种。
[0040] 进一步优选地,所述其他抗原为猪传染性胃肠炎病毒抗原。
[0041] 本发明的第九方面在于提供所述的试剂盒在用于非诊断目的的猪流行性腹泻病 毒检测分析中的应用。
[0042] 本发明的含有杂交瘤细胞8A3A10株分泌表达的单克隆抗体的试剂盒能够在流行 病学分析、对离体组织进行检测等非诊断目的方面应用。
[0043] 本发明具有以下突出的优点:
[0044] 1. 口服使用,使用途径简单;
[0045] 2.目前猪流行性腹泻病毒疫苗的预防效果不能达到100%,该产品可以弥补现 有疫苗的缺陷,解决了现有疫苗、母源抗体不足时所引发的仔猪猪流行性腹泻病毒感染问 题;
[0046] 3.可以用于紧急预防猪流
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