作为抗抑郁药的异噁唑啉衍生物的制作方法

专利名称：作为抗抑郁药的异噁唑啉衍生物的制作方法
技术领域：
本发明涉及具有抗抑郁活性和/或抗焦虑活性和/或体重控制活性的取代的异噁唑啉衍生物、它们的制备方法、含有它们的药物组合物，以及它们作为药物的用途，尤其是用于治疗抑郁症、焦虑症、与抑郁和/或焦虑有关的压力相关性病症和包括神经性厌食症和贪食症的体重疾病的药物的用途。
本发明还涉及具有抗抑郁活性和/或抗焦虑活性和/或体重控制活性的取代的异噁唑啉衍生物与抗抑郁药、抗焦虑药和/或精神抑制药的新颖组合。
表现出抗抑郁活性的四氢萘和1，2-二氢化茚衍生物可从EP-361577B1公知。这些化合物除具有的α2-肾上腺素能受体拮抗剂活性外，还属于典型的单胺再摄取抑制剂，而且它们表现出抗抑郁活性但没有镇静作用。
现有技术与这些化合物相关的问题是，这种化合物会产生相当多的副作用，如恶心、兴奋、心跳加速和性功能降低。此外，它需要较长时间(尤其是3-4周)才开始起作用。
本发明的目的是提供具有抗抑郁药和/或抗焦虑药和/或体重控制活性的新颖的化合物衍生物，尤其是没有上述缺点的化合物。
本发明涉及通式(I)的新颖的异噁唑啉衍生物 它们的药物上可接受的酸或碱加成盐，它们的立体化学异构体，其中X 为CH2、N-R7、S或O；R7选自氢、烷基、苯基、苯烷基、烷羰基、烷氧基羰基和一烷氨基羰基和二烷氨基羰基，苯基和烷基非必须地用一个或多个卤素原子取代；
R1和R2各自独立地选自氢、羟基、氰基、卤素、OSO2H、OSO2CH3、苯基、苯烷基、烷氧基、烷氧基烷氧基、烷氧基烷氧基烷氧基、四氢呋喃基氧基、烷羰基氧基、烷基硫代基、烷氧基烷羰基氧基、吡啶基羰基氧基、烷羰基氧烷氧基、烷氧基羰氧基、链烯基氧基、链烯基羰氧基和一烷氨基烷氧基和二烷氨基烷氧基，烷基和芳基非必须地用一个或多个羟基或卤素原子或氨基取代；或R1和R2可一起形成选自-CH2-CH2-O-、-O-CH2-CH2-、-O-CH2-O-、-CH2-O-CH2-和-O-CH2-CH2-O-的二价基-R1-R2-；a和b是不对称中心；(CH2)m是m个碳原子的直烃基链，m为1-4的整数；Pir 为通式(IIa)、(IIb)或(IIc)的任何一个非必须地取代的基团 其中每个R8相互独立地选自氢、羟基、氨基、硝基、氰基、卤素和烷基；n 为1-5的整数；R9选自氢、烷基和甲酰基；和R3代表非必须地取代的芳族碳环的或杂环的环体系与非必须地取代的和部分或全部氢化的1-6个原子长的烃基链一起，其中所述环体系与Pir基连接且可含有一个或多个选自O、N和S的杂原子。
更具体的，本发明涉及根据通式(I)化合物，其中R3为根据通式(IIIa)、(IIIb)或(IIIc)的任何一个基团
其中d 为单键而Z为选自-CH2-、-C(＝O)-、-CH(OH)-、-C(＝N-OH)-、-CH(烷基)-、-O-、-S-、-S(＝O)、-NH-和-SH-的二价基；或d为双键而Z为式＝CH-或＝C(烷基)-的三价基；A 为5元或6元芳族碳环或杂环环，选自苯基、吡喃基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、噻吩基、异噻唑基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、呋喃基、噁二唑基和异噁唑基；P 为0-4的整数；Q 为0-7的整数；R4选自氢、烷基、苯基、联苯基、萘基、卤素和氰基，烷基和芳基非必须的用一个或多个羟基或卤素原子或氨基取代；R5等于R4；或R4和R5一起形成选自-CH2-、＝CH-、-CH2-CH2-、-CH＝CH-、-O-、-NH-、＝N-、-S-、-CH2N(烷基)-、-CH＝N-、-CH2O-和-OCH2-的二价基-R4-R5-；每个R6相互独立地选自氢、羟基、氨基、硝基、氰基、卤素、羧基、烷基、苯基、烷氧基、苯氧基、烷羰基氧基、烷氧基羰基、烷基硫代基、一烷氨基和二烷氨基、烷基羰基氨基、一烷氨基羰基和二烷氨基羰基、一烷氨基羰基氧基和二烷氨基羰基氧基、一烷氨基烷氧基和二烷氨基烷氧基，烷基和芳基非必须地用一个或多个羟基或卤素原子或氨基取代；或两个相邻的R6可一起形成选自-CH2-CH2-O-、-O-CH2-CH2-、-O-CH2-C(＝O)-、-O-CH2-O-、-CH2-O-CH2-、-O-CH2-CH2-O-、-CH＝CH-CH＝CH-、-CH＝CH-CH＝N-、-CH＝CH-N＝CH-、-CH＝N-CH＝CH-、-N＝CH-CH＝CH-、-CH2-CH2-CH2-、-CH2-CH2-C(＝O)-和-CH2-CH2-CH2-CH2-的二价基-R6-R6-；和R10选自氢、烷基、苯烷基和苯基。
优选的，本发明涉及其中X＝O或NH；R1和R2均为烷氧基；m＝1；Pir为根据通式(IIa)的基，其中R8为氢且n＝4；R3为根据通式(IIIb)的基，其中Z为＝CH-，d为双键，A为苯环，R4为烷基和R10为氢的那些化合物。
更优选的，本发明涉及其中X＝O；R1和R2均为甲氧基；m＝1；Pir为根据通式(IIa)的基，其中R8为氢且n＝4；R3为根据通式(IIIb)的基，其中Z为＝CH-，d为双键，A为苯环，R4为甲基和R10为氢的化合物。
在本申请书的范围中，烷基指带有1-6个碳原子的直链或支链饱和烃基，例如甲基、乙基、丙基、丁基、1-甲基丙基、1，1-二甲基乙基、戊基、己基；或烷基指带有3-6个碳原子的环状饱和烃基，例如环丙基、甲基环丙基、环丁基、环戊基和环己基。卤素属于氟、氯、溴和碘。非必须的用一个或多个卤素原子取代的烷基是例如多卤烷基，例如二氟甲基和三氟甲基。
药物可接受的盐定义为包含根据通式(I)化合物能形成的治疗活性的无毒加成盐。所述盐可通过用合适的酸处理根据通式(I)化合物的碱来获得，所述酸是例如无机酸，如氢卤酸，尤其是盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸和磷酸；有机酸如乙酸、羟乙酸、丙酸、乳酸、丙酮酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、环己烷氨基磺酸、水杨酸、对氨基水杨酸和pamoic acid。
含有酸性质子的通式(I)化合物还可以通过用合适的有机和无机碱处理而转化成它们的治疗活性的无毒金属加成盐或胺加成盐。合适的碱盐包括例如铵盐、碱金属和碱土金属盐，尤其是锂、钠、钾和钙盐；与有机碱的盐，如benzathine、N-甲基-D-葡糖胺、hybramine盐；以及与氨基酸的盐，所述氨基酸的例子如精氨酸和赖氨酸。
相反，所述盐形式可通过用合适的碱或酸处理而转化成游离形式。
用于本申请书的范围的术语“加成盐”还包括通式(I)化合物以及它们的盐能形成的溶剂化物。这种溶剂化物是例如水合物和醇化物。
通式(I)化合物的N-氧化物形式包括其中一个或几个氮原子被氧化成所谓的N-氧化物的那些通式(I)化合物，尤其是其中哌嗪基的一个或多个氮被N-氧化的那些N-氧化物。
上文所用的术语“立体化学异构体”指通式(I)化合物可具有的所有可能的异构体形式。除非另外提及或指出，化合物的化学表达式均指所有可能的立体化学异构体的混合物，所述混合物含有基本分子结构的所有非对映异构体和对映异构体。更具体的，立体性中心可具有R-或S-构型；二价环状(部分地)饱和基上的取代基可具有顺式构型或反式构型。包含双键的化合物可在所述双键上具有E或Z-立体化学。通式(I)化合物的立体化学异构体显然包含在本发明的范围内。
根据CAS命名法，当分子中存在两个公知的绝对构型的立体性中心时，用R或S描述符标识(基于Cahn-Ingold-Prelog顺序规则)最小编号的手性中心(参考中心)。第二个立体性中心的构型用相对的描述符[R*，R*]或[R*，S*]表示，其中R*始终确定为参考中心，而[R*，R*]指具有相同手性的中心，[R*，S*]指手性不同的中心。例如，如果分子中最低编号的手性中心具有S构型且第二中心为R构型，立体描述符用S-[R*，S*]表示。如果采用“α”和“β”在具有最低环数的环体系中的不对称碳原子上最高优先级取代基的位置始终任意地处于由该环体系确定的平均平面的“α”位置。该环体系中的其他不对称碳原子上的最高优先级取代基的位置(通式(I)化合物中的氢原子)相对于参照原子上的最高优先级取代基的位置而言，如果它在由该环体系确定的平均平面的相同一侧就称为“α”，或如果在由该环体系确定的平均平面的另一侧就称为“β”。
通式(I)化合物和某些中间体的结构中具有至少两个立体中心，在通式(I)中分别表示为a和b。由于该合成路径后接着进行三环体系的合成，那两种不对称中心a和b的构型就预先确定，使得中心a的相对构型为S*，而中心b的相对构型为R*。
本发明还包括本发明的药物活性化合物的衍生物化合物(通常称为“前药”)，它们在体内降解产生本发明化合物。前药在靶受体上的活性通常(但不总是)低于它们降解成的化合物。当所需化合物具有使其给药困难或无效的化学或物理性能时，前药就特别有用。例如，所需化合物可能很难溶解，也可能很难通过粘膜上皮，或可能具有不理想的短血浆半衰期。有关前药的进一步讨论可参见Stella，V.J.等的“Prodrugs”，Drug Delivery Systems，1985，pp.112-176，和Drugs，1985，29，pp.455-473。
根据本发明的药物活性化合物的前药形式通常为根据通式(I)化合物、其药物可接受酸或碱加成盐、其立体化学异构体，以及其带有酯化的或酰胺化了的酸基的N-氧化物形式。这种酯化的酸基包括通式-COORx的基，其中Rx为C1-6烷基、苯基、苄基或以下基之一 酰胺化了的基包括通式-CONRyRz的基，其中Ry为氢、C1-6烷基、苯基或苄基，Rz为-OH、H、C1-6烷基、苯基或苄基。
本发明的带有氨基的化合物可用酮或诸如甲醛的醛衍生，形成曼尼期碱。该碱将在水溶液中以第一级动力学水解。
