专利名称：启动子及其应用的制作方法
技术领域：
本发明提供启动子、载体、构建体和药物组合物及其在癌症治疗中的应用。
背景技术：
甲胎蛋白(AFP)的合成在出生后即迅速地下降。血液AFP在非妊娠的成年人中 几乎检测不到。肝癌、睾丸癌、畸胎瘤、消化道肿瘤和胰腺癌的癌症细胞可以产生AFP。AFP 是诊断这些癌症的指标。AFP在乙型肝炎病毒阳性的肝癌患者中的升高尤为突出。肝癌
月干(Carcinoma, hepatocellular)、生月干(Carcinoma, pleomorphic hepatocellular)、肝细胞瘤(Hepatoma)。Bid是一种仅含BH3结构域的促细胞凋亡的Bcl-2家族分子(LuoX，et al.，Bid, a Bcl2 interacting protein, mediates cytochrome c releasefrom mitochondria in response to activation of cell surface death receptors (作为 Bcl2 互作蛋白的 Bid 介导线粒体释放细胞色素c，以应答细胞表面死亡受体的活化)，Cell 1998，94 :481_90 ； Yin XM. Bid, a criticalmediator for apoptosis induced by the activation of Fas/ TNF-Rl deathrec印tors in h印atocytes (Bid是肝细胞Fas/TNF-Rl死亡受体活化诱导凋 亡中的关键介质)，J Mol Med 2000 ；78 203-11)。在Fas/TNF-Rl诱导的经受体细胞凋亡 的途径中，Bid可被CaspaseK又称FLICE)激活，在Caspase-8的作用下，Bid被切割成 较小但活性较强的tBid。Bid已被认为是一种肿瘤抑制分子(Zinkel SS, et al. ,Genes & Development2003,17 229~39 Ji Miao,et al.，Int.J. Cancer,2006，119，1985—1993)。增 加Bid的水平可诱导癌细胞的死亡进而有助于癌症的治疗。概述第一方面提供启动子，其序列为甲胎蛋白启动子的片段。第二方面提供制备本发明的启动子的方法。第三方面提供载体，所述载体包含一个或多个本发明的启动子。第四方面提供构建体，包含本发明的载体以及与所述载体可操作连接的一条或多 条目的序列，其中所述目的序列中的至少一条的转录受本发明的启动子起始。第五方面提供药物组合物，所述组合物包含本发明的构建体和药学上可接受的载 体。第六方面提供本发明的载体或构建体在制备治疗癌症的药物组合物中的用途。第七方面提供治疗癌症的方法，包括将有效量的本发明的构建体或本发明的药物 组合物对个体给药。附图简述
图1是由人肝组织分离的甲胎蛋白启动子片段的活性检测结果，检测使用荧光素 酶基因作为报告基因。图2显示Ad/AFPtBid对鼠肝内肿瘤生长的抑制作用，其中横坐标括号内的数字 表示小鼠数目。将三种不同的癌症细胞接种于鼠肝内建立鼠肝肿瘤模型。图2a使用产生甲胎蛋白的ifep3B细胞，图2b使用不产生甲胎蛋白的SK-Ifep-I细胞及不产生甲胎蛋白的 大肠癌DLD-I细胞。Ad/AFPtBid可明显地抑制H印3B细胞肿瘤的生长(图2a) (ρ < 0. 05， 方差分析)，但并不抑制SK-Ifep-I细胞与DLD-I细胞肿瘤的生长(图2b)。Ad/AFPtBid与 5-氟尿嘧啶(5-FU)或阿霉素(Dox)联合使用，其抑制作用更为显著(图2a)。图3表示甲胎蛋白启动子片段的核苷酸序列及所用克隆引物的核苷酸序列。
