950^，8，!1-3) ;5(：138.1((：-3)和132.7((：-4)]。此外，腿8(：谱中!1-6和(：-18的相关 性表明6位连氧碳（5〇84.9)位于18,6-内酯环上。1^(^3￥谱中!1 3-19与!1-6，!1-6与!13-17， H3-17与H-10,以及H-I与H 3-19的相关性表明它们均为α构象。通过H3-19和H-12的相 关性可确定H-I的构象（H-1 α和H-I β )。同样，H3-17和H-20的相关性表明了 H-7的构 象（Η-7 α和Η-7 β )。立体构型通过E⑶实验证实，实验值与理论值基本一致（图2)。该 化合物结构如图1所示。
[0028] 实施例2 :化合物（I )药理作用试验
[0029] -、材料和试剂
[0030] Ado，Sigma 公司；L-Hey，Sigma 公司；DTNB，Sigma 公司；二硫苏糖醇（DTT)，分析 纯，上海伯奥生物科技有限公司；乙二胺四乙酸（EDTA)，分析纯，天津市远航化学品有限公 司）；硫酸铵，分析纯，天津市东丽区天大化学试剂厂；磷酸二氢钾，分析纯，天津市东丽区 天大化学试剂厂；磷酸氢二钾，分析纯，天津市东丽区天大化学试剂厂；wistar大鼠，哈尔 滨医科大学实验动物中心。
[0031] 二、试验方法
[0032] 2. ISAH水解酶的提取
[0033] 4°C下取新鲜大鼠肝脏，用2倍于肝脏重量的lOmmol/L pH7. 6磷酸缓冲液（含 2mmol/L DTT, lmmol/L EDTA)制成勾衆。肝衆在 4°C 10, 000rad/min 离心 30min，取上清液， 4°C 10, 000rad/min离心60min，取上清液，上清液用38%硫酸铵沉淀，于4°C 10, OOOrad/ min离心后，弃上清，取沉淀冻干备用。
[0034] 2. 2SAH水解酶活性测定
[0035] 用比色法测定SAH水解酶的活性。SAH水解酶能可逆性地催化S-腺苷-L-高半胱 氨酸（SAH)分解为腺苷（Ado)、高半胱氨酸（Hcy)，半胱氨酸可与二硫硝基苯甲酸（DTNB)发 生硫醇-二硫化物交换反应，反应中1分子的半胱氨酸引起1分子的硫硝基苯甲酸的释放。 它在PH 8. 0时，在412nm波长处有强烈的吸收，因此可利用比色法定量测定-SH基，测定吸 收光度值以检测SAH水解酶活性。
[0036] 空白对照曲线绘制：将100 μ 1反应混合物（含DTT 2mM，EDTA ImM，腺苷2mM， D，L-高半胱氨酸2mM，磷酸钾缓冲液pH 7. 6120mM) 6份，分别在37°C水浴中培养0秒、10秒、 20秒、30秒、40秒、50秒，然后各取20 μ 1，分别加入到盛有60 μ I Tris-Cl缓冲液（PH 8.0) 的离心管中混匀，再各取20 μ 1分别加入到6支盛有100 μ I DTNB分析液的离心管中，准确 静置5min，使其充分显色，在412nm处检测吸光值。
[0037] SAH水解活性曲线绘制：将100 μ 1反应混合物（含DTT 2mM，EDTA ImM，腺苷2mM， D，L-高半胱氨酸2mM，磷酸钾缓冲液pH 7. 6120mM，SAH水解酶3 μ I) 6份，实验方法同上。
[0038] 2. 3化合物（I )对SAH水解酶活性的抑制作用
[0039] 将化合物（I )用蒸馏水配制成浓度为0· 05mg/ml的样品溶液。将100 μ 1反应混 合物（含DTT 2mM，EDTA ImM，腺苷2mM，D，L-高半胱氨酸2mM，磷酸钾缓冲液pH 7. 6120mM， SAH水解酶3 μ 1，化合物（I )样品溶液3 μ I) 6份，实验方法同上。
[0040] 三、结果及结论
[0041 ] 3. 1空白对照曲线及SAH水解酶活性测定
[0042] 图4中可见，反应底物腺苷和高半胱氨酸在不加 SAH水解酶的情况下，会缓慢的向 合成的方向反应，空白对照曲线中底物的吸光度逐渐降低。SAH水解酶是该反应的催化剂， 在底物腺苷和高半胱氨酸浓度非常高的情况下，SAH水解酶催化腺苷和高半胱氨酸迅速反 应，但是10秒后，该反应合成和水解达到平衡，反应体系中高半胱氨酸的量趋于稳定。图4 中酶活性检测曲线前10秒底物吸光度迅速降低，10秒后底物的吸光度逐渐趋于稳定，反应 就达到了平衡。
[0043] 3. 2化合物（I )对SAH水解酶的抑制作用
