CJBV是否对真菌类及引起食物 中毒的细菌具有抑制效果。
[0131] (1)酵母及霉菌（真菌类）的抗菌活性试验
[0132] 首先，进行试验确认新分离的芽孢杆菌CJBV是否对霉菌一一炭疽病菌 (Colletotrichumorbiculare)、番前枯萎病JCM12575(Fusariumoxysporumf.sp. IycopersiciJCM12575)、白色念珠菌（Candidaalbicans)、病原性酵母--拜耳接合酵母 (Zygosaccharomycesbailii)具有抗菌活性。
[0133] 将所述4种真菌类分别在马铃薯葡萄糖琼脂（PDA!Potatodextroseagar)培养 基进行培养。然后，在乙醇里溶解根据所述实施例2真空蒸发的抗菌组合物一一芽孢杆菌 CJBV培养液的丁醇萃取物后，在涂布所述4种菌株的各个平板培养基上面放置直径8mm的 纸圆片，以25y1为单位添加所述抗菌物质后，在30°C温度下培养24小时至48小时，观察 分离菌株产生的抗菌物质是否生成抑菌圈。
[0134] (2)引起食物中毒的细菌的抗菌活性试验
[0135] 另外，进行如下实验，确认新分离的芽孢杆菌CJBV是否只对发酵食品中引起食物 中毒的细菌具有特定的抗菌活性。
[0136] 在TSA(Trypticsoyagar)培养基上分别培养引起食物中毒的细菌--錯样 芽胞杆菌（Bacilluscereus)、单核细胞增多性李斯特氏菌（Listeriamonocytogenes) 和酱类发酵细菌--枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis)、解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens)〇
[0137] 然后，在乙醇里溶解根据所述实施例2真空蒸发的抗菌组合物一一芽孢杆菌CJBV 培养液的丁醇萃取物（ExtractionwithBuOH)后，在涂布所述4种菌株的各个平板培养基 上面放置直径8mm的纸圆片，以25y1为单位添加所述抗菌物质后，在37°C温度下培养24 小时至48小时，观察分离菌株产生的抗菌物质是否生成抑菌圈。
[0138] 对于2种酱类发酵细菌，除了所述实验组以外，由丁醇（BuOH)代替芽孢杆菌CJBV 培养液一一丁醇萃取物，作为对照组使用。
[0139] 图3及图4显示根据所述实施例3的结果，如下表1显示根据不同抑菌圈的生成 程度抗菌活性程度。
[0140]【表1】
[0142] 所述表1中，表示不能抑制生长，' + '表示抑菌圈的直径为3mm至5mm以下， '++'表示抑菌圈的直径为6mm至IOmm以下，'+++'表示抑菌圈直径IOmm以上。
[0143] 如图3上部所示，利用含有本发明新分离的芽孢杆菌CJBV菌株、所述菌株的孢子、 所述菌株的培养物及其浓缩物、萃取物、干燥物中的一种以上有效成分的抗菌组合物，对病 原性真菌类一一炭疽病菌、尖孢镰刀菌进行处理的结果显示，形成IOmm以上的抑菌圈，确认 其抑制真菌类生长的抗菌活性非常强。
[0144] 因此，本发明新分离的芽孢杆菌CJBV及抗菌组合物抑制黄瓜、香瓜、西瓜等萌芦 科蔬菜作业的炭疽病及枯萎病等植物传染病，能够有效利用于植物病防治用微生物制剂以 及利用其的植物病原性真菌的防治方法。
[0145] 另外，如图3下部所示，利用本发明新分离的芽孢杆菌CJBV、所述菌株产生的芽孢 菌霉素D类似物或抗菌组合物，对病原性真菌类一一白色念珠菌、拜耳接合酵母进行处理的 结果，形成6_至IOmm的抑菌圈，确认其抑制真菌类生长的抗菌活性非常强。
[0146] 因此，本发明新分离的芽孢杆菌CJBV、所述菌株产生的芽孢菌霉素D类似物及抗 菌组合物对皮肤真菌病、念珠菌性阴道炎、口腔炎、肠炎等细菌感染疾病具有效果，能够有 效应用于预防、改善和治疗以上疾病的准药品、保健食品、饲料等。另外，可以作为引起食物 中毒危险低的食品有效使用。
[0147]另外，如图4所示，利用本发明新分离的芽孢杆菌CJBV或抗菌组合物，对引起食 物中毒的细菌和发酵酱类时使用的有益菌同时进行处理的结果，确认其对引起食物中毒的 细菌一一蜡样芽胞杆菌及单核细胞增多性李斯特氏菌具有很强的抗菌活性，但是不会抑制 酱类发酵细菌的生长。
[0148] 已有报告的以往根据微生物产生的细菌素，其不仅对引起食物中毒的细菌具有特 定的抗菌活性，还影响酱类发酵细菌的生长，存在难以直接使用于发酵食品的问题。
[0149] 与此相反，根据本发明新分离的芽孢杆菌CJBV、所述菌株产生的芽孢菌霉素D类 似物以及利用其的抗菌组合物对酱类发酵细菌不具有抗菌活性，只对引起食物中毒的细菌 等食品中主要有害细菌具有抑制作用和抗菌活性，能够直接用于食品。
[0150] 而且，已确认对各种食品污染源具有很强的抗菌活性，本发明新分离的芽孢杆菌 CJBV、所述菌株产生的芽孢菌霉素D类似物以及利用其的抗菌组合物对食物中毒、腹泻、呕 吐等在内的细菌感染疾病具有预防、改善和治疗效果，能够有效应用于预防、改善和治疗以 上疾病的准药品、保健食品、饲料等。