用下文所述方法制备的通式(I)化合物可合成对映异构体的外消旋混合物形式，可根据现有技术公知的拆分方法互相分离。通式(I)的外消旋化合物可通过与合适的手性酸反应而转化成相应的非对映异构体盐型。所述非对映异构体盐型随后通过例如选择性或分级结晶而分离，并通过碱处理而放出对映异构体。通式(I)化合物的对映异构体型的作为选择的分离方法涉及采用手性固定相的液相层析法。所述纯立体化学异构体还可衍生自合适原材料的相应的纯立体化学异构体，条件是该反应立体专一地发生。如果需要专一的立体异构体，优选的是所述化合物通过立体专一的制备方法合成。这些方法有益地采用纯对映异构体原材料。
本发明化合物惊人地具有选择性5-羟色胺(5-HT)再摄取抑制剂活性，并具有额外的α2-肾上腺素能受体拮抗剂活性，以及表现出强抗抑郁活性和/或抗焦虑活性和/或体重控制活性，而没有镇静作用。此外，由于本发明化合物具有选择性5-羟色胺(5-HT)再摄取抑制剂活性，以及α2-肾上腺素能受体拮抗剂活性，因而还适于治疗和/或预防其中单独一种活性或所述活性结合能够具有治疗用途的疾病。具体而言，本发明化合物适于治疗和/或预防以下疾病·中枢神经系统病变，包括·情绪异常，具体包括主要抑郁性病变、具有或不具有以下特征的抑郁症精神病、紧张症、忧郁症、产后发作的非典型特征，以及在反复发作的情况下，具有或不具有季节性形态、心境恶劣病变、两极化I型病变、两极化II型病变、循环精神病、再发性短暂抑郁性病变、混和的情感性病变、未具体指明特征的两极化病变、由于一般医学病症引起的情绪异常、物质诱发的情绪异常、未具体指明特征的情绪异常、季节性情感异常以及月经前烦躁症。
·焦虑症，包括恐慌症、空室恐怖症、未出现空室恐怖症的恐慌症、没有恐慌症病史的空室恐怖症、特异性恐怖症、社交恐怖症、强迫观念-强迫行为性病变、创伤后压力病变、急性压力病变、普遍化焦虑症、一般医学病症引起的焦虑症、药物诱发的焦虑症，以及未具体指明特征的焦虑症。
·与抑郁和/或焦虑有关的压力相关病变，包括急性压力反应、调节性病变(短暂抑郁性反应、长期抑郁性反应、混和的焦虑和抑郁反应、具有显著的其他情绪障碍的调节性病变、具有显著的行为障碍的调节性病变、具有情绪与行为的混和障碍的调节性病变、具有其他具体的显著症状的调节性病变)以及对于严重压力的其他反应。
·痴呆症、健忘症以及未具体指明特征的认知障碍，特别是由于退化性病变、损伤、创伤、感染、血管病变、毒素、缺氧、维生素缺乏或内分泌紊乱引起的痴呆症，或由于酒精或维生素B1缺乏等其他原因引起的健忘症，由于单纯疱疹性脑炎和其他边缘性脑炎引起的双侧耳页损伤，缺氧/低血糖/严重痉挛和手术后继发的神经元损害，退化性病变，血管病变或第III脑室周边的病变。
·由于其他医学病症导致的认知力受损引起的认知紊乱。
·人格异常，包括患妄想狂的人格异常、精神分裂症样人格异常、分裂模式型人格异常、拒绝社交型人格异常、边缘型人格异常、演戏状人格异常、自恋型人格异常、回避型人格异常、依赖型人格异常、强迫性神经症型人格异常，以及未另外具体指明的人格异常。
·各种原因引起的情感分裂症，包括躁狂型、抑郁型、混和型情感分裂症；妄想狂型、无组织型、紧张型、无差别型和残余型精神分裂症；精神分裂症、情感分裂症、妄想症、暂时性精神病、共通型精神病、物质诱发型精神病，以及未具体指明其他症状的精神病。
·运动不能症、运动不能-僵直症候群、运动障碍和药物诱发型帕金森氏症、图雷特综合征及其症状、震颤、舞蹈病、肌阵孪、抽搐以及肌紧张不足。
·注意力缺乏/多动症(ADHD)·帕金森氏症、药物诱发的帕金森氏症候群、脑炎后发生的帕金森氏症候群、渐进性核上瘫痪症、多重系统萎缩症、脑皮质基底变性症、帕金森氏症候群-ALS痴呆综合症，以及基底神经节钙化症。
·早老性痴呆症，包括早发性和晚发性，具有情绪抑郁。
·痴呆症和心智迟钝的行为障碍和举止异常，包括不安和激动。
·锥体外束运动异常。
·唐氏综合征(Down’s)。
·静坐不能。
·摄食异常，包括神经性厌食、非常型神经性厌食、神经性贪食、非常型精神性贪食、与其他心理障碍有关的过度摄食，以及非特异性摄食异常。
·与AIDS有关的痴呆。
·慢性疼痛病症，包括神经病变性疼痛、发炎性疼痛、癌症疼痛，以及外科手术(包括牙科手术)后的疼痛。这些适应症还可包括急性疼痛、骨骼肌肉疼痛、下背疼痛、上肢疼痛、纤维肌肉疼痛和颜面肌肉疼痛症候群、口腔颜面疼痛、腹部疼痛、幻想疼痛、抽搐性三叉神经疼痛和非常型颜面疼痛、神经根损害和蜘蛛膜炎、老年病疼痛、中枢神经痛以及发炎疼痛。
·神经变性疾病，包括早老性痴呆、亨廷顿舞蹈病、克罗伊茨费尔特-雅各布病、皮克病、诸如多发性硬化和ALS的髓鞘脱失症，其他神经病变与神经痛、多发性硬化、肌肉萎缩性侧索硬化、中风以及头部创伤。
·成瘾病变，包括·具有或不具有生理依赖性的药物依赖或滥用，特别地所述药物为酒精、安非他命、安非他命类似物质、咖啡因、大麻、可卡因、引起幻觉的物质、吸入剂、尼古丁、类鸦片、苯环哌啶、苯环哌啶类似物质、镇静性安眠药、苯并二丫庚因和/或其他物质，特别适于治疗从上述药物脱瘾以及戒酒妄想。
·特别由酒精、安非他命、咖啡因、大麻、可卡因、引起幻觉的物质、吸入剂、尼古丁、类鸦片、苯环哌啶、镇静剂、安眠药、抗焦虑药和其他物质诱发的情绪异常。
·特别由酒精、安非他命、咖啡因、大麻、可卡因、引起幻觉的物质、吸入剂、尼古丁、类鸦片、苯环哌啶、镇静剂、安眠药、抗焦虑药和其他物质诱发的焦虑症，以及出现焦虑的适应不良症。
·戒烟。
·体重控制，包括肥胖症。
·睡眠异常与障碍，包括·睡眠障碍和/或深度睡眠作为主要睡眠异常，与另一种心智异常相关的睡眠异常，由一般医学病症引起的睡眠异常，以及药物诱发的睡眠异常。
·昼夜节律异常。
·提高睡眠质量。
·性功能障碍，包括性欲异常、性兴奋异常、性高潮异常、性疼痛、因一般医学病症引起的性功能障碍、药物诱发的性功能障碍，以及未另外指明的性功能障碍。
因此本发明还涉及以上定义的通式(I)化合物、其医药上可接受的酸或碱加成盐、其立体化学异构体、其N-氧化物，及其用作药品的前药。此外，本发明还涉及通式(I)化合物、其医药上可接受的酸或碱加成盐、其立体化学异构体、其N-氧化物，及其前药用于制造治疗抑郁症、焦虑症和体重控制异常，或更一般地治疗任何一种上述疾病的药物上的用途。
本发明化合物还适于与目前已有的或正在开发的或将来可利用的抗抑郁药、抗焦虑药和/或精神抑制药结合，作为上述疾病中的附加治疗和/或预防，以提高药效和/或改善开始作用速度。在其中抗抑郁药、抗焦虑药和/或精神抑制药表现出活性的啮齿类模型中进行评价。例如，评价化合物与抗抑郁药、抗焦虑药和/或精神抑制药结合用于减轻压力诱发的体温过高的效果。
因此本发明还涉及包含本发明化合物和选自抗抑郁药、抗焦虑药和精神抑制药的一种或多种其他化合物的药物组合物，以及涉及用这种组合物制造药物，以改善其在抑郁症和/或焦虑症治疗中的效果和/或开始作用。
体外受体与神经递质传送物的结合和信号传递研究可用于评价本发明化合物的α2-肾上腺素能受体拮抗剂活性和5-羟色胺(5-HT)再摄取抑制剂活性。可分别用体外α2-肾上腺素能受体和5-羟色胺传送物占有度作为中枢渗透和抑制α2-肾上腺素能受体和5-羟色胺传送物的效力的指标。作为体内α2-肾上腺素能受体拮抗剂的指标，可采用对老鼠进行皮下注射，或对老鼠进行静脉注射medetomidine前口服该化合物，然后观察老鼠的恢复反射的逆转(medetomidine试验)。作为5-羟色胺(5-HT)再摄取抑制剂活性的指标，可采用对老鼠进行皮下注射，或在皮下投注对氯安非他命前口服该化合物后，观察老鼠的头部抽搐和兴奋的抑制作用(pCA试验)。
本发明还涉及包含药物可接受的载体和作为活性成分的治疗有效量的本发明化合物的组合物。本发明化合物或它们的任何亚群可配制成用于给药目的的各种药物剂型。作为合适的组合物，可提及全身给药常采用的所有组合物。为了制备本发明的药物组合物，将有效量的特定化合物(非必须的以加成盐的形式)作为活性成分，与药物可接受的载体结合形成最终的混合物，所述载体可依给药所需的剂型不同而呈多种形式。这些药物组合物理想的是适合于尤其是口服、经直肠、经皮肤、胃肠外注射或经吸入物给药的单位剂型。例如，在制备口服剂型组合物时，在诸如悬浮液、糖浆、酏剂、乳液和溶液的口服液体制剂的情况下，可采用诸如例如水、二元醇类、油脂类、醇类等任何常用的药物介质；或在制备粉剂、丸剂、胶囊和片剂的情况下，采用诸如淀粉、糖、高岭土、稀释剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等的固体载体。由于片剂和胶囊给药方便，因而代表了最有益的口服剂型单位，当然采用固体药物载体。对于胃肠外的组合物，其载体通常包括无菌水(至少占大部分)，尽管还可包括例如帮助溶解的其他成分。制备例如注射液时，其载体包含生理盐水、葡萄糖溶液或生理盐水与葡萄糖溶液的混合物。注射用悬浮液也可用合适的液体载体、悬浮剂等制备。还包括在临使用前才转化成液体剂型的固体剂型。在适于经皮肤给药的组合物中，其载体非必须的包含渗透增强剂和/或合适的润湿剂，非必须的与少量任何性质的合适添加剂结合，所述添加剂不会对皮肤产生显著的不良作用。所述添加剂可促进对皮肤的给药和/或可有助于制备所需组合物。这些组合物可以各种方式给药，例如经皮肤贴剂、定点贴剂、软膏。
特别有益的是将上述药物组合物配制成给药方便和剂量均匀的单位剂型。本文所用的单位剂型指适合作为单位剂量的物理上分开的单位，每个单位含有经计算与需要的药物载体结合产生要求疗效的预定量活性成分。这种单位剂型的实例是片剂(包括有刻记的和有包衣的片剂)、胶囊、丸剂、粉剂包、糯米纸囊剂、栓剂、可注射的溶液或悬浮液等，以及被隔离的多重剂型。
本发明化合物通常可由每一步都是本领域普通技术人员公知的连续步骤制备。