[0044] 图4中可见，加入化合物（I )后，腺苷和高半胱氨酸持续向合成的方向反应，并 没有出现SAH水解酶加速反应并迅速达到反应平衡的现象。说明化合物（I )抑制了 SAH 水解酶的活性。分析可能具有抗病毒的活性。
[0045] 实施例3
[0046] 片剂的制备：按实施例1方法先制得化合物（I )，以及利用有机酸如酒石酸、或 柠檬酸或甲酸或乙二酸等、无机酸如盐酸或硫酸或磷酸制成的盐，按其与赋形剂重量比为 1:9的比例加入赋形剂，制粒压片。
[0047] 实施例4
[0048] 口服液的制备：按实施例1方法先制得化合物（I )，以及利用有机酸如酒石酸、 或柠檬酸或甲酸或乙二酸等、无机酸如盐酸或硫酸或磷酸制成的盐，按常规口服液制法制 成口服液。
[0049] 实施例5
[0050] 胶囊剂或颗粒剂的制备：按实施例1方法先制得化合物（I )，以及利用有机酸如 酒石酸、或柠檬酸或甲酸或乙二酸等、无机酸如盐酸或硫酸或磷酸制成的盐，按其与赋形剂 重量比为1:9的比例加入赋形剂，制成胶囊或颗粒剂。
[0051] 实施例6
[0052] 注射液的制备：按实施例1方法先制得化合物（I )，以及利用有机酸如酒石酸、 或柠檬酸或甲酸或乙二酸等、无机酸如盐酸或硫酸或磷酸制成的盐，按常规加注射用水，精 滤，灌封灭菌制成注射液。
[0053] 实施例7
[0054] 无菌粉针的制备：按实施例1方法先制得化合物（I )，以及利用有机酸如酒石 酸、或柠檬酸或甲酸或乙二酸等、无机酸如盐酸或硫酸或磷酸制成的盐，将其溶于无菌注射 用水中，搅拌使溶，用无菌抽滤漏斗过滤，再无菌精滤，分装于安瓿中，低温冷冻干燥后无菌 熔封得粉针剂。
【主权项】
1. 具有下述结构式的化合物（I )，2. 权利要求1所述的化合物（I )的制备方法，其特征在于包含以下操作步骤：(a)将 构树的干燥根粉碎，用80 %乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙 酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物； (b)步骤（a)中乙酸乙酯萃取物用大孔树脂除杂，依次用10%乙醇和75%乙醇洗脱，收集 75 %乙醇洗脱液，减压浓缩得75 %乙醇洗脱物浸膏；（c)步骤（b)中75 %乙醇洗脱浸膏用 正相硅胶分离，依次用体积比为85:1、45:1、20:1、10:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱 得到5个组分；（d)步骤（c)中组分3用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为25:1、20:1 和10:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤（d)中组分2用十八烷基硅烷 键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为60%的甲醇水溶液等度洗脱，收集9-12个柱体积 洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物（I )。3. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树 脂。4. 药物组合物，其中含有治疗有效量的权利要求1所述的化合物（I )和药学上可接 受的载体。5. 权利要求1所述的化合物（I )在制备抗病毒药物中的应用。6. 权利要求4所述的药物组合物在制备抗病毒药物中的应用。
【专利摘要】本发明公开了一种高度氧化的二萜化合物及其制备方法和医药用途，属于药物领域，具体涉及从构树的干燥根中分离得到的一种新的二萜化合物及其制备方法和医药用途。该化合物为首次报道，可以从构树的干燥根中提取、分离纯化得到，纯度高。体外试验证明该化合物能抑制SAH水解酶活性，具有抗病毒的活性，可以将该化合物应用于抗病毒领域，制备抗病毒药物。
【IPC分类】C07D493/10, A61K31/343, A61P31/12
【公开号】CN105061451
【申请号】CN201510541755
【发明人】林天样
【申请人】林天样
【公开日】2015年11月18日
【申请日】2015年8月28日