来设计用于 筛选的siRNA片断。最后，通过同源性比对(NCBI BLAST)来过滤siRNA序列，以提高siRNA片 断的特异性并减少RNAi干扰的脱靶效应。
[0026] 本发明的药物还可与其他治疗椎间盘退行性疾病的药物联用，多种药物联合使用 可以大大提高治疗的成功率。
[0027] 本发明的药物还包括药学上可接受的载体，这类载体包括(但并不限于）：稀释剂、 赋形剂如乳糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、淀粉、水等、填充剂如淀粉、蔗糖等;粘合剂如单糖浆、 葡萄糖溶液、淀粉溶液、纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮;湿润剂如甘油；崩 解剂如干淀粉、海藻酸钠、海带多糖粉末、琼脂粉末、碳酸钙和碳酸氢钠;吸收促进剂季铵化 合物、十二烷基硫酸钠等;表面活性剂如聚氧化乙烯山梨聚糖脂肪酸酯、十二烷基硫酸钠、 硬脂酸单甘油酯、十六烷醇等;致湿剂如甘油、淀粉等；吸附载体如淀粉、乳糖、斑脱土、硅 胶、高岭土和皂粘土等;润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙和镁、聚乙二醇、硼酸粉末等。
[0028] 本发明的药物可以使用不同的添加剂进行制备，例如稳定剂、杀菌剂、缓冲剂、等 渗剂、螯合剂、pH控制剂及表面活性剂。
[0029]稳定剂包括人类血清蛋白、L-氨基酸、糖及纤维素衍生物。L-氨基酸还可以包括甘 氨酸、半胱氨酸及谷氨酸中的任意一个。糖类包括单糖，例如葡萄糖、甘露糖、半乳糖、果糖 等;糖醇，例如甘露醇、纤维醇、木糖醇等;二糖，例如蔗糖、麦芽糖、乳糖等;多聚糖，例如葡 聚糖、羟丙基淀粉、硫化软骨素、透明质酸等及它们的衍生物。纤维素衍生物包括甲基纤维 素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙甲基纤维素及羟甲基纤维素钠。
[0030]表面活性剂包括离子或非离子表面活性剂，例如聚氧化乙烯烷基酯、山梨聚糖单 酰基酯、脂肪酸甘油酯。
[0031] 添加剂缓冲剂可以包括硼酸、磷酸、乙酸、柠檬酸、谷氨酸及相应的盐(它们的碱金 属或碱性稀土金属盐，例如钠盐、钾盐、钙盐及镁盐）。等渗剂包括氯化钾、氯化钠、糖及甘 油。螯合剂包括乙二胺四乙酸钠及柠檬酸。
[0032] 本发明的药物还可包括药学上可接受的涂层材料包括(但不限于），快速分解涂层 材料、染色剂、肠溶性聚合物、增塑剂、水溶性聚合物、水不溶性聚合物、染料、色素、其他崩 散剂。常见快速分解涂层材料包括0PADRY;肠溶性聚合物包括甲基内烯酸聚合物、磷羟丙甲 基纤维素苯二甲酸酯、羟丙甲基纤维素乙酸酯、羟丙甲基纤维素琥珀酸酯、羟甲乙基纤维 素、乙酰磷苯二甲酸纤维素;增塑剂包括聚乙二醇(PEG)、丙二醇等。
[0033]本发明药物的单位剂型可以使多种形式，代表性的剂型包括固体剂型如片剂、丸 剂、粉剂、干粉剂、颗粒、胶囊等;液态剂型如溶液、悬浮液、乳状液、糖浆、酏剂等。
[0034] 本发明所述药物可以通过任何途径给予受体，只要能达到目标组织，其可通过口 服或非口服的多种途径，如口服给药、鼻内给药、腹腔内给药、肌内给药、皮下给药、皮内给 药、肺内给药、直肠内给药、静脉内给药。
[0035] 在本发明的上下文中，"NDUFAB1基因"包括NDUFAB1基因以及NDUFAB1基因的任何 功能等同物的多核苷酸。NDUFAB1基因包括与目前国际公共核酸序列数据库GeneBank中 NDUFAB1基因（NC_000016.10)DNA序列具有70%以上同源性，且编码相同功能蛋白质的DNA 序列；
[0036] 优选地，NDUFAB1基因的编码序列包括以下任--种DNA分子：
[0037] (1)序列表中SEQ ID N0· 1所不的DNA序列；
[0038] (2)在严格条件下与（1)限定的DNA序列杂交且编码相同功能蛋白质的DNA序列；
[0039] (3)与（1)或(2)限定的DNA序列具有70%、优选地，90%以上同源性，且编码相同功 能蛋白质的DNA分子。
[0040]在本发明的具体实施方案中，所述NDUFAB1基因的编码序列是SEQ ID N0.1所示的 DNA序列。
[0041 ] 在本发明的上下文中，NDUFAB1基因表达产物包括NDUFAB1蛋白以及NDUFAB1蛋白 的部分肽。所述NDUFAB1蛋白的部分肽含有与椎间盘退行性疾病相关的功能域。
