专利名称：大发表提取物在制药中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种天然植物提取物在制药领域中的新用途。
背景技术：
大发表为豆科植物三棱枝杭子梢，拉丁名Campylo-tropis trigonoclada[Franch]A.K.schindl.，俗名亦称为“松漏争”。大发表在自然界中至少分布在中国云南省、贵州省、四川省，为多年生小灌木。为保护资源，一般以地上部份入药。在中国专利申请号为96121261.6，名称为“治疗前列腺疾病的康舒药物”的专利申请公开了一种治疗前列腺疾病的药物，它是以大发表(学名为豆科植物三棱枝菥子梢)为主要原料，按照下述方法制成的单方或复方制剂；将药材大发表粉碎，加入含醇量为0-80％的乙醇溶液，用加热回流的方法提取，提取温度为40℃以上，提取时间为1-3小时，提取液经过滤，减压浓缩至相对密度1.02-1.1(45-50℃)的浸膏，喷雾干燥，制得浸膏粉，还可添加辅料制成胶囊、颗粒或片剂，用于治疗前列腺增生和前列腺炎症。
发明内容
本发明的目的在于提供植物大发表的提取物在制药中的新的应用。
本发明涉及大发表提取物作为制备改善排尿功能的药物中的应用。
本发明涉及大发表提取物作为制备治疗排尿不畅的药物中的应用。
本发明涉及大发表提取物作为制备治疗轻度尿梗阻的药物中的应用。
本发明涉及大发表提取物作为制备治疗尿潴留的药物中的应用。
本发明涉及大发表提取物作为制备由于损伤、致炎中枢神经或周围神经造成的排尿困难的药物中的应用。
本发明涉及大发表提取物作为制备麻醉、手术后所造成的排尿困难的药物中的应用。
本发明涉及大发表提取物作为制备产后排尿功能障碍的药物中的应用。
上述的由于损伤、致炎中枢神经或周围神经造成排尿困难主要是指因前列腺增生、前列腺炎、尿路结石、膀胱内血块、尿道狭窄所造成的排尿困难。
本发明所述的大发表提取物是大发表的水提物或者醇提物，可以通过现有技术获得。
本发明所述的大发表提取物，每日服用量相当于原生药材10-500g均可，优选30至100g。由于其安全性良好，还可以再增加剂量，当然也可以长期服用。服用方式包括口服、血管内注射、血管外注射、透皮吸收、雾化吸入和直肠吸收，如果是长期用药，以口服为佳。本发明所述的大发表提取物可以制备成分散片、片剂、胶囊剂、口服液等多种口服剂型，也可以制备成注射液、静脉注射液、气雾剂、贴膏剂等剂型。
本发明对己知植物大发表提取物发掘了新的医疗用途，开拓了一个新的应用领域。本发明的大发表提取物可单独作为药用有效成分，也可与其它无排斥作用的组分配伍，制成相应剂型的药剂。
为了更好地理解本发明的实质，下面将用大发表提取物的药理试验及结果来说明其在制药领域中的新用途。
一、实验药物的制备药材大发表粉碎后，用0-80％的乙醇溶液提取(当乙醇含量为零时，即为用水提取)，采用热回流1-3小时或冷浸24-48小时的方法，提取2-3次，提取液减压浓缩至相对密度为1.02-1.10(45-50℃)浸膏，喷雾干燥或上大孔吸附树脂，经洗脱杂质后再用乙醇洗脱，然后浓缩干燥，制得实验药物。以下实验均采用经大孔吸附树脂富集有效成份后干燥得到的样品。
二、药理实验(一)大发表提取物对离体膀胱肌和尿道平滑肌的作用研究1、大发表提取物对离体大鼠膀胱平滑肌的收缩作用选取320-400g的成年雄性大鼠，脱颈椎处死后立即分离出膀胱制成10×2mm的条片，悬置于盛有25ml Kerb’s营养液的麦氏浴皿中，恒温36±1℃，负荷500mg；稳定30min，给药换液后休息十分钟；以0.1ml 0.0625％的Ach(终浓度相当于2.5μg/ml)收缩幅度为100％，分别给予大发表提取物200μg/ml、100μg/ml、50μg/ml、舍尼通400μg/ml及其它试药高特灵5-25μg/ml、竹林胺10μg/ml、津源灵10μg/ml。结果见表11大发表提取物对大鼠膀胱肌条的收缩作用