具体实施例方式在本文中，术语“目的序列，，指任何的多核苷酸序列。目的序列可以转录成RNA。 转录后的RNA可以作为反义RNA序列，也可以进一步加工成siRNA。当目的序列是编码序列 时，转录后的RNA还可以被翻译成氨基酸序列。在本文中，术语“启动子”指一段能起始目的序列向RNA转录的核酸序列。启动子 被RNA聚合酶识别，从而起始转录。启动子一般位于目的序列的上游。将目的序列的转录起始位点编号为+1，并以从 +1逆数的负数编号转录起始位点的上游位点。例如-100代表上游位点100。大部分真核 生物启动子包含TATA盒，即序列TATAAA，该序列会与TATA结合蛋白结合，以协助形成RNA 聚合酶转录复合物。TATA盒通常接近转录起始位点，例如距离起始位点50个碱基对以内。 真核生物启动子还可以进一步与其它调节区域，例如增强子、沉默子、边界元件或绝缘子配 合，以调节目的序列的转录水平。在本文中，术语“载体”指在将目的序列与载体可操作连接之后，能够使目的序列 转移至受体细胞并使其转录的DNA分子，其中如果目的序列是编码序列，则编码序列还能 被表达。在本文中，载体与目的序列可操作连接而得到的制备物为“构建体”。载体包括但不限于，病毒载体和质粒载体。病毒载体以病毒颗粒的方式，通过病毒 包膜蛋白与宿主细胞膜的相互作用进入细胞。质粒载体则是借助于物理或化学的作用而导 入细胞。载体进入细胞之后，或整合进宿主细胞染色体，或以染色体外可自我复制的附加体 形式存在。在宿主细胞中，载体或稳定地或瞬时地转录目的序列。在本文中，本发明的载体衍生自“起始载体”。起始载体的实例是哺乳动物双 杂交系统，例如 PACT、pBIND、pACT-MyoD、pBIND—Id、pG51uc (Promega Corporation, WI,美国)；腺病毒系统，例如 pAdEasy-1、pShuttle-CMV、pShuttle(Stratagene Inc.，CA，美国)；腺相关病毒系统，例如 pAAV-MCS、pAAV-RC、pHelper、pAAV-LacZ、 pAAV-IRES-hrGFP、pCMV-MCS (Stratagene Inc.，CA，美国)；哺乳动物表面展示系统，例如 pDisplay (Invitrogen Corporation, CA，美国)；信号通路报告载体，例如 pGAS-TA-Luc、 pSTAT3-TA-Luc、pISRE_TA_Luc、ρTA-Luc> pi κ B-EGFP> pNFAT-TA-Luc (ClontechLabo ratories, Inc.，CA，美国)；逆病毒载体，例如 pLNCX2、pQCXIH、pMSCVpuro (Clontech Laboratories, Inc.，CA，美国)、pLVTH(AddgeneInc.，MA，美国)；慢病毒载体,例如 FUGW、 pCMV-dR8. 91、pCMV-VSV-G、pRSV-rev、pLentilox 3. 7、pMDLg、pRRE、pffPXL(Addgenelnc.， MA，美国)>pLVX-DsRed-Monomer-Nl (Clontech Laboratories, Inc. , CA，美国)、pLPl、pLP2、 pLP VSV-G, pVSV-G(InvitrogenCorporation, CA，美国)；RNAi 载体，例如 pSilencerl. O、 pSilencer 2. 1—U6 hygro、pSilencer 3. I-Hl hygro、pSilencer 3. I-Hl neo、pSilencer 4. I-CMV neo、pSilencer 4. I-CMV puro (Applied Biosystems,)、pSIREN-RetroQ (Clontech Laboratories, Inc.，CA，美国)；荧光蛋白报告载体，例如 pDsRedl-Cl、 pDsRedl-Nl、pDsRED-Monomer-NU pEYFP-Cl、pEYFP-Nl、pEGFP-1、pEGFP-Cl、pEGFP-Nl、 PEGFP-N3, pcDNA-EGFPl (Clontech Laboratories, Inc.，CA，美国)；哺乳动物表达载体，例 如 pcDNA (Invitrogen Corporation, CA,美国)。在本文中，“可操作连接”意指，例如，启动子与目的序列的连接允许启动子起始 目的序列的转录；再例如，启动子与终止子的连接允许启动子所起始的转录被终止子终止； 又例如，载体与目的序列的连接允许目的序列与启动子可操作连接，并且允许该启动子与 终止子可操作连接。