:l(L/mol)，再加入X(CH2)n Y 16摩尔份，85°C反 应5h得黄芩素衍生物。其中，所述X(CH2)n Y中，X、Y均为I，n=10。
[0098] (2b)取步骤(1 b)得到的黄芩素衍生物1重量份、无水碳酸钠2重量份、小檗红碱1重 量份加入反应器中，加入乙腈150重量份，搅拌，加热至85°C，回流8h，将反应液趁热过滤，滤 液回收溶剂，用5重量份的DMS0溶解，柱分离，依次用质量百分浓度为30 %、40 %、50 %、60 % 的甲醇溶液洗脱，HPLC检测，收集质量百分浓度为60%甲醇洗脱部分，浓缩，浓缩液再用3重 量份的硅胶(400~500目）拌样，硅胶柱分离，用20倍柱体积的石油醚和乙酸乙酯混合液(石 油醚和乙酸乙酯的体积比为1:1)洗脱，再用甲醇洗脱，回收甲醇，即得双黄素。
[0099] 实施例6
[0100] 本实施中的双黄素的制备方法与实施例5基本相同，其中，本实施例的X(CH2)n Y， X、Y均为F，n = 7。
[0101] 实施例7
[0102] 本实施中的双黄素的制备方法与实施例5基本相同，其中，本实施例的X(CH2)n Y， X、Y均为Br，n = 3。
[0103] 为了验证本发明中双黄素的医药活性，特进行以下实验。
[0104] -、抗菌活性研究
[0105] 1.1实验材料
[0106] 1.1.1实验仪器
[0107]电热恒温培养箱、电子天平(上海恒平）、玻璃培养皿、0.25nm除菌滤膜(MP公司）、 超净工作台、高压灭菌箱，试管、镊子等工具，用前均需高温灭菌。
[0108] 1.1.2培养基
[0109] Mueller-Hinton营养琼脂培养基、Mueller-Hinton营养肉汤培养基（青岛高科园 海博生物技术有限公司）
[0110] 1.1.3菌种
[0111] 8种细菌，菌种均来自北京卫生部生物制品研究所。分别是金黄色葡萄球菌 (261112-5)、乙型溶血性链球菌(32210)、肺炎链球菌(32215)、绿脓杆菌（10211)、大肠杆菌 (44113-5)、伤寒杆菌(50071-16)、白色念珠菌(98001 )、乙型副伤寒杆菌。
[0112] 1.1.4 药物
[0113] 5种药物，小檗碱(BBR，纯度96 % );黄芩苷（g，纯度96 % );黄芩素（s，96 % ); X4-s (实施例1中制得的双黄素，纯度95% ) ;X4-g(自制，小檗红碱9位与黄芩苷在葡萄糖醛酸羧 基上的结合物，纯度95%)。
[0114] 1.2实验方法
[0115] 1.2.1培养基的配制
[0116]营养琼脂培养基、营养肉汤培养基均按照试剂说明进行，配制1000mL，三角瓶分 装，包扎后120 C/30min灭囷，备用。
[0117] 1.2.2药液配制
[0118] 1.2.2.1小檗碱样品液的配制
[0119] 精确称取小檗碱试样lOOO.OOmg，溶于50mL含2.5%吐温及10%01^0的水溶液中， 浓度为2.0mg/mL，微孔滤膜过滤除菌，备用。
[0120] 1.2.2.2黄芩苷样品液的配制
[0121] 精确称取黄芩素试样lOOO.OOmg，加入适量5%Na2C03及蒸馏水定容至10mL，调pH =7.2，浓度为100.0mg/mL，微孔滤膜过滤除菌，备用。
[0122] 1.2.2.3黄芩素样品液的配制
[0123] 精确称取黄芩素试样100.00mg，溶于50mL含5 %吐温及10 %DMS0的水溶液中，浓度 为2.0mg/mL，微孔滤膜过滤除菌，备用。
[0124] 1 · 2 · 2 · 4 X4_g样品液的配制：
[0125] 精确称取X4-g试样80.00mg，溶于50mL含10 % DMS0的水溶液中，浓度为1.6mg/mL， 微孔滤膜过滤除菌，备用。
[0126] 1.2.2.5 X4-s样品液的配制：
[0127] 精确称取X4-s试样100.00mg，溶于50mL含10 %DMS0的水溶液中，浓度为2.0mg/mL， 微孔滤膜过滤除菌，备用。
[0128] 注:经对照试验，4 %DMS0对除乙型链球菌外均没抑制作用；2.5 %DMS0对乙型链球 菌无抑制作用。
[0129] 1.2.3抗菌试验