具体的，带有通式(IIa)Pir基的通式(I)化合物可通过用通式(V)的取代哌嗪在通式(IV)中间体上进行亲核性取代反应制备。这些反应可在诸如二噁烷、甲基异丁基酮或N，N’-二甲基甲酰胺的反应惰性溶剂中，在诸如碳酸钾、碳酸钠或三乙胺的合适碱存在下，或即使不存在碱，在后一种情况下应用过量的通式(V)的试剂进行。合适的反应温度为100-150℃。
在化合物(IV)中，L代表任何合适的反应性离去基团，尤其是诸如氯、溴或碘的卤素，或诸如甲基磺酰氧基或4-甲基苯磺酰氧基的磺酰氧基。
带有通式(IIa)Pir基的通式(I)化合物还可通过两步反应式制备，其中通式(IV)中间体首先与通式(VII)的取代哌嗪反应，将R3基引入分子中。反应条件与上述用于通式(VI)的化合物的反应条件相似。
在化合物(IV)中，L代表任何合适的反应性离去基团，尤其是诸如氯、溴或碘的卤素，或诸如甲基磺酰氧基或4-甲基苯磺酰氧基的磺酰氧基。
在中间体化合物(VII)中，也可例如通过一个叔丁氧羰基保护其中一个氮官能团。

在化合物(IX)中，L代表任何合适的反应性离去基团，尤其是诸如氯、溴或碘的卤素，或诸如甲基磺酰氧基或4-甲基苯磺酰氧基的磺酰氧基。也可用R3-CHO作为化合物(IX)。
带有通式(IIa)Pir基的通式(I)化合物还可通过两步反应方案制备，其中通式(VIII)中间体与通式(X)酸反应，然后还原中间体(XI)的羰基官能团。步骤1的反应可在诸如氯仿、二氯甲烷、四氢呋喃、二甲基甲酰胺或它们的混合物的反应惰性溶剂中进行，采用本领域普通技术人员公知的任何方法，使用诸如1，1’-羰基二咪唑、N，N’-二环己基碳化二亚胺的缩合试剂，或先将通式(X)的羧酸转变成其相应的酰基氯。步骤2所示的反应可用诸如氢化锂铝或氢化铝的合适还原剂，在例如四氢呋喃的合适溶剂中进行。通常这些反应可在从-20℃到室温的温度下进行。
在中间体化合物(XI)和(XII)中，A基团代表非必须取代的芳族碳环或杂环体系，所述体系包括长5个原子的部分或全部氢化的烃基链，其中一个或多个碳原子可选自氧、氮和硫的一个或多个原子代替，该环体系通过所述烃基链与上述Pir基连接。
取代基R1和R2可通过诸如脱甲基化、酰化、酯化、胺化和酰胺化的本领域公知的方法改变或相互转化。
原材料和某些中间体是可商购的，或可根据本领域公知的常用反应方法制备。例如，其中X＝O的通式(IV)中间体可根据以下反应方案(方案1)制备方案1 在中间体化合物(XIV)中，L代表任何合适的反应性离去基团，尤其是诸如氯、溴或碘的卤素，或诸如甲基磺酰氧基或4-甲基苯磺酰氧基的磺酰氧基。此外，中间体化合物(XIV)中的Alk代表任何C1-6烷基，尤其是乙基，m见通式(I)的定义。
其中X＝NH的通式(IV)中间体也可以根据上述步骤1相同的方式制备，条件是中间体化合物(XIII)用其胺类似物(XVI)代替，优选的用例如COCF3基保护胺基。烷基化步骤可在例如四氢呋喃或二甲基甲酰胺的反应惰性溶剂中，在诸如氢化钠或氢化钾的强碱存在下，并加入诸如18-冠-6或15-冠-5的冠醚进行。合适的反应温度为室温到60℃。

可采用本领域公知的技术，例如采用盐酸羟胺的技术，在NaHCO3或吡啶存在下，在例如乙醇的反应惰性溶剂中，将通式(XVII)的中间体转化成通式(XVIII)的肟。中间体(XVIII)被氧化成它的腈氧化物，并就地进行分子内的环加成反应，产生通式(XIX)的化合物。这种氧化反应可用次氯酸钠溶液，在三乙胺存在下，在诸如二氯甲烷的惰性溶剂中，在室温下进行。氧化反应也可用氯胺-T(N-氯-4-甲基-苯磺酰氨，钠盐)，在诸如回流的乙醇的溶剂中搅拌加热进行。在这一阶段形成了通式(I)的两个立体中心a和b。
通式(XX)的化合物可用本领域公知的方法制备，例如通过在例如氢硼化钠的合适还原剂存在下，在诸如水、醇、四氢呋喃或它们的混合物的合适溶剂中，一般在室温下还原通式(XIX)的羰基化合物来制备。
通式(IV)中间体可用标准技术从通式(XX)中间体制备。因此，在诸如三乙胺的碱存在下，在例如二氯甲烷的反应惰性溶剂中，在0℃到室温的反应温度下，与甲烷磺酰氯或4-甲基苯磺酰氯反应，产生相应的磺酰氧基衍生物中间体(IV)。还可制备相应的卤代衍生物，例如在四氯甲烷存在下，在诸如四氢呋喃的反应惰性溶剂中，用三苯基膦处理通式(XX)中间体，搅拌并回流混合物。
由以上和以下反应显见，可将反应产物从反应介质中分离，如果需要，还可根据诸如萃取法、结晶法和色谱法的本领域一般公知的方法进一步纯化。可进一步显见的是，以一种以上对映异构体形式存在的反应产物可通过公知的技术从它们的混合物中分离出来，特别应用诸如制备性HPLC的制备色谱法。典型的是，中间化合物(IV)和通式(I)的最终化合物可分离成它们的对映异构体形式。
其中X＝CH2的本发明化合物可根据以下反应方案(方案2)制备，其中根据通式(V)的中间化合物首先与通式(XX)的二卤代衍生物用标准的技术，在或不在碱存在下，在诸如氯仿、二氯甲烷或1，2-二氯乙烷的惰性反应溶剂中，在从室温到80℃的反应温度下，进行N-烷基化反应，产生通式(XXI)中间体。在诸如甲苯的非质子性溶剂中，在回流温度下搅拌加热，用诸如Dean-Stark水分离器的标准装置除去水，将通式(XXII)的醛与叔丁基胺反应，产生通式(XXIV)的亚胺。通式(XXIV)的中间化合物与通式(XXI)中间体的C-烷基化反应可在诸如正丁基锂的烷基锂衍生物存在下，在惰性气氛下和诸如四氢呋喃的干燥惰性溶剂中，在-78-0℃的低温下进行，产生通式(XXV)中间体。通式(XXVI)的中间化合物可通过在诸如碳酸氢钠的碱存在下，在诸如类似乙醇的低级烷基醇的溶剂中，通常在室温下将通式(XXV)的化合物与羟基胺反应来制备。最后，通式(XXVI)的肟衍生物氧化成其腈氧化物，以及随后就地环加成反应得到通式(XXVII)的化合物的过程，可通过与诸如从通式(XVIII)中间体得到通式(XIX)化合物的上述方法相似的标准技术实现。
方案2 可见以上公开的反应步骤可适用于具体的反应产物。该反应步骤可以本领域普通技术人员公知的任何方式进行，包括在溶液中或作为固体相反应，后者的反应产物与树脂材料结合，并在最终的裂解步骤中从树脂材料上释放。这种实施方式和修改的实例已在本说明书中通过实施例的方式进一步公开。
化合物3，3a，4，5-四氢萘并[1，2-c]异噁唑-3-乙酸(通式(IV)，其中每个R1和R2为H，m＝0，X＝CH2和L＝COOH)已公开在SyntheticCommunications，27(16)，2733-2742(1997)中，作为合成消炎性、止痛和解热性化合物的中间体，不包括在专利保护范围内。
以下实施例说明本发明但不限于此。
试验部分本申请书采用的通式(I)化合物的碳环编号体系如下 对于某些化合物，其中的立体性碳原子的绝对立体化学构型不由试验确定。此时首先分离出的立体化学异构体记为“A”，其次分离出的记为“B”，而不再参考其真实的立体化学构型。然而，所述“A”和“B”异构体型可由本领域普通技术人员用例如X射线衍射法的公知方法清楚地表征。通式(I)中的立体性中心a和b分别具有3a和3的环编号。
在下文中，“DMF”定义为N，N-二甲基甲酰胺，“DIPE”定义为二异丙基醚，而“THF”定义为四氢呋喃。
A、中间化合物的制备实施例A1.a中间体1的制备 将4-溴-2-丁烯酸甲酯(0.1647mol)在DMF(50ml)中的溶液滴加到2-羟基-4，5-二甲氧基苯甲醛(0.0823mol)与K2CO3(0.1647mol)在DMF(200ml)中的混合物中。在室温下搅拌反应混合物2小时，过滤并蒸发干燥滤液。用10％NaOH水溶液清洗残渣，然后用CH2Cl2萃取。将分离出的有机层干燥(Na2SO4)过滤，并蒸发溶剂。用二乙醚清洗残渣然后干燥。产物20g中间体1(87％)。
实施例A1.b中间体2的制备 在中间体1(0.041mol)在乙醇(150ml)中的溶液中加入羟基胺(0.045mol)。加入吡啶(57ml)。在室温下搅拌反应混合物2小时，然后倒入水中，用浓HCl酸化。用CH2Cl2萃取该混合物。将分离出的有机层干燥(Na2SO4)过滤，并蒸发溶剂。产物11.7％(96％，粗产物)。通过硅胶高压液相色谱法对试样(2g)提纯(洗脱剂CH2Cl2/CH3OH95/5)。收集纯馏分并蒸发溶剂。用二乙醚清洗残渣然后干燥。产物0.9g中间体2。
实施例A1.c中间体3的制备 在中间体2(0.037mol)和Et3N(1ml)在CH2Cl2(220ml)中的混合物中滴加NaOCl，5％(130ml)。在室温下搅拌反应混合物4小时，然后用水清洗，干燥(Na2SO4)、过滤并蒸发滤液。通过短开放硅胶柱色谱法对残渣提纯(洗脱剂CH2Cl2/2-丙酮100/0到95/5)。收集所需部分并蒸发溶剂。产物5.8g(54％，不再提纯地用于下一个反应步骤)。将试样(2g)从EtOAc再结晶。滤除沉淀并干燥。产物1.7g中间体3。
实施例A1.d中间体4的制备 将NaBH4(0.043mol)分批加入中间体3(0.017mol)在THF(50ml)和H2O(5ml)中的溶液中，并在冰浴上搅拌冷却。在室温下搅拌所得反应混合物2小时。加入2-丙酮并搅拌30分钟。用水清洗反应混合物并用CH2Cl2萃取。用盐水清洗分离出的有机层，干燥(Na2SO4)，过滤并蒸发溶剂。通过短开硅胶柱色谱法(洗脱剂CH2Cl2/CH3OH 95/5)并通过硅胶高压液相色谱法(洗脱剂CH2Cl2/CH3OH 98/2)对残渣提纯。收集纯馏分并蒸发溶剂。用二乙醚处理试样(1.8g)然后干燥。产物1.2g中间体4(59％)。
实施例A1.e中间体5的制备 将Et3N(0.016mol)加入中间体4(根据A3制备的)(0.0109mol)在CH2Cl2(60ml)中的溶液中。在冰浴中冷却混合物。加入甲磺酰氯(0.012mol)并搅拌所得反应混合物30分钟。然后用水清洗混合物，干燥(Na2SO4)，过滤并蒸发溶剂。产物3.5g中间体5(82％，不再提纯地用于下一个反应步骤)。