在本文中，术语“一致性”是指比对两条多核苷酸序列时，所述序列在相应核苷酸 位置上具有相同的核苷酸，比对使用例如Blast (http://blast, ncbi. nlm. nih. gov/)。第一方面提供启动子，其序列为甲胎蛋白启动子的片段。在一些实施方式中，甲胎蛋白启动子片段可以是如SEQ ID NO :2、SEQ ID NO :3、 SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :7、SEQ ID NO 9 或 SEQ IDNO 12 所示的序列。在另一些实施方式中，甲胎蛋白启动子片段可以是如SEQ IDNO :4所示的序列。所 述片段还可以是通过对如SEQ ID NO :4所示的序列添加、替换或缺失一个或多个核苷酸而 获得的具有如SEQ IDNO :4所示序列的启动子活性的序列。所述片段也可以是与SEQ IDNO 4 所示的序列具有 75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、 99%或100% —致性的序列。甲胎蛋白启动子片段也可以是如SEQ ID NO :6所示的序列。所述片段还可以是通 过对如SEQ ID NO :6所示的序列添加、替换或缺失一个或多个核苷酸而获得的具有如SEQ ID NO :6所示序列的启动子活性的序列。所述片段也可以是与SEQ ID NO :6所示的序列具 有 75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或 100% — 致性的序列。甲胎蛋白启动子片段也可以是如SEQ ID NO :8所示的序列。所述片段还可以是通 过对如SEQ ID NO :8所示的序列添加、替换或缺失一个或多个核苷酸而获得的具有如SEQ ID NO :8所示序列的启动子活性的序列。所述片段也可以是与SEQ ID NO :8所示的序列具 有 75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或 100% — 致性的序列。甲胎蛋白启动子片段也可以是如SEQ ID NO :10所示的序列。所述片段还可以是通 过对如SEQ ID NO 10所示的序列添加、替换或缺失一个或多个核苷酸而获得的具有如SEQ ID NO :10所示序列的启动子活性的序列。所述片段也可以是与SEQ ID N0:10所示的序列 具有 75%,80%,85%,90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,99%^； 100% 一致性的序列。甲胎蛋白启动子片段也可以是如SEQ ID NO :11所示的序列。所述片段还可以是通 过对如SEQ ID NO 11所示的序列添加、替换或缺失一个或多个核苷酸而获得的具有如SEQ ID NO :11所示序列的启动子活性的序列。所述片段也可以是与SEQ ID N0:11所示的序列 具有 75%,80%,85%,90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,99%^； 100% 一致性的序列。在特定的实施方式中，添加和替换可以使用具有稀有碱基的核苷酸。稀有碱基是除主要碱基腺嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶、鸟嘌呤和尿嘧啶之外的其它碱基，例如其它天然存 在于DNA中的碱基。稀有碱基包括但不限于主要碱基的甲基衍生物，例如5-甲基胞嘧啶和 5_羟甲基胞嘧啶。在一些实施方式中，甲胎蛋白启动子片段还可以在其中的任何位点具有包括但不 限于硫代修饰的核苷酸。在另一些实施方式中，甲胎蛋白启动子片段还可以在其5’端具有包括但不限于特 殊标记的核苷酸。特殊标记的实例是荧光标记、生物素标记、地高辛标记、磷酸化标记和放 射性标记。荧光标记例如使用FAM、ROX和TAMRA。在一些实施方式，本文所述的启动子特异地在产甲胎蛋白的细胞中起始目的序列 的转录，而在正常细胞中不起作用。