一种p53-MDM2结合抑制剂二羟基异喹啉衍生物的合成方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及制备一类非肽类P53-MDM2结合抑制剂NVP-CGM097及其类似物的合成 方法，本发明属于有机合成领域。
【背景技术】
[0002] p53蛋白是与人类恶性肿瘤相关性最高的肿瘤抑制蛋白之一，它是指名称为 TP53、p53、TP73、p73、TP63、TP73L、p63的所有基因和/或其所编码的蛋白质。对p53的严 格调控是哺乳动物细胞存活所必须的，P53过多表达或不当的激活使细胞死亡，而表达减少 或失活则导致肿瘤的发生。在DNA损伤、低氧血症、热休克、RNA耗尽或代谢改变等应激情 况下，激活P53抑癌蛋白，直接或通过其他转录因子间接地导致细胞生长阻滞、细胞凋亡。 p53蛋白受其负反馈调节蛋白鼠双微体MDM2 (Mouse Double Minute 2,在人的同源蛋白为 HDM2)控制，MDM2在许多肿瘤细胞中高度表达，使其与p53之间的负反馈调节失衡，从而促 进细胞生长以及加速肿瘤的出现及生长。HDM2抑制p53蛋白的活性主要是通过以下两种方 式：形成HDM2-p53蛋白复合物，或促进p53蛋白的降解。此外，HDM2还作为一种穿梭蛋白 介导P53蛋白的核浆转运。通过抑制p53与HDM2的结合作用作为恶性肿瘤治疗中的药物 靶点。
[0003] 异喹啉酮衍生物，其分子结构如下述通式I所示，具有良好的p53-MDM2结合抑制 活性，且对于肿瘤细胞也有较高增殖抑制活性。
[0004]
[0005] 其中，Rp R2为相同的或不同的取代或非取代的(^~C7的烷基、取代或非取代的 C 7的环烷基、取代或非取代的C C 7的杂环烷基等；R3为氢、取代或非取代的C C 6 的烷基等；Z代表CH、N ;X为卤素，所述卤素指氟、氯、溴；η为0,1，2, 3。代表性的化合物I 的结构式如下所示（1-1至1-6)，这些化合物对P53-HDM2的半抑制浓度IC5。均小于4nM，其 中化合物I-I (通用名：NVP-CGM097)对p53-HDM2的IC5。低至0. 8nM，表现出非常好的生物 活性特征。
[0006]
[0007] 对于此类化合物合成方法的报道较少，专利W02011076786A1，W02012175520以及 W02012066095中，公开的方法均为先分别合成化合物9-1和化合物9-2,再通过乌尔曼反应 得到目标化合物9,如下述反应通式所示：
[0009] 其中R^RyR3, Ζ，η的定义如前。
[0010] 化合物9-2的合成，需使用剧毒性的锡试剂，以及昂贵、不易得的铑金属催化剂， 反应条件苛刻需氩气保护。目标化合物9的合成，需要先在170Γ条件下对磷酸钾进行预处 理，且反应体系需氩气保护，条件苛刻，收率低（以NVP-CGM097为例，此步乌尔曼反应收率 仅23. 8 %，自化合物9-6合成化合物9五步反应总收率仅为4. 5 % )，纯化难度大，不适合进 行工艺放大。
[0011] 专利W02011076786A1公开了另一种合成方法，由化合物9-2先通过乌尔曼反应形 成化合物10-4,再通过脱保护基、取代、还原胺化及关环反应合成化合物10。该合成路线需 优先使用成本高的化合物9-2,使得化合物10的合成成本大大提高。
[0012]
[0013] 本发明公开了一种制备非肽类p53-MDM2结合抑制剂NVP-CGM097及其类似物合 成方法，本发明属于有机合成领域。该合成路线新颖，操作简便，收率高，安全性好，环境友 好，成本低，有利于工艺化生产。
【发明内容】
[0014] 本发明的目的是提供一种制备非肽类P53-MDM2结合抑制剂NVP-CGM097及其类似 物的合成方法。
[0015] 其反应通式如下式所示：
[0017] 其中R2为相同的或不同的取代或非取代的(^~C7的烷基、取代或非取代的 C 7的环烷基、取代或非取代的C C 7的杂环烷基；R3为氢、取代或非取代的C (： 6的 烷基；R4为氢或甲基；η为0,1，2, 3 ;X为卤素，所述卤素指氟、氯、溴；Z为CH、N。优选的，R3 为氢、甲基或乙基，η = 1，札为异丙基、异丁基、环丁基或四氢呋喃基，1?2为甲基。
[0018] 下面更具体地描述本发明的制备方法。然而，应理解，本发明并不局限于以下所给 出的具体反应条件（如溶剂、所用化合物的量、反应温度、反应所需时间等）。
[0019] 本发明的制备方法可用以下流程表示：
[0020] 1.化合物1与化合物2通过还原胺化得到化合物3 ;
[0021]
[0022] 其中R3, η定义如前。
[0023] 所述的还原胺化方法和条件可以为本领域此类反应的常规方法和条件，进一步 的，所述反应的还原剂选自硼氢化钠、硼氢化锂、三乙酰氧基硼氢化钠、氰基硼氢化钠中的 一种或多种，所述的还原剂与化合物1的摩尔比为1~5:1 ;所述反应中化合物1与化合物 2、乙酸的摩尔比分别为1:1. 0~1. 2:0. 1~3 ;所述反应使用的溶剂选自甲醇、乙醇、二氯 甲烷、1，2_二氯乙烷或四氢呋喃中的一种或多种；所述的反应时间以检测反应完成为止；
[0024] 所述化合物1参照W02013056070中所述方法合成；
[0025] 所述化合物2参照W02011133039中所述方法合成。
[0026] 2.化合物3与溴乙酸甲酯在碱性条件下、经碘代物催化反应，得到化合物4 ;
[0027]
