_90°C)、 乙酸乙酯萃取除杂，取萃取后的水相溶液，用正丁醇萃取，收集正丁醇相溶液。
[0023] 上述技术方案中，优选步骤C中乙醇-水溶液体积配比为11:9、2:8、3:7、4:6、5:5或 6:4中的至少一种。
[0024]上述技术方案中，优选步骤D中高效液相色谱分离纯化是采用20mm X 250mm，5μηι的 C18色谱柱，流速为5~20ml/min，流动相为30~45 %的甲醇，紫外检测器检测波长为254nm， 每次进样190~210μ1，收集10.2~15.2min的色谱峰，多次累加后干燥。
[0025]本发明所解决的第三个技术问题是提供该黄酮类化合物(6,8,4^三羟基黄酮ΙΟ 吡喃葡萄糖基 Κ-Η"'-吡喃葡萄糖基) 啦喃葡萄糖苷) 在制备具有抗氧化活性的药物 或保健食品中的应用。
[0026] 具体的，体现本发明黄酮类化合物具有抗氧化活性是通过该黄酮类化合物具有清 除DPPH自由基的能力、清除羟自由基的能力、具有清除ABTS自由基的能力、具有还原能力体 现。
[0027] 本发明所解决的第四个技术问题是提供该黄酮类化合物(6,8,4^三羟基黄酮-7-c-吡喃葡萄糖基-f-o-H"'-吡喃葡萄糖基)吡喃葡萄糖苷)在制备抗肿瘤活性的药物或保 健食品中的应用。
[0028] 具体的，体现本发明黄酮类化合物具有抗肿瘤活性是通过该黄酮类化合物对于 HGC-27肿瘤细胞增殖的抑制作用较强和抑制KM小鼠体内S180肿瘤细胞生长体现，
[0029] 本发明所解决的第五个技术问题是提供该黄酮类化合物(6,8,4^三羟基黄酮ΙΟ 吡喃葡萄糖基-f-O-H"'-吡喃葡萄糖基) 吡喃葡萄糖苷) 在制备具有免疫增强活性的药 物或保健食品中的应用。
[0030] 具体的，体现本发明黄酮类化合物具有免疫增强活性是通过该黄酮类化合物能够 促进巨噬细胞产生N0,能促进巨噬细胞的吞噬功能，对巨噬细胞的增殖有显著影响体现。
[0031] 本发明所解决的第六个技术问题是提供该黄酮类化合物(6,8,4^三羟基黄酮-7-C-吡喃葡萄糖基-f-O-d"-啦喃葡萄糖基)啦喃葡萄糖苷)在制备具有PC12细胞保护作用 的药物或保健食品中的应用。
[0032] 具体的，体现本发明黄酮类化合物具有PC12细胞保护作用是通过该黄酮类化合物 能减轻H2〇2对PC12细胞的损伤，能够降低PC12细胞中由出0 2损伤引起的MDA含量升高，减少 PC12细胞的LDH释放量，能提高PC12细胞内S0D的活力，能提高PC12细胞内CAI1酶的活力，能 提高PC12细胞内GSH-Px的活力，能抑制由出0 2损伤引起的细胞内R0S含量升高，能够稳定线 粒体膜电位体现，
[0033]综上，本发明黄酮类化合物(6，8，4'-三羟基黄酮-7-C-吡喃葡萄糖基-4'-0-(4〃 '-吡喃葡萄糖基)吡喃葡萄糖苷)具有明确的抗氧化活性、抗肿瘤活性、具有免疫增强活性以 及PC12细胞保护作用，为临床应用提供了一种新的选择。
【附图说明】
[0034]图1黄酮类化合物红外图。
[0035]图2黄酮类化合物氢谱图。
[0036] 图3黄酮类化合物碳谱图。
[0037] 图4黄酮类化合物高分辨质谱图。
[0038]图5黄酮类化合物HSQC。
[0039] 图6黄酮类化合物HMBC。
[0040] 图7黄酮类化合物HMBC相关图。
[00411图8黄酮类化合物的DPPH自由基清除能力。
[0042]图9黄酮类化合物的羟自由基清除能力。
[0043]图10黄酮类化合物的ABTS自由基清除能力。
[0044]图11黄酮类化合物的还原能力。
[0045] 图12 N0标准曲线。
[0046] 图13黄酮类化合物对RAW264.7巨噬细胞生成N0的影响。
[0047] 其中：'表示与空白组对比P〈0.05广'表示与空白组对比P〈0.01。
[0048]图14黄酮类化合物对RAW264.7巨噬细胞生成吞噬功能的影响。
[0049] 其中：'表示与空白组对比？〈0.05广'表示与空白组对比？〈0.01。
[0050]图15黄酮类化合物对RAW264.7巨噬细胞生成增殖的影响。
[0051 ] 其中：'表示与空白组对比P〈0.05广'表示与空白组对比P〈0.01。
[0052]图16黄酮类化合物HGC-27肿瘤细胞抑制率。
[0053] 图17黄酮类化合物对PC12细胞存活率的影响。
[0054] 其中：'表示与模型组对比P〈0.05;#，表示与对照组对比P〈0.05。
[0055] 图18黄酮类化合物对细胞内MDA的影响。
[0056] 其中：'表示与模型组对比P〈0.05;#，表示与空白组对比P〈0.05。
[0057]图19黄酮类化合物对LDH含量的影响。
[0058] 其中：*，表示与模型组对比P〈0.05;，表示与空白组对比P〈0.01。
[0059]图20黄酮类化合物对S0D酶活力的影响。
