癌、骨癌、食道癌、黑色素瘤、肾癌和口腔癌。
[0074] 其中，制备得到的抗肿瘤药物为固态、半固态、液态或气态，包括但不限于片剂、胶 囊、粉剂、颗粒剂、膏剂、溶液剂、栓剂、注射剂、吸人剂、疑胶剂、微球和气溶胶。
[0075] 其中，所述的抗肿瘤药物的制备方法为本领域公知的制备方法。例如，旨在注射给 药的药物组合物可以通过将本发明的化合物或其药学上可接受的盐或前药与灭菌的蒸馆 水组合来制备，从而形成溶液剂。可添加表面活性剂以促进形成均匀溶液或混悬液。制备药 物组合物的实际方法为本领域技术人员所己知，例如可参见The Science and Practice of Pharmacy(制药科学与实践），20th Edition(Philadelphia College of Pharmacy and Science,2000)〇
[0076] 其中，所述的抗肿瘤药物的给药途径包括但不限于口服、局部、经皮、肌肉、静脉、 吸入、肠胃外、舌下、直肠、阴道及鼻内。例如，适合口服给药的剂型包括胶囊、片剂、颗粒剂 以及糖浆等。这些制剂中包含的本发明的化合物可以是固体粉末或颗粒;水性或非水性液 体中的溶液或是混悬液；油包水或水包油的乳剂等。上述剂型可由活性化合物与一种或多 种载体或辅料经由通用的药剂学方法制成。上述的载体需要与活性化合物或其他辅料兼 容。对于固体制剂，常用的无毒载体包括但不限于甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、纤维素、葡 萄糖、庶糖等。用于液体制剂的载体包括但不限于水、生理盐水、葡萄糖水溶液、乙二醇和聚 乙二醇等。活性化合物可与上述载体形成溶液或是混悬液。具体的给药方式和剂型取决于 化合物本身的理化性质以及所应用疾病的严重程度等。本领域技术人员能够根据上述因素 并结合其自身具有的知识来确定具体的给药途径。例如可参见:李俊，《临床药理学》，人 民卫生出版社，2008.06; 丁玉峰，论临床剂型因素与合理用药，医药导报，26(5)，2007; Howard C.Ansel,Loyd V Allen，Jr. ,Nicholas G.Popovich著，张志强主译，〈〈药物剂型与 给药体系》，中国医药科技出版社，2003.05。
[0077]同时，本发明中香豆素类NEDD8激活酶抑制剂可以与一种或多种其它的本发明化 合物或者一种或多种其它抗癌药物联合或组合使用，以治疗和/或预防肿瘤。可以与本发明 化合物联用的药物包括但不限于万珂、多西他赛、吉西他滨、顺铂、卡铂、格列卫、替莫唑胺、 阿霉素、达卡巴嗪、特罗凯、依托泊糖苷、柔红霉素以及阿糖胞昔等。
[0078] 上述香豆素类NEDD8激活酶抑制剂的制备方法，它包括如下步骤：
[0079] (I )NaH溶于甲苯后在氮气保护下冰浴搅拌4~6min，并在冰浴条件下向其中滴加 4_溴-2-羟基苯乙酮的甲苯溶液，滴加完毕后继续冰浴搅拌15~25min;冰浴搅拌完成后，向 其中加入碳酸二乙酯并在110~125°C下加热回流搅拌8~16h;加热回流搅拌完成后，用盐 酸水溶液调节混合体系PH至4~6后，过滤，滤液经柱层析(PE:EA = 20:1)纯化后得到1-(4_ 溴-2-羟基-苯)丙酮酸乙酯；
[0080] (2)将步骤（1)中制备得到的1-(4_溴-2-羟基-苯)丙酮酸乙酯溶于甲苯后在110~ 125°C下加热回流搅拌18~30h后，过滤，滤液经甲苯洗涤并浓缩得黄色油状物后，与甲苯混 合后继续在110~125°C下加热回流搅拌18~30h;加热回流搅拌完成后过滤，取固体部分用 甲苯洗涤，干燥后，得到4-羟基-7-溴香豆素；
[0081] (3)将碳酸钾、溴化苄和步骤(2)中制备得到的4-羟基-7-溴香豆素溶于乙腈后在 氮气保护下75~81°C加热回流搅拌4~8h，过滤，滤液降至室温后静置0.5~1.5h后有白色 絮状固体生成，过滤，取固体部分用4°C的乙腈洗涤，干燥后，得到4-苄氧基-7-溴香豆素； [0082] (4)将氯化钯、联萘二苯磷、碳酸铯和4-(N_苯乙基-N-叔丁氧羰基胺)哌啶和步骤 (3)中制备得到的4-苄氧基-7-溴香豆素溶于1，4_二氧六环后，在氮气保护下，80~100°C下 加热搅拌8~16h后，过滤，取滤液经柱层析(PE: EA = 5:1)纯化后得到7- (4- (N-苯乙基-N-叔 丁氧羰基胺基)哌啶)-4-苄氧基香豆素；
