作为组蛋白脱乙酰酶抑制剂的取代的吲哚基-烷基-氨基衍生物的制作方法

专利名称：：作为组蛋白脱乙酰酶抑制剂的取代的吲哚基-烷基-氨基衍生物的制作方法作为组蛋白脱乙酰酶抑制剂的取代的吲哚基-烷基-氨基衍生物本发明涉及具有组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制酶活性的化合物。本发明还涉及它们的制备方法，包括它们的组合物，以及它们在体外和体内抑制HDAC和作为药品的用途，例如作为药品用于抑制增殖性病症，例如癌症和牛皮裤。核组蛋白被称为机器的整体和动态组分，所述机器负责调节基因转录以及其它DNA-模板过程例如复制、修复、再结合和染色体分离。它们是翻译后修饰包括乙酰化、磷酸化、曱基化、遍在蛋白化和ADP-核糖基化的对象。组蛋白脱乙酰酶，在此称为"HDACs",是催化除去蛋白赖氨酸残基上乙酰基4务饰的酶，包括核小体组蛋白H2A、H2B、H3和H4。与组蛋白转乙酰酶一起，在此称为"HATs",HDACs调节组蛋白乙酰化的水平。核小体组蛋白乙酰化的平衡在许多基因的转录中起重要作用。组蛋白的次乙酰化与缩合染色质结构有关，该缩合染色质结构导致基因转录的抑制，而乙酰化组蛋白与更开放的染色质结构和转录激活有关。已经描述了十一个结构有关的HDACs并分成两种类型。I类HDACs由HDAC1、2、3、8和11组成，而II类HDACs由HDAC4、5、6、7、9和IO组成。第三类HDACs的成员在结构上是与第I类和II类HDACs无关的。I类/II类HDACs通过锌-相关的机理起作用，而m类HDACs是NAD-相关的。除组蛋白外，其它蛋白也是乙酰化的底物，特别是转录因子例如p53、GATA-1和E2F;核受体例如糖皮质激素受体、曱状l泉受体、雌激素受体；和细胞周期调节蛋白例如pRb。蛋白乙酰化与蛋白稳定有关，例如p53稳定，辅助因子的募集和增加DNA结合。p53是一种肺瘤抑制基因，响应各种应激信号，例如DNA损伤，其可以诱导细胞周期停滞或细胞调亡。p53-诱导的细胞周期停滞的主要靶标似乎是p21基因。紧接于它由p53导致的激活，p21已经根据它与细胞周期蛋白/依赖细胞周期蛋白的激酶络合物的结合被识别，其导致Gl和G2阶段细胞周期停滞，老年期间上调，以及它与增殖细胞核抗原的相互作用。HDAC抑制剂的研究表明，它们在细胞周期停滞、细胞分化、细胞凋亡和变异表型反转中起重要作用。抑制剂曲古抑菌素A(TSA),例如，在G1和G2阶段引起细胞周期停滞，恢复各种细胞系的变异表型，以及诱导弗罗德白血病细胞及其他的分化。已经报道TSA(和辛二酰苯胺异羟肟酸SAHA)在小鼠中抑制细J包生长、i秀导终末分化和预防肿瘤形成(Finnin等，Nature,401:188-193,1999)。还报道曲古抑菌素A用于治疗纤维变性，例如肝纤维化和肝硬化(Geerts等，欧洲专利申请EP0827742,1998年3月11日公开)。HDAC抑制剂的药效基团由金属-结合区域组成，其与HDACs的含锌-活性位点、连接基区域和表面识别区域或封端区域相互作用，其在活性位点的边缘上与残基相互作用。还报道HDACs抑制剂诱导p21基因表达。由这些抑制剂所引起的p21基因的转录激活通过如下促进染色质重新塑造，接着在p21启动子区域中的组蛋白H3和H4的乙酰化。p21的这种激活以p53-独立方式存在，因此HDAC抑制剂在含突变p53基因的细胞是有效的，其中突变p53基因是许多肿瘤的标志。此外，HDAC抑制剂可以具有间接活性，例如增大宿主免疫应答和抑制肿瘤血管生成，并因此可以抑制原发性肿瘤的生长和阻碍转移(Mai等，MedicinalResearchReviews,25:261-309,2005)。鉴于上述，HDAC抑制剂在治疗细胞增殖性疾病或病症中，包括具有突变p53基因的肿瘤可能具有很大的潜力。2003年8月14日公开的专利申请EP1472216公开了作为组蛋白脱乙酰酶抑制剂的双环异羟肟酸盐。2003年9月18日7^开的专利申请EP1485099、EP1485348、EP1485353、EP1485354、EP1485364、EP1485365、EP1485370、EP1485378等公开了作为组蛋白脱乙酰酶抑制剂的取代哌。秦基嘧啶基异羟肟酸，此外EP1485365公开了R306465。2003年10月9日公开的专利申请EP1492534公开了作为HDAC抑制剂的包含哌嗪键的氨基甲酸化合物。2003年10月23日公开的专利申请EP1495002公开了作为组蛋白脱乙酰酶抑制剂的取代哌。泰基苯基苯曱酰胺化合物。2003年11月13日公开的专利申请EP1501508公开了作为组蛋白脱乙酰酶抑制剂的苯曱酰胺。2004年l月29日公开的专利申请WO04/009536公开了作为组蛋白脱乙酰酶抑制剂的在芳基和异羟肟酸盐之间含烷基连接基的衍生物。2004年2月12日公开的专利申请EP15251997^开了作为组蛋白脱乙酰酶抑制剂的(杂)芳基烯基取代的双环异鞋肟酸盐。2004年6月24日公开的专利申请EP1572626公开了作为药理学试剂的亚芳基-羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺衍生物。2004年7月29日公开的专利申请EP1581484公开了具有抗炎和抗肺瘤活性的N-羟基-苯甲酰胺衍生物的衍生物。2004年7月29日^^开的专利申请EP1585735^A开了作为组蛋白脱乙酰酶抑制剂的取代芳基异羟肝酸盐衍生物。2004年8月19日公开的专利申请EP1592667公开了作为药理学试剂的单-酰化O-亚苯基二胺衍生物。2004年8月19日公开的专利申请EP15卯340公开了作为组蛋白脱乙酰酶抑制剂的二氨基亚苯基衍生物。2004年8月26日公开的专利申请EP1592665z^开了作为组蛋白脱乙酰酶抑制剂的苯甲酰胺衍生物。2004年8月26日公开的专利申请WO04/072047公开了作为组蛋白脱乙酰酶抑制剂的丐l"呆、苯并。米哇和萘并咪唑。2004年9月30日公开的专利申请EP1608628^A开了作为组蛋白脱乙酰酶抑制剂的与非芳族杂环体系连接的异羟肟酸盐。2004年IO月14日公开的专利申请EP1613622公开了作为组蛋白脱乙酰酶抑制剂的肝书f生物。2004年10月28日公开的专利申请EP1611088公开了作为组蛋白脱乙酰酶抑制剂的异羟坊酸盐衍生物。2005年3月31日公开的专利申请WO05/028447公开了作为组蛋白脱乙酰酶抑制剂的苯并n米唑。2005年4月7日公开的专利申请WO05/030704和WO05/030705公开了作为组蛋白脱乙酰酶抑制剂的苯曱酰胺。2005年5月6日乂>开的专利申请WO05/040101乂>开了作为组蛋白脱乙酰酶抑制剂的酰基脲连接的和磺酰基脲连接的异羟肟酸盐。同样在2005年5月6日公开的专利申请WO05/040161公开了作为组蛋白脱乙酰酶抑制剂的二芳基连接的异羟肟酸盐。2005年8月18日/>开的专利申请WO05/075469z^开了作为组蛋白脱乙酰酶抑制剂的瘗唑基异轻肟酸和p塞二唑基异羟將酸。2005年9月22日公开的专利申请WO05/086898公开了作为组蛋白脱乙酰酶抑制剂的杂五环异幾肟酸。2005年10月6日7>开的专利申请\￥005/0928997>开了作为组蛋白脱乙酰酶的烯基苯甲酰胺。本发明的化合物在结构、它们的药理学活性和/或药理学效力方面不同于现有技术。所解决的问题是提供具有高酶和细胞活性的组蛋白脱乙酰酶抑制剂，其具有增加的生物利用度和/或体内效力。本发明的新化合物解决了上述问题。本发明的化合物表现出极好的组蛋白脱乙酰酶抑制酶和细胞活性。它们具有大容量以激活p21基因。它们可能具有所希望的药物动力学曲线和^f氐的P450酶亲和性，其降4氐不利的药物-药物相互作用的风险，使其提供宽的安全范围。本发明化合物的有利特点可能是代谢稳定性、溶解性和/或p21诱导能力。本发明涉及式(I)的化合物其N-氧化物形式、药学上可接受的加成盐和立体化学异构形式，其中n是0或l以及当n是0时，那么是指直接键；m是0、l或2以及当n是0时，那么是指直接键；p是0或l以及当n是0时，那么是指直接键；每个X独立地是N或CH;每个Y独立地是O、NH、N-d-6烷基、CH或CH2，以及当Y是CH时,那么所述取代基与环结构的Y原子相连；W是羟基或式(a-l)的基团<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>R"是羟基或-NH2;R"是氢、噻吩基、呋喃基或苯基，并且每个噻吩基、呋喃基或苯基可以任选被卤素、氨基、硝基、氰基、羟基、苯基、Q-6烷基、(二Cw烷基)氨基、d-6烷氧基、苯基d-6烷氧基、羟基d-6烷基、Cw烷氧基羰基、羟基羰基、Cw烷基羰基、多囟代d-6烷氧基、多卣代C"烷基、d-6烷基磺酰基、羟基羰基d-6烷基、Cw烷基羰基氨基、氨基磺酰基、氨基磺酰基Cw烷基、异噁唑基、氨基羰基、苯基Cw烯基、苯基C3_6炔基或吡啶基C3-6炔基取代；R6、R7和RS每个独立地是氢、-NH2、硝基、呋喃基、卤素、Cw烷基、C^烷氧基、三氟甲基、噻吩基、苯基、d-6烷基羰基氨基、氨基羰基Cw烷基或-OC-CH2-RH;其中RH是氢、Cw烷基、羟基、氨基或Cw烷氧基；RZ是d—6烷基、Cw环烷基、CL6烷基氨基羰基或Cw烷氧基羰基；R3是氢、d-6烷基、C3—7环烷基、羟基Cw烷基、CL6烷氧基C"烷基、C^烷氧基羰基或d-6烷基氨基羰基；或112和113可以是桥连的(即形成环状的环体系)，具有亚甲基、亚乙基或亚丙基桥连基；R4是氢、d—6烷基、陽C(=0)國C服H-S(=0)2陽N(CH3)2;^巾每个R"和R"独立地是氢、氨基、d—6烷基或氨基C!