肤的碱性部位。然后，将基体从Novo-Heparin取出，将基体用20mL蒸 馈水洗涂后干燥。 阳122][实施例引
[0123]将实施例2中得到的、用粘接性肤处理过的组织修复用支架的基体变更为实施例3中得到的基体，除此W外，与实施例4同样地操作，用Novo-胎parin对组织修复用支架的 基体进行处理。 阳124][实施例6] 阳1巧]使用附属于Fiblast(注册商标）喷雾250(科研制药株式会社制）的、含有人重 组FGF冷冻干燥品作为细胞生长因子的玻璃瓶和溶解液调制细胞生长因子水溶液。具体而 言，在玻璃瓶中加入溶解液使人重组FGF冷冻干燥品溶解成溶解液，调制浓度100μg/mL的 细胞生长因子水溶液。将实施例4中得到的、经肝素和粘接性肤处理的组织修复用支架的 基体在0. 5mL所调制的细胞生长因子水溶液中浸溃，使细胞生长因子结合于在基体的表面 结合于粘接性肤的肝素。然后，将基体从细胞生长因子水溶液取出，将基体用20mL蒸馈水 洗涂后干燥。利用对使用细胞生长因子处理前的基体的表面和处理后的基体的表面进 行分析，结果确认到，通过使用细胞生长因子进行的处理，C2s的峰的强度显著增强。认为 运是因为，由于细胞生长因子结合于与基体表面的粘接性肤结合的肝素而基体表面的碳原 子数增加。 阳126][实施例7]
[0127] 将实施例4中得到的、经肝素和粘接性肤处理的组织修复用支架的基体变更为实 施例5中得到的基体，除此W外，与实施例6同样地操作，用细胞生长因子水溶液对组织修 复用支架的基体进行处理。利用对用细胞生长因子处理前的基体的表面和处理后的基 体的表面进行分析，结果确认到，通过使用细胞生长因子进行的处理，C2s的峰的强度显著 增强。
[0128][实施例8、实施例9和比较例1]
[0129] 将结合于基体表面的粘接性肤的肝素结合有细胞生长因子的组织修复用支架、或 未进行表面处理的组织修复用支架埋入6周龄的雄性ICR小鼠的皮下后，观察埋入后第7 天的支架周围的组织。实施例8中使用实施例6中得到的组织修复用支架。实施例9中使 用实施例7中得到的组织修复用支架。比较例1中使用未进行表面处理的组织修复用支架。 将实施例8、实施例9和比较例1的埋入支架后第7天的ICR小鼠的皮下组织的照片示为图 1 (实施例8)、图2 (实施例9)和图3 (比较例1)。 阳130] 根据图1和图2可知，当使用结合于基体表面的粘接性肤的肝素结合有细胞生长 因子的组织修复用支架时，ICR小鼠的皮下组织中的血管新生良好地进行。另一方面，根据 图3可知，当使用未进行表面处理的组织修复用支架时，血管新生的速度慢。
[0131][参考例1~4]
[0132] 使用基体表面结合有粘接性肤的组织修复用支架或基体表面的粘接性肤结合有 肝素的组织修复用支架，除此W外，与实施例8同样地操作，观察埋入支架后第7天的ICR 小鼠的皮下组织。参考例1中使用实施例2中得到的组织修复用支架。参考例2中使用实 施例3中得到的组织修复用支架。参考例3中使用实施例4中得到的组织修复用支架。参 考例4中使用实施例5中得到的组织修复用支架。将参考例1~4的埋入支架后第7天 的ICR小鼠的皮下组织的照片示为图4 (参考例1)、图5 (参考例2)、图6 (参考例3)和图 7 (参考例4)。
[0133] 根据图4和图5可知，当使用仅用粘接性肤进行表面处理的组织修复用支架时， ICR小鼠的皮下组织中血管新生的速度慢。根据图5和图6可知，当使用经粘接性肤和肝素 进行表面处理的组织修复用支架时，ICR小鼠的皮下组织中血管新生的速度也慢。 阳134][实施例10]
[0135] 继实施例8之后，对埋入实施例6中得到的支架后第28天的ICR小鼠的皮下组织 进行组织学评价。组织学评价通过肥染色和抗CD31抗体免疫染色进行。将肥染色和抗CD31抗体免疫染色后的皮下组织的截面的图像示于图8。在图8所示的图像中，确认到大量 浸润细胞和血管结构。目P，通过使用经粘接性肤、肝素W及细胞生长因子表面处理的支架， ICR小鼠的皮下组织的修复良好地进行。 阳136][实施例11和比较例2] 阳137](小鼠头盖骨的骨再生试验）
[0138]将α-TCP(a型憐酸Ξ巧）粉末用实施例1中得到的粘接性肤和肝素进行表面 处理。具体而言，在50°C、遮光下将28.7mg的α-TCP(α型憐酸立巧）粉末在0. 1血浓度 l.Omg/mL的实施例1中得到的粘接性肤水溶液中浸溃24小时后，在培养箱内风干一晚。常 溫下将得到的肤修饰α-TCP粉末在0.ImL的Novo-HeparinQ万单位/lOmL、持田制药株式 会社制）中浸溃8小时，经培养箱内的风干，得到经表面处理的a-TCP粉末。实施例11中 使用得到的经表面处理的α-TCP粉末作为支架。比较例2中使用未处理的α-TCP粉末作 为支架。 阳139] 使用环银棒灯re地inebar)在小鼠的头盖骨中形成直径4mm、深度0. 3mm的骨缺 损部。在形成的骨缺损部填充粉末状的支架。填充支架后，用ePTFE膜被覆骨缺损部位。填 充支架后第4周，利用X射线CT对骨缺损部进行拍照。将实施例11的X射线CT图像示于 图9,将比较例2的X射线CT图像示于图10。根据图9与图10的比较可知，图9中，在图 像上，骨缺损部内的白化进行得更多。目P，实施例11中，骨再生比比较例2进行得更多。认 为当使用经粘接性肤和肝素表面处理的支架时，存在于小鼠头部内的细胞生长因子被捕捉 在支架的表面，促进了骨再生。