[0083] (5)将步骤(4)中制备得到的7-(4_(N-苯乙基-N-叔丁氧羰基胺基)哌啶)_4_苄氧 基香豆素和10%钯碳溶于四氢呋喃后在室温下搅拌6~12h后，加入氨气饱和的甲醇溶液，， 搅拌4~6min后，过滤，滤液经氨气饱和的甲醇溶液洗涤并浓缩后得到黄色油状粗品；将黄 色油状粗品溶于混合溶液中，搅拌0.5~1.5h后，过滤，取固体部分用混合溶液洗涤后，干 燥，得到7-(4-(N-苯乙基-N-叔丁氧羰基胺)哌啶)-4_羟基香豆素；
[0084] (6)将步骤(5)中制备得到的7-(4_(N-苯乙基-N-叔丁氧羰基胺)哌啶)_4_羟基香 豆素和三乙胺溶于二氯甲烷后冰浴搅拌5~15min，滴加三氟甲磺酸酐，滴加完成后在室温 下搅拌1~3h后，经100~200目硅胶制砂柱层析纯化，得到三氟甲磺酸7-(4-(N-苯乙基-N-叔丁氧羰基胺)哌啶)基香豆素-4-酯；
[0085] (7)步骤(6)中制备得到的三氟甲磺酸7- (4- (N-苯乙基-N-叔丁氧羰基胺)哌啶)基 香豆素-4-酯溶于1，4_二氧六环后，加入三乙胺和出^^心，在氮气保护下回流搅拌6~ 18h;回流搅拌完成后，将所得的混合体系（用旋转蒸发仪)浓缩后，溶于乙酸乙酯并用水洗2 ~3次后，取有机相经柱层析纯化后，得到中间体;将中间体溶于混合溶液中，室温下搅拌5 ~7h后，加入甲苯，旋干后，再次溶于甲苯，并将混合体系浓缩以去除甲苯；向去除甲苯后的 混合体系中加入乙醚，超声3~lOmin，过滤，取固体部分用乙醚洗涤，干燥后，即得。
[0086] 步骤（1)中，4-溴-2-羟基苯乙酮、NaH和碳酸二乙酯的摩尔比为1:2.1~2.4:1.1~ 1.4;4-溴-2-羟基苯乙酮的甲苯溶液中，溶质4-溴-2-羟基苯乙酮的浓度为100~300g/L;盐 酸水溶液中，溶质HCl的质量百分比为37~40%。
[0087]步骤(2)中，1-(4_溴-2-羟基-苯)丙酮酸乙酯和溶解其所用甲苯的固液比为lg:5 ~IOmL0
[0088]步骤(3)中，碳酸钾、溴化苄和步骤(2)中制备得到的4-羟基-7-溴香豆素的摩尔比 为0.5~1:1.8~2.2:1〇
[0089]步骤(4)中，氯化钯、联萘二苯磷、碳酸铯、4-(N_苯乙基-N-叔丁氧羰基胺)哌啶和 步骤(3)中制备得到的4-苄氧基-7-溴香豆素的摩尔比0.005~O. Ol:0.08~0.1:1~1.1:1 ~1.2:1〇
[0090] 步骤(5)中，步骤(4)中制备得到的7_(4_(N-苯乙基-N-叔丁氧幾基胺基)哌啶)_4_ 苄氧基香豆素和1 〇 %钯碳的质量比为1: 〇 . 〇 1~〇 . 1;所述的混合溶液由石油醚和乙酸乙酯 以3:1的体积比混合而成;氨气饱和的甲醇溶液与四氢呋喃的体积比为1:3~5;黄色油状粗 品和溶解其所用混合溶液的固液比为Ig: 3~5mL。
[0091 ] 步骤(6)中，步骤(5)中制备得到的7-(4_(N_苯乙基-N-叔丁氧幾基胺)哌啶)_4_轻 基香豆素、三乙胺和三氟甲磺酸酐的摩尔比为1:1.1~1.5:1.1~1.3。
[0092]步骤(7)中，步骤(6)中制备得到的三氟甲磺酸7-(4-(N-苯乙基-N-叔丁氧羰基胺） 哌啶)基香豆素-4-酯、三乙胺和H2N-(Rt)q的摩尔比为1:1~1.2:1~1.2;所述的混合溶液由 三氟乙酸和二氯甲烷以1:5的体积比混合而成;旋干前加入的甲苯与混合溶液的体积比为 0.5~1:1;乙醚与旋干前加入的甲苯的体积比为0.5~1:1。
[0093]其中，步骤(7)可由如下步骤代替：
[0094]步骤(6)中制备得到的三氟甲磺酸7-(4-(N-苯乙基-N-叔丁氧羰基胺)哌啶)基香 豆素-4-酯溶于1，4_二氧六环后，加入四（三苯基膦)钯、碳酸铯和H2N-(Rt)q,在氮气保护下 回流搅拌6~12h;回流搅拌完成后在室温下过滤，滤液浓缩并经柱层析纯化后，得到中间 体;将中间体溶于混合溶液中，室温下搅拌5~7h后，加入甲苯，旋干后，再次溶于甲苯并将 混合体系浓缩以去除甲苯；向去除甲苯后的混合体系中加入乙醚，超声3~lOmin，过滤，取 固体部分用乙醚洗涤，干燥后，即得。