产甲胎蛋白的细胞包括但不限于，哺乳动物例如人的胎 儿肝细胞，哺乳动物例如人的畸胎瘤、肝癌、睾丸癌、消化道肿瘤和胰腺癌的癌症细胞。所 述肝癌的实例是肝细胞癌、多形性肝细胞癌和肝细胞瘤。上述癌症的细胞系例如保藏于 美国模式菌种保藏中心(ATCC) (Manassas, VA，美国)，并且具体描述于例如http//www. atcc. org/Portals/l/TumorLines. pdf (将其全部内容通过引用并入本文)。所述细胞系 的实例是 C3A(ATCC 登录号 CRL-10741)、SNU-398 (ATCC 登录号 CRL-2233)、SNU-449 (ATCC 登录号 CRL-2234)、SNU-182 (ATCC 登录号 CRL-2235)、SNU-475 (ATCC 登录号 CRL-2236)、 Hep 3B2. 1-7 (ATCC 登录号 HB-8064)、HepG2 (ATCC 登录号 HB-8065)、SNU-387 (ATCC 登录号 CRL-2237)、SNU-423 (ATCC 登录号 CRL-2238)以及 PLC/PRF/5 (ATCC 登录号 CRL-8024)等。第二方面提供制备如本发明的启动子的方法。在一些实施方式中，制备可以使用全序列合成。例如，使用可商购的DNA全序列合 成仪合成本发明的启动子。在另一些实施方式中，制备可以采用分离。分离例如使用扩增。扩增所用模板可 以是第一方面中的产甲胎蛋白的细胞的基因组DNA。所述基因组DNA可以是从上述细胞提 取的基因组DNA，也可以是存在于上述细胞破碎产物中的基因组DNA。提取例如使用可商购 的DNA提取试剂盒。破碎例如使用可商购的超声破碎仪或高压破碎仪。第一方面中的产甲 胎蛋白的细胞可以是以细胞系形式存在的细胞，也可以以组织形式存在的细胞。扩增例如使用PCR。PCR所用引物针对本发明的启动子而设计。引物设计可以使用 软件，例如 OLIGO 引物分析软件(Molecular Biologylnsights, Inc.，C0，美国)和 Primer Premier (Premier Biosoft International，CA，美国)。引物例如是表 1 和图 3 所示引物。 对于特定的待扩增序列、模板和引物，本领域技术人员能够确定PCR温度和循环数。PCR可 以在PCR仪中进行，也可以在任何可控温的设备例如水浴锅中进行。在特定实施方式中，第一方面中的添加、替换或缺失一个或多个核苷酸可以通过 常规的定点突变方法完成。第一方面中的硫代修饰和特殊标记例如使用可商购的试剂盒完 成。第三方面提供载体，所述载体包含一个或多个本发明的启动子。在特定实施方式中，载体还可以包含一个或多个另外的启动子。所述另外的启动 子可以在哺乳动物例如人的一种或多种细胞中起始目的序列的转录。另外的启动子的实例 是SV40启动子、人巨细胞病毒早期启动子(CMV-IE)、人延伸因子1-亚基启动子、Rous肉瘤 病毒基因长末端重复序列、人泛素C基因启动子、snRNA启动子、甲胎蛋白启动子的全长序列以及上文所列起始载体中的启动子。在一些实施方式中，载体还可以包含一个或多个其它元件。在某些实施方式中，所 述其它元件是终止子。载体包含一个或多个终止子，以致载体上的每一个启动子可操作连 接至少一个终止子。所述终止子是至少能够在第一方面中的产甲胎蛋白细胞中终止目的序 列转录的终止子，例如是CMV终止子、SV40终止子、甲胎蛋白终止子以及上文所列起始载体 中的终止子。在某些实施方式中，所述其它元件还可以包括转录产生翻译起始所需序列的多核 苷酸序列。所述翻译起始所需序列例如核糖体结合位点。在特定的技术方案中，载体还可 以包含转录产生内部核糖体进入位点的多核苷酸序列。在某些实施方式中，所述其它元件还可以包括能够使目的序列与载体可操作连接 的位点或部分。特别地，载体包含能够使目的序列插入载体的位点，例如单个限制性酶切位 点或多克隆位点。在某些实施方式中，所述其它元件还可以包括筛选标志物序列。筛选标志物序列 的实例是胸腺激酶基因、二氢叶酸还原酶基因、抗生素抗性基因和荧光蛋白报告基因。在某些实施方式中，所述其它元件还可以包括复制元件。复制元件是至少能够在 第一方面中的产甲胎蛋白细胞中复制载体的复制元件，例如上文所列起始载体中的复制原