-6烷基；和W是氢、羟基、氨基、卣素、C"烷基、多卣代C^烷基、C"烷氧基羰基、羟基羰基、C"烷基羰基氨基、d—6烷氧基或单-或二(Cw烷基)氨基。/人取4戈基上引入双环体系的线表示该4建可以与双环体系的任何合适的环原子相连。术语"组蛋白脱乙酰酶抑制剂"或"组蛋白脱乙酰酶的抑制剂"用来识别化合物，该化合物能够与组蛋白脱乙酰酶相互作用并抑制它的活性，更特别地抑制它的酶活性。抑制组蛋白脱乙酰酶酶活性是指减少组蛋白脱乙酰酶从组蛋白中除去乙酰基的能力。优选地，这种抑制是专一性的，即在抑制剂浓度低于产生某种其它的、无关的生物效应所需要的抑制剂的浓度时，该组蛋白脱乙酰酶抑制剂降低组蛋白脱乙酰酶从组蛋白中除去乙酰基的能力。如在上述定义和下文中所使用，卣代通常是指氟、氯、溴和碘；d-6烷基是指具有l-6个碳原子的直链和支链饱和烃基，例如甲基、乙基、丙基、丁基、l-甲基乙基、2-甲基丙基、戊基、2-甲基-丁基、己基、2-曱基戊基等；C2—6烯基是指含有一个双键以及具有2-6个碳原子的直链和支链烃基，例如乙烯基、2-丙烯基、3-丁烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、3-曱基-2-丁烯基等；Cw炔基是指含有一个三键以及具有3-6个碳原子的直链和支链链烃基，例如2-丙炔基、3-丁炔基、2-丁炔基、2-戊炔基、3-戊炔基、3-己炔基等；多卣代d—6烷基是指含有三个相同的或不同的卤素取代基的C^6烷基，例如三氟甲基；以及C3—7环烷基包括具有3-6个碳的环烃基团，例如环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环庚基等。药学上可接受的加成盐包括药学上可接受的酸加成盐和药学上可接受的碱加成盐。在本文中以上所述的药学上可接受的酸加成盐是指包含治疗活性的无毒酸加成盐形式，其中式(I)的化合物能够生成。具有碱性质的式(I)化合物通过用合适的酸处理所述碱形式，可以转化成它们的药学上可接受的酸加成盐。合适的酸包括例如无才几酸，例如氢囟酸，例如盐酸或氢溴酸；石克酸；^肖酸；-岸酸等酸；或有才几酸，例如乙酸、三氟乙酸、丙酸、羟基乙酸、乳酸、焦葡萄酸、草酸、丙二酸、琥珀酸(即丁二酸)、马来酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、甲磺酸、乙磺酸、苯>^黄酸、对曱苯-黄酸、环拉酸、水杨酸、对氨基水杨酸、朴酸等酸。具有酸性质的式(I)化合物通过用合适的有机或无机碱处理所述酸形式，可以转化成它们的药学上可接受的碱加成盐。合适的碱盐形式包括例如铵盐，碱金属和碱土金属盐，例如锂、钠、钾、镁、钙盐等，与有机碱形成的盐，例如千星(benzathine)、N-曱基-D-葡糖胺、哈胺盐，以及与氨基酸例如精氨酸、赖氨酸等形成的盐。术语"酸或碱加成盐"还包括水合物和溶剂加成形式，其中式(I)的化合物能够形成。这些形式的实例例如是水合物、醇化物等。在此所使用的术语"式(I)化合物的立体化学异构形式"是指由相同的原子、通过相同的连接顺序构成的、但具有不同的三维结构的所有可能的化合物，其是不可互换的，其中式(I)的化合物可能具有。除非另作说明或表明，化合物的化学名称包括所述化合物可能具有的所有可能的立体化学异构形式的混合物。所述混合物可能含有所有所述化合物基本分子结构的非对映异构体和/或对映体。式(I)化合物的所有立体化学异构形式，包括纯的形式或彼此的混合物，拟包括在本发明的范围内。式(I)化合物的N-氧化物形式是指包含式(I)化合物的那些，其中一个或数个氮原子被氧化成所谓的N-氧化物，特别是其中哌啶-、哌溱或哒溱基-氮中的一个或多个被N-氧化的那些N-氧化物。式(I)的一些化合物还可以以它们的互变异构形式存在。虽然没有明确地表示在上面式中的这些形式拟包括在本发明的范围内。当在下文中使用时，术语"式(I)的化合物"是指还包括药学上可接受的加成盐以及所有立体异构形式。在此所使用的术语"组蛋白脱乙酰酶"和"HDAC"拟指任何一族的酶，其从组蛋白N-末端处的赖氨酸残基的s-氨基中除去乙酰基。除非本文中另有说明，术语"组蛋白"是指任何组蛋白蛋白，包括来自任何物种的H1、H2A、H2B、H3、H4和H5。人HDAC蛋白或基因产物包括但不局限于HDAC-1、HDAC-2、HDAC-3、HDAC-4、HDAC-5、HDAC國6、HDAC國7、HDAC-8、HDAC-9、HDAC國IO和HDAC-11。所述的组蛋白脱乙酰酶还可以源自原生动物或真菌来源。第一组感兴趣的化合物由式(I)的那些化合物组成，其中应用一个或多个下列限制条件a)n是l;b)p是0;c)每个X是N;d)每个Y是CH;e)W是羟基；f)R2是Cw烷基；g)R和RS可以是用亚甲基、亚乙基或亚丙基桥连基桥连的；h)113是氢;i)R4是d-6烷基；和j)115是氢。第二组感兴趣的化合物由式(I)的那些化合物组成，其中应用一个或多个下列限制条件a)n是l;b)p是O;c)每个Y是CH;d)R"是氩;e)R6、R和RS每个独立地是氢，f)R2是d-6烷基；g)112和113可以是用亚甲基、亚乙基或亚丙基桥连基桥连的；h)R3是氬；i)R4是d-6烷基；和j)R5是氢。第三组感兴趣的化合物由式(I)的那些化合物或第一组和第二组的那些化合物组成，其中应用一个或多个下列限制条件a)n是O;b)每个Y独立地是O、CH或CH2;c)W是羟基；和d)RS是C3.7环烷基、d-6烷氧基羰基或d-6烷基氨基羰基。四组感兴趣的4t合物由式(I)的那些化合物组成，其中应用一个或多个下列限制条件a)n是l;b)m是l或2;c)p是O;d)每个X是N;e)每个Y是CH;f)112和113是用亚曱基、亚乙基或亚丙基桥连基桥连的；g)R4是d-6烷基；h)115是氢。一组优选的化合物由式(I)的那些化合物组成，其中n是l;p是0;每个X是N;每个Y是CH;W是羟基；112是(^-6烷基和R3是氢或者R2和R3可以与亚曱基、亚乙基或亚丙基桥连基一起桥连；R"是d-6烷基；以及115是氢。另一组优选的化合物由式(I)的那些化合物组成，其中n是1;p是0;每个Y是CH;111()是氲；R6、R7和118每个独立地是氢，！^是d-6烷基以及R3是氢或者R2和R3可以与亚曱基、亚乙基或亚丙基桥连基一起桥连；W是Cw烷基；以及W是氢。一组更优选的化合物由式(I)的那些化合物组成，其中n是l;m是l或2;p是0;每个X是N;每个Y是CH;R"和R"与亚曱基、亚乙基或亚丙基桥连基一起桥连；R"是d-6烷基；以及115是氬。最优选的化合物是化合物No.2和化合物No.3。o.0.84C2HF302化合物No2.1.38C2HF302化合物No.3式(I)的化合物和它们的药学上可接受的盐和N-氧化物和立体化学异构形式可以以常规方式制备。起始物质和一些中间体是已知的化合物并且是市场上可买到的，或者可以根据通常本领域已知的常规反应步骤或如专利申请EP1485099、EP1485348、EP1485353、EP1485354、EP1485364、EP1485365、EP1485370和EP1485378中所述的反应步骤制备。一些制备方法将在下文中更详细地进行描述。获得最终式(I)化合物的其它方法在实施例中描述。式(I)的异羟坊酸，其中W是鞋基，在此称为式(I-a)的化合物，可以通过式(II)的中间体与合适的酸例如三氟乙酸反应制备。所述反应在合适的溶剂例如曱醇或二氯曱烷中进行。式(I)的化合物，其中W是式(a-l)的基团以及119是-,2,在此称为式(I-b)的化合物，可以通过式(III)的中间体其中M代表氢或钠或锂或碱金属阳离子如钠，在此称为式(III-a)的化合物，与式(IV)的中间体在合适的试剂例如苯并三唑-l-基氧基三(吡咯烷基)構六氟磷酸盐(PyBOP)存在下反应进4亍制备。该反应可以在石咸如三乙胺存在下、在合适的溶剂如二氯甲烷和四氢呋喃的混合物中进行。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula>式(I-b)的化合物还可以通过式(V)的中间体与合适的酸例如三氟乙酸反应制备。所述反应在合适的溶剂例如曱醇或二氯曱烷中进行。式(I)的化合物，其中W是式(a-l)的基团以及W是羟基，在此称为式(I-c)的化合物，可以通过式(VI)的中间体与氟化四丁基铵在合适的溶剂如四氢呋喃中反应制备。在式(VI)的中间体中的TBDMS是指叔丁基(二甲基)硅烷基。式(II)的中间体可以通过式(III)的中间体与式(VII)的中间体在合适的试剂如N'-(乙基羰基亚氨基)"^,^[-二甲基-1,3-丙二胺，一氩氯化物(EDC)和l-羟基-lH-苯并三唑(HOBT)存在下反应制备。该反应可以在碱如三乙胺存在下、在合适的溶剂如二氯甲烷和四氢吹喃的混合物中进行。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage20</formula>式(V)的中间体可以通过式(III)的中间体与式(VIII)的合适的叔丁氧羰基(Boc)保护的苯胺在苯并三唑-l-基氧基三(二甲氨基)锜六氟磷酸盐(BOP)和氢化钠存在下反应制备。