实施例A1.f中间体6的制备 反应在N2气氛下进行。将BBr3(0.04368mol)搅拌滴加到中间体5(根据A1.e制备的)(0.00873mol)在CH2Cl2(100ml)中的溶液中，冷却到-78℃。将反应混合物升温到-40℃并在-40℃下继续搅拌2小时。然后将混合物倒入冰水中并用CH2Cl2萃取。将分离出的有机层干燥(MgSO4)，过滤并蒸发溶剂。通过硅胶闪蒸塔色谱法(洗脱剂CH2Cl2/CH3OH 97/3)，然后通过HPLC(洗脱剂CH2Cl2/CH3OH 99.5/0.5到90/10)对残渣提纯。收集两种产物部分并蒸发它们的溶剂。产物0.750g中间体6(26％)。
实施例A1.g中间体7的制备 在100℃下搅拌中间体5(根据A1.e制备的)(0.0422mol)和哌嗪(0.1267mol)在1，4-二噁烷(15ml)中的混合物2小时。蒸发掉溶剂。用水清洗残渣并用CH2Cl2萃取。将分离出的有机层干燥(Na2SO4)，过滤并蒸发掉溶剂。产物13g中间体7(NMR85％)。
实施例A1.h中间体8的制备 通过手性柱色谱法，经具有固定相的柱LC110-2 CHIRALPAK-AD(2000g，堆积压力45bar，检测范围2.56，波长240nm，温度30℃；注射溶液200g在8.4L CH3CN中；然后加入19.6L甲醇(+2％乙醇)，然后过滤；注射容积700ml；洗脱剂CH3OH/CH3CN 70/30v/v)将中间体5(根据A1.e制备的)(200g，0.58mol)分离成其对映异构体。收集两种产物部分并蒸发掉它们的溶剂。产物95g中间体8。
实施例A1.i中间体9的制备
将中间体8(根据A1.h制备的)(0.0728mol)与1-(叔丁氧基羰基)哌嗪(0.087mol)在二噁烷(500ml)中的混合物搅拌并回流48小时。蒸发溶剂并加入CH2Cl2。再加入H2O和NaOH(50％)并用CH2Cl2萃取混合物。将分离出的有机层干燥(MgSO4)并在真空下蒸发溶剂。
产物中间体9。
实施例A1.j中间体10的制备 将中间体9(0.00318mol)和2，2，2-三氟乙酸(189ml)在CH2Cl2(500ml)中的混合物在室温下搅拌1小时。蒸发溶剂并将残余物溶解在CH2Cl2中。加入NaOH(50％)并萃取混合物。将分离出的有机层干燥(MgSO4)，过滤并真空蒸发溶剂。通过硅胶短柱色谱法(洗脱剂CH2Cl2/(MeOH/NH3)100/0；95/5)对残渣提纯。收集纯馏分并蒸发掉溶剂。产物14.32g中间体10(59％)。
实施例A1.k中间体11的制备 将中间体10(0.00599mol)、1-氯-2-丙酮(0.00599mol)和K2CO3(0.01199mol)在DMF(200ml)中的混合物在室温下搅拌24小时。蒸发溶剂。将残余物溶解在CH2Cl2中。用水洗涤有机溶液，干燥(MgSO4)，过滤并真空蒸发溶剂。产物(定量得到)中间体11。
实施例A1.l中间体12的制备 反应在N2气氛下进行。将3，4-二氢-2-萘甲酸(0.0043mol)和1，1’-羰基双[1H-咪唑](0.0047mol)的无水CH2Cl2混合物在室温下搅拌1小时。加入中间体7(根据A1.g制备的)(0.0043mol)的无水CH2Cl2溶液，在室温下搅拌所得反应溶液±24小时。用水洗涤溶液，然后用CH2Cl2萃取。将分离出的有机层干燥(Na2SO4)，过滤并蒸发溶剂。通过硅胶短开柱色谱法(洗脱剂CH2Cl2/CH3OH 97/3)对残渣提纯。收集纯馏分并蒸发溶剂。产物0.4g中间体12(22％)。
实施例A1.m中间体13的制备将乙烯基三苯基溴化(0.0025mol)加入中间体7(根据A1.g制备)(0.003mol)的CH2Cl2(20ml)溶液中。在室温下搅拌所得反应混合物4小时。减压蒸发溶剂。产物2.2g中间体13，不经进一步提纯就用于下一反应步骤。
实施例A1.n中间体14的制备 在室温和氮气流下，将1，1’-羰基双[1H-咪唑](0.0099mol)加入(E)-3-碘代-2-甲基丙烯酸(0.009mol)的无水CH2Cl2溶液中。搅拌混合物1小时，然后加入中间体7(根据A1.g制备)(0.009mol)。在室温下搅拌反应混合物16小时，用水和盐水洗涤，干燥(Na2SO4)并减压蒸发溶剂。通过硅胶短开柱色谱法(洗脱剂CH2Cl2/MeOH99/1)对残余物(白色泡沫)提纯。收集纯馏分并蒸发溶剂。产物3.82g中间体14(白色固体，81％)。
实施例A1.o中间体15的制备搅拌LiAlH4、1.0M/THF(0.00848mol)的THF(100ml)溶液，并在-20℃和氮气流下回流。一次性加入AlCl3(0.0093mol)并在-20℃下搅拌所得混合物10分钟。滴加中间体14(根据A1.n制备)(0.0077mol)的THF(100ml)溶液，并在-20℃下搅拌所得混合物1小时。在-10℃下滴加20％的饱和NH4Cl溶液，并将反应混合物升温到室温。将水加入悬浮液并用CH2Cl2萃取。干燥(Na2SO4)分离出的有机层并减压蒸发溶剂。用Et2O处理残余物并干燥。产物3.73g中间体15(白色固体，94％)。
实施例A1.p中间体16的制备将中间体7(根据A1.g制备)(0.015mol)、1-氯-2-丙酮(0.015mol)和K2CO3(0.030mol)在CH3CN(60ml)中的混合物在室温下搅拌24小时。蒸发掉溶剂。将残余物分配到水和CH2Cl2之间。将分离出的有机层干燥(Na2SO4)，过滤并蒸发溶剂。通过硅胶短开柱色谱法(洗脱剂CH2Cl2/CH3OH 95/5)对残渣提纯。收集纯馏分并蒸发溶剂。产物4.79g中间体16(82％)。
实施例A1.q中间体17的制备 在0℃下将NaBH4(0.0128mol)分批添加到中间体16(根据A1.p制备)(0.0051mol)和水(3.2ml)的THF(40.5ml)溶液中。在室温下搅拌反应混合物一夜，然后用10％的NH4Cl水溶液处理。用CH2Cl2萃取该混合物。将分离出的有机层干燥，过滤并蒸发溶剂。通过硅胶短开柱色谱法(洗脱剂CH2Cl2/CH3OH 97/3)对残渣提纯。收集所需馏分并蒸发溶剂。产物1.6g中间体17(80％)。
实施例A1.r中间体18的制备将中间体7(根据A1.g制备)(0.03mol)溶解在CH3CN(200ml)中并添加K2CO3(0.27ml)。添加环氧乙烷甲醇(0.27mol)并在60℃下在周末搅拌反应混合物。真空蒸发溶剂。将残余物分配在水和CH2Cl2之间。分离有机层，干燥(Na2SO4)、过滤并减压蒸发溶剂。通过制备性HPLC提纯残余物((1)洗脱剂CH2Cl2/(CH3OH/NH3)95/5，然后(2)洗脱剂CH2Cl2/CH3OH 90/10)。收集产物部分并蒸发溶剂。产物7.5g(61％)纯中间体18和3.5g原材料/目标化合物1/1的混合物。
实施例A1.s中间体19的制备 将中间体18(根据A1.r制备)(0.0012mol)溶解在CH2Cl2(200ml)中。添加高碘酸钠盐(0.0024mol)的NaHCO3/H2O(足量)溶液，并剧烈搅拌所得反应混合物2小时。将残余物分配在水和CH2Cl2之间。用盐水洗涤分离出的有机层，干燥(Na2SO4)、过滤并真空蒸发溶剂。产物0.430g中间体19(定量产物；不再提纯地用于下一反应步骤)。
实施例A2.a中间体20的制备 反应在N2气氛下进行。将2，2，2-三氟-N-(2-甲酰苯基)-乙酰胺(0.1869mol)的DMF(375ml)溶液滴加到含NaH(0.2055mol)的DMF(375ml)中。室温下搅拌混合物30分钟。滴加4-溴-3-丁烯酸甲酯(0.2803mol)的DMF(200ml)溶液。然后添加18-冠-6(催化用量)。在60℃搅拌所得反应混合物2小时，然后在室温放置一夜。蒸发溶剂。用水洗涤残余物并用CH2Cl2萃取。将分离出的有机层干燥(Na2SO4)、过滤并蒸发溶剂。通过硅胶开柱色谱法(洗脱剂CH2Cl2/己烷90/10、100/0和CH2Cl2/2-丙酮96/4、90/10和80/20)对残渣提纯。收集纯馏分并蒸发溶剂。产物44.37g中间体20(75％，不再提纯地用于下一步反应)。
实施例A2.b中间体20的制备 将羟胺(0.169mol)和吡啶(0.211mol)添加到中间体20(根据A2.a制备)(0.1407mol)的乙醇(450ml)溶液中，并在室温下搅拌所得反应混合物3小时。用10％的柠檬酸溶液洗涤混合物，然后用CH2Cl2萃取。将分离出的有机层干燥(Na2SO4)、过滤并蒸发溶剂。产物45.76g中间体21(98％，不再提纯地用于下一步反应)。
实施例A2.c中间体22的制备 将中间体21(根据A2.b制备)(0.0658mol)与N-氯-4-甲基-苯磺酰胺的钠盐(0.0658mol)在乙醇(500ml)中的混合物搅拌并回流2小时。真空浓缩混合物，经dicalite过滤，用水和盐水洗涤滤液，然后用CH2Cl2萃取。将分离出的有机层干燥(Na2SO4)、过滤并蒸发溶剂。通过硅胶开柱色谱法(洗脱剂CH2Cl2/2-丙酮100/0、96/4、90/10和80/20)对残渣提纯。收集所需馏分并蒸发溶剂。用己烷结晶残余物(糖浆状物)，然后用DIPE洗涤并干燥。产物12.32g中间体22(57％)。
实施例A2.d中间体23的制备 将NaBH4(0.0289mol)分批添加到中间体22(根据A2.c制备)(0.0116mol)在THF(81ml)和H2O(6.8ml)中的混合物中，搅拌并在冰浴上冷却。室温搅拌所得反应混合物一夜。用饱和NH4Cl水溶液处理混合物，然后用EtOAc萃取。将分离出的有机层干燥(Na2SO4)、过滤并蒸发溶剂。用CH2Cl2洗涤残余物，然后从EtOAc重结晶。滤除沉淀物并干燥。产物0.9g中间体23(38％)。