[0130] 空白对照为不含药物的培养基。配制好的五种药物样品液，加入培养液按倍半稀 释方法，从1:2.5、1:5、1:10、1:20、1:40、1:80、1:160、1:320、1:640依次稀释〇41从1:5开 始稀释），共9个浓度，每管总量lml，流通蒸气灭菌。对于特殊菌种，需另外处理：（1)乙型溶 血性链球菌还需另外加入1 %葡萄糖。（2)肺炎链球菌还需另外加入10%兔血清。（3)白色念 珠菌的试验应用沙氏培养液稀释药液。各种菌种在37 °C培养培养8小时后，取0. lml，分别加 入空白对照管及各浓度药液管中，继续3 7 °C培养2 4小时，观察结果，判定最小抑菌浓度 (MIC)，并将结果记入表5中。
[0131] 1.3实验结果
[0132]
[0133] 表5
[0134] 由表5可见，五种药物均对金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌（除黄芩苷外，MIC 均<100ug/ml)、肺炎双球菌具有一定的抑制作用。其中，黄芩素对各种菌种都有较强的抑 制作用，抗菌活性最强；其次是小檗碱，再次是X4-s、X4-g，且X4-g比黄芩苷的抗菌活性强。 具体每个菌种活性结果:抗金色葡萄球菌活性明显的依次有黄芩素〉小檗碱>X4-s>X4-g? 黄芩苷;抗大肠杆菌的活性以黄芩素最强;抗乙型链球菌活性明显的依次有黄芩素〉小檗碱 >X4-g>X4-s>黄芩苷;抗肺炎双球菌活性以小檗碱及X4-s最强;抗伤寒杆菌活性较好的是黄 芩素及X4-s;抗乙型副伤寒杆菌以黄芩素的活性最强;抗绿脓杆菌活性较好的是小檗碱及 X4-s;抗白色念珠菌活性较好的有X4-s、小檗碱及黄芩素。
[0135] 二、抗溃疡性肠炎活性研究
[0136] 1.建立药理溃疡性肠炎药效小鼠动物模型和考察指标
[0137] 1.1实验材料
[0138] 1.1.1实验仪器
[0139] 电子天平、载玻片、镊子、剪刀等工具。
[0140] 1.1.2试剂及药品
[0141] 葡聚糖硫酸钠(DSS，分子量50000,购于MP Biomedicals公司，试验时按重量体积 比配成3.5%，5%，7%的水溶液）；
[0142] 隐血试剂盒购于南京建成生物研究所。
[0143] 1.1.3动物
[0144] BALB/C小鼠，SPF级，雄性，7-8周龄，体重20 ± 2g，购自广东省医学实验动物中心， 合格证号:SYXK(粵)2012-0125,于广东药学院动物实验中心饲养。
[0145] 1.2 DSS造模浓度的考察
[0146] 7-8周龄BALB/C小鼠16只，分为4组，每组4只小鼠，分别是正常组、3.5 %DSS模型 组、5 %DSS模型组、7 %DSS模型组。各模型组分别饮用3.5 %、5%、7 %DSS溶液7天，正常组饮 用蒸馏水，于第8天处死动物，观察结肠组织的病变情况，进行CMDI评分。每天观察动物的便 血，大便性状，毛发，精神活动及体重，以DAI评分标准进行评分。并计算结肠指数，结肠指数 (cm/g)=结肠长度（cm)/结肠湿重（g) 〇
[0147] 1.3 UC模型的建立及急性期和慢性期的观察
[0148] 7-8周龄BALB/C小鼠48，分为正常组及模型组，每组24只小鼠，造模前小鼠适应性 饲养2周，参考Melgar和Cooper等方法建立结肠炎模型。正常组自由饮用水，而模型组饮用 5 % DSS溶液7天，并从第8天起开始改为自由饮用蒸馏水。
[0149] 每天观察动物的便血，大便性状，毛发，精神活动及体重，以DAI评分标准进行评 分。并分别于第8天、第15天、第32天处死正常组及模型组小鼠各8只，观察结肠组织的病变 情况，进行CMDI评分。
[0150] 1.4疾病活动指数(DAI)的测定
[0151] 1.4.1 DAI 评分标准
[0152] 小鼠的DAI由体重下降百分比、大便性状隐血情况决定，参照Melgar和Cooper等的 研究并进行适当的改进进行评分，计算小鼠 DAI。
[0153] DAI=体重下降评分+粪便性状评分+便血评分，其数值越高疾病越严重。评分标准 见表6。
[0154]
[0156] 注:正常大便:成形大便;松软大便:不黏附于肛门的糊状、半成形大便;稀便:可黏 附于肛门稀水样便。
[0157] 表6:疾病活动指数评分标准
[0158] 1.4.2隐血试验的测定
[0159] 严格按照隐血试剂盒进行，每只小鼠取少量粪便，加在载玻片上，一次滴加3-4滴 一号试剂，1-2滴二号试剂，进行显色反应及按表7进行评分。
[0160]
[0161 ] 注:2-3分