所述反应可以在合适的溶剂如p比咬中进行。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage20</formula>式(VI)的中间体可以通过式(III)的中间体与式(IX)的合适的叔丁基(二曱基)硅烷基(TBDMS)保护的苯胺在苯并三唑-l-基氧基三(二曱氨基)锛六氟磷酸盐(BOP)和三乙胺存在下反应制备。所述反应在合适的溶剂如N,N-二曱基甲酰胺中进行。式(III)的中间体可以通过式(X)的中间体与合适的酸溶液如盐酸或》咸溶液如氢氧化锂或氬氧化钠在合适的溶剂如醇，例如乙醇或丙醇或二嗯烷中反应制备。式(X)的中间体其中RS除氪以外如上所定义，可以通过相应的式(X)的化合物其中R3是氢与合适的用来引入合适的W基团的功能性试剂反应制备。例如，当RS是d—6烷基、C3.7环烷基、羟基d—6烷基或d-6烷氧基d-6烷基时，那么该试剂是合适的烷基化试剂例如合适的烷基卣化物，如氯化物，该反应在石咸性条件如l吏用三乙胺下在合适的溶剂如二曱基甲酰胺中进行。当RS是Q-6烷氧基羰基或CL6烷基氨基羰基时，那么该试剂是合适的酰化剂例如合适的酰基卤，例如氯化物，该反应在石咸性条件如使用三乙胺下在合适的溶剂如二氯甲烷中进行。式(X)的中间体其中RS是氲，在此称为式(X-a)的中间体，可以通过式(XI)的中间体与式(XII)的中间体在合适的试剂如NaBH(OAc)3和Ti(OEt)4存在下在合适的溶剂如二氯乙烷或曱醇中反应制备。或者，该反应可以使用BH3CN在酸性条件例如使用乙酸下在合适的溶剂如曱醇中或在氩化条件使用钯-碳催化剂下在合适的溶剂如甲醇中进行。o(ch2)n=N厂|、<formula>formulaseeoriginaldocumentpage22</formula>式(X)的中间体其中n是1，112和113是桥连的，虚线表示亚甲基、亚乙基或亚丙基桥连基和n是1,在此称为式(X-b)的中间体，可以通4存在下在合适的溶剂如二氯乙烷中反应制备。或者，该反应可以使用BH3CN在酸性条件例如使用乙酸下在合适的溶剂如甲醇中或在氢化条件使用钯-碳催化剂下在合适的溶剂如甲醇中进行。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage22</formula>本发明还涉及式(II)、(III)、(X)、(X-a)和(X-b)的中间体，在此共同称为式(A)的化合物，其中Q是Cw烷氧羰基、羟基羰基或四氬吡喃氧基氨基羰基，以及n、m、p、X、Y、Z、R2、R3、R4和115如式(1)所定义，及其N-氧化物形式、药学上可接受的加成盐和立体化学异构体形式。对于上述中间体，可以根据对式(I)化合物所定义的组，定义感兴趣的、优选的、更优选的和最优选的4匕合物的组。式(I)的化合物和一些中间体在它们的结构中可以具有至少一个立体异构中心。此立体异构中心可以以R或S构型存在。合物，其可以根据本领域已知的拆分方法相互分开。通过与合适的手性酸反应，式(I)的外消旋化合物可以转化为相应的非对映体盐形式。所述非对映体盐形式随后例如通过选择性或分步结晶分离，该对映异构体通过碱从其中释放。分离式(I)化合物的对映异构体形式的另一方法包括使用手性固定相的液相色谱。所述纯的立体化学异构体形式还可以源自于合适的起始物质的相应纯的立体化学异构形式，条件是该反应立体异构专一性地进行。优选地，如果需要专一性的立体异构体，所述化合物将通过立体专一性制备方法进行合成。这些方法将有利地使用对映体纯的起始物质。式(I)的化合物、其药学上可接受的酸加成盐和立体异构形式具有有价值的药理学性质，因为它们具有组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制作用。通过给予有效量的本发明化合物，本发明提供一种抑制细胞(包括变异细胞)异常生长的方法。细胞异常生长是指细胞生长与正常的调节机制无关(例如接触性抑制丧失)。这包括直接引起癌细胞生长停滞、终末分化和/或调亡以及间接抑制肿瘤新血管形成的肿瘤生长抑制。本发明还提供一种抑制肿瘤生长的方法，通过给予有效量的本发明的化合物给需要这种治疗的受试者，例如哺乳动物(更特别是人)。特别地，本发明提供一种抑制肿瘤生长的方法，通过给予有效量的本发明的化合物。可以被抑制的胂瘤的实例，但不局限于，肺癌(例如腺癌和包括非小细胞肺癌)，胰腺癌(例如胰腺癌症如外分泌胰腺癌症)，结肠癌(例如结肠癌，例如结肠腺癌和结肠腺瘤)，前列腺癌包括晚期疾病，淋巴系统的造血胂瘤(例如急性淋巴细胞性白血病，B细胞淋巴瘤，伯基特氏胂瘤)，骨髓性白血病(例如急性髓性白血病(AML))，甲状腺滤泡状癌，骨髓发育异常综合征(MDS),间质来源的胂瘤(例如纤维肉瘤和横紋肌肉瘤)，黑色素瘤，畸胎癌，成神经细胞瘤，胶质瘤，皮肤的良性肿瘤(例如角化棘皮瘤)，乳腺癌(例如晚期乳腺癌)，肾癌，卵巢癌，膀胱癌和表皮癌。本发明的化合物可以用于其它治疗目的，例如a)通过在对治疗癌症的肿瘤进行辐射之前、期间或之后给予本发明的化合物，寧:化;改射治疗的肿瘤；b)治疗关节病和骨病例如类风湿性关节炎、骨关节炎、少年关节炎、痛风、多关节炎、牛皮辫关节炎、强直性脊柱炎和系统性红斑狼疮；c)抑制平滑肌细胞增殖包括血管增殖性疾病、动脉粥样硬化和再狭窄；d)治疗炎性病症和皮肤病症例如溃疡性结肠炎、克罗恩病、过敏性鼻炎、移植物抗宿主病、结膜炎、哮喘、ARDS、贝切特氏病、移植排斥、荨麻渗、过敏性皮炎、局限性脱发、硬皮病、皮渗、湿渗、皮肌炎、粉刺、糖尿病、系统性红斑狼疮、川畸(氏)病、多发性硬化、肺气肝、嚢性纤维化和慢性支气管炎；e)治疗子宫内膜异位、子宫平滑肌瘤、功能障碍性子宫出血和子宫内膜增生；f)治疗眼睛血管形成，包括影响视网膜与脉络膜血管的血管病变；g)治疗心功能障碍；h)抑制免疫抑制性病症，如治疗HIV感染；i)治疗肾功能障碍；j)抑制内分泌病变；k)抑制生糖作用异常的功能障碍；l)治疗神经病变，例如帕金森氏症或造成^人知异常的神经病变，例如阿兹海默氏症或与聚谷酰胺病变相关的神经性疾病；m)治疗精神错乱例如精神分裂症、双相性精神障碍、抑郁症、焦虑和并青神病；n)抑制神经肌肉病变，例如肌萎缩性侧硬化；o)治疗脊柱月几肉萎缩；p)治疗其它通过加强基因表达而可治疗的其它病变；q)加强基因疗法；r)抑制脂肪形成；s)治疗寄生虫病例如疟疾。因此，本发明公开了用作药品的式(I)化合物，以及式(I)的这些化合物在制备用于治疗一种或多种上述病症的药物的用途。式(I)的化合物、其药学上可接受的酸加成盐和立体异构形式可以具有有价值的诊断性质，因为它们在包括冲企测或测定在标记化合物和HDAC间形成络合物的生物样品中可用于才企测或识别HDAC。该检测或识别法可使用由标记试剂如方文射性同位素、酶、荧光物质、发光物质等等标记的化合物。放射性同位素的实例包括1251、1311、3H与"C。酶通常通过适当底物的共轭而可检测，其进而催化可检测的反应。其实例包括例如p-半乳糖苷酶、P-葡糖苷酶、碱性磷酸酶、过氧化酶与苹果酸脱氢酶，优选辣根过氧化酶。发光物质包括例如鲁米诺、鲁米诺衍生物、荧光素、多管水母素(aequorin)与荧光素酶。生物才羊品可定义为体组织或体液。体液的实例为脑脊ft液、血液、血浆、血清、尿液、痰、唾液等等。就其实用的药物性质而言，本发明化合物可配制成用于给药目的的不同的药物形式。为了制备本发明的药物组合物，将作为活性成分的有效量的碱或酸加成盐型特定化合物与药学上可接受的载体密切混合，该载体可呈多种不同形式，取决于所需给药制剂型式。这些药物组合物最好呈适合优选用于经口、直肠、经皮肤给药或胃肠外注射用的单位剂型。例如，制备口服剂型组合物时，可使用任何常用的药物介质，如在口服液体制剂，如悬浮液、糖浆、酏剂和溶液的情况中可^f吏用例如水、二醇、油类、醇类等等；或在制备粉剂、丸剂、胶嚢和片剂的情况中可使用固态载体如淀粉、糖类、高岭土、润滑剂、结合剂、崩解剂等等。由于片剂与胶嚢方便给药，因此代表最有利的口服单位剂型，在这种情况下当然使用固态药物载体。对于胃肠外组合物，载体通常包括无菌水，至少占绝大部分，但也可包含其它成份，例如有助于溶解度。例如，可制备可注射液，其中载体包括盐水溶液、葡萄糖溶液或盐水与葡萄糖溶液的混合物。也可制备注射用悬浮液，在这种情况下可使用适当液态载体、悬浮剂等等。在适合经皮肤给药的组合物中，载体任选包含渗透加强剂及/或合适的湿化剂，任选与任何性质的少量合适添加剂组合，该添加剂不对皮肤引起显著的不良效应。这些添加剂可促进给药至皮肤及/或可能有助于制备所需组合物。这些组合物可依多种方法给药，例如作为透皮式贴布、滴剂或软膏。特别有利的是以方便给药且剂量均一的单位剂型配制上述药物组合物。本说明书与权利要求中所使用的单位剂型指物理性分离的适合作为单一剂量的单位，各单位包含经计算可产生所需治疗效果的预定量活性成分，与所需的药物载体组合。这些单位剂型实例为片剂(包括有划痕或有包衣的片剂)、胶嚢、丸剂、散剂包、扁嚢片、注射用溶液或悬浮液、茶匙剂、汤匙剂等等，及其离散多重剂型。本领域技术人员很容易由下文出示的试验结果决定有效量。通常，考虑治疗有效量为每公斤体重0.005亳克至100毫克，尤其是每公斤体重0.005毫克至10毫克。可以在一天内以适当时间间隔将所需剂量分成2、3、4或更多个亚剂量给药。