其它试药高特灵5-25μg/ml、竹林胺10μg/ml、津源灵10μg/ml(均为α-受体拮抗剂)未见明显收缩膀胱肌的作用。
2、大发表提取物对离体兔尿道平滑肌的舒张作用选用雄性日本大耳兔，棒击后脑处死后立即分离出尿道制成条片(10×2mm)，悬置于麦氏浴皿中，加入25ml Kerb’s营养液，恒温36±1℃，负荷500mg。稳定30min，加入NA 0.1ml(相当于10μg/ml)，至曲线平稳后，分别加入大发表提取物100μg/ml、50μg/ml、25μg/ml、舒列安(KS)200μg/ml、舍尼通100μg/ml及其它试药竹林胺10μg/ml。记录35分钟，观察药物对抗NA所致尿道收缩作用。以NA所致收缩作用为100％，计算各药舒张率。结果见表2表2大发表提取物对家兔离体尿道平滑肌的松驰作用
结果
(1)大发表提取物具有明显的收缩膀胱和松驰尿道的作用。作用强度优于植物花粉提取物舍尼通。
(2)α-受体拮抗剂竹林胺改善排尿功能主要通过松驰尿道平滑肌，对膀胱肌无收缩作用。
(二).大发表提取物对大鼠膀胱内压的影响3、大发表提取物对大鼠膀胱内压的影响一般对于膀胱排尿功能的研究往往采用测定动物膀胱内压和残尿量。该方法能够比较准确地反映体内膀胱肌收缩力和尿道括约肌张力。
SD雄性大鼠，20-23周龄[1]，提前一天灌胃给药，分别给予清洁水、大发表提取物0.5g/kg、0.25g/kg、0.125g/kg以及舍尼通70mg/kg，一日三次，第二天给药一次。竹林胺5mg/kg，一日一次，给药两天。末次给药后一小时腹腔注射乌拉坦(1.0g/kg)麻醉。
参考Keisvke Yokoi[2][3]和铃木孝宪等[4]的方法，在耻骨弓上部纵向切开，暴露膀胱。在膀胱底用线松松打一活结。膀胱顶部剪一小洞，插入一根直径为1.2mm的导管，导管通过血压传感器与生理记录仪相连；导管内扎入7号针头与蠕动泵相连，灌注速度为0.2ml/min。描记泵启动后的图形，至出现排尿反射，停止泵液。记录排尿时间、排尿阈值(开始排尿压力)、最大排尿压(排尿反射引起的一过性最大压力)、停尿压(排尿结束后压力)。排尿结束曲线走平后重复一次，记录排尿阈值、最大排尿压。计算激发压、最大膀胱容量。排尿结束后结扎膀胱底的线，剪下膀胱，重差法计算残尿量。
激发压＝最大排尿压-排尿阈值最大膀胱容量＝排尿时间×灌注速度实验结果见表3和表4表3大发表提取物对大鼠膀胱内压的影响(n＝8)单位mmHg
x±SD，t-test *P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001表4大发表提取物对大鼠最大膀胱容量和残尿量的影响(n＝8)单位克
x±SD，t-test *P＜0.05结果(1)大发表提取物各剂量组均可降低排尿阈值和最大排尿压，但可升高激发压，中、高剂量与正常组相比均有显著性差异(P＜0.05)，表明大发表提取物可减小排尿阻力，增加膀胱平滑肌的收缩力，增强排尿反射正反馈的形成，从而有利于尿排空。
(2)各受试药物均显著减少最大膀胱容量(P＜0.05)，大发表提取物中、高剂量最为明显。大发表提取物还能减少残尿量；大发表提取物中、高剂量与正常组相比有显著性差异(P＜0.05)。大发表提取物既可松弛膀胱颈平滑肌，又能增加膀胱逼尿肌的收缩(见离体实验部份)，因而可同时减小最大膀胱容量和残尿量。舍尼通作用较弱，而竹林胺主要是松弛膀胱颈平滑肌，它们对残尿量减少均不明显。