实施例A2.e中间体24的制备 将中间体23(根据A2.d制备)(0.001468mol)和三苯基膦(0.001909mol)在四氯甲烷(30ml)和THF(20ml)中的混合物搅拌并回流3小时。蒸发溶剂至干燥。通过硅胶短开柱色谱法(洗脱剂CH2Cl2/己烷90/10，然后100/0)对残渣提纯。收集所需馏分并蒸发溶剂。从甲醇中结晶出残余物。滤除沉淀并干燥。产物2.6g中间体24(79％)。
实施例A3.a中间体25的制备 将1-哌嗪羧酸1，1-二甲基乙酯(0.02mol)分批加入1，4-二氯-2-丁烯(0.025mol)的CHCl3(60ml)溶液中。室温下搅拌反应混合物24小时，然后搅拌回流24小时。用饱和NaHCO3溶液使反应终止，干燥(Na2SO4)、过滤并蒸发溶剂。通过硅胶短开柱色谱法(洗脱剂CH2Cl2/EtOAc)对残渣提纯。收集纯馏分并蒸发溶剂。产物2.2g中间体25(40％)。
实施例A3.b中间体26的制备 反应在N2流下进行。将60％的NaH(0.0579mol)与18-冠-6(催化用量)在THF(25ml)中的混合物冷却。分批添加2-氨基-4，5-二甲氧基苯甲醛(0.0579mol)与THF(50ml)的混合物。室温下搅拌反应混合物30分钟。分批添加中间体25(根据A3.a制备)(0.0386mol)与THF(50ml)的混合物。室温下搅拌混合物3天，然后用NH4Cl(10％)处理。用CH2Cl2萃取混合物。分离有机层，干燥、过滤并蒸发溶剂直至干燥。通过硅胶短开柱色谱法(洗脱剂CH2Cl2/CH3OH 99/1和98/2)对残渣提纯。收集纯馏分并蒸发溶剂。产物5.5g中间体26(23％)。
实施例A3.c中间体27的制备反应在N2流下进行。向60％的NaH(0.03mol)与THF(20ml)的混合物中分批添加中间体26(根据A3.b制备)(0.02mol)与THF(80ml)的混合物以及18-冠-6(催化用量)。室温下搅拌混合物20分钟。分批添加三氟乙酸酐(0.022mol)。室温下搅拌混合物3小时，用NH4Cl(20％)溶液处理，然后用CH2Cl2萃取，并蒸发溶剂直至干燥。通过硅胶短开柱色谱法(洗脱剂CH2Cl2/CH3OH 99/1和98/2)对残渣提纯。收集纯馏分并蒸发溶剂。产物5.3g中间体27(58％)。
实施例A3.d中间体28的制备 将中间体27(根据A3.c制备)(0.0115mol)、羟胺(0.0126mol)和NaHCO3(0.023mol)与无水乙醇(60ml)的混合物在室温下搅拌24小时，过滤并蒸发溶剂直至干燥。产物5.8g中间体28(95％)。
实施例A3.e中间体29的制备 将1-氯-2，5-吡咯烷二酮(0.0272mol)分批添加到中间体28(根据A3.d制备)(0.0109mol)的CH2Cl2(100ml)溶液中。室温下搅拌混合物2小时。滴加Et3N(0.0272mol)。室温下搅拌混合物一夜，用10％的K2CO3溶液终止反应，然后萃取并蒸发溶剂至干燥。产物中间体29。
实施例A3.f中间体30的制备 将中间体29(根据A3.e制备)(0.0109mol)与LiOH(0.0109mol)在H2O(17.5ml)和1，4-二噁烷(70ml)中的混合物在室温下搅拌3小时。用NaOH(2N)溶液处理混合物，然后用CH2Cl2萃取。蒸发溶剂直至干燥。通过短开柱色谱法(洗脱剂CH2Cl2/CH3OH 98/2)对残渣提纯。收集纯馏分并蒸发溶剂。产物2.07g中间体30(45％)。
实施例A3.g中间体31的制备 将三氟乙酸(7.9ml)滴加到中间体30(0.0047mol)的CH2Cl2(33ml)溶液中。室温下搅拌混合物3小时，冷却并用50％的NaOH溶液碱化。萃取混合物并蒸发溶剂直至干燥。产物1.6g化合物31(100％)。
实施例A4.a中间体32的制备 将1，4-二氯-2-丁烯(0.03mol)加入1-(2-萘甲基)哌嗪(0.025mol)和NaHCO3(0.025mol)在CH3Cl2(75ml)中的混合物中。室温下搅拌反应混合物24小时。滤除固体，然后用CH2Cl2洗涤，用10％的Na2CO3溶液洗涤有机溶液，脱水(Na2SO4)、过滤并蒸发溶剂。通过硅胶短开柱色谱法(洗脱剂CH2Cl2/EtOAc/2-丙酮)对残渣提纯。收集纯馏分并蒸发溶剂。产物3.4g中间体32(43％)。
实施例A4.b中间体33的制备搅拌NS(0.0546mol)和叔丁基胺(0.0983mol)的甲苯(75ml)溶液，并用Dean-Stark水分离器回流24小时。蒸发溶剂。蒸馏提纯残余物(0.5mmHg下的沸点75℃)。产物8.1g中间体33(72％)。
实施例A4.c中间体34的制备 反应在氮气气氛下进行。在-78℃搅拌下将n-BuLi(0.014mol)滴加到中间体33(根据A4.a制备)(0.0125mol)和2，2，6，6-四甲基哌啶(0.0012mol)的无水THF(25ml)溶液中。在-10℃下搅拌混合物3小时。在-10℃下分批添加中间体32(根据A4.b制备)(0.0083mol)的无水THF(25ml)溶液。室温下搅拌反应混合物24小时，然后用NH4Cl(10％)终止反应，并分离有机层。用CH2Cl2萃取含水层。将混和的有机层脱水(Na2SO4)、过滤并蒸发溶剂。产物5.6g中间体34(100％)。
实施例A4.d中间体35的制备 将NaHCO3(0.015mol)和羟胺(0.0125mol)添加到中间体34(根据A4.c制备)(0.0083mol)的无水乙醇(50ml)溶液中。室温下搅拌反应混合物24小时。添加CH3Cl2，滤除固体并用CH2Cl2洗涤。蒸发溶剂。将残余物倒入CH2Cl2中并用10％的Na2CO3和用盐水洗涤。分离有机层，脱水(Na2SO4)、过滤并蒸发溶剂。通过硅胶短开柱色谱法(洗脱剂CH2Cl2/EtOAc/2-丙酮)对残渣提纯。收集所需馏分并蒸发溶剂。产物0.9g中间体35(24％)。
实施例A5.a化合物36的制备 将A(0.029mol)和中间体5(根据A1.e制备)(0.0058mol)在1，4-二噁烷(5ml)中的混合物在100℃下搅拌6小时。蒸发溶剂。通过硅胶短开柱色谱法(洗脱剂CH2Cl2/CH3OH 98/2-97/3)对残渣提纯。收集产物部分并蒸发溶剂。产物3.3g中间体36。
实施例A5.b化合物37的制备将三氟乙酸(11.7ml)滴加到中间体36(根据A5.f制备)(0.0071mol)的CHCl3(50ml)溶液中，并在±10℃下搅拌所得反应混合物3小时。冷却反应混合物，然后再用50％的NaOH碱化。萃取该混合物并蒸发萃取的溶剂。产物2.5g中间体37(定量产物；不再提纯地用于下一反应步骤)。
B、最终化合物的制备实施例B1.a化合物1的制备 将中间体5(根据A1.e制备)(0.0291mol)与1-(3-苯基-2-丙烯基)-哌嗪(0.0582mol)的混合物在100℃下加热2小时。用水洗涤粗反应混合物，并用CH2Cl2萃取。分离有机层并脱水(Na2SO4)，过滤并蒸发溶剂。通过硅胶短开柱色谱法(洗脱剂CH2Cl2/CH3OH 95/5)，并通过硅胶HPLC(洗脱剂CH2Cl2/CH3OH 80/20)提纯残余物。收集纯馏分并蒸发溶剂。通过手性柱色谱法经Chiralpak AD(洗脱剂C2H5OH/CH3CN 90/10)将该部分分离成其光学对映异构体。收集(B)-对映异构体部分并蒸发溶剂。将残余物溶解在甲醇中并转化成盐酸盐(1∶2)。过滤沉淀并干燥。产物2.47g化合物1。
实施例B1.b化合物2的制备 将中间体5(根据A1.e制备)(0.0044mol)与(3-苯基-2-丙烯基)-哌嗪(0.0087mol)的混合物在100℃下搅拌2小时。通过硅胶短开柱色谱法(洗脱剂CH2Cl2/CH3OH 95/5)，然后通过硅胶高压液相色谱法(洗脱剂CH2Cl2/CH3OH 96/4)对反应混合物提纯。收集纯馏分并蒸发溶剂。用二乙醚处理残余物(1.4g)，然后干燥。产物1.2g化合物2(60％)。
实施例B1.c化合物3的制备 将中间体6(0.00227mol)、(E)1-(2-甲基-3-苯基-2-丙烯基)哌嗪(0.00273mol)和NaHCO3(0.00455mol)在二噁烷(30ml)中的混合物搅拌并回流48小时。蒸发溶剂。将残余物溶解在CH2Cl2中。用水洗涤有机溶液，脱水(MgSO4)，过滤并蒸发溶剂。通过硅胶短开柱色谱法(洗脱剂CH2Cl2/(CH3OH/NH3)99/1)，然后通过HPLC(洗脱剂CH2Cl2/CH3OH 99.5/0.5-98/2)提纯残余物。收集所需馏分并蒸发溶剂。产物0.17g化合物3。
实施例B1.d化合物4的制备将中间体8(根据A1.h制备)(0.0058mol)与 (0.0116mol)在二噁烷(10ml)中的混合物搅拌并回流8小时，然后在室温下搅拌一夜，然后搅拌回流18小时。用水处理混合物并用CH2Cl2萃取。蒸发分离出的有机层的溶剂。通过硅胶短开柱色谱法(洗脱剂CH2Cl2/MeOH 97/3)提纯残余物。收集所需馏分并蒸发溶剂。用二乙醚处理残余物然后干燥。产物0.9g化合物4(33％)。
实施例B1.e化合物5的制备 将中间体10(根据A1.i制备)(0.0029mol)与 (0.0058mol)、AcOH(0.48g)和(AcO)3BHNa(0.4g)在1，2-二氯乙烷(20ml)中的混合物搅拌并回流一夜。用水处理混合物并萃取。蒸发分离出的有机层的溶剂。通过硅胶短开柱色谱法(洗脱剂CH2Cl2/MeOH 97/3)提纯残余物。收集所需馏分并蒸发溶剂。用二乙醚处理残余物然后干燥。产物1.07g化合物5(82％)。