该小剂量可配制成单位剂型，例如每单位剂型包含0.5至500毫克，尤其是10至500毫克活性成分。本发明另一方面提出一种HDAC-抑制剂与另一种抗癌剂的组合，尤其用于药物，更具体地，用于治疗癌症或相关疾病。治疗上述病症时，本发明化合物可以有利地用于与一种或多种其它药剂组合，更尤其是，与其它抗癌剂组合。抗癌剂的实例为-柏配^立^:合物例如顺柏、卡辆或奥沙利4白(oxalyplatin);-紫杉烷化合物例如紫杉醇或紫杉萜；-拓朴异构酶I抑制剂例如喜树碱化合物例如伊立替康或托泊替康；-拓朴异构酶II抑制剂例如抗肿瘤鬼臼霉素衍生物例如依托泊苷或替尼泊苷；-抗肺瘤长春花生物碱例如长春花碱、长春新碱或长春瑞滨；-抗胂瘤核苦衍生物例如5-氟尿嘧咬、吉西他滨或卡培他滨；画烷基化试剂例如氮芥或亚硝基脲例如环磷酰胺、苯丁酸氮芥、亚硝脲氮芥或环己亚硝脲；-抗肿瘤蒽环类抗生素衍生物例如柔红霉素、多柔比星、伊达比星或米托蒽醌；-HER2抗体例如曲妥单抗；-雌激素受体拮抗剂或选择性雌激素受体调节剂例如他莫昔芬、托瑞米芬、屈洛昔芬、氟维司群(faslodex)或雷洛昔芬；-芳香酶抑制剂例如依西美坦、阿那曲唑、来曲唑和Y犬氯唑；-分化剂例如类视色素、维生素D和维曱酸代谢阻滞剂(RAMBA)例如异维甲酸；-DNA甲基转移酶抑制剂例如氮胞苷；-激酶抑制剂例如flavoperidol、伊马替尼曱磺酸酯或吉非替尼；-法尼基转移酶抑制剂；-其它HDAC抑制剂；國泛激素-蛋白酶体途径抑制剂例如Velcade;或-Yondelis。在此使用的术语"钿配位化合物"表示提供离子形式铂的任何胂瘤细胞生长抑制铂配位化合物。术语"紫杉烷化合物，，表示具有紫杉烷环体系的一类化合物，并且与某些物种的紫杉(Taxus)树的提取物相关或来源于其中。术语"拓朴异构酶抑制剂"用来表示在真核细胞中能够改变DNA拓朴结构的酶。它们对重要的细胞功能和细胞增殖是关键的。在真核细胞中存在两种类型的拓朴异构酶，即类型I和类型II。拓朴异构酶I是约100,000分子量的单体酶。该酶结合DNA,引进一个暂时性单链裂口，打开双螺旋(或使之解开)，然后先使裂口封合后，再自DAN股上解离。拓朴异构酶II的作用机理类似，其涉及诱导DNA股开裂或形成游离基。术语"喜树碱化合物"用来表示与母体喜树碱化合物相关或由其所衍生的化合物，它是书f生自中国树种Camptothecinacuminata及印度树种Nothapodytesfoetida的不可溶于7Jc的才直物石咸。术语"鬼臼毒素化合物，，用来表示与自剥度比尔谟(mandrake)植物萃取出的母体鬼臼毒素化合物相关或由其所衍生的化合物。术语"抗胂瘤长春花石咸"用来表示与来自长春花(Vincarosea)植物的萃取物相关或由其所衍生的化合物。术语"烷化剂"包括一类共同特点为在生理条件下有能力提供烷基给具有生物活性的大分子如DNA的化学剂。对于大多数较重要试剂如氮芥及亚硝基脲，活性烷化部分在体内在复杂的降解反应(其中有些为酶反应)之后产生。烷化剂的最重要药物作用为特别在DNA合成与细胞分裂过程中干扰与细胞增殖相关的基本机理。烷化剂在快速增殖组织中干扰DNA功能与整体性的能力提供了其医疗用途及其多种毒性的基础。术语"抗肺瘤蒽环素衍生物"包括得自真菌波赛链球菌(Strep,peuticusvar.caesius)的抗生素及其书亍生物，其特征在于具有一个四环素环结构，利用糖苷键连接一种罕见糖道诺糖胺。已知原发性乳癌瘤中人类上皮生长因子受体2蛋白质(HER2)的扩增作用与某些患者的临床预后结果不佳有相关性。曲妥单抗为一种高度纯化的重组体DNA-衍生的拟人化单克隆IgGl-K抗体，其与HER2受体的细胞外区域具有高的亲和性和专一性。许多乳腺癌有雌激素受体，且这些肿瘤的生长可受到雌激素刺激。术语"雌激素受体拮抗剂"和"选择性雌激素受体调节剂"用来表示与雌激素受体(ER)结合的雌二醇的竟争性抑制剂。选择性雌激素受体调节剂与ER结合时，会诱发受体的三维空间形状改变，调节其与DNA上雌激素反应元素(ERE)的结合。在停经后妇女中，循环雌激素的主要来源为肾上腺与卵巢雄激素(雄烯二醇与睾固酮)经由周边组织中芳香酶转化成雌激素(雌固酮与雌二醇)。经由芳香酶抑制或去活化作用消耗雌激素可有效且选择性治疗某些患有与激素相关的乳癌的停经后患者。在此使用的术语"抗雌激素剂"不仅包括雌激素受体拮抗剂和选择性雌激素受体调节剂，而且包括如上所述的芳香酶抑制剂。术语"分化剂"包括可依不同方式抑制细胞增殖及诱发分化的化合物。已知维生素D和类视黄素在调节多种正常和恶性细胞型态的生长与分化上扮演重要角色。视黄酸代谢作用阻断剂(RAMBA's)通过抑制细胞色素P450-所介导的视黄酸分解代谢作用而提高内因性视黄酸含量。DNA的甲基化变化为人体赘生瘤最常见的异常现象。特定基因的发动子中的过度甲基化通常与所涉及的基因失活有关。术语"DNA甲基转化酶抑制剂"用来表示通过DNA甲基转化酶的药物抑制作用而发挥作用及使肿瘤抑制基因表达再活化的化合物。术语"激酶抑制剂"包括涉及细胞循环发展及计划性细胞死亡(细胞凋亡)的激酶的强力抑制剂。术语"法呢基转化酶抑制剂"用来表示设计用于防止Ras及其它细胞内蛋白质的法呢基化反应的化合物。已知其可影响恶性细胞增殖与存活。术语"其它HDAC抑制剂"包括但不局限于-羧酸酯例如丁酸酯、肉桂酸、4-苯基丁酸酯或丙戊酸；画异羟肟酸例如辛二酰基苯胺异羟肟酸(SAHA),含有哌嗪的SAHA类似物，二芳基异羟肟酸盐A-161906及其吵唑基醚-,四氢吡啶-和四氢萘酮-类似物，双环芳基-N-羟基羧酰胺，pyroxamide，CG-1521，PXD-101,磺酰胺异羟lt酸，LAQ-824,LBH-589，曲古抑菌素A(TSA)，oxamflatin,scriptaid，与scriptaid相关的三环分子，间羧基肉桂酸二异羟肟酸(CBHA),CBHA-类异羟肟酸，trapoxin-异羟肟酸类似物，CRA-024781,R306465和相关的苯甲酰基-和杂芳基-异羟肟酸，氨基辛二酸酯和丙二酰基二酰胺；誦环;j犬四肽例》口trapoxin，apidicin,缩酚酸肽，spiruchostatin有关的化合物，RedFK-228,含巯基环状四肽(SCOPs)，含异羟肟酸环状四肽(CHAPs),TAN-174s和azumamides;-苯甲酰胺类例如MS-275或CI-994,或-depudecin。术语"泛激素-蛋白酶体途径抑制剂"用来识别化合物，所述化合物在蛋白酶体包括细胞周期调节蛋白中抑制细胞蛋白的目标破坏。对于癌症的治疗，本发明化合物可以连同辐射一起给予如上所述的患者。辐射是指电离辐射，特别是指Y辐射，尤其是由直线加速器或现在通用的放射性核素发射的那种。由放射性核素进行的肿瘤辐射可以是外部的或内部的。本发明还涉及本发明的抗癌剂和本发明的HDAC抑制剂的组合。本发明还涉及本发明的组合在药物治疗中的用途，例如用于抑制肿瘤细力包生长。本发明还涉及本发明的组合用于抑制肿瘤细胞生长。本发明还涉及在人类受试者中抑制肿瘤细胞生长的方法，其包括给予该受试者有效量的本发明的组合。本发明还提供抑制细胞(包括变异细胞)异常生长的方法，通过给予有效量的本发明的组合。其它药物试剂和HDAC抑制剂可以同时(例如单独或整体组合物)或以任何顺序依次给药。在后者情况中，该两种化合物将在一个时间段内和以足以确保达到有利的或协同作用的数量和方式给药。可以理解，优选的给药方法和顺序以及该组合的每一组分的各个剂量和方案将取决于所给予的具体的其它药物试剂和HDAC抑制剂、它们的给药途径、所治疗的具体肿瘤和所治疗的具体宿主。给药的最佳方法和顺序以及剂量数量和方案可以容易地由本领域技术人员使用常规方法并鉴于在此所述的信息组来确定。铂配位化合物的有利给药剂量为每平方米体表面积1至500毫克(mg/m2),例如50至400mg/m2，尤其是每个疗程的顺铂剂量为约75mg/m2，卡铂剂量为约300mg/m2。紫杉烷化合物的有利给药剂量为每平方米体表面积50至400毫克(mg/m2),例如75至250mg/m2,尤其是每个疗程的紫杉醇剂量为约175至250mg/m2,及紫杉辟的剂量为约75至150mg/m2。喜树碱化合物的有利给药剂量为每平方米体表面积0.1至400毫克(mg/m2),例如1至300mg/m2,尤其是每个疗程的依立替康剂量为约100至350mg/m2,托泊替康剂量为约1至2mg/m2。抗肿瘤鬼臼毒素衍生物的有利给药剂量为每平方米体表面积30至300毫克(mg/m2),例如50至250mg/m2,尤其是每个疗程的依托泊甙剂量为约35至100mg/m2，登尼泊甙剂量为约50至250mg/m2。抗肿瘤长春花碱的有利给药剂量为每平方米体表面积2至30毫克(mg/m2),尤其是每个疗程的长春花碱剂量为约3至12mg/m2,长春新石咸剂量为约1至2mg/m2,长春瑞宾剂量为约10至30mg/m2。抗胂瘤核香衍生物的有利给药剂量为每平方米体表面积200至2500毫克(mg/m2),例如700至1500mg/m2,尤其是每个疗程的5-FU剂量为200至500mg/m2,吉西他滨剂量为约800至1200mg/m2，卡培他滨剂量为约1000至2500mg/m2。烷化剂，如氮芥或亚硝基脲的有利给药剂量为每平方米体表面积100至500毫克(mg/m2)，例如120至200mg/m2,尤其是每个疗程的环石粦酰胺剂量为约100至500mg/m2,苯丁酸氮芥剂量为约0.1至0.2mg/m2,卡莫司汀剂量为约150至200mg/m2,洛莫司汀剂量为约100至150mg/m2。