(3)植物花粉制剂舍尼通也可降低排尿阈值(P＞0.05)和最大排尿压(P＜0.05)，但抑制激发压(P＜0.05)，说明舍尼通主要降低排尿阻力，对排尿反射正反馈的形成有抑制作用。
(4)α-受体拮抗剂竹林胺显著降低排尿阈值和最大排尿压(P＜0.05)，也抑制激发压(P＞0.05)。α-受体拮抗剂的作用机制主要是通过松弛膀胱颈平滑肌。
(三)大发表提取物对尿梗阻的影响3、尿梗阻模型参考文献(Shinsuke Takechi.Nonbacterial prostatit is caused bypartial urethral obstruction in the rat.Urol Res(1999)27346-350)，2Kg±0.5Kg重量的单一性别的兔子，戊巴比妥钠(1mg/Kg)麻醉后将兔仰卧位固定于实验台上，在膀胱颈处套上可调式塑料套环，塑料套环内径为5mm。然后缝合腹腔，让其自然恢复。恢复期间分别给予清洁水、大发表0.5g/kg、0.25g/kg、0.125g/kg以及舍尼通70mg/kg，一日三次。竹林胺5mg/kg，一日一次。连续给药三天。三天后造成尿梗阻模型。末次给药后一小时腹腔注射乌拉坦(1.0g/kg)麻醉。
参考检测膀胱内压的方法，在耻骨弓上部纵向切开，暴露膀胱。在膀胱底用线松松打一活结。膀胱顶部剪一小洞，插入一根导管(直径2.0mm)，导管通过血压传感器与生理记录仪相连；导管内扎入8号针头与蠕动泵相连(灌注速度为2ml/min)。描记泵启动后的图形，至出现排尿反射，停止泵液。记录排尿时间、排尿阈值(开始排尿压力)、最大排尿压(排尿反射引起的一过性最大压力)、停尿压(排尿结束后压力)。排尿结束曲线走平后重复一次，记录排尿阈值、最大排尿压。计算激发压、最大膀胱容量。排尿结束后结扎膀胱底的线，剪下膀胱，重差法计算残尿量。
激发压＝最大排尿压-排尿阈值最大膀胱容量＝排尿时间×灌注速度实验结果见表5和表6表5大发表提取物对兔膀胱颈梗阻膀胱内压的影响(n＝8)单位mmHg
x±SD，t-test与模型对照组比*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001表6大发表提取物对兔膀胱颈梗阻膀胱容量和残尿量的影响(n＝8)单位克
x±SD，t-test与模型对照组比*P＜0.05大发表提取物能够有效增加膀胱收缩力，促进尿排空。通过增加最大排尿压，增强排尿反射(表现在激发压增加)，从而降低残尿量。
(四)大发表提取物对尿潴留的影响
5、尿潴留模型选择2.5-3.0Kg健康雌性家兔36只，随机分为三组，每组12只，分别为造模组、大发表提取物治疗组(提前三天给药，每日一次，每次0)、手术对照组。
造模方法从耳缘静脉注射3％戊巴比妥钠(1mg/Kg)，麻醉后将兔仰卧位固定于实验台上。无菌条件下剖腹，暴露膀胱及子宫，分离子宫，并在子宫颈处结扎，切除子宫和宫旁进入膀胱的部份神经组织，造成子宫切除术后尿潴留模型，在尿道近耻骨联合处剪开约2mm的小口，将导尿管插入膀胱，排空膀胱内尿液后以1ml/s的速度，每隔2min向膀胱内注37℃恒温生理盐水4ml，观察并记录排尿阈值、残尿量。解剖镜下分离盆神经节至膀胱的节后分支，用玻璃分针轻轻分离此神经长约1cm，记录时将神经轻轻挑起，置于直径为30mm的铂金丝电极上作单极引导，再用银针插入附近腹部肌肉作参考电极，记录盆神经放电频率。
表7三组家兔平均注水次数与膀胱内压力变化结果(KPa)
与造模组比较*P＜0.05，▲＜0.01表8排尿阈值和残余尿量比较(x±SD，ml)