实施例B1.f化合物6的制备将化合物3(根据实施例B1.c制备)(0.00020mol)、乙酰氯(0.00024mol)和Et3N(0.00061mol)在氯仿(10ml)中的混合物在室温下搅拌2小时。添加水并用CH2Cl2萃取该混合物。将分离的有机层脱水(MgSO4)、过滤并真空蒸发溶剂。通过Chromatotron上的CC-TLC(洗脱剂CH2Cl2/CH3OH 97/3；然后99/1)提纯残余物。收集所需馏分并蒸发溶剂。产物0.022g化合物6。
实施例B1.g化合物7的制备 化合物8的制备 分离化合物2(根据B1.b制备)(0.0022mol)并通过手性柱色谱法经Chiralpak AD(洗脱剂C2H5OH/CH3CN 90/10)提纯成其光学对映异构体。收集这两部分并蒸发其溶剂。产物±1.5g的馏分1(LCI纯度＞99.5％)和±1.5g的馏分2(LCI纯度＞99.5％)。馏分1通过用己烷处理并搅拌一夜而结晶。滤出沉淀物并干燥。产物1.08g化合物7(润滑脂固体)。馏分2通过用EtOAc处理并搅拌一夜而结晶。滤出沉淀物并干燥。产物0.54g化合物8(润滑脂固体)。
实施例B2.a化合物9的制备 将中间体24(根据A2.e制备)(0.0022mol)、1-(2-萘甲基)哌嗪(0.0044mol)和KI(催化用量)在1，4-二噁烷(2.5ml)中的混合物搅拌并回流一夜。用水洗涤反应混合物并用CH2Cl2萃取该混合物。通过硅胶短开柱色谱法(洗脱剂CH2Cl2/CH3OH 98/2)，然后通过HPLC(洗脱剂CH2Cl2/(CH3OH/NH3)96/4)提纯残余物。收集纯馏分并蒸发溶剂。用DIPE处理残余物，过滤并干燥。产物0.3g化合物9(30％)。
实施例B2.b化合物10的制备 反应在氮气气氛下进行。将化合物9(根据B2.a制备)(0.0012mol)的无水THF(3ml)溶液和18-冠-6(催化用量)缓慢添加到NaH，60％(0.0018mol)的无水THF(2ml)溶液中。在室温下搅拌反应混合物30分钟。滴加乙酰氯(0.0013mol)并在室温下搅拌反应混合物3小时。用含水NH4Cl处理并用CH2Cl2萃取该反应混合物。将分离的有机层脱水、过滤并蒸发溶剂。通过硅胶短开柱色谱法(洗脱剂CH2Cl2/CH3OH 98/2)，然后通过HPLC(洗脱剂CH2Cl2/(CH3OH/NH3)98/2)提纯残余物。收集纯馏分并蒸发溶剂。产物0.26g化合物10(52％)。
实施例B3.a化合物11的制备 将中间体31(根据A3.g制备)(0.0045mol)、(E)-(3-氯-2-甲基-1-丙烯基)-苯(0.0037mol)和K2CO3(0.0037mol)在DMF(15ml)中的混合物在70℃下搅拌2小时。用水洗涤混合物然后用CH2Cl2萃取。分离有机层，脱水、过滤并蒸发溶剂。通过硅胶短开柱色谱法(洗脱剂CH2Cl2/CH3OH 98/2)提纯残余物。收集所需馏分并蒸发溶剂。再通过HPLC(洗脱剂CH2Cl2/(CH3OH/NH3)98/2)提纯残余物。收集纯馏分并蒸发溶剂。用DIPE处理残余物。过滤沉淀物并干燥。产物0.34g化合物11(20％)。
实施例B3.b化合物12的制备 化合物13的制备 通过高压液相色谱法经Chiralcel OJ(洗脱剂己烷/MeOH/EtOH20/24/56)提纯化合物11(根据B3.a制备)(0.00605mol)。收集所需馏分并蒸发溶剂。产物馏分A和B。馏分A通过高压液相色谱法经RP BDS C18(洗脱剂(0.5％的NH4OAc水溶液/CH3CN(90/10))/MeOH70/30)提纯。收集纯馏分并蒸发有机溶剂。用CH2Cl2萃取含水层。将分离的有机层脱水(MgSO4)，过滤并蒸发溶剂。在己烷中搅拌残余物并滤除沉淀。产物0.69g化合物12。馏分B通过高压液相色谱法经RP BDS C18(洗脱剂(0.5％的NH4OAc溶液/CH3CN(90/10))/MeOH70/30)提纯。收集纯馏分并蒸发有机溶剂。用CH2Cl2萃取含水层。将分离的有机层脱水(MgSO4)，过滤并蒸发溶剂。在己烷中搅拌残余物并滤除沉淀。产物0.67g化合物13。
实施例4化合物14的制备 反应用Quest 210合成器(Argonaut Technologies，San Carlos，USA)以固体相进行。将N，N-二异丙基乙胺(0.0036mol)添加到 (0.0006mol)在乙腈(4ml)中的悬浮液中。加入1-(2-氯苯基甲基)哌嗪(0.0012mol)，并在80℃下搅拌所得反应混合物2 0小时。然后过滤每个反应容器并蒸发滤液。用HPLC提纯残余物。收集纯馏分并蒸发溶剂。产物0.102g化合物14。
实施例B5.a化合物15的制备 将中间体7(根据A1.g制备)(0.0036mol)、2-(溴甲基)萘(0.0055mol)和K2CO3(0.0055mol)在MIK(15ml)中的混合物在100℃下搅拌±24小时。用水洗涤粗反应混合物，然后用CH2Cl2萃取。将分离的有机层脱水(Na2SO4)，过滤并蒸发溶剂。通过硅胶高压液相色谱法(2次)((I)洗脱剂CH2Cl2/CH3OH 95/5；(II)洗脱剂CH2Cl2/(CH3OH/NH3)98/2)提纯残余物。收集纯馏分并蒸发溶剂。产物0.2g化合物15(11％)。
实施例B5.b化合物16的制备
化合物17的制备 通过柱色谱法(洗脱剂己烷/C2H5OH梯度30/70-0/100；柱CHIRALPAK AD 1000埃20μm DIACEL)将化合物15(根据B5.a制备)(0.0106mol)分离成其对映异构体。收集两种纯馏分并蒸发其溶剂。将残余物溶解在CH3OH中并转化成盐酸盐(1∶2)。滤除沉淀物并干燥。
产物2.08g化合物16(36％)和2.19g化合物17(38％)。
实施例B6化合物18的制备 将中间体7(根据A1.g制备)(0.0045mol)、2-甲基-3-(3-噻吩基)-2-丙烯醛(0.00675mol)、NaBH(OAc)3(0.00675mol)和HOAc(2滴)在1，2-二氯乙烷(30ml)中的混合物在室温下搅拌一夜。添加饱和NH4Cl水溶液并用CH2Cl2萃取该混合物。将分离出的有机层脱水(MgSO4)、过滤并在真空下蒸发溶剂。通过硅胶闪蒸柱色谱法(洗脱剂CH2Cl2/(CH3OH/NH3)97/3)，然后通过HPLC(洗脱剂CH2Cl2/(CH3OH/NH3)99/1-98/2)提纯残余物。收集产物馏分并蒸发溶剂。
产物0.965g化合物18(46％；还含有3％的(Z)异构体！)。
实施例B7化合物19的制备 将中间体10(根据A1.j制备)(0.003mol)、4-氯苯甲醛(0.0045mol)和(AcO)3BHNa(0.0045mol)在1，2-二氯乙烷(30ml)中的混合物在室温下搅拌并回流2小时。添加饱和NH4Cl水溶液并用CH2Cl2萃取该混合物。将分离出的有机层脱水(MgSO4)、过滤并在真空下蒸发溶剂。通过硅胶短开柱色谱法(洗脱剂CH2Cl2/(MeOH/NH3)97/3)提纯残余物。收集所需馏分并蒸发溶剂。从DIPE沉淀出残余物。产物1.180g化合物19(57％)。
实施例B8化合物20的制备 将 (0.00036mol)、2-甲基苯甲醛(0.00108mol)和NaOCH3的30％CH3OH溶液(0.00108mol)在无水CH3OH(8ml)中的混合物在65℃下搅拌16小时(反应用Quest 210合成器(Argonaut Technologies，San Carlos，USA)以固体相进行)。过滤混合物并用HPLC(洗脱剂CH2Cl2/(CH3OH/NH3)98/2)提纯滤液。收集所需馏分并蒸发溶剂。产物0.032g化合物20。
实施例B9化合物21的制备 反应在氮气气氛下进行。将LiAlH4，1M/THF(0.8ml)溶液在-20℃下搅拌。一次性加入AlCl3(0.0009mol)。将所得溶液在-20℃下搅拌10分钟。滴加中间体12(根据A1.1制备)(0.0008mol)的无水THF(5ml)溶液，将所得反应混合物在-20℃下搅拌1小时。然后小心加入饱和NH4Cl水溶液。用水洗涤反应混合物，然后用CH2Cl2萃取。将分离出的有机层脱水(Na2SO4)、过滤并蒸发溶剂。用醚处理残余物。通过CC-TLC Chromatotron(洗脱剂CH2Cl2/CH3OH 97/3)提纯残余物(0.13g)。收集纯馏分并蒸发溶剂。产物0.09g化合物21(30％)。
实施例B10化合物22的制备 反应在N2气流下进行。在室温下搅拌中间体13(根据A1.m制备)(0.001mol)在无水CH3OH(20ml)中的混合物。添加NaOCH3的30％CH3OH溶液(0.002mol)。加入1，2-二氢化茚-5-甲醛(0.002mol)，并将所得反应混合物搅拌回流16小时。将反应混合物冷却到室温。加入20％的NH4Cl，并用CH2Cl2萃取该混合物。用水以及盐水洗涤分离的有机层，脱水(Na2SO4)、过滤并减压蒸发溶剂。通过短开柱色谱法以及CC-TLC法(洗脱剂CH2Cl2/CH3OH 98/2)提纯残余物。收集产物馏分并蒸发溶剂。产物0.035g化合物22(7.2％，浅棕色固体)。
实施例B11化合物23的制备 将中间体15(根据A1.o制备)(0.00136mol)、2-(三甲基甲锡烷基)吡啶(0.0027mol)和Pd(PPh3)4(0.00013mol)在甲苯(20ml)中的混合物加热到100℃。搅拌反应混合物16小时并冷却到室温。加入水并用CH2Cl2萃取该混合物。收集分离的有机层，用水以及盐水洗涤，脱水(Na2SO4)并减压蒸发溶剂。通过硅胶短开柱色谱法(洗脱剂CH2Cl2/MeOH 98/2)提纯残余物。收集纯馏分并蒸发溶剂。将所得残余物通过CC-TLC在Chromatotron(洗脱剂CH2Cl2/MeOH 98/2)提纯。收集纯馏分并蒸发溶剂。产物0.044g化合物23(浅棕色固体，7％)。