点ο在某些实施方式中，所述其它元件还可以包括转录调节区域，例如增强子、沉默 子、边界元件和绝缘子。在一些实施方式中，本发明的载体的制备可以通过衍生起始载体来完成。衍生使 起始载体包含一个或多个本发明的启动子。衍生可以借助酶切和连接，也可以仅借助连接。 衍生所采用的策略和操作步骤为本领域技术人员所熟知。在某些实施方式中，通过向起始载体添加一个或多个本发明的启动子，或者使用 一个或多个本发明的启动子替换起始载体上原有的启动子来实现衍生。在特定实施方式中，衍生还可以包括向起始载体添加一个或多个本文所述的另外 的启动子，或者使用一个或多个本文所述的另外的启动子替换起始载体上原有的启动子的步骤。在特定实施方式中，衍生还可以包括向起始载体添加一个或多个本文所述的其它 元件，或者使用一个或多个本文所述的其它元件替换起始载体上原有的同类元件的步骤。第四方面提供构建体，包含本发明的载体以及与所述载体可操作连接的一条或多 条目的序列，其中所述目的序列中的至少一条的转录受本发明启动子的起始。在特定实施方式中，所述目的序列中的一条或多条受本文所述的另外的启动子所 起始。在一些实施方式中，所述多条目的序列可以间隔一个或多个核苷酸。特别地，所述 间隔的多个核苷酸是蛋白酶酶切位点的编码序列。所述蛋白酶是在哺乳动物细胞、特别是 人细胞、更特别是人肝癌细胞中不丧失活性的蛋白酶。在一些实施方式中，目的序列可以是编码序列，例如可以是其产物能够引起细胞 凋亡、死亡或伤害的序列。特别地，目的序列是促凋亡蛋白编码序列。促凋亡蛋白包括但不 限于，Bid、tBid、Bad、Bax、Bim和Caspase-7。目的序列的制备可以通过全序列合成或从细胞分离，并且其制备方法为本领域技术人员所熟知。在一些实施方式中，可以通过将目的序列插入本发明的载体而制备构建体。所述 插入例如借助酶切和连接。酶切和连接可以针对本文所述的单个限制性酶切位点或多克隆 位点。在另一些实施方式中，可以通过将目的序列与本发明的载体直接连接而制备构建 体。第五方面提供药物组合物，所述组合物包含本发明的构建体和药学上可接受的载 体。在一些实施方式中，药物组合物还包含其它治疗剂，例如抗癌药。抗癌药的实例是 Dox、5-FU 禾口 TNFa。在一些实施方式中，药学上可接受的载体例如是与药物给药相容的任何溶剂、分 散介质、包被物、抗细菌剂和抗真菌剂、等张剂和吸收延迟剂。在一些实施方式中，所述药物组合物的制备使用例如在美国药典以及类似参考文 献中描述的标准方法。所述药物组合物可以以各种剂型存在，包括但不限于片剂、丸剂、悬 浮剂、霜剂和糊剂。第六方面提供本发明的载体或构建体在制备治疗癌症的药物组合物中的用途。第七方面提供治疗癌症的方法，包括将有效量的本发明的构建体或本发明的药物 组合物对个体给药。在一些实施方式中，癌症是癌症细胞能够产生甲胎蛋白的癌症，例如是畸胎瘤、肝 癌、睾丸癌、消化道肿瘤和胰腺癌。肝癌包括P53抗性(p53-resistent)的肝癌和p53敏感 的肝癌。肝癌的实例是肝细胞癌、多形性肝细胞癌和肝细胞瘤。上述癌症的细胞系例如是 第一方面中的癌症的细胞系。在一些实施方式中，所述构建体或药物组合物可以用于例如肠胃外、吸入、局部或 全身性给药。肠胃外给药例如静脉、腹膜内、肌内、皮下、直肠或阴道给药。吸入给药例如鼻 内或口腔吸入给药。局部给药例如向表皮外部、口腔给药，以及向耳、眼和鼻中以及不显著 进入血流的部位滴注给药。全身性给药例如口服、静脉、腹膜内或肌内给药。在特定实施方 式中，所述构建体或药物组合物可以通过静脉或皮下给药。治疗有效量是足以诱发对受治个体的治疗性作用的量。治疗有效量的变化取决于 给药途径、药学上可接受的载体以及与其它治疗剂或其它治疗性疗法的可能的共同应用。在一些实施方式中，所述构建体的治疗有效量为MOI不低于10，特别地，所述构建 体的MOI为100。在特定实施方式中，所述构建体可以使癌细胞在给药4天后显著死亡。在 一些实施方式中，所述构建体的治疗有效量为不低于IX 109pfu，特别地为lXlOlfu。在一些实施方式中，所述药物组合物中的其它治疗剂，例如Dox、5-FU和TNFa的 治疗有效量分别为不低于5ng/ml、不低于5 μ g/ml和不低于lng/ml。特别地，Dox、5-FU和 TNFa的治疗有效量分别为50ng/ml、50y g/ml和lOng/ml。在特定实施方式中，所述药物组 合物可以使癌细胞在给药2天后显著死亡。在另一些实施方式中，所述药物组合物中的Dox 或5-FU的治疗有效量分别为不低于lmg/kg或不低于4mg/kg，特别地为10mg/kg或40mg/