与造模组比较*P＜0.05，▲＜0.01表9三组家兔盆神经平均放电频率比较(次/min)
与造模组比较*P＜0.05，▲＜0.01结果造模后动物进入膀胱的部分神经被切断，表现为排尿阈值上升，膀胱潴溜尿量增加，残尿量增加，盆神经放电频率下降，用大发表提取物治疗后，排尿阈值明显下降，残尿量降低，增加盆神经放电频率，潴溜尿量有一定下降。
(五)大发表提取物的安全性实验6、大发表提取物安全性实验安全性实验和临床用药制备方法均根据实施例二。
(1)大发表对大、小鼠的急性半数致死量(口服LD50)经口(po)给予大发表的急性半数致死量(LD50)及95％可信限值分别为(a)大鼠12.0543(10.0528-14.4542)g/kg(b)小鼠6.8591(5.8314-8.0679)g/kg(2)大发表提取物对大、小鼠的急性半数致死量(腹腔注射LD50)腹腔注射(ip)给予大发表的急性半数致死量(LD50)及95％可信限值分别为(a)大鼠0.397(0.3052-0.5165)g/kg(b)小鼠0.6495(0.4627-0.9118)g/kg(3)大发表对大鼠长期毒性试验SD大鼠连续六个月分别经口给予大发表2.50(高剂量)、1.25(中剂量)和0.63(低剂量)g/(kg·d)剂量，三个剂量组对各阶段的血液学、血液生化学指标均无明显影响。对各阶段的脏器重量及系数也无明显影响，大体观察和病理组织学检查也均未见任何因受试物引起的病理形态学和组织学改变，与对照组相同。在本试验剂量条件下，SD大鼠连续六个月经口给予相当人临床拟用剂量192、96、48倍的大发表，仅高、中剂量组大鼠在给药期间出现可逆性不规则流涎现象，未明显出现毒副反应和未明显显示中毒靶器官。无毒(影响)剂量不低于2.50g/(kg·d)。
(六)大发表提取物的临床应用7、临床应用我们选取发病率较高的前列腺增生、产后尿潴留孕妇、腹腔手术后尿潴留患者各30例进行临床验证。每日服用量相当于50g生药材。
(一)前列腺增生致排尿困难症状分级量化(1)夜尿次数正常 0-1次0分轻度 2次 1分中度 3-4次2分重度 5次以上 3分(2)排尿困难正常 无排尿困难 0分轻度 偶有 1分中度 时有 2分重度 经常有 3分(3)尿线情况正常 0分轻度 细而成线 1分中度 断续成线 2分重度 涓滴不成线 3分(4)尿道灼痛正常 无 0分轻度 偶有 1分中度 时有 2分重度 经常有 3分(5)少腹症状正常 无 0分轻度 满闷感 1分中度 胀满 2分重度 胀痛 3分国际前列腺症状评分(I-PSS)
(二)前列腺增生致排尿困难疗效评定标准(参照“中药新药的临床研究指导原则”制定)1、显效(1)I-PSS评分≤7，L指数≤1，或病情总分降低90％以上。
(2)前列腺体积缩小为原来的60％以下。残余尿量减少70％以上(3)最大尿流率≥18ml/s。
以上具备2项即可1、有效(1)I-PSS评分≤13，治疗前L指数为4-6者降低至2-3，或病情总分降低60％以上。
(2)前列腺体积缩小为原来的80％以下，残余尿量减少50％以上。
(3)最大尿流率≥12ml/s。
以上具备1项即可2、无效未达到有效标准30例前列腺增生患者临床结果
结果提示对前列腺增生患者有效率达到77％。提示大发表提取物对前列腺增生患者有较好治疗作用。
(三)尿潴留排尿困难症状分级量化(1)排尿困难正常无排尿困难 0分轻度偶有 1分中度时有 2分重度经常有 3分(2)尿线情况正常 0分轻度细而成线 1分中度断续成线 2分重度涓滴不成线 3分(3)少腹症状正常无 0分轻度满闷感 1分中度胀满 2分重度胀痛 3分膀胱功能分级评分