实施例B12化合物24的制备 反应在N2气氛下进行。将n-BuLi，2.5M/己烷(0.0062mol)滴加到搅拌的(对氟苄基)三苯基氯化(0.0062mol)的THF(20ml)溶液中。搅拌混合物15分钟。滴加中间体11(根据A1.k制备)(0.00514mol)的THF(20ml)溶液。在50℃下搅拌反应混合物16小时。加入水并用Et2O萃取该混合物。将分离出的有机层脱水(MgSO4)、过滤并在真空下蒸发溶剂。通过硅胶短开柱色谱法(洗脱剂CH2Cl2/CH3OH 97/3)，然后通过HPLC(洗脱剂CH2Cl2/(CH3OH/NH3)99/1)提纯残余物，以分离(E)/(Z)异构体。收集两种产物馏分并蒸发它们的溶剂。产物0.651g化合物24(26％，(E))。
实施例B13化合物25的制备 将树脂 (0.0016mol；1.5mmol/g)悬浮在THF中。加入1.6M的BuLi(0.0015mol)并搅拌混合物15分钟。过滤混合物并用无水THF(3×)洗涤过滤的残余物(树脂)。将树脂悬浮在THF(5ml)中。加入中间体19(根据A1.s制备)(0.0004mol)并在100℃下搅拌反应混合物一夜。将混合物冷却、过滤并真空蒸发滤液。通过制备性HPLC(洗脱剂CH2Cl2/(CH3OH/NH3)97/3)提纯残余物。收集产物馏分并蒸发溶剂。产物0.168g化合物25。
实施例B14化合物26的制备将中间体16(根据A1.p制备)(0.0025mol)、苯胺(0.0028mol)和NaBH4(0.0028mol)在HOAc(50ml)中的混合物在室温下搅拌2小时。加入NH4OH水溶液。用CH2Cl2萃取该混合物。将分离的有机层脱水(MgSO4)、过滤并在真空下蒸发溶剂。通过硅胶短开柱色谱法(洗脱剂CH2Cl2/(CH3OH/NH3)99/1)，然后通过硅胶闪蒸柱色谱法(洗脱剂CH2Cl2/(CH3OH/NH3)98/2)提纯残余物。收集产物馏分并蒸发溶剂。产物0.181g化合物26(15％)。
实施例B15化合物27的制备 将 (0.0018mol)在N2气氛下滴加到中间体17(根据A1.q制备)(0.0012mol)、3-氟苯酚(0.0018mol)和PPh3，pol.(0.0024mol)的无水THF(10ml)溶液中。在室温下搅拌反应混合物一夜。过滤混合物，用CH2Cl2和CH3OH洗涤，蒸发溶剂。通过硅胶短开柱色谱法(洗脱剂CH2Cl2/EtOAc 2/1和CH2Cl2/CH3OH 96/4)，然后通过硅胶闪蒸柱色谱法(洗脱剂CH2Cl2/CH3OH 97/3)提纯残余物。收集产物馏分并蒸发溶剂。产物0.29g化合物27(50％)。
实施例B16化合物28的制备
将NaClO(4％)(0.005mol)加入中间体35(根据A4.d制备)(0.002mol)的CH2Cl2(10ml)溶液中。在室温下搅拌反应混合物4小时。加入Et3N(0.004mol)并在室温下搅拌反应混合物24小时。分离有机层，用Na2SO3(10％)洗涤，脱水(Na2SO4)、过滤并蒸发溶剂。通过硅胶短开柱色谱法(洗脱剂EtOAc和CH2Cl2/CH3OH 95/5)提纯残余物。收集所需馏分并蒸发溶剂。将残余物倒入二乙醚中，然后通过dicalite过滤并蒸发滤液。将残余物溶解在二乙醚中并转化成盐酸盐(1∶2)。过滤沉淀，用2-丙酮和二乙醚洗涤，并脱水。产物0.15g化合物28(15％)。
实施例B17化合物29的制备 将中间体37(根据A5.g制备)(0.006mol)和2-(溴甲基)萘(0.003mol)在二噁烷(40ml)中的混合物在100℃下搅拌6小时，然后在室温下搅拌一夜。用10％的K2CO3水溶液处理反应混合物，然后用CH2Cl2萃取。蒸发分离的有机层。通过硅胶短开柱色谱法(洗脱剂CH2Cl2/CH3OH 95/5和90/10和CH2Cl2/(CH3OH/NH3)95/5)提纯残余物。收集产物馏分并蒸发溶剂。用二乙醚处理残余物(1.49g)，然后干燥。产物0.8g化合物29(53％)。
下表(表1-5)中给出了已根据以上任何一个实施例制备的许多化合物。所有化合物都测试了其药理活性。
表1











表2A

表2B
表2C
表3A

表3B
表3C 表4
表5 C、药理学实施例实施例C1对α2-肾上腺素能受体亚型和对5-HT转运蛋白的结合性试验一般说明通式(I)化合物与hα2-受体和h5-HT转运蛋白的相互作用在体外放射性配位体结合性试验中评定。一般来说，对特定受体或转运蛋白具有高结合性亲和力的低浓度放射性配位体，用在特定受体或转运蛋白中富含的组织制剂的试样，或用在缓冲介质中表达了克隆的人受体的细胞制剂培养。在培养期间，放射性配位体与受体或转运蛋白结合。当这种结合达到平衡时，将结合了放射性活性的受体与未结合放射性活性的受体分开，并对结合了活性的受体或转运蛋白计数。测试化合物与受体的相互作用在竞争性结合试验中评估。将各种浓度的测试化合物添加到含有受体制剂或转运蛋白制剂和放射性配位体的培养混合物中。与其结合亲和力和其浓度成比例的测试化合物抑制了放射性配位体的结合。用于hα2A、hα2B和hα2C受体结合性的放射性配位体为[3H]-raulwolscine，用于h5-HT转运蛋白的放射性配体是[3H]paroxetine。
细胞培养与膜制剂在Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium(DMEM)/Nutrient混合物Ham’s F12(比例1∶1)(Gibco，Gent-Belgium)中培养与人肾上腺素能的α2A、α2B或α2C受体cDNA稳定的转染的CHO细胞，其中所述培养基以10％热失活的胎牛血清(Life Technologies，Merelbeke-Belgium)和抗生素(100IU/ml青霉素G、100μg/ml硫酸链霉素、110μg/ml丙酮酸和100μg/ml L-谷氨酰胺)为补充。在收集的前一天，用5mM丁酸钠诱发细胞。达到80-90％融合时，在不含Ca2+和Mg2+的磷酸缓冲盐水中刮下细胞，并以1500×g离心收集10分钟。用Ultraturrax均质器将细胞在Tris-HCl 50mM中均质化，并以23500×g离心10分钟。丸剂经再悬浮和再均质化以洗涤一次，并将最终的丸剂再悬浮在Tris-HCl中，分成每份1ml并在-70℃下储存。
α2-肾上腺素能受体亚型的结合性试验将膜解冻，并在培养缓冲液(N-甘氨酰甘氨酸25mM，pH8.0)中再均质化。在500μl的总容积中，用带有或不带有竞争剂的[3H]raulwolscine(NET-722)(New England Nuclear，USA)(1nM最终浓度)中在25℃下培养2-10μg蛋白质60分钟，然后用Filtermate 196收集器(Packard，Meriden，CT)经GF/B滤纸快速过滤。用冰冷的洗涤缓冲剂(Tris-HCl，50mM，pH7.4)彻底洗涤滤纸。与滤纸结合的放射性活度在Topcount(Packard，Meriden，CT)中通过闪烁计数器确定，结果以每分钟的计数(cpm)表示。在1μM的oxymetazoline(对于hα2A受体和hα2B受体)存在下，和在1μM的spiroxatrine(对于hα2C受体)存在下测定非特意性结合。
对于5-HT转运蛋白的结合性试验将人血小板膜(Oceanix Biosciences Corporation，Hanover，MD，USA)解冻，在缓冲剂(Tris-HCl 50mM，120mMNaCl和5mM KCl)中稀释并用Ultraturrax均质器快速(最多3秒)均质化。在250μl的总容积中，用带有或不带有竞争剂的[3H]paroxetine(NET-869)(NewEngland Nuclear，USA)(0.5nM最终浓度)在25℃下培养50-100μg蛋白质60分钟。用Filtermate 196收集器(Packard，Meriden，CT)，通过用0.1％聚乙烯胺预润湿的GF/B滤纸快速过滤培养混合物，以中止培养。用冰冷的缓冲剂彻底洗涤滤纸，并在Topcount液体闪烁计数器(Packard，Meriden，CT)中计量滤纸上的放射性。数据用cpm表示。用丙咪嗪(在1μM的最终浓度下)确定非特意性结合。
数据分析与结果存在化合物时的试验数据以不存在测试化合物时测量的总结合性的百分比计算。自动生成以总结合性的百分比与测试化合物的浓度对数值的关系绘制的抑制性曲线，用非线性回归法拟合出S形抑制性曲线。测试化合物的pIC50值从单个曲线得出。
根据通式(I)的所有化合物在10-6M-10-9M的测试浓度范围内，至少在hα2A位置(但往往还在hα2B和hα2C位置)上，且同时在5-HT转运蛋白位置上，以浓度相关的方式产生50％(pIC50)以上的抑制性。对于选择数量的化合物，它涵盖了通式(I)的各种实施方式的绝大部分，其体外研究结果示于表6。
表6体外试验的某些结果(pIC50-值)(n.d.不确定)
实施例C2对于α2-肾上腺素能受体拮抗作用和对于5-羟色胺(5-HT)再摄取抑制活性的体内试验A、Medetomidine试验在饥饿了一夜的Wiga雄鼠(200-250g)上记录medetomidine(0.10mg/kg，i.v.)诱发的行为丧失的开始和结束。行为丧失强度记录为0＝行为正常，1＝轻度运动失调，2＝显著运动失调，3＝行为丧失期小于5分钟，4＝行为丧失期大于5分钟。在标准条件下，在medetomidine测试前1小时给药测试化合物或溶剂(s.c或p.o.)。药物诱发的拮抗作用的标准(1)行为丧失的拮抗作用持续＝0分钟(1.4％伪阳性对照；n＝74)；(2)运动失调的逆转得分＜2(0％伪阳性)。药物诱发的增强的标准行为丧失反射超过120分钟(0％伪阳性)。中枢作用性α2-肾上腺素能受体拮抗剂或行为刺激剂拮抗行为丧失；镇静剂化合物可导致作用延长。
