新化合物及其应用的制作方法

专利名称：：新化合物及其应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及新的吲哚并喹喔啉衍生物，它们的制备方法以及它们的药物应用。尤其是，本发明涉及新的喷哚并喹喔啉衍生物及其在治疗病毒感染上的应用。发明
背景技术：
：^^周知，病毒是人和动物的许多疾病，有时是生命的疾病的病因。例如，疱疹病毒如1型单纯疱,SV-1)，2型单纯疱,SV-2)，巨细胞病毒(CMV)，EB病^(EBV)，7X痘带状疱疹病^(VZV)和6型人疱疹病^(HHV6)与许多常见病毒疾病是相关的。人CMV(HCMV)感染是终生的痛苦其可造成发病和死亡。与HCMV相关的病理包括小头畸形，肝脾肿大(heptosplenomegaly)，黄疸，脑炎，新生儿或宫内胎儿的感染，和免疫低下宿主的感染。由于几个原因，越来越多的人有感染HCMV的风险，目前估计在美国有80%的成人感染了HCMV。特另赐感的人群是那些免縣统减弱的人，如AIDS患者，感染HCMV可能导致视网膜炎，胃炎和肺炎。而且，HCMV诱发的肺炎或肝炎也是频发且严重的骨髓移植并发症。欧洲专利EP0238459涉及了取代吲卩朵并喹喔啉，其如下其中lM樣了氢或一个a个，，l-4个，相似的或不同的在14禾口/或7-10位上的取代基，其选自卤素，，Br，具有不多于4个碳原子的低级烃掛烷氧基，三氟甲基三氯甲基；X是-(CH2)n-R2基团，其中R2^^氮碱性残基如NH2、NHR4或NR5R6，其中R4、R5和R6^ll5jt也對氐级烷基或环^S且n是1"4的整数，R3代表氢、具有不多于4个碳原子的低级烷S/环烷基，和该化合物与酸和卤素加成的药学可接受加成产品，与碘，一氯化碘，或一溴化碘加成。但是，显然对于具有抗病毒功效的新药仍存在迫切的需求，尤其是针对疱疹病毒如HCMV，而本发明的目的在于提供能满足这种需求的化合物。发明辨，在本发明的第一方面提供了一种具有式(I)的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>其中R选自H、F、Cl、Br、CF3、C画C6烷氧基和OH;R2选自H和d-C6烃基；n是l-12;m是0或l;和Y选自CH2、NR3、(NR3R4yX、O和S;R3和R4^t^自H和C广C4烃基；禾口X"选自药学可接受的阴离子。根据另一方面，提供了制备具有式(i)的化合物的方法，是舰将式(n)的化与式On)的化合物在自喊溶剂混合物中反应，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>其中R1、R2、Y、m和n如上文式(I)中所定义；禾口L是离去基团。在本发明的另一方面提供了包括具有式(I)的化合物和至少一种药学可接受贝,効」的药物组合物。根据本发明的一个方面，该药物组合物是一种适于治疗病毒感染的抗病毒组合物。本发明的其它方面以及它们的实施方式如权禾腰求所定义。发明具体实施例方式在本发明的一个实施方式中，式(I)中的Ri选自H、F、Cl、Br、CF3、OCH3和OH。而且，在本发明的一个实施方式中，式(I)中的W选自H和CrQ驢，例如H和CVC3烷基，如H和CH3。式(I)中的平衡离子X—可以是任何适宜的药学可接受阴离子，如C1—，Bf，甲烷磺酉变盐，甲苯磺酸盐，乙酸盐，柠檬ll盐和马来酸盐。式(I)中的指数n可选自l-12之间的任意值，如2-10，或4-10，例如4-8;或l-6，例如l-3。用于制备本发明化合物的式(H)的化合物本身可按照EP0238459以及美国专利4,990,510的一臓导来制备，这些专禾嘟引A^文作为参考。式(m)的化合物，即L(CH^(YUCH2)nL，可i!31本领域技术人员公知的方&^成，m化学供应商处购买。