[0095]其中，三氟甲磺酸7-(4_(N-苯乙基-N-叔丁氧羰基胺)哌啶)基香豆素-4-酯、四（三 苯基膦)钯、碳酸铯和H2N- (Rt)q的摩尔比为1:0.005~0.01:1~1.2:1~1.3;所述的混合溶 液由三氟乙酸和二氯甲烷以1:5的体积比混合而成；旋干前加入的甲苯与混合溶液的体积 比为0.5~1:1;乙醚与旋干前加入的甲苯的体积比为0.5~1:1。
[0096]上述制备方法中，没有特别说明的的柱层析，都是使用PE:EA = 20:1的层析柱。 [0097] 其中，上述制备方法可制备得到I-I~1-18; 1_19由步骤(5)中制备得到的7_(4_ (N-苯乙基-N-叔丁氧幾基胺)哌啶)_4_羟基香?素脱Boc后制得；1_20由步骤(4)中制备得 到的7_(4_( N-苯乙基-N-叔丁氧幾基胺基)哌啶)_4_节氧基香?素脱Boc后制得。
[0098] 有益效果：
[0099]与现有技术相比，本发明能够有效抑制肿瘤细胞增值，对NEDD8激活酶高表达细胞 增值抑制效果明显。本发明可用于制备抗肿瘤药物，且与硼替佐米等药物联合用药具有协 同作用，增加药效。
【附图说明】
[0100]图1为本发明香豆素类NEDD8激活酶抑制剂的结构通式。
【具体实施方式】
[0101] 下述实施例中，I-I~1-20的制备总反应式如下所示
[0102]
[0103] 其中，如由间溴苯酚和苯乙胺为起始原料合成关键中间体7。关键中间体经胺化后 脱Bo c制得I -1~I -18，关键中间体6依次经脱Bo c后制得I -19。关键中间体5依次经脱Bo c后 制得1_20。
[0104] 实施例1 7-(4_(苯乙胺基)哌啶-1-取代)_4_苄氨基-香豆素（I-I)的制备
[0105] 操作步骤：
[0106] (1)1-(4-溴-2-羟基-苯)丙酮酸乙酯（1)的合成
[0107] 2L四颈圆底烧瓶中加入1000 mL无水甲苯及31g NaH，氮气保护下，冰浴搅拌5min。 冰浴条件下滴加溶有60g 4-溴-2-羟基苯乙酮的甲苯溶液400mL。滴加完毕后继续冰浴搅拌 20min。然后滴加67g碳酸二乙酯。滴加完毕后加热回流搅拌过夜。TLC检测反应完毕后，冰浴 降温，用浓盐酸调pH至酸性。过滤，滤饼用乙酸乙酯洗涤，滤液浓缩的粗品。用柱层析纯化 (PE :EA = 20:l)得产品60·41g。HNMR(300MHz，CDCl3)δ:7·53(d，J = 8·4Hz，lH)，7·22(s，lH)， 7.08(d,J=5.7Hz,lH),3.98(s,2H),3.77(s,3H).MS(ESI)(m/z):295.0[M+23] +.
[0108] (2)4-羟基-7-溴香豆素(2)的合成
[0109] 500mL圆底烧瓶中加入300mL甲苯。及60.41 g化合物1，加热回流搅拌24h。有大量白 色固体生成，过滤，滤液用甲苯洗涤。收集滤饼并干燥，滤液浓缩得黄色油状物，加入200mL 甲苯，继续加热回流搅拌24h。过滤，滤饼用甲苯洗涤，收集滤饼并干燥。得白色固体产品 37.23g〇HNMR(300MHz,DMS0-d6)5：7.76(d ,J = 8.4Hz,lH),7.22(d ,J=1.8Hz,lH),7.08(dd, J = 8.4,1.8Hz,lH),5.61(s,lH).MS(ESI)(m/z):239.0[M-l] + .
[0110] (3) 4-苄氧基-7-溴香豆素(3)的合成
[0111] 500mL圆底烧瓶中加入300mL无水乙腈，37.23g中间体2，42.69g碳酸钾及52.6g溴 化苄，氮气保护条件下加热回流搅拌6h。趁热过滤，滤液静置自然降温至室温后继续静置 Ih。有白色絮状固体生成。过滤，滤饼用4°C的乙腈洗涤。收集滤饼干燥。的17.27g产品。HNMR (300MHz,DMS0-d6)5：7.75-7.72(m,2H),7.56-7.52(m,3H),7.47-7.40(m,3H),6.09(s,lH), 5.35(s,2H).