【主权项】
1. 一种肽，其氨基酸序列中具有粘接性部位和碱性部位，所述粘接性部位包含具有 2, 3-二羟基苯基或3, 4-二羟基苯基的氨基酸残基，所述碱性部位中有3个以上的碱性氨基 酸残基相连。2. 根据权利要求1所述的肽，所述粘接性部位与所述碱性部位通过间隔区部位而结 合。3. 根据权利要求1或2所述的肽， N末端或C末端是在末端或其附近具有碱性部位的碱性末端， 在比该碱性部位更靠近碱性末端一侧不存在氨基酸残基，或者存在包含1个以上5个 以下的氨基酸残基且不含粘接性部位的部位。4. 根据权利要求3所述的肽， 除所述碱性末端以外的另一端是在末端或其附近具有粘接性部位的粘接性末端， 在从所述粘接性末端开始的5个氨基酸残基内，含有所述粘接性部位且不含所述碱性 部位。5. 根据权利要求4所述的肽，从C末端开始的9个残基的序列是序列号1所示的氨基 酸序列。6. -种复合物，其为权利要求1~5中任一项所述的肽与糖胺聚糖的复合物。7. -种复合物，其为权利要求1~5中任一项所述的肽、糖胺聚糖以及细胞生长因子的 复合物， 所述细胞生长因子与所述糖胺聚糖结合，且通过所述糖胺聚糖与所述肽的所述粘接性 部位结合。8. -种组织修复用支架，其表面通过所述粘接性部位结合有权利要求1~5中任一项 所述的肽。9. 一种组织修复用支架，其为表面具有糖胺聚糖的组织修复用支架， 权利要求1~5中任一项所述的肽通过所述粘接性部位与所述支架的表面结合， 所述糖胺聚糖与所述肽的所述碱性部位结合。10. -种组织修复用支架，其为表面具有细胞生长因子的组织修复用支架， 权利要求1~5中任一项所述的肽通过所述粘接性部位与所述支架的表面结合， 所述细胞生长因子与糖胺聚糖结合，且通过所述糖胺聚糖与所述肽的所述碱性部位结 合。11. 一种组织修复用支架的表面处理方法，其使权利要求1~5中任一项所述的肽与组 织修复用支架的表面接触。12. 根据权利要求11所述的组织修复用支架的表面处理方法，进一步使糖胺聚糖结合 于所述肽的所述碱性部位。13. 根据权利要求12所述的组织修复用支架的表面处理方法，进一步使细胞生长因子 结合于所述肽所结合的所述糖胺聚糖。14. 一种组织修复用支架的表面处理方法，其使权利要求6所述的复合物与组织修复 用支架的表面接触。15. 根据权利要求14所述的组织修复用支架的表面处理方法，进一步使细胞生长因子 结合于所述复合物中的所述糖胺聚糖。16. -种组织修复用支架的表面处理方法，其使权利要求7所述的复合物与组织修复 用支架的表面接触。17. -种组织修复用支架的表面处理用的处理液，其含有权利要求1~5中任一项所述 的肽。18. -种组织修复用支架的表面处理用的处理液组，其包括权利要求17所述的处理液 和含有糖胺聚糖的处理液。19. 根据权利要求18所述的组织修复用支架的表面处理用的处理液组，进一步包括含 有细胞生长因子的处理液。20. -种组织修复用支架的表面处理用的处理液，其含有权利要求6所述的复合物。21. -种组织修复用支架的表面处理用的处理液组，其包括权利要求20所述的处理液 和含有细胞生长因子的处理液。22. -种组织修复用支架的表面处理用的处理液，其含有权利要求7所述的复合物。
【专利摘要】提供一种肽、含有该肽的复合物、使用该肽或该复合物进行了表面处理的组织修复用支架、使用该肽或该复合物进行的组织修复用支架的表面处理方法、以及该表面处理方法中使用的处理液或处理液组，所述肽能够进行组织修复用支架的表面处理，所述表面处理能够不使用对活体组织的修复产生不良影响的材料地促进活体组织的修复。将含有粘接性部位和碱性部位的肽与糖胺聚糖组合而进行组织修复用支架的表面处理，所述粘接性部位和碱性部位分别包含规定的氨基酸残基。
【IPC分类】C07K5/10, C07K14/475, C07K19/00, C07K5/08, C07K5/06, C07K14/00, A61L27/00
【公开号】CN105263951
【申请号】CN201480023577
【发明人】山冈哲二, 柿木佐知朗, 马场俊辅, 桥本典也
【申请人】国立研究开发法人国立循环器病研究中心, 株式会社Jms
【公开日】2016年1月20日
【申请日】2014年4月25日
【公告号】EP2990412A1, US20160137694, WO2014175445A1