抗肿瘤蒽环素衍生物的有利给药剂量为每平方米体表面积10至75毫克(mg/m2),例如15至60mg/m2,尤其是每个疗程的柔红霉素剂量为约40至75mg/m2，阿霉素剂量为约25至45mg/m2,伊达比星剂量为约10至15mg/m2。曲妥单抗的有利给药剂量为每平方米体表面积1至5毫克(mg/m2),尤其是每个疗程剂量为2至4mg/m2。抗雌激素剂的有利给药剂量为每天约1至100毫克，依特定药剂及所治疗病症而定。它莫西芬的有利口服剂量为一天服用两次5至50毫克，优选为10至20毫克，持续治疗一段足够时间，以达成及维持治疗效果。托瑞米芬的有利口服剂量为一天服用一次约60毫克，持续治疗一段足够时间，以达成及维持治疗效果。阿纳托唑的有利口服剂量为一天服用一次约1毫克。屈洛昔芬的有利口服剂量为一天服用一次约20-100毫克。雷洛昔芬的有利口服剂量为一天服用一次约60毫克。依西美坦的有利口服剂量为一天服用一次约25毫克。这些剂量可以每个疗程给药例如一次、两次或多次，可以每7、14、21或28天重复一次。就其有用的药物性质而言，根据本发明的组合中的组分(即其它药剂与HDAC抑制剂)可配制成各种不同给药目的的药物型式。各组分可于分开的药物组合物中分开配制，或于同时含有两种组分的单一药物组合物中配制。因此，本发明还涉及一种药物组合物，其包含另一个药剂和HDAC抑制剂以及一种或多种药物载体。本发明还涉及一种以药物组合物形式的本发明的组合，其包含抗癌剂和本发明的HDAC抑制剂以及一种或多种药物载体。组合物中的用途。本发明还涉及一种产品，其含有作为第一活性成分的本发明的HDAC抑制剂以及作为第二活性成分的抗癌剂，作为混合制剂用于同时、单独或依次用途用于治疗患有癌症的患者。实验部分下列实施例举例说明本发明。在下文中，"EDC，，定义为N'-(乙基羰基亚氨基)^,]^二曱基-1,3-丙二胺，一氲氯化物，"DCM"定义为二氯甲烷，"DMSO"定义为二甲亚砜，"EtOAc，，定义为乙酸乙酯，"EtOH，，定义为乙醇，"HOBt，，定义为l-羟基-lH-苯并三唑，"MeOH"定义为甲醇，"TFA，，定义为三氟乙酸以及"THF，，定义为四氩呋喃。A.中间体化合物的制备实施例Al.^)...±.间..体.丄的.制.务在室温下，在N2流中，将乙醇钬(IV)(0.017mol)加入到2-[4-(氨基曱基)-l-哌啶基]-5-嘧啶甲酸乙酯(0.0083mol)和l-(I画曱基國IH-吲咮-3-基)-乙酮(O.Olmol)在l，2-二氯-乙烷(150ml)中的溶液中。将混合物在室温下搅拌4天。加入三(乙酸根合-a-O)硼氢化物(l-)钠(0.017mol)。将混合物在室温下搅拌3天，倒入到石友酸钾10%中。加入DCM。将混合物在室温下搅拌1小时，然后在石圭藻土(celite)中过滤。分离有机层，干燥(MgS04),过滤，并蒸除溶剂。残余物(5g)用硅胶柱色谱提纯(15-40|um)(洗脱液DCM/MeOH/NH4OH97/3/1)。收集纯的馏分，并蒸除溶剂，得到1.9g(54。/。)中间体l。D...i且体....的.制备<formula>formulaseeoriginaldocumentpage33</formula>将中间体1(0.0045mol)和氬氧化钠(0.018mol)在EtOH(190ml)中的混合物搅拌并回流4小时，然后冷却至室温，蒸发至干。将残余物吸收到乙醚中。滤出沉淀并千燥，得到1.6g(86%)中间体2，熔点>260°C。.P.丄..中..间..体.l.的.制.务<formula>formulaseeoriginaldocumentpage33</formula>在N2流中，将EDC(0.0117mol)和HOBT(0.0117mol)加入到中间体2(0.0039mol)在THF(160ml)和DCM(160ml)中的溶液中。将混合物在室温下搅拌30分钟。加入O-(四氢-2H-吡喃-2-基)-羟胺(0.0117mol)。将混合物在室温下搅拌3天，倒入到水水中，接着用DCM萃取。分离有才几层，干燥(MgS04),过滤，并蒸除溶剂。残余物(3g)用硅月交柱色谱提纯(15-40|um)(洗脱液DCM/MeOH/NH4OH93/7/0.5)。收集纯的馏分，并蒸除溶剂，得到1.55g(82%)中间体3。实施例A2.^)....中..乱体丄的.制.务<formula>formulaseeoriginaldocumentpage33</formula>在N2流中，将氰基硼氢化钠(0.0034mol)和乙酸(0.037mol)在室温下加入到中间体8(0.0038mol)和1-甲基-3-(3-吡咯烷基)-1H-。引咮(0.0034mol)在MeOH(70ml)中的溶液中。将混合物在室温下搅拌48小时，倒入到碳酸钾10%中，接着用DCM萃取。分离有机层，干燥(MgS04),过滤，并蒸除溶剂。残余物(L6g)用硅胶柱色谱提纯(5|um)(洗脱液DCM/MeOH/NH4OH99/1/0.05-94/6/0.3)。收集纯的馏分，并蒸除溶剂，得到0.38g(26。/。)中间体4。D...中..间.体.l.的制..备.将中间体4(0.0096mol)和氲氧化钠(0.038mol)在EtOH(450ml)中的混合物搅拌并回流4小时，然后冷却至室温并吸收到乙醚中。滤出沉淀，干燥，得到3.8g(900/。)中间体5，熔点〉260。C。丄.中..乱体.々..的.制.务在N2流中，在室温下，将EDC(0.0172mol)和HOBT(0.0172mol)加入到中间体5(0.0086mol)在THF(400ml)和DCM(400ml)中的溶液中。将混合物搅拌45分钟。加入O-(四氬-2H-吡喃-2-基)-羟胺(0.0172mol)。将混合物在室温下搅拌24小时，倒入到冰水中，并用DCM萃取。分离有机层，干燥(MgS04),过滤，并蒸除溶剂。残余物(6.8g)用硅胶柱色谱提纯(15-40|um)(洗脱液DCM/MeOH/NH4OH95/5/0.1)。收集纯的馏分，并蒸除溶剂，得到3g(68。/。)中间体6，熔点8(TC。实施例A3i)....中.河体....的.制.备<formula>formulaseeoriginaldocumentpage35</formula>在l(TC下，在N2流中，将2-(甲基磺酰基)-5-嘧啶甲酸乙酯(0.094mol)在乙腈(40ml)中的溶液加入到4-哌啶曱醇(0.086mol)和碳酸钾(0.172mol)在乙腈(200ml)中的悬浮液中。将混合物恢复至室温，然后搅拌4小时，倒入到水中并用EtOAc萃取。分离有机层，干燥(MgS04)，过滤，并蒸除溶剂。残余物(23g)用CH3CN/乙醚结晶。将沉淀滤出并干燥，得到7.8g(340/。)中间体7。残余物用硅胶柱色谱提纯(20-45|dm)(洗脱液DCM/MeOH/NH4OH97/3/0.1)。收集纯的馏分，蒸除溶剂，得到4.6g(200/())中间体7，熔点129。C。t丄.t.间.体.l.的.制..备.O在画78。C,在N2流中，将DMSO(0.127mol)加入到草酰氯(0.061mol)在DCM(110ml)中的溶液中。将混合物搅拌15分钟。加入中间体7(0.051mol)在DCM(200ml)中的溶液。混合物在-78。C搅拌1.5小时。滴加三乙胺(0.26mol)。将混合物在-78。C搅拌15分钟，然后冷却至室温2.5小时。加入水。混合物用DCM萃取。分离有机层，干燥(MgSOj,过滤，并蒸除溶剂。残余物(14g)用硅胶柱色谱提纯(20-45fim)(洗脱液环己烷/EtOAc70/30)。收集纯的馏分，并蒸除溶剂，得到7.6g(57%)中间体8。.Q.)....中.N.体.义的.勉务O在N2流中，将乙醇钛(IV)(0.0019mol)在室温下加入到中间体8(0.0014mol)和l-曱基國3画(3-哌啶基)-IH國巧I哚(0.0012mol)在1,2-二氯-乙烷(25ml)中的溶液中。将混合物在60。C下搅拌24小时，然后冷却至5°C。在N2流中，加入三(乙酸根合-a-O)硼氢化(l-)钠(0.0036mol)。将混合物在室温下4觉拌48小时，倒入到^友酸钾10°/。中。加入DCM。将混合物在硅藻土上过滤。分离有机层，干燥(MgS04),过滤，并蒸除溶剂。残余物(1g)用硅胶柱色谱提纯(0.15-40pm)(洗脱液DCM/MeOH/NH4OH97/3/0.1)。收集纯的馏分，并蒸除溶剂，得到0.36g(44%)中间体9。.H.i.间.体丄Q..的.制.务将中间体9(0.0008mol)和氬氧化钠(0.0032mol)在EtOH(40ml)中的混合物搅拌并回流4.5小时，然后冷却至室温，蒸发至干。将残余物吸收到乙醚中。将沉淀滤出并干燥，得到0.36g(100%)中间体IO,熔点〉260。C。.l..中..乱体j丄.的.制.务.在N2流中，在室温下，将EDC(0.0024mol)和HOBT(0.0024mol)加入到中间体10(0.0008mol)在THF(40ml)和DCM(40ml)中的溶液中。将混合物搅拌15分钟。加入O-(四氢-2H-吡喃-2-基)-羟胺(0.0024mol)。将混合物在室温下搅拌4天，倒入到水中，接着用DCM萃取。分离有机层，干燥(MgSOj,过滤，并蒸除溶剂。