[0151] 如上所述，因为本发明新分离的芽孢杆菌CJBV及所述菌株产生的芽孢菌霉素D类 似物对1种以上不同种类的真菌类及细菌具有抗菌效果，能够作为植物及作物用抗菌剂、 具有抗菌活性的食品以及预防、改善和治疗细菌感染疾病的饲料、保健食品、准药品、医药 品使用。
[0152] 本发明所属技术领域的从业人员应当理解，根据如上说明，在不脱离本发明的技 术思想和必须特征的范围内，可以对本发明进行多种变更和修改。因此，应当理解，以上所 述实施例仅为本发明的说明内容而已，并非限定本发明。比起所述详细说明，对于本发明的 保护范围应当解释为：本发明的权利要求的意义及范围以及从其同等概念延伸的所有变更 或修改形态，均属于本发明的保护范围。
[0153]【保藏号】
[0154] 保藏机构名称：韩国微生物保藏中心（国外）
[0155] 保藏机构地址：YurinB/D
[0156] 45,Hongjenae_2ga-gil Seodaemun-gu 首尔 120-861 大韩民国 生物材料的分类命名：芽孢杆菌CJBV保藏号：KCCM11528P 保藏日：20140417。
【主权项】
1. 一种芽孢杆菌CJBV(Bacillus velezensis CJBV)菌株，其特征在于： 其对真菌类及引起食物中毒的细菌具有特定抗菌活性，保藏号为KCCM11528P。2. 根据权利要求1所述的芽孢杆菌CJBV菌株，其特征在于： 所述菌株对酱类发酵细菌一一枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)不具有抗菌活性。3. 根据权利要求1所述的芽孢杆菌CJBV菌株，其特征在于： 所述真菌类选自由炭疽病菌（Colletotrichumorbiculare)、尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum)、白色念珠菌（Candidaalbicans)及拜耳接合酵母（Zygosaccharomyces bailii)组成的组。4. 根据权利要求1所述的芽孢杆菌CJBV菌株，其特征在于： 所述引起食物中毒的细菌是蜡样芽胞杆菌（Bacilluscereus)或单核细胞增多性李斯 特氏菌（Listeriamonocytogenes) 〇5. -种抗菌组合物，其含有选自由权利要求1至4中任意一项所述的芽孢杆菌CJBV菌 株、所述菌株的孢子、所述菌株的培养物及其浓缩物、萃取物、干燥物组成的组中的一种以 上有效成分。6. -种含有权利要求5所述的抗菌组合物的食品组合物。7. -种含有权利要求5所述的抗菌组合物的饲料组合物。8. -种含有权利要求5所述的抗菌组合物的植物及作物用抗菌剂。9. 一种含有权利要求5所述的抗菌组合物的药物组合物，其预防和治疗细菌感染疾病 的。10. 根据权利要求9所述的药物组合物，其特征在于： 所述细菌是真菌类或引起食物中毒的细菌。11. 根据权利要求9所述的药物组合物，其特征在于： 所述细菌感染疾病选自由食物中毒、皮肤真菌病、念珠菌性阴道炎、腹泻、呕吐、肠炎、 胃肠炎、便秘、腹痛、腹胀、霍乱、李氏杆菌病、蜂窝组织炎、尿路感染、脑膜炎、腹膜炎、膀胱 炎、淋巴盐、指头脓炎、中耳炎、呼吸系统疾病、肺炎、化脓性炎症或败血症组成的组。12. -种含有权利要求5所述的抗菌组合物的保健食品，其预防和改善细菌感染疾病。13. -种含有权利要求5所述的抗菌组合物的准药品组合物。14. 一种由权利要求1所述的芽孢杆菌CJBV菌株产生，如式1所示的芽孢菌霉素D类 似物， [式1]其中，所述R为CH3、CH2-CH3、CH2-CH2-CH3。15. -种含有权利要求14所述的芽孢菌霉素D类似物的抗菌组合物。16. 根据权利要求15所述的抗菌组合物，其特征在于： 所述抗菌组合物抑制炭疽病菌（Colletotrichumorbiculare)、尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum)、白色念珠菌（Candidaalbicans)、拜耳接合酵母（Zygosaccharomyces bailii)、錯样芽胞杆菌（Bacilluscereus)及单核细胞增多性李斯特氏菌（Listeria monocytogenes)的生长。
【专利摘要】本发明涉及一种保藏号为KCCM11？528P的新分离的芽孢杆菌CJBV(Bacillus？velezensis？CJBV)菌株、从其分离的芽孢菌霉素D类似物以及利用其的抗菌组合物，新分离的芽孢杆菌CJBV及所述菌株产生的芽孢菌霉素D类似物对1种以上不同种类的真菌类及细菌具有抗菌效果，能够作为植物及作物用抗菌剂、具有抗菌活性的食品以及预防、改善和治疗细菌感染疾病的饲料、保健食品、准药品、医药品使用。KCCM11528P20140417
【IPC分类】A23K1/16, C12N1/20, A61P31/04, C07K11/02, C12R1/07, A23L3/3463, A61K35/742
【公开号】CN105087423
【申请号】CN201510249972
【发明人】柳炯硕, 全垠亭, 姜大翊
【申请人】Cj第一制糖株式会社
【公开日】2015年11月25日
【申请日】2015年5月15日