泌尿症状困扰评分(BS)
(四)尿潴留疗效评定标准(参照“中药新药的临床研究指导原则”制定)1、痊愈(1)I-PSS评分≤3，L指数≤1，或病情总分降低90％以上。
(2)残余尿量减少90％以上(3)最大尿流率≥24ml/s。
以上具备2项即可2、显效(1)I-PSS评分≤7，L指数≤1，或病情总分降低80％以上。
(2)残余尿量减少70％以上(3)最大尿流率≥18ml/s。
以上具备2项即可3、有效(1)I-PSS评分≤13，治疗前L指数为4-6者降低至2-3，或病情总分降低60％以上。
(2)前列腺体积缩小为原来的80％以下，残余尿量减少50％以上。
(3)最大尿流率≥12ml/s。
以上具备1项即可4、无效
未达到有效标准产后尿潴留孕妇、腹腔手术后尿潴留患者各30例临床验证结果
结果表明对产后尿潴留的有效率达到96％，对腹腔手术后尿潴留有效率达到87％。提示大发表提取物对以上两种疾病有较好治疗作用。
经过对比实验，大发表提取物比花粉制剂(如舍尼通)、化学药α-受体拮抗剂如高特灵、竹林胺、津源灵等具有更好的改善排尿功能的作用。
具体实施例方式
实施例1药材大发表粉碎后，用20-95.7％的乙醇溶液提取，优化的为40％-70％采用冷浸72小时的方法，提取3次，提取液减压浓缩至相对密度为1.02-1.10(45-50℃)浸膏，得粗提物，收率7.8％。可将大发表提取物加入淀粉及相应的辅料，混匀后制粒，压制成片剂。该方法的收率为5-8％，按日服用量折算为生药材50g的话，每日需服用2.5-4g。服用量较大。用于改善排尿功能、治疗排尿不畅。
实施例2也可以在实施例1述大发表提取物的基础上进一步精制，采用JKSD型大孔吸附树脂，与等重量大发表浸膏拌匀，上柱，先用3-5倍柱体积纯净水冲洗至无色，再用1-3倍柱体积5％乙醇稀溶液洗至无色。以上洗出液弃去不用，再用50％-99％乙醇洗脱，收集洗脱液。浓缩，干燥，研磨成粉状。可将大发表加入淀粉及相应的辅料，混匀后装入胶囊中制成胶囊剂。该方法的收率为0.8-1.2％，按日服用量折算为生药材50g的话，每日需服用0.4-0.6g。用于治疗轻度尿梗、尿潴留。
权利要求
1.大发表提取物作为制备改善排尿功能的药物中的应用。
2.大发表提取物作为制备治疗排尿不畅的药物中的应用。
3.大发表提取物作为制备治疗轻度尿梗阻的药物中的应用。
4.大发表提取物作为制备治疗尿潴留的药物中的应用。
5.大发表提取物作为制备由于损伤、致炎中枢神经或周围神经造成的排尿困难的药物中的应用。
6.大发表提取物作为制备麻醉、手术后所造成的排尿困难的药物中的应用。
7.大发表提取物作为制备产后排尿功能障碍的药物中的应用。
全文摘要
本发明涉及一种天然植物提取物在制药领域中的新用途。本发明涉及大发表提取物作为制备改善排尿功能的药物中的应用、作为制备治疗排尿不畅的药物中的应用、作为制备治疗轻度尿梗阻的药物中的应用、作为制备治疗尿潴留的药物中的应用、作为制备由于损伤、致炎中枢神经或周围神经造成的排尿困难的药物中的应用、作为制备麻醉、手术后所造成的排尿困难的药物中的应用、作为制备产后排尿功能障碍的药物中的应用。本发明对已知植物大发表提取物发掘了新的医疗用途，开拓了一个新的应用领域。本发明的大发表提取物配制成的药物为多种剂型，即可单独药用，也可与其它无排斥作用的组分配伍。
文档编号A61P25/00GK1853667SQ200510010760
公开日2006年11月1日 申请日期2005年4月21日 优先权日2005年4月21日
发明者唐书明, 冯有, 龙飞, 杨晓源, 杨存金 申请人:云南白药集团股份有限公司