残余物(0.49g)用kromasil柱色"i普提纯(5)(洗脱液DCM/MeOH/NH4OH98/2/0.2-93/7/0.7)。收集纯的馏分，并蒸除溶剂，得到0.26g(61%)中间体11。实施例A4"...中..间..体.丄...的.制.务在N2流中，将乙醇，钛(4+)盐(0.0172mol)在室温下加入到中间体8(0.0104mol)和l-甲基誦3國(3-吡咯烷基)-IH誦舊(0.0115mol)在1,2-二氯乙烷(50ml)中的溶液中。混合物在60。C下搅拌3小时，然后在室温下搅拌过夜。分批加入三(乙酸根合-ot-O)硼氬化(l-)钠(0.0345mol)。将混合物在室温下搅拌过夜，接着倒入到水水中。加入DCM。将混合物在硅藻土上过滤。滤液用DCM萃取。分离有机层，干燥(MgS04),过滤，并蒸除溶剂。残余物(3.2g)用硅胶柱色谱提纯(0.15-40ium)(洗脱液DCM/MeOH/NH4OH96/4/0.2)。收集纯的馏分，并蒸除溶剂，得到0.55g(lP/。)中间体12。L)...中..间.体丄..的.制.务将中间体12(0.0012mol)和氪氧化钠(0.0024mol)在EtOH(40ml)中的混合物在6(TC下搅拌8小时，然后冷却至室温。过滤沉淀，用EtOH洗涤，然后用乙醚洗涤并干燥，得到0.6g(100%)中间体13,作为钠盐形式被分离。.d...中..间..体..M..的.制.务.在室温下，将HOBt(0.0024mol)和EDC(0.0024mol)加入到中间体13(0.0016mol)和三乙胺(0.0048mol)在DCM/THF(20ml)中的溶液中。将混合物在室温下搅拌15分钟。加入(四氢-2H-吡喃國2誦基)-羟胺(0.0032mol)。将混合物在室温下搅拌48小时，倒入到水中，接着用DCM萃取。分离有机层，千燥(MgS04)，过滤，并蒸除溶剂。残余物(0.6g)用kromasil柱色镨提纯(10|iim)(洗脱液DCM/MeOH/NH4OH97/3/0.3)。收集纯的馏分，并蒸除溶剂，得到0.046g(6%)中间体14。B.最终化合物的制备实施例Bl.佐.全物.丄的.制.备.<formula>formulaseeoriginaldocumentpage38</formula>将中间体3(0.003mol)在TFA(7.5ml)和MeOH(150ml)中的混合物在室温下搅拌24小时，然后在3(TC下进行蒸发。残余物用氨基涂敷的珪胶柱色谱提纯(25-40)(洗脱液DCM/MeOH/水80/20/2)。收集纯的馏分，蒸除溶剂。残余物(0.453g,37%)用MeOH/CH3CN/乙醚结晶。将沉淀滤出并干燥，得到0.255g(18%)化合物1,熔点296°C。实施例B2佐.会.教义.的.制.备..0.32C2HF3021.24H20<formula>formulaseeoriginaldocumentpage39</formula>将中间体6(0.0003mol)在TFA(0.9ml)和MeOH(18ml)中的混合物在室温下搅拌24小时，然后蒸发至干。残余物用氨基涂敷的硅胶柱色谱提纯(25-40jam)(洗脱液DCM/MeOH/水90/10/1)。收集纯的馏分，蒸除溶剂。残余物(0.195g)用乙醚吸收若干次。将混合物蒸发并干燥，得到0.122g(66%)化合物2，熔点231。C。实施例B3佐.金鲍.1.的.制.备.将中间体11(0.0005mol)在TFA(1.5ml)和MeOH(30ml)中的混合物在室温下搅拌24小时，然后在3(TC蒸发。残余物用CH3CN/MeOH/乙醚结晶。沉淀滤出并干燥，得到0.17g(56%)化合物3,熔点224。C。实施例B4化.全鲍.4..的.制.务.将中间体14(0.00009mol)在TFA(0.2ml)和MeOH(2ml)中的混合物在室温下搅拌24小时，然后蒸发至干。残余物(0.05g)用氨基涂l丈的硅月交柱色i普提纯(25-40|um)(洗脱液DCM/MeOH/水85/15/1)。收集纯的馏分，蒸除溶剂，得到0.022g(56%)化合物4，熔点70°C。实施例B5.佐.金物j..的.制.备.在室温下，将三乙胺(0.0027mol)加入到中间体13(0.0006mol)、1,2-苯二胺(0.0016mol)和苯并三唑-l-基氧基三(吡咯烷酮)锛六氟磷酸盐(0.0014mol)在DCM(5ml)和THF(5ml)中的溶液中。将混合物在室温下搅拌72小时，倒入到水中，并用DCM萃取。分离有机层，干燥(MgSOj,过滤，并蒸除溶剂。残余物(0.8g)用kromasil柱色谱提纯(3.5|im)(洗脱液DCM/MeOH/NH4OH97/3/0.3-92/8/0.3)。收集纯的馏分，蒸除溶剂，得到0.014g(4%)化合物5，熔点9CTC。表F-l列出了根据上述实施例之一制得的化合物。表F-1<table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table>C.药理学实施例组蛋白脱乙酰酶抑制作用的体外分析法(参见实施例C.1)测定采用式(I)化合物所得的抑制HDAC酶活性。式(I)化合物的细胞活性在A2780肿瘤细l包上，采用测试细l包毒性或存活性的比色测定法测定(MosmammTim,JournalofImmunologicalMethods65:55-63,1983)(参见实施例C.2)。化合物的溶解度测定化合物保留在溶液中的能力。在第一种方法中，测定稀释时化合物保留在水溶液中的能力(参见实施例C.3.a)。DMSO储备液使用单一含水緩冲溶剂在不同的连续步骤中稀释。然后，在BDGentest溶解度扫描仪中扫描混合物检测沉淀的出现。在第二种方法中，化合物在不同pH下的溶解度可以使用化学发光氮气检测器(参见实施例C.3.b)进行测定。药物的通透性表示其由一种介质移动至或通过另一种介质的能力。具体地说，其移动通过肠膜进入血流与/或从血流进入目标中的能力。通透性(参见实施例C.4)可以通过测定过滤器固定化的人工膜^f岸脂双层的形成进行测定。在过滤器固定化的人工膜分析法中，由96孔微滴定板和96孔过滤板形成"夹心"，使得每个复合孔中被分隔成两个隔间，底层为供体溶液，上层为受体溶液，中间以涂覆2%(重量/体积)二油酰基磷脂酰基-胆碱的十二碳烷溶液的125jam微过滤片(0.45iluti孔径)分隔，处于当该系统接触到含水緩沖液时，过滤器通道内形成多层膜的双层物的条件下。以厘米/秒测定通过此人工膜的化合物的通透性。其目的为检视药物在两种不同pH:4.0与7.4下通过平行人工膜的通透性。采用UV-分光光度计于250至500nm之间的最适当波长下检测化合物。药物的代谢作用表示该脂溶性异种生物化合物或生物内生化合物经酶转化成极性、水溶性且可排泄的代谢物(群)。药物代谢作用的主要器官为肝脏。代谢产物的活性通常低于母体化合物或无活性。然而，有些代谢物可能加强活性或毒性效果。因此，药物代谢作用可包括"去毒化"与"毒化"过程。决定生物体处理药物与化学物能力的主要酶系统之一由细胞色素P450单氧化酶代表，该酶是依赖NADPH的酶。化合物的代谢稳定性可于体外使用亚细胞人类组织测定(参见实施例C.5)。本文中化合物的代谢稳定性由这些化合物与微粒体培养15分钟后的药物代谢％表示。4乜合物的数量用LC-MS分碎斤法测定。现已表明，多种抗肿瘤剂激活p21蛋白，包括DNA损伤剂和组蛋白脱乙酰酶抑制剂。DNA损伤剂通过肿瘤抑制基因p53激活p21基因，而组蛋白脱乙酰酶抑制剂通过转录因子Spl转录激活p21基因。因此，DNA损伤剂通过p53应答元件激活p21启动子，而组蛋白脱乙酰酶抑制剂通过spl部位激活p21启动子(相对于TATA盒位于-60bp-+40bp区域)，这二者都引起p21蛋白表达增加。当细胞中的p21启动子由不包含p53应答元件的p211300bp启动子片l殳组成时，它因此对DNA损伤剂是非应答的。化合物诱导p21的能力可以通过试验化合物诱导p21的能力进而在细胞水平引起HDAC抑制进行评价。与对照组水平相比，该细月包可以稳定地用含不包含p53应答元件并且其中报道基因表达增加的p211300bp启动子片段的表达载体转染，确定化合物具有p21诱导能力。该报道基因是一种荧光蛋白，该报道基因的表达以所发射荧光的数量进行测定(参见实施例C.6.a)。最后的方法是一种体内方法，其中小鼠用于筛选化合物的药物活性。上述稳定变异的肿瘤细胞可以以足以产生肿瘤的数量给予小鼠。在肺瘤细胞在足够的时间内形成肿瘤后，可以将潜在活性化合物给予该动物，所述化合物对肿瘤细胞的作用通过测定报道基因的表达进行评价。与对照组水平相比，与药物活性化合物一起培养将导致报道基因表达增加(参见实施例C.6.b.)专一性HDAC抑制剂不应抑制其它酶，例如大量存在的CYPP450蛋白质。CYPP450(大肠杆菌表达的)蛋白质3A4、2D6en2C9将其专一性底物转化成荧光分子。CYP3A4蛋白质可使7-苯甲氧基-三氟曱基香豆素(BFC)转化成7-羟基-三氟甲基香豆素。CYP2D6蛋白质转化3-[2-(N，N-二乙基-N-甲基氨基)乙基]-7-曱氧基-4-甲基香豆素(AMMC)形成3-[2-(N,N-二乙基氨基)乙基]-7-羟基-4-曱基香豆素盐酸盐，CYP2C9蛋白质转化7-曱氧基-4-三氟甲基香豆素(MFC)形成7-羟基-4-三氟曱基香豆素。