[0060] 其中：'表示与模型组对比P〈0.05;#，表示与空白组对比P〈0.05。
[0061] 图21黄酮类化合物对CAI1酶活力的影响。
[0062] 其中：**，表示与模型组对比P〈0.01;，表示与空白组对比P〈0.01。
[0063]图22黄酮类化合物对GSH-Px酶活力的影响。
[0064] 其中：'表示与模型组对比P〈0.05;，表示与空白组对比P〈0.01。
[0065]图23黄酮类化合物对细胞内R0S含量影响。
[0066] 其中：'表示与模型组对比P〈0.05;，表示与空白组对比P〈0.01。
[0067]图24黄酮类化合物对线粒体膜电位的影响。
[0068] 其中：A表示正常组;B表示H2〇2模型组;C表示TA3 la实验组。
【具体实施方式】
[0069] 本发明一种黄酮类化合物是采用如下方法从菥蓂子中提取分离纯化而得：
[0070] 取菥蓂子10kg，粉碎至20~40目，加入10倍体积95%乙醇回流提取3次，每次 60min，合并提取液、过滤，减压浓缩，得浸膏1.57kg，浸膏用蒸馏水混悬，在分液漏斗中加入 等体积石油醚(60°C_90°C)萃取，充分振荡后，待混合液分层后，收集水相溶液，反复操作5 次后，水相溶液加入等体积乙酸乙酯萃取，充分振荡混匀后，待混合液澄清分层后，收集水 相溶液，反复操作5次后，水相溶液加入等体积正丁醇萃取，充分振荡混匀后，待澄清分层 后，收集正丁醇相溶液，减压浓缩，得浸膏182g。浸膏用重量比3倍的20%乙醇溶解后，进行 反相硅胶柱(5cm X 25cm)层析，多次上样洗脱，每次上样20ml，用体积配比为1:9、2:8、3:7、 4:6、5:5、6:4的乙醇-水溶液梯度洗脱，TLC监测合并相同的部分，得到6个部分;洗脱液的1: 9部分进一步用半制备高效液相色谱分离纯化，以40%甲醇为流动相，采用20mmX250mm，5y m的Cis制备柱为固定相，流速10ml/min，紫外检测器检测波长为254nm，每次进样200μ1，收集 13. lmin的色谱峰，多次累加后干燥，即可得该黄酮类化合物。
[0071] 对该黄酮类化合物进行红外光谱分析、ESI-MS质谱分析、高分辨率质谱分析和1D、 2D核磁共振分析(13C Μ?、1!! NMR、DEPT135、HMBC和HSQC)。
[0072] 本发明一种黄酮类化合物经过ESI-MS m/z显示其分子量756,综合1H-NMR和13C-NMR数据，其化学式为C33H4〇〇2()。h-NMR和 13C-NMR数据见表1。
[0073] 表1黄酮类化合物的碳氢归属
[0075]结合IR、一维核磁数据，二维核磁数据以及高分辨数据分析(见附图1~附图6)，可 确定黄酮类化合物的结构为式1所示。附图7为该黄酮类化合物的HMBC相关图。该黄酮类化 合物鉴定为6,8,4/-三羟基黄酮-7-(：-吡喃葡萄糖基-4 /-0-(4〃/-吡喃葡萄糖基)吡喃葡萄 糖苷。
[0076]以下为本发明黄酮类化合物（以下简称TA31a)的化学活性研究实验。
[0077] 1、抗氧化活性
[0078]以清除DPPH、ABTS、羟自由基及还原能力为评价指标，对本发明黄酮类化合物进行 抗氧化能力测定。
[0079] 1)DPPH自由基清除能力测定：100yL O.lmM的DPPH加入lOOyL的样品，室温反应 30min，517nm测定吸光度值。同时做不加样品的空白对照，以及只含样品的样品本底对照。 [0080] DPPH 清除率 ％ = 1-(A1_A2)/A0
[0081 ] A1:样品+DPPH的吸光度值;A2:样品+溶剂的吸光度值;A0:DPPH的吸光度值
[0082]结果如图8显示，本发明黄酮类化合物具有清除DPPH自由基的能力，且具有剂量依 赖关系，但整体的清除能力较阳性对照组Vc要弱。通过计算得知，本发明黄酮类化合物清除 DPPH 的 IC5Q 值为 132 · 95yg/mL。
[0083] 2)羟自由基清除能力测定：150yL不同浓度的样品中加入25yL 1.5mM FeS〇4和10μ L20mM水杨酸，再加入15yL 6mM H2〇2(337°C反应lh，520nm处测定吸光度值。
[0084] 清除率 ％ = 1-(A1_A2)/A0
[0085] 其中:A1:样品吸光度值;A2:样品本底对照的吸光度值;A0:不加样品和H20 2吸光度 值
[0086] 结果如图9显示，本发明黄酮类化合物具有一定的清除羟自由基的能力，且具有剂 量依赖关系，在浓度<125yg/mL条件下，对羟自由基的清除能力强于相同剂量的Vc，在浓度〉 125yg/mL后，清除能力低于Vc。通过计算可知，本发明黄酮类化合物清除羟自由基的1(： 50值 分别为111.18yg/mL。
[0087] 3 )ABTS自由基清除能力测定：7mM的ABTS