进行以下观察行为丧失开始(分钟)、行为丧失结束(分钟)和行为丧失强度(0-4分)。分别在s.c.(溶液)或p.o.(悬浮液)给药后1小时进行观察。起始剂量为10mg/kg(参考文献Berger，U.V.，Grzanna，R.，Molliver，M.E.，Exp.Neurol.103，111-115(1989)；Fuller，R.W.，Perry，K.W.，Molloy，B.B.，Eur.J.Pharmacol.33，119-124(1975)和Lassen，B.J.，Psychopharmacol.57，151-153(1978))。
B、pCA试验采用雄Wiga鼠(体重200±20g)。给药试验化合物或溶剂1小时后，皮下注射pCA溶液(5mg/kg；10ml/kg)。pCA注射45分钟后，记录头部抽搐(HTW)的老鼠数，并从pCA给药45、50和55分钟开始，以3个连续5分钟的间隙对兴奋度(EXC)打分。由经训练的观察者根据强度等级打分0＝没有或疑似，1＝有，2＝显著，3＝最大。将15分钟观察时间内头部抽搐的次数累计，用于统计分析。对于其他现象，采用3个5分钟间隙的中间值。
在s.c.或p.o.给药后1小时进行标准观察。起始剂量通常为10mg/kg。先以起始剂量给药2个动物。当两个动物在至少一种观察中都表现出活性时，就认为该化合物是活性的，并以降低4倍的剂量重复试验。当仅在两个动物之一上发现活性时，就测试另外的动物。当在这个另外的动物中发现活性时，也认为该化合物是活性的，并以降低4倍的剂量重复试验。在所有其他情况下，在具体的时间-路径-剂量下，都认为该化合物是无活性的(参考文献Janssen，P.A.J.，Niemegeers，C.J.E.，Awouters，F.，Schellekens，K.H.L.，Megens，A.A.H.P.，Meert，T.F.J.，Pharmacol.Exp.Therap.244，685-693(1988))。
结果根据本发明的大量化合物在小于或等于10mg/kg的剂量下，在medetomidine试验和pCA试验中都表现出中枢活性(最小有效剂量)。
实施例C3[35S]GTPγS结合性试验取hα2A肾上腺素能受体表达的CHO细胞株的膜解冻，并在20mMHepes缓冲剂中再均质化。96孔板的每个孔中培养介质包括20mMHepes缓冲剂，pH7.5，1μM GDP，3mM MgCl2，100mM NaCl，0.25nM[35S]GTPγS和10μg蛋白质。在[35S]GTPγS前20分钟加入拮抗肌和参照激动剂去甲肾上腺素(3μM)。通过GF/B滤纸快速过滤结束培养(20分钟，37℃)，并通过液体闪烁计数器计量结合性。
结果在GTPγS结合性试验中评价的所有本发明化合物在高达10μM时，未表现出结合到hα2A受体的[35S]GTPγS明显增加。在该试验中评价的所有化合物能抑制去甲肾上腺素诱发的[35S]GTPγS结合性的增加，从而在该受体上表现出它们的拮抗特性。
权利要求
1.根据通式(I)化合物 其药物上可接受的酸或碱加成盐，其立体化学异构体及其N-氧化物，其中X 为CH2、N-R7、S或O；R7选自氢、烷基、苯基、苯烷基、烷羰基、烷氧基羰基和一烷氨基羰基和二烷氨基羰基，苯基和烷基非必须地用一个或多个卤素原子取代；R1和R2各自独立地选自氢、羟基、氰基、卤素、OSO2H、OSO2CH3、苯基、苯烷基、烷氧基、烷氧基烷氧基、烷氧基烷氧基烷氧基、四氢呋喃基氧基、烷羰基氧基、烷基硫代基、烷氧基烷羰基氧基、吡啶基羰基氧基、烷羰基氧基烷氧基、烷氧基羰氧基、链烯基氧基、链烯基羰氧基和一烷氨基烷氧基和二烷氨基烷氧基，烷基和芳基非必须地用一个或多个羟基或卤素原子或氨基取代；或R1和R2可一起形成选自-CH2-CH2-O-、-O-CH2-CH2-、-O-CH2-O-、-CH2-O-CH2-和-O-CH2-CH2-O-的二价基-R1-R2-；a和b是不对称中心；(CH2)m是m个碳原子的直烃基链，m为1-4的整数；Pir 为根据通式(IIa)、(IIb)或(IIc)的任何一个的非必须地取代的基团 其中每个R8相互独立地选自氢、羟基、氨基、硝基、氰基、卤素和烷基；n 为1-5的整数；R9选自氢、烷基和甲酰基；和R3代表与非必须地取代的和部分或全部氢化的1-6个原子长的烃基链一起的非必须地取代的芳族碳环的或杂环的环体系，其中所述环体系与Pir基连接且可含有一个或多个选自O、N和S的杂原子。
2.根据权利要求1的化合物，其特征在于R3为根据通式(III)任何一个基团 其中d 为单键Z为选自-CH2-、-C(＝O)-、-CH(OH)-、-C(＝N-OH)-、-CH(烷基)-、-O-、-S-、-S(＝O)、-NH-和-SH-的二价基；或d为双键而Z为式＝CH-或＝C(烷基)-的三价基；A 为5节或6节芳族碳环或杂环环，选自苯基、吡喃基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、噻吩基、异噻唑基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、呋喃基、噁二唑基和异噁唑基；p 为0-4的整数；q 为0-7的整数；R4选自氢、烷基、苯基、联苯基、萘基、卤素和氰基，其中烷基和芳基非必须的用一个或多个羟基或卤素原子或氨基取代；R5等于R4；或R4和R5可一起形成选自-CH2-、＝CH-、-CH2-CH2-、-CH＝CH-、-O-、-NH-、＝N-、-S-、-CH2N(烷基)-、-CH＝N-、-CH2O-和-OCH2-的二价基-R4-R5-；每个R6各自独立地选自氢、羟基、氨基、硝基、氰基、卤素、羧基、烷基、苯基、烷氧基、苯氧基、烷羰基氧基、烷氧基羰基、烷基硫代基、一烷氨基和二烷氨基、烷羰基氨基、一烷氨基羰基和二烷氨基羰基、一烷氨基羰基氧基和二烷氨基羰基氧基、一烷氨基烷氧基和二烷氨基烷氧基，烷基和芳基非必须地用一个或多个羟基或卤素原子或氨基取代；或两个相邻基R6可一起形成选自-CH2-CH2-O-、-O-CH2-CH2-、-O-CH2-C(＝O)-、-O-CH2-O-、-CH2-O-CH2-、-O-CH2-CH2-O-、-CH＝CH-CH＝CH-、-CH＝CH-CH＝N-、-CH＝CH-N＝CH-、-CH＝N-CH＝CH-、-N＝CH-CH＝CH-、-CH2-CH2-CH2-、-CH2-CH2-C(＝O)-和-CH2-CH2-CH2-CH2-的二价基-R6-R6-；和R10选自氢、烷基、苯烷基和苯基。
3.根据权利要求2的化合物，其特征在于X＝O或NH；R1和R2均为烷氧基；m＝1；Pir为根据通式(IIa)的基，其中R8为氢且n＝4；R3为根据通式(IIIb)的基，其中Z为＝CH-，d为双键，A为苯环，R4为烷基和R10为氢。
4.用作药品的根据权利要求1到3任何一项的化合物。
5.在活体内降解产生根据权利要求1到3任何一项的化合物的化合物。
6.包含药物可接受的载体和作为活性成分的治疗有效量的根据权利要求1到3任何一项的化合物或根据权利要求5的化合物的药物组合物。
7.根据权利要求6的药物组合物的制备方法，包括将根据权利要求1到3任何一项的化合物或根据权利要求5的化合物与药物可接受的载体混和。
8.根据权利要求1到3任何一项的化合物或根据权利要求5的化合物在制造治疗抑郁症、焦虑症和体重异常的药物中的应用。
9.包含药物可接受的载体和作为活性成分的治用有效量的根据权利要求1到3任何一项的化合物或根据权利要求5的化合物，以及选自抗抑郁药、抗焦虑药和精神抑制药的一种或多种其他化合物的药物组合物。
10.根据权利要求9的药物组合物在制造在抑郁症、焦虑症和体重异常的治疗中提高疗效和/或开始作用的药物中的用途。
11.根据权利要求1到3任何一项的化合物或根据权利要求5的化合物在制造治疗抑郁症、焦虑症和体重异常的药物上的用途，所述治疗包括把权利要求1到3任何一项的化合物或根据权利要求5的化合物或选自抗抑郁药、抗焦虑药和精神抑制药的一种或多种其他化合物同时或依次给药。
12.选自抗抑郁药、抗焦虑药和精神抑制药的一种或多种化合物在制造治疗抑郁症、焦虑症和体重异常的药物上的用途，所述治疗包括把选自抗抑郁药、抗焦虑药和精神抑制药的一种或多种化合物，和根据权利要求1到3任何一项的化合物或根据权利要求5的化合物同时或依次给药。
13.根据权利要求9的药物组合物在抑郁症、焦虑症和体重异常的治疗中提高疗效和/或开始作用上的用途。
14.根据权利要求9的药物组合物的制造方法，包括将权利要求1到3任何一项的化合物或根据权利要求5的化合物与选自抗抑郁药、抗焦虑药和精神抑制药的化合物和药物可接受的载体混和。
15.根据权利要求1到3任何一项的化合物的制备方法，其特征在于根据通式(IV)的化合物与根据通式(V)或通式(VII)的化合物反应。
16.根据通式(IV)的化合物 其中R1、R2、X和m的定义与通式(I)相同且L为离去基，所述化合物不包括3，3a，4，5-四氢萘并[1，2-c]异噁唑-3-乙酸。
17.根据通式(VIII)的化合物 其中R1、R2、X、m、R8和n的定义与通式(I)相同。
18.根据权利要求16的化合物，其特征在于L选自OSO2C6H4(CH3)、OSO2CH3、Cl、Br和I。
全文摘要
本发明涉及根据通式(I)的取代异噁唑啉衍生物其中X＝CH
文档编号A61K31/454GK1492871SQ02805243
公开日2004年4月28日 申请日期2002年2月13日 优先权日2001年2月21日
发明者J·I·安德雷斯-吉尔, F·J·费尔南德斯-加德, M·J·阿尔卡扎-瓦卡, J·M·茨德-努内斯, J·帕斯托尔-费尔南德斯, A·A·H·P·梅根斯, G·I·C·M·海伦, X·J·M·朗洛伊斯, M·H·M·贝克, T·H·W·斯特克勒, C M 海伦, H P 梅根斯, J I 安德雷斯-吉尔, M 朗洛伊斯, M 贝克, W 斯特克勒, 茨德-努内斯, 费尔南德斯-加德, 阿尔卡扎-瓦卡, 雇卸 费尔南德斯 申请人:詹森药业有限公司