抑制这种酶反应的化合物将导致荧光讯号降低(参见实施例C.7)。实施例C.1:组蛋白脱乙酰酶的抑制作用的体外分析法使用Biomol的HDAC荧光活性分析/药物发现试剂盒(cat.No:AK-500-0001)。该HDAC荧光活性分析基于FluordeLys(荧光组蛋白脱乙酰酶赖氨酰基(Fl丽ogenicHistonedeAcetylaseLvsvl))底物和显影剂组合。该FluordeLys底物，包含乙酰化的赖氨酸侧链。该底物的脱乙酰作用4t丈化该底物，^使得在第二步中，用FluordeLys显影剂处理产生荧光基团。HeLa核萃取物(供应商Biomol)以60iug/ml与75iuM底物一起进行培养。将该FluordeLys底物加入到含有25mMTris，137mMNaCl,2.7mMKCl和lmMMgCl2.6H20在pH7.4的緩沖液中。30min后,加入l体积的显影剂。该荧光基团用355nm灯激发，在荧光板读数器上检测发射光(450nm)。对于每一实验，平行运行对照组(含HeLa核萃取物和緩冲液)，空白培养物(含緩冲液，但没有HeLa核萃取物)和样品(含溶于DMSO中的化合物并且进一步在緩冲液和HeLa核萃取物中稀释)。在第一实例中，化合物在1(^M浓度进行测试。当化合物在1(^M表现出活性时，产生浓度-反应曲线，其中该化合物在10^M和10一M之间的浓度范围内进行试^r。所有样品试验4次。在每一试^r中，空白值从对照组和样品值中扣除。对照样品表示100%的底物脱乙酰化。对于每一样品，荧光用对照组平均值的百分比来表示。当合适时，釆用分级数据的概率分析法计算IC5o值(将代谢物的数量减少到对照组的50%所需的药物浓度)。本文中测试化合物的效果用pIC50来表示(IC5o值的负log值)(参见表F國2)。实施例C.2:在A2780细J包上测定抗增殖活性所有试验化合物均溶于DMSO中，并进一步在培养基中稀释。细胞增殖分析法中的最终DMSO浓度从未超过O.1%(v/v)。对照组含有A2780细胞及不含化合物的DMSO,而空白组则含有DMSO,但不含细胞。将MTT以5mg/ml溶于PBS中。制备甘氨酸緩冲液，其包含0.1M甘氨酸和0.1MNaCl,通过NaOH(1N)緩冲至pH10.5(所有试剂均来自Merck)。取人类A2780卵巢癌瘤细胞(美国宾州FoxChase癌症中心T.C.Hamilton博士的热心捐赠)于补充2mML-谷酰胺、50貼/ml庆大霉素与10%胎牛血清的RPMI1640培养基中培养。细胞照例以单层培养物保持在37°C的潮湿5%C02气氛中。每周使用胰蛋白酶/EDTA溶液传代细胞一次，分割比例为l:40。所有培养基与补充物均得自LifeTechnologies。采用Gen-Probe霉浆菌组织培养试剂盒(供应商BioM6rieux)测得细胞中不含霉浆菌污染物。将细胞接种在NUNCTM96孔培养板中(供应商LifeTechnologies),使之附着在塑胶板上过夜。用于铺板的密度为每孔1500个细胞，总体积为200pl培养基。细胞附着在培养板上后，更换培养基，添加药物与/溶剂至最终体积200|Lil。培养4天后，以200pl新鲜培养基置换培养基，采用以MTT为基础的分析法分析细胞密度与活力。每孔中添加25|LilMTT溶液，细胞再于37。C下培养2小时。然后，小心吸出培养基，依序添加25inl甘氨酸緩沖液及100iulDMSO,使蓝色MTT-甲腊产物溶解。微试验板于微板振荡器上振荡10分钟，使用Emax96孔分光光度计(供应商Sopachem)测定540nm的吸光度。实验中，各实验条件的结果均为3个重复孔的平均值。出于初次筛选的目的，化合物在单一固定浓度10《M下测试。对于活性化合物，则重复试-睑，以建立完整的浓度-响应曲线。对于每次实马全，对照组(不含药物)及空白培养组(不含细胞或药物)均平行进行。所有对照组与样品组数值均扣除空白组数值。对于每个样品，细胞生长平均值(以吸光度为单位)均以相对于对照组细胞生长平均值的百分比表示。当适当时，采用分级数据的概率分析法计算IC50值(使细胞生长下降至对照组的50%时所需药物浓度)(Finney,D.J.,ProbitAnalyses,第2版，第IO章,GradedResponse,CambridgeUniversityPress,Cambridge,1962)。本文中以pICso(ICso值的负对数值)表示测试化合物的效果(参见表F-2)。实施例C.3:溶解度/稳定性.^^...在.盒杰介质.中..的.动.左.学婆.解.度.5000-9.8jxM(1/2稀释)的DMSO-储备液在DMSO中在96孔储备液板(200ml每孔)中制备。每次稀释后，将所述样品混合。然后，将这些DMSO溶液(2)的等分试样转移到2个其它96孔緩冲板中，含有200|iil每孔含水緩冲液。每一緩冲板含有含水緩冲液pH7.4或含水緩冲液pH4.0。上次稀释后，将緩冲板混合，样品在室温下稳定0.5小时。每一化合物稀释一式两份以排除随机误差。然后，在BDGentest溶解度扫描仪中扫描混合物检测沉淀的出现。基于混合物中不存在/存在沉淀，通过内插法计算动力学溶解度。评级分为3类。高溶解度化合物得到3分，其具有大于或等于50pM的溶解度。中等溶解度的化合物得到2分，其具有大于10)LiM小于50pM的溶解度。低溶解度的化合物得到l分，这些化合物的溶解度小于或等于lO]uM。(参见表F-2)。不同pH化合物的溶解度还可以使用化学发光氮气检测器进行测定(参见表F-2)。实施例C.4:平行人工膜通透性分析法在含2ml含水緩沖液系统pH4或pH7.4(PSR4系统溶液浓缩物(pION))的深孔或预混合板中稀释储备液样品(10|ul于100%DMSO中的5mM储备液的等分试样)。在添加样品至参考玲反中之前，先添加150iul緩冲液至孔中，测定空白UV值。之后，弃置i爰冲液，并将该板用作参考板。所有测定均在耐UV的板子上进行(供应商Coaster或Grcinsr)。在测定参考板的空白值后，添加150pl稀释的样品至参考板中，添加200iul稀释样品至供体板1中。使用4iul人工膜形成溶液(1,2-二油酰基-sn-甘油-3-胆碱磷酸于含0.1%2,6-二-叔丁基-4-曱基苯酚的十二碳烷中)涂覆受体过滤板l(供应商Millipore,MAIPN45型)，置于供体板l上方，形成"夹心，，。添加緩冲液(200|iil)至上方的受体孔中。此"夹心"加盖，保存在室温与黑暗中18小时。在添加150jal緩冲液至孔中后，测定UV值，测定受体板2的空白值。在受体板2测定空白值后，弃置緩沖液，从受体过滤板1中取出150ili1受体溶液移至受体板2中。然后自夹心中取出受体过滤板l。在测定供体板2的空白值(如上述)后，自供体板l中取出150pl供体溶液移至供体板2中。扫描供体板2、受体板2及参考板的孔中UV光谱(SpectraMAX190)。所有光谱均经PSR4p控制软件计算通透性。所有化合物均进行三次重复。每次实验均使用卡马西平、灰黄霉素、无环乌苷、阿替洛尔、呋塞米和氯噻溱作为标准物。化合物分成三类低通透性(平均值O.5xl0—、m/s;得分l),中通透性(lxl(T6cm/s〉平均值^0.5x10—6cm/s;得分2)或高通透性(2lxl(T6cm/s;得分3)。实施例C.5:代谢稳定性依据Gorrod等人(Xenobiotica5:453-462,1975)通过在使组织经过机械性均质化后离心分离制备亚细胞组织制剂。肝组织于水冷O.lMTns-HCl(pH7.4)緩冲液中漂洗，以洗除过量血液。随后吸干组织，称重，使用手术用剪刀粗略剪断。组织碎片于3倍体积水冷的0.1M磷酸盐緩沖液(pH7.4)中，使用装有特氟隆捣杵的Potter-S(意大利Bmun公司)或SorvallOmni-Mix均质器均质化7xl0秒。在两种情况下，在均质化期间，容器均保持在水中/上。组织均质液于4。C下，4吏用Sorvall离心才几或Beckmann超离心才几，于9000xg下离心20分钟。所得上清液保存在-80。C下，称为"S9"。此S9部分可4吏用Beckmann超离心才几于100,000xg下再离心60分钟(4°C)。小心吸出所得上清液，等分并称为"胞液，，。将沉淀再悬浮于0.1M石舞酸盐i爰冲液中(pH7.4),每0.5克原始组织重的i冬体积为1ml,称为"微粒体"。所有亚细胞组织部分被等分后，立即于液氮中冷冻，保存在-8(TC下，直到使用时为止。对于测试样品，培养混合物含有PBS(0.1M)、化合物(5jiM)、微粒体(1mg/ml)与NADPH-发生系统(0.8mM葡萄糖-6-磷酸、0.8mM氯化镁及0.8单位葡萄糖-6-磷酸去氢酶)。对照组样品含有相同材料，但微粒体被热去活(95。C下10分钟)的微粒体替代。对照组样品中化合物的回收率总是100%。混合物于37。C下预培养5分钟。添加0.8mMNADP在零时间点(t=0)开始反应，并将样品培养15分钟(t=15)。添加2倍体积DMSO停止反应。样品随后于900xg下离心IO分钟，分析前上清液在室温下保存不超过24小时。所有培养均进行二次重复。采用LC-MS分析法分析上清液。所有培养均进行二次。采用LC-MS分析法分析上清液。在XterraMSC18(50x4.6mm，5]um，美国Waters乂〉司)上洗脱样品。采用Alliance2790(供应商美国Waters公司)HPLC系统。