[0042] "NDUFAB 1蛋白"包括NDUFAB 1蛋白以及NDUFAB 1蛋白的任何功能等同物。所述功能 等同物包括NDUFAB1蛋白保守性变异蛋白质、或其活性片段，或其活性衍生物或其突变体。 突变体包括等位变异体、天然突变体、诱导突变体、其氨基酸序列通过缺失、替代、增加和/ 或插入发生变异的突变体、与修饰的氨基酸序列功能相同的突变体及在高或低的严格条件 下能与NDUFAB1的DNA杂交的DNA所编码的蛋白质。
[0043]优选地，NDUFAB1蛋白是具有下列氨基酸序列的蛋白质：
[0044] (1)由序列表中SEQ ID N0.2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
[0045] (2)将SEQ ID N0.2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺 失和/或添加且与SEQ ID N0.2所示的氨基酸序列具有相同功能的由SEQ ID N0.2所示的氨 基酸序列衍生的蛋白质。取代、缺失或者添加的氨基酸的个数通常为1-50个，较佳地1-30 个，更佳地1-20个，最佳地1-10个。
[0046] (3)与SEQ ID N0.2所示的氨基酸序列具有至少80%同源性(又称为序列同一性）， 更优选地，与SEQ ID NO. 2所示的氨基酸序列至少约90%至95%的同源性，常为96%、97%、 98 %、99 %同源性的氨基酸序列构成的多肽。
[0047]在本发明的具体实施方案中，所述NDUFAB1蛋白是具有SEQ ID N0.2所示的氨基酸 序列的蛋白质。
[0048]通常，已知的是，一个蛋白质中一个或多个氨基酸的修饰不会影响蛋白质的功能。 本领域技术人员会认可改变单个氨基酸或小百分比的氨基酸或对氨基酸序列的个别添加、 缺失、插入、替换是保守修饰，其中蛋白质的改变产生具有相似功能的蛋白质，提供功能相 似的氨基酸的保守替换表是本领域公知的。
[0049] 氨基酸序列的修饰可以源自自发突变或遗传后修饰，也可以人工诱导天然基因产 生。
[0050] 通过添加一个氨基酸或多个氨基酸残基修饰的蛋白质的例子是NDUFAB1蛋白的融 合蛋白。对于与M3UFAB1蛋白融合的肽或者蛋白质没有限制，只要所得的融合蛋白保留 NDUFAB1蛋白的生物学活性即可。
[0051 ]本发明的NDUFAB1蛋白也包括对SEQ ID N0.2所示的氨基酸序列的非保守修饰，只 要经过修饰的蛋白质仍然能够保留NDUFAB1蛋白的生物学活性即可。在此类修饰蛋白质中 突变的氨基酸数目通常是10个或者更少，例如6个或者更少，例如3个或者更少。
[0052] 在本发明的上下文中，"诊断椎间盘退行性疾病"既包括判断受试者是否已经患有 椎间盘退行性疾病、也包括判断受试者是否存在患有椎间盘退行性疾病的风险。
[0053] 在本发明的上下文中，"治疗椎间盘退行性疾病"从疾病的状态变化来分，可以包 括疾病的缓解、疾病的完全治愈;从药物发挥的作用不同，可以包括促进细胞生长、抑制细 胞凋亡。
[0054] 本发明的优点和有益效果：
[0055] 本发明首次发现了NDUFAB1基因表达水平与椎间盘退行性疾病的发生发展相关， 通过检测受试者椎间盘组织中NDUFAB1的表达水平，可以判断受试者是否患有椎间盘退行 性疾病、或者判断受试者是否存在患有椎间盘退行性疾病的风险，从而指导临床医师给受 试者提供预防方案或者治疗方案。
[0056]本发明发现了一种与椎间盘退行性疾病相关的新的分子标记物-NDUFAB1基因，同 传统的检测手段相比，基因诊断更及时、更特异、更灵敏。
【附图说明】
[0057]图1显示利用QPCR检测NDUFAB1基因在椎间盘退行性疾病髓核组织中的表达情况；
[0058] 图2显示利用QPCR检测siRNA对NDUFAB1基因表达的影响；
[0059] 图3显示利用MTT检测NDUFAB1基因表达对椎间盘退行性疾病髓核细胞生长的影 响。
[0060] 具体的实施方式
[0061] 下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细的说明。以下实施例仅用于说明本 发明而不用于限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条 件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring HarborLaboratory Press，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
[0062]实施例1筛选与椎间盘退行性疾病相关的基因标志物 [0063] 1、样品的收集
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