式On)中的离去基团L可适当地先自如Cl、Br、甲烷磺酰基和甲苯磺酰基，尽管本领域技术人员知iK可考虑其它离去基团。所用的凝U体系应该是一种在所选的反应条件下反应物在其中是可溶的并且应该是如有利于反应生成所需的产品。作为一个例子，可选择一种或几种极性的非质子或质子線J，如乙腈、THF、甲醇、乙醇、异丙醇、醋酸乙酯以及醋酸甲酯。本领域技术人员熟知如何选择这类M淋系以及适宜的反应条件。本发明化合物用作抗病毒剂，因而在本发明的一个方面提供了一种含有式(I)的化合物和至少一种药学可接受赋形齐啲抗病毒药物组合物。在本发明的一个实施方式中，药物组合物用于病毒的治疗，病毒选自疱疹病毒，如1型单纯疱疹(HSV-1)，2型单纯疱疹(HSV-2)，巨细胞病寧CMV)，EB病^(EBV)，7X痘带状疱疹病寧VZV)和6型人^^:廣病^(HHV6)。在本发明的一个实施方式中，病毒是人类巨细胞病毒。药学可接受赋形剂可以是例如，介质，佐剂，载体或稀释剂，如本领域技术人员所公知的禾口Remington在TheScienceandPracticeofPharmacy，第21片反，MackPrintingCompany,Easton，Pennsylvania(2005)所描述的。而且，考虑到除式(I)的化合物之外本发明药物组合物还可包括其它治疗活性物质，如其它抗病毒齐'J。本发明药物组合物可经肠胃外或口服给药并可用于需要这种治疗的脊椎动物的局部或全身抗病毒治疗，如鸟，或哺乳动物如人类，或动物如家畜或农畜。考虑到在多药治疗中可将本发明药物组合物与其它相容药物，如其它抗病毒药物一起给药。下文通过实施例进一步阐述了本发明，但实施例不应被解释为限制由权利要求所定义的本发明范围。应该注意双环体系中每个的编号方式与欧洲专利EP0238459的取代吲哚并喹喔啉的通式的是一样的，如上文所示。实施例本发明化合物的制备利用来自于DMS0"4卩H:5=2.50ppm;13C:&=39.5)的信号作为内标，在BrukerDPX300(300MHz)光谱i^Ch记录室温下DMSO-de溶液中的NMR光谱。5值单位为ppm。鋭提分蹄屯的，按供应商提供的刺柳。实施例1烯烃二聚物的合成一般步骤(lOmmol规模)将B-220(式n，R-H，R2=CH3，或其衍生物)、二劍饿和乙腈加热15小时使回流下或在7(TC)。M3131滤分离形成的固体，用乙腈洗涤并干燥。la)R1=H，R2=CH3，n=3，m=0，X-=Br-产量70%;iH誦NMR5:8.34(d，IH)，7.94(m，2H)，7.77(m，2H)，7.43(t，1H)，4.93(br.s，2H)，3.86(br.s，2H)，3.54(br.s，2H)，3.27(s，6H)，2.39(s，6H)，1.77(br.s，2H)，1.28(br.s，2H)。lb)R!=H，R2=CH3，n=5，m=0，X=Br-产量49%;H-NMR5:8.35(d，1H)，8.00(s，1H)，7.92(d，1H)，7.80(m，2H)，7.45(t，1H)，4.91(t，2H)，3.85(t，2H)，3.49(m，2H)，3.24(s，6H)，2.48(s，3H)，2.45(s，3H)，1.69(m，2H)，1.17(s，6H)。lc)R=9-Br，R2=CH3,n=3，m=0，X^Br—产量73%;H-NMR5:8.39(s，1H)，8.08-7.81(m，3H)，7.73(s，1H)，5.16(br.s，2H)，3.69(br.s，2H)，3.43(br.s，2H)，3.25(s，6H)，2.39(s，3H)，2.37(s，3H)，1.88(br.s，2H)，1.32(br.s，2H)。