kg ο治疗有效量的构建体或药物组合物可以是无副作用的。所述副作用包括但不限于，消化障碍出现的胃腹胞胀、食欲减退、恶心干呕、腹泻等；骨髓抑制所出现的白细胞下 降、血小板减少、贫血；机体衰弱导致的全身疲乏、四肢无力、精神不振、甚至心慌、气短、失 眠、出虚汗、口干舌燥及脱发；以及发烧，患部疼痛、静脉炎、口腔炎、食管粘膜充血水肿及溃 疡等炎症反应。在一些实施方式中，所述构建体或药物组合物可以与例如治疗癌症的其它药剂或 其它治疗性疗法联用。所述联用可以是在同一时间或不同时间下进行。以下实施例意在阐述本发明的实施方案，而不应被理解为对发明范围的限定。实施例实施例1甲胎蛋白启动子片段的克隆利用基因组DNA提取试剂盒(QIAGEN，Hilden，德国)，从原发性肝癌患者的肝癌组 织中提取基因组DNA。利用表1及图3所示引物的具体位置和序列，通过PCR扩增获得SEQ ID NOs :1-12。所得序列如表1和图3所示。表1 从人肝癌组织中分离并克隆的甲胎蛋白启动子的片段
权利要求
启动子，其序列为甲胎蛋白启动子的片段。
2.如权利要求1所述的启动子，其中所述甲胎蛋白启动子的片段选自如SEQID NO :2、 SEQ ID NO :3、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :7、SEQ ID NO 9 和 SEQ ID NO 12 所示的序列。
3.如权利要求1所述的启动子，其中所述甲胎蛋白启动子的片段选自如SEQID NO :4、 SEQ ID NO :6、SEQ ID NO :8、SEQ ID NO 10 和 SEQ ID NO 11 所示的序列，或者是通过对选 自如 SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:8、SEQ ID N0:10 禾口 SEQ ID N0:11 所示的序 列添加、替换或缺失一个或多个核苷酸而获得的具有该序列的启动子活性的序列。
4.载体，包含一个或多个如权利要求1-3中任一项所述的启动子。
5.如权利要求4所述的载体，其中所述载体衍生自起始载体，优选衍生自腺病毒载体、 慢病毒载体和PcDNA载体。
6.如权利要求4或5所述的载体，还包含一个或多个终止子，以致每一个所述的启动子 可操作连接至少一个终止子。
7.构建体，包含如权利要求4-6中任一项所述的载体以及与所述载体可操作连接的一 条或多条目的序列，其中所述目的序列中的至少一条的转录受所述甲胎蛋白启动子的片段 起始。
8.如权利要求7所述的构建体，其中所述目的序列为促凋亡蛋白的编码序列，优选促 凋亡蛋白Bid或tBid的编码序列。
9.药物组合物，包含如权利要求7或8所述的构建体和药学上可接受的载体。
10.如权利要求9所述的药物组合物，还包含抗癌药，优选包含阿霉素、5-氟尿嘧啶或 TNFa。
11.如权利要求4-6中任一项所述的载体、或权利要求7或8所述的构建体在制备治疗 癌症的药物组合物中的用途。
12.如权利要求11所述的用途，所述癌症选自睾丸癌、畸胎瘤、消化道肿瘤和胰腺癌， 优选肝癌，更优选肝细胞癌、多形性肝细胞癌和肝细胞瘤。
全文摘要
本申请涉及甲胎蛋白启动子，包含所述启动子的载体，以及包含所述载体的构建体及其在治疗癌症中的用途。本申请还涉及药物组合物及其在治疗癌症中的用途，所述组合物包含所述构建体和药学上可接受的载体。
文档编号C12N15/63GK101988057SQ20091016402
公开日2011年3月23日 申请日期2009年8月4日 优先权日2009年8月4日
发明者赖宝山, 陈功 申请人:香港中文大学