[0028] 其中R3, η定义如前。
[0029] 所述的亲核取代方法和条件可以为本领域此类反应的常规方法和条件，进一步 的，所述的碱选自碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯、碳酸氢钠、碳酸氢钾、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧 化锂，或三乙胺、二异丙胺，所述碱与化合物3的摩尔比为1. 5~4:1 ;所述碘化物选自碘化 钠或碘化钾，所述碘化物与化合物3的摩尔比为0. 02~0. 1:1。
[0030] 3.化合物4通过氧化得到化合物5 ;
[0031]
[0032] 其中R3, η定义如前。
[0033] 所述的氧化方法和条件可以为本领域此类反应的常规方法和条件，如：Swern氧 化、琼斯氧化、氯络酸吡啶盐氧化、重络酸吡啶盐氧化、2-碘酰苯甲酸氧化、戴斯-马丁氧 化、2, 2, 6, 6-四甲基哌啶氧化物氧化等，优选为Swern氧化。
[0034] 4.化合物5和化合物6通过还原胺化得到化合物7 ;
[0036] 其中Χ，Ζ，η定义如前。
[0037] 所述的还原胺化方法和条件可以为本领域此类反应的常规方法和条件，进一步 的，所述还原剂选自硼氢化钠、硼氢化锂、三乙酰氧基硼氢化钠、氰基硼氢化钠中的一种或 多种，优选为三乙酰氧基硼氢化钠；所述还原剂与化合物6的摩尔比为1~6:1，优选为1~ 2:1 ;化合物5与化合物6的摩尔比为1~1. 5:1 ;所述反应溶剂选自甲醇、乙醇、二氯甲烷、 1，2-二氯乙烷或四氢呋喃中的一种或多种，优选为二氯甲烷；所述的反应时间以检测反 应完成为止；
[0038] 步骤4中可包含以下后处理步骤，反应结束后，将反应液过滤后浓缩后，得到化合 物7,直接进行下一步反应。
[0039] 其中，步骤4中所示的化合物6的合成方法如下所示，将化合物11手性拆分后，得 到化合物12,化合物12经步骤7还原硝基得到化合物6。
[0041] 所述化合物11参考Synthesis, 1982, 3, 216-217中所述方法合成；
[0042] 所述步骤7中使用的还原剂选自钯/碳、氢氧化钯/碳、铂/碳、氧化钼、雷尼镍、 锌粉、铁粉、铁粉-锌粉复合物；溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇、四氢呋喃、乙腈、甲苯中的一 种或多种；所述反应温度为15~85°C。反应结束后，后处理方式为：将反应液浓缩后溶解 于乙酸乙酯中，过滤并洗涤滤饼，合并有机相，浓缩得到粗品褐色油状物化合物6，得到的粗 品6可直接用于下一步反应。
[0043] 5.化合物7和甲醛或多聚甲醛反应，经还原胺化得到化合物8 ;
[0044]
[0045] 其中 RpR^R3, Χ，Ζ，η 定义如前。
[0046] 所述的还原胺化方法和条件可以为本领域此类反应的常规方法和条件，进一步 的，所述还原剂选自硼氢化钠、硼氢化锂、氰基硼氢化钠、三乙酰氧基硼氢化钠中的一种或 多种，所述溶剂选自甲醇、乙醇、二氯甲烷、1，2-二氯乙烷、四氢呋喃中的一种或多种。所述 的反应时间以检测反应完成为止；
[0047] 6.化合物8在酸性条件下脱保护后，碱性条件下酰胺环化得到化合物I ;
[0049] 其中RpRyR3JJ, η定义如前。
[0050] 所述反应中的酸选自盐酸、三氟乙酸、甲酸；所述反应中的碱选自碳酸钾、碳酸钠、 碳酸铯、碳酸氢钾、碳酸氢钠、醋酸钾、甲醇钠、乙醇钠，或三乙胺、二异丙胺、吡啶、氨水；所 述的酸、碱与化合物8的投料摩尔比为3~12:3~10:1。所述有机溶剂可为二氧六环、乙 酸乙酯、二氯甲烷、甲醇、异丙醇、1，2-二氯乙烷中的一种或多种；所述的反应时间以检测 反应完成为止。
[0051] 本发明方法的优点主要在于：
[0052] 1.该路线公开了一种合成NVP-CGM097及其类似物的新方法，且该方法反应条件 简单，易操作，后处理方便，收率高，环境友好，反应原料经济易得，适合工业生产；
[0053] 2.化合物8由化合物12经过还原、两步还原胺化方便地得到，该反应操作简单，后 处理方便，中间不需要纯化，并且三步收率高达70% ;
[0054] 3.化合物5的合成操作简单，后处理方便，并且自化合物1至化合物5三步收率高 达 80% ;
[0055] 本方法是一条全新的可工业化的合成路线。同时，该路线对开发新的P53-MDM2结 合抑制剂具有很好的方法学意义。 具体实施例
[0056] 下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，本发明并不局限于以下所给出 的具体反应条件（如溶剂、所用化合物的量、反应温度、反应所需时间等）。下列实施例中未 注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件进行。
[0057] 实施例中所用的原料或试剂除特别说明之外，均市售可得。
[0058] 实施例中所述的室温均指20-35Γ。除非特别指出，所述的试剂不经纯化直接使 用。所有溶剂均购自商业化供应商，例如奥德里奇（Aldrich)，并且不经处理就可使用。反 应通过TLC分析和/或通过LC-MS分析，通过起始材料的消耗来判断反应的终止。分析 用的薄层层析（TLC)是在预涂覆硅胶60F2540. 25毫米板的玻璃板（EMD化学品公司（EMD Chemic