ld)R^9匿Cl，R2=H，n=3，m=0，X=Br-13C-NMRDMSO-d65:21.6(t)，25.2(t)，35.3(t)，50.8(q)，59.0(t)，63.3(t)，112.6(d),120.4(s)，121.6(d),126.1(s)，126.8(d),127.5(d),129.3(d),129.8(d),131.1(d),138.6(s)，139.0(s)，139.8(s)，142.0(s)，144.9(s)。le)R1=H,R2=H，n=l，m=l，Y=CH2，X^Bf3C-NMRDMSO-d65:17.0(t)，35.0(t)，50.9(q)，59.9(t)，60.5(t)，110.8(d),119.0(s)，121.7(d),122.4(d),126.5(d),127.5(d),129.2(d)*,131.5(d),138.9(s)，139.5(s)，139.7(s)143.5(s)，144.7(S)。*两^t碳原子一^K言号1^R=H，R2=H，n=3，m=0，X=Br-13C-NMRDMSO-d65:21.7(t)，25.4(t)，35.0(t)，50.8(q)，59.2(t)，63.2(t)，110.7(d),119.1(s)，121.8(d),122.5(d),126.6(d),127.4(d),129.2(d),129.3(d),131.6(d),139.0(s)，139.6(s)，139.8(s)，143.6(s)，144.8(s)。实施例2醚二聚物的合成一般步骤(lOmmol规模)将B-220(或其衍生物)、二卣代烷和乙腈在回流下加热20小时。iffil过滤分离形成的固体，用乙腈洗涤并千燥。2a)R、H，R2=CH3，n=2，Y=0，m=l，X"=Br-产量58%;^-NMR5:8.22(d，IH)，7.84(s，IH)，7.72(m，2H)，7.59(s，1H)，7.47(d，1H)，7.38(t，1H)，7.08(d，1H)，4.85(t，2H)，4.09(br.s，2H)，3.93(m，4H)，3.29(s，6H)，2.35(s，3H)，2.26(s，3H)，2.24(s，3H)。2b)R^9-Br，R2=CH3，n=2，Y=0，m=l,X-=Br-产量91%;iH-NMR5:8.02(d，1H)，7.77-7.66(m，3H)，7.49(s，1H)，7.45(d，2H)，7.07(d，2H)，4.78(t，2H)，4.11(br.s，2H)，3.95-3.90(m，4H)，3.27(s，6H)，2.31(s，3H)，2.26(s，3H)，2.18(s，3H)。生物学试验下文描述了禾,本发明化合物即实施例1的化合物la实施针对人类巨细胞病毒的抗病毒活性试验。称作B-220的参照化合物是欧洲专利EP0238459戶/f公开的2，3-二甲基-6-(N，N-二甲氨基乙萄-6H-吲哚辨^-b)喹喔啉。对病毒感染的抑制效应的it验为评价耙向结构病毒蛋白是否与靶向病毒转录物一样有效，粒了舰的噬菌斑试验，其中将新抗病毒剂之一与公认的可抑制HCMV转录[GCV(Cymevene，Roche)和PFA(Foscavir，AstraZeneca)]或感染[IVIg(IVIGCP，BiotestPharma)，一种抗体]的抗病毒剂进行比较。在0dpi(感染后的天数)的实验中同时添加抗病毒齐诉口TB40/E，其指示了药剂很好地抑制感染。通过比较，孔内被感染细胞的数量与阳性对照的im，并计算所测药剂实现的感染抑制率从而获得该实验的结果。以HCMV的AD-169株和临床分离菌株分别重复该实验，获得基科瞷的结果。表1中显示了所观,质的抑制玄媒，以感染抑制率％标。这些来自于由感染人鄉市成纤维细胞的HCMVAD169BTB40的噬菌斑试验。表l.以感染抑制率％^^所测物质的抑制$媒物质抑制效果(％)la雨IVIg(参照)100B-220(参照)20来氟米特(参照)25-50膦甲Ml(参照)20-50更昔,(参照)20-30i&验的结果表明了本发明化合物具有极好的病染抑制效果。HCMV装配(assembly)和排出(egress)的抑制试验用抗病毒剂B-220和如表2所示的其它参照物质以及本发明化合物la处理被感染的人鄉市成纤维细胞(HL细胞)以评价本发明化合物对HCMV感染、装配和排出的效果。这些实验中在感染后的第3或5天(dpi)添加抗病毒剂并保留在培养物中至7dp。之后将上清液和破碎的细胞转移至新的细胞培养物中过夜随后为正表达而进行染色。结果表明了物Mm好地阻止病毒的装配和排出。更具体而言，在3dpi大部分病毒壳條核内被装配而在5dpi它们主要在细鹏中获得它们的外壳且一些已经开始它们的第二次包膜。在表2中显示了fflil改进的噬^^逸验测定的抗病毒物质的抑制媒。几种物质在由正染色测定的正皿上显示出100%的抑制M过电子显微镜观测大部分被处理细胞的核内未观察到壳体结构。被称为la的本发明化，表5见出堪比更昔洛韦所获得的结果的极好结果。表2.抗病毒物质的抑制效果<table>complextableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>作用机制本发明化合物的作用机制不希望受任何理论柳蹄l」，应该注意的是受测的本发明化合物la显示出非常明显的正表达抑制。另外，电子显微镜数据表明了病毒装配的减弱。事实上，用于识别和量化稳定的HCMV中间体微粒的图像分析技术表明了壳蛋白与病毒壳体结合的减弱。这些数据共同表明了本发明化合物用于抗病毒治疗中的高潜力。另外，通过使用与至少一种其它抗病毒活性剂组合的本发明化合物，如在多药物治疗中，可预期有协同效应并减弱或避免了获得耐药性的风险。毒性M31碘化丙卩定染色被感染细胞培养物和未感染的人鄉市成纤维细胞的细胞培养物的i微，本发明化^tJ未显示出任何毒性。10倍于实^ff用的化合物la浓度在0-7加的时间段未显示出毒性。在病毒实验中所用的化合物浓度是mM水平。当浓度在IOOmM以上b-220表现出细胞毒性。材料和方法细胞培养实验中所用的人鄉市成纤维细胞，HL细胞(MRC-5)在添加了10%胎牛血清(FCS)和P/。青霉素和链霉素(PeSt)的含Earle's和L谷氨^fei安(来自于GIBCO)的MEM溶液中于37°C和5%C02下温育。在实验开始时HL细胞被保留在175cm2的Falcon细胞培养瓶。当将它们转移至48孔多孑L板(BectonDickinson)以进行感染并用抗病毒剂温育时，禾,胰蛋白酶和EDTA将细胞从细胞培养瓶释放。在，的相同条件下温育细胞直至达到50%的融合并被{顿至第26代。以HCMV感染细胞以感染复数(MOI)为0.02，用HCMV，病毒株TB40/E[G.Jahn教授友情提供的内皮适宜的临床分离菌^UR1814)]和病毒株AD-169分别感染HL细胞，并在，相同的培养液中于37°C和5%CQ2下温育mM感染后的第3或5天(dpi)。一些细胞(在第0天的实验)同时撤虫抗病毒剂(参见如下)。阴'IW照是i呆持未感染的。细胞与抑制剂和抗病毒剂的接触改变了现有的培养液(在感染后的第3或5天实验中)，添加了新的培养液，其含有不同浓度的抑制齐诉口抗病毒剂。然而在第0天实验的感染并保挣温育赶感染后的第1天前这是同时进行的。在加Alffl胞之前将含IVIg的培养液与病毒冰浴培养l小时。舰的噬菌斑微在感染后的第3或5天实验中MRC-5细胞的上清液被转移至未感染细胞以评估分泌病毒的数量。在剩余细胞中加入新培养液并iM:在IKA-Vibrax-VXR上以300欲併衬岳晃多孔板10併中与玻璃球一起破碎细胞。之后将细胞碎片转移至未感染细胞以便能够评价有感染性的细胞内病毒颗粒的数量。以病毒颗粒感染新细胞大约1小时之后改变培养液，并洗去细胞碎片。在第0天的实验中细胞在感染后的第1天立即被固定(按照以下解释的程序)。如上，分别处理阳性对照(未处理的被感染细胞)和阴性对照(未处理的未感染细胞)。细胞的免疫荧光染色在之后的一天，用3。/。多聚甲,FA)在室温(RT)下将新HL细胞(在感染后第3和5天实验中的)固定15^jH中。为使细胞可渗透，在室温下以刚好覆盖^面数量的DAKO在RT下进行20^H中的背景封闭之后，禾佣含0.3%TntonX的磷酸缓冲液(PBS)在RT下温育15力H中。之后将所有多孑L板与稀释至1:100的直接针对早期抗原(正A，Antigene)的初级抗^(小鼠)在8。C下温育45分钟。随后将细胞与稀释至1:100、的次级抗体兔抗鼠FITC(DakoCytomation)在8°C下温育45分钟并同时以DAPI(Sigma)染色，稀释至1:250的DAPI是一种可对细胞核染色的化学物质。如上，分别处理两种细胞株的阳t顿照和阴+顿照。免疫荧光显微镜分析利用NikonEclipseTE2000-U对细mS行荧光显微镜分析。M肉目艮对孔的两个不同部分的表达正A的细胞数量进^i十数并与相同部分的细胞总数(由DAPI指示的)进行比较。禾拥这些值评估每孔中被感染细胞的百分比并从中计算由不同物质所实现的抑制数。因为不可能对孔内的细胞总数进行手工计数，ia择计算孔的两个部分内被感染细胞的百分比并将其应用于整个孔的方法。权利要求1.式(I)的化合物，其中R1选自H、F、Cl、Br、CF3、C1-C6烷氧基和OH；R2选自H和C1-C6烷基；n是1-12；m是0或1；和Y选自CH2、NR3、(NR3R4)+X-、O和S；R3和R4独立选自H和C1-C4烷基；和X-选自药学可接受阴离子。2.如权利要求1所述的化合物，其中W选自H、F、Cl、Br、CF3、OCH33.如权利要求1或2所述的化合物，其中R2选自H和CH3。4.如权利要求1-3任意一项所述的化合物，其中X"选自Cr、Br.、甲烷磺、甲苯磺酸盐、乙Kb、柠禾蒙酸盐和马^^,。5.如权利要求1~4任意一项所述的化糊，其中m是0。6.如权利要求14任意一项所述的化合物，其中m是l。7.如权利要求6所述的化糊，其中Y是O。8.如权利要求1-7任意一项所述的化合物，其中n是4-10。9.如权利要求1-7任意一项所述的化合物，其中n是l-3。10.—种制备权利要求1-9任意一项所述的化合物的方法，是fflil将式(n)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>在翻喊赖嗨合物中与式(ni)的化合物反应，其中R1、R2、Y、m和n如权利要求l-9任意所定义；禾口L是离去基团。11.如权利要求10所述的方法，其中离去基团选自C1、Br、甲烷磺酰基和甲苯磺酰基。12.用作药物的如禾又利要求1-9任意一项所述的化合物。13.含有权利要求1-9任意一项所述化合物和药学可接受赋形齐啲药物组合物。14.如^l利要求13所述的药物组合物，用作抗病毒药物。15.如权利要求14戶腿的药物组合物，用作抗疱疹病毒药物。16.如权利要求15所述的药物组合物，其中疱疹病毒是人巨细胞病毒。17.—种Mi合药^l利要求13-16任意一项所述的药物组合物治疗需要这种治疗的脊椎动物的方法。全文摘要式(I)的化合物，其中R¹选自H、F、Cl、Br、CF₃、C₁-C₆烷氧基和OH，R²选自H和C₁-C₆烷基；n是1-12，m是0或1，Y选自CH₂、NR³、(NR³R⁴)+X”、O和S；R³和R⁴独立选自H和C₁-C₄烷基；而X”选自药学可接受的阴离子。一种制备该化合物的方法，其作为药物的应用，和治疗的方法。文档编号A61P31/12GK101374845SQ200780002886公开日2009年2月25日申请日期2007年1月22日优先权日2006年1月23日发明者C·索德伯格-诺克勒,J·伯格曼,M·霍曼,R·恩格奎斯特申请人:维洛诺瓦公司