洗脱剂为緩沖液A(在&0/乙腈(95/5)中的25mM乙酸铵(pH5.2)),溶剂B为乙腈，且溶剂C为曱醇，流速为2.4ml/min。所使用的梯度为在5分钟内，以线性方式，使有机相浓度由0%逐渐提高至50%B与50%C，于1分钟内至100%B,然后保持有机相浓度固定另外1.5分钟。样品注射总体积为25iliI。采用附有ESI光源的Quattro(供应商英国曼彻斯特市Micromass公司)三重四级质谱仪作为检测器。光源与去溶剂化温度分别设定在120与350°C,使用氮气作为气雾剂及干燥气体。以正扫描冲莫式取得数据(单离子反应)。锥管电压设定在10V,停留时间为l秒。代谢稳定性以化合物于活性微粒体(E(act))的存在下培养15分钟后的代谢％表示(代谢％=100%-((E(act)于t为15时的总离子电流(TIC)/E(act)于t为0时的TIC)xioo)。代谢百分比小于20%的化合物则定义为是高度代谢稳定的。代谢百分比在20与70%之间的化合物则定义为是中度稳定的，而代谢百分比高于70%的化合物则定义为是低度代谢稳定的。当进行代谢稳定性扫描时，总是包含3种参考化合物。包含维拉帕米作为低度代谢稳定性的化合物(代谢％=73%)。包含西沙比利作为中度代谢稳定性的化合物(代谢％=45%),并且包含丙醇作为中度至高度代谢稳定性的化合物(代谢％=25%)。使用这些参考化合物确认代谢稳定性分析法的有效性。测试化合物2和3，并分別发现它们是高代谢稳定的和中等代谢稳定的。实施例C.6:P21诱导能力.实.燕.對.d终.:.....绅.胞方.法A2780细胞(ATCC)在补充有10。/。FCS,2mML-谷氨酰胺和庆大霉素的RPMI1640培养基中在37"在湿润的培养箱中与5%C02—起培养。所有细胞培养溶液由Gibco-BRL(Gaithersburg，MD)提供。其它物质由Nunc提供。基因组DNA从增殖A2780细胞提取并用作p21启动子的嵌套式PCR分离的模板。首次扩增在55。C的退火温度下使用低聚核苷酸对作为模板进行20周期。相对于TATA盒含-4551至+88片段的所得4.5kb片段用低聚核普酸TCGGGTACCGAGGGCGCGGTGCTTGG和周期，产生4.5kb片段并随后用低聚核苷酸对TCGGGTACCGGTAGATGGGAGCGGATAGACACATC和期，产生相对于TATA盒含-1300至+88片段的1.3kb片段。存在于低聚核苷酸(下划线序列)的限制性位点XhoI和KpnI用于亚克隆。所述荧光素酶指针从pGL3-碱基中除去并在Kpnl和Xbal限制性位点用ZsGreen指针代替(来自pZsGreenl-Nl质粒)。pGL3-碱基-ZsGreen-1300通过将上述人p21启动子区域的1.3kb片段插入到XhoI和KpnI位点的pGL3-石咸基-ZsGreen进行构造。所有限制酶由BoehringerManheim(德国)提供。将A2780细胞以2xlOS细胞密度平铺到6孔板中，培养24小时，并用2ug的pGL3-碱基-ZsGreen-1300和0.2ug的pSV2neo载体通过使用Lipofectamine2000(Invitrogen,布鲁塞尔，比利时)4姿照厂商描述进行转染。该转染后的细胞用G418(Gibco-BRL,Gaithersburg,MD)选择IO天，并使单细胞悬浮液进行生长。三周后，获得单克隆。扩展A2780选择的克隆并以10000细胞每孔接种到96孔板中。接种24小时后，细胞用化合物(在邻近p21启动子区域中影响spl部位)处理另外24小时。接着，细胞用4。/oPFA固定30，并用Hoechst染料对比染色。引起ZsGreen产生并由此产生荧光的p21启动子激活，通过AscentFluoroskan(ThermoLabsystems,布鲁塞尔，比利时)进行监测。对于每一实验，平行进行对照组(不含药物)和空白培养(不含细胞或药物)。从所有对照组和样品值中扣除空白值。对于每一样品，p21诱导值用存在于对照组中的p21百分比值来表示。诱导百分比高于130%定义为显著诱导。测试化合物l、2和3,并且其在100nM浓度下表现出显著诱导。.实.掩创..d.!,.;....体.改方.漆.将选择的克隆皮下注射(107细胞/200到棵鼠侧腹中，12天后获得可用卡尺测量的肿瘤。从第12天起，对动物口服或静脉内每日给药6天，给予溶剂和20-40mpk化合物(4-10只动物每组)。通过内部发展自动全身成像系统(装备有GFP过滤器并与CCD摄像机型JAI⑧CV-M卯耦合的荧光立体显微镜型OlympusSZX12,通过基于NationalInstruments的IMAQ视觉软件软件包控制)的荧光评价肺瘤。测试化合物2并与对照组相比，其表现出增加的荧光。实施例C.7:P450抑制能力所有试l全化合物均溶于DMSO(5mM)中，再于乙腈中稀释至5xl(T4M。使用分析緩冲液(0.1MNaK磷酸盐緩冲液pH7.4)进一步稀释，最终溶剂浓度从未超过2%。CYP3A4蛋白质的分析法包括每孔中含15pmolP450/mg蛋白质(在0.01MNaK磷酸盐緩冲液+1.15。/。KCl中)、NADPH发生系统(含3.3mM葡萄糖-6-磷酸、0.4U/ml葡萄糖-6-磷酸去氢酶、1.3mMNADP与3.3mMMgCl2.6H20的分析緩冲液)及化合物，总分析体积为100微升。于37。C下预培养5分钟后，添加150]uM含荧光探针底物BFC的分析緩冲液开始酶反应。于室温下培养30分钟后，添加2倍体积乙腈中止反应。在激发波长405nm及发射波长535nm下测定荧光。其中包含酮基康唑(ketoconazole)(IC5。值=3《1(T8M)作为此实'睑的参考化合物。CYP2D6蛋白质的分析法包括每孔中含6pmolP450/mg蛋白质(在0.01MNaK磷酸盐緩冲液+1.15y。KCl中)、NADPH发生系统(含0.41mM葡萄糖-6-磷酸、0.4U/ml葡萄糖-6-磷酸去氢酶、0.0082mMNADP与0.41mMMgCl2'6H2〇的分析緩冲液)及化合物，总分析体积为100微升。在37。C下预培养5分钟后，添加3|LiM含荧光探针底物AMMC的分析緩冲液开始酶反应。于室温下培养45分钟后，添加2倍体积乙腈中止反应。在激发波长405nm及发射波长460nm下测定荧光。其中包含喹尼定(quinidine)(IC5C^l<5xlO-8M)作为此实马全的参考化合物。CYP2C9蛋白质的分析法包括每孔中含15pmolP450/mg蛋白质(在0.01MNaK磷酸盐緩冲液+1.15。/oKCl中)、NADPH发生系统(含3.3mM葡萄糖-6-磷酸、0.4U/ml葡萄糖-6-磷酸去氬酶、1.3mMNADP与3.3mMMgCl2.6H20的分析緩冲液)及化合物，总分析体积为100微升。在37t:下预培养5分钟后，添加200iLiM含荧光探针底物MFC的分析緩冲液开始酶反应。在室温下培养30分钟后，添加2倍体积乙腈中止反应。在激发波长405nm及发射波长535nm下测定荧光。其中包含速吩唑(sulfaphenazole)(IC5(^i=6.8xlO-7M)作为此实验的参考化合物。出于初次篩选的目的，化合物在lxlO-SM的单一固定浓度下测试。对于活性化合物，重复实验以建立完整的浓度-响应曲线。对于每次实验，均平行进行对照组(不含药物)与空白培养组(不含酶或药物)。所有化合物均分析四次。所有对照组与样品组数值均扣除空白组数值。对于各样品，样品的P450活性平均值(以相对荧光单位表示)以相对于对照组中P450活性平均值的百分比表示。抑制作用百分比以100%减去样品中P450活性平均值表示。若适当时，计算IC5o值(使P450活性下降至对照组的50%时所需药物浓度)。表F-2:列举了根据实施例C.l、C.2、C.3.a.和C.3.b试验的化合物的结果。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage50</formula>D.组合物实施例薄膜衣片剂.片.刑.核.的..制.备.将100g式(I)化合物、570g乳糖和200g淀粉的混合物充分混合，其后用5g十二烷基石危酸钠和10g聚乙烯-p比咯烷酮在约200ml水中的溶液湿润。将该湿4分末混合物过筛，干燥并再次过筛。然后，加入100g微晶纤维素和15g氢化植物油。将整个充分混合并压制成片剂，得到10.000片，每片包含10mg式(I)化合物。向10g曱基纤维素在75ml变性乙醇中的溶液中加入5g乙基纤维素在150ml二氯甲烷中的溶液。然后，加入75ml二氯甲烷和2.5ml1,2,3-丙三醇。将10g聚乙二醇熔融并溶于75ml二氯甲烷中。将后者溶液加入到前者中，然后加入2.5g十八烷酸^t美、5g聚乙烯-p比咯烷酮和30ml浓缩色素悬浮液，接着将整个均化。该片剂核用由此获得的混合物在包衣装置中包衣。权利要求1.式(I)的化合物其N-氧化物形式、药学上可接受的加成盐和立体化学异构形式，其中n是0或1，以及当n是0时，那么是指直接键；m是0、1或2，以及当n是0时，那么是指直接键；p是0或1，以及当n是0时，那么是指直接键；每个X独立地是N或CH；每个Y独立地是O、NH、N-C1-6烷基、CH或CH2，以及当Y是CH时，那么所述取代基与环结构的Y原子相连；R1是羟基或式(a-1)的基团其中R9是羟基或-NH2；R10是氢、噻吩基、呋喃基或苯基，并且每个噻吩基、呋喃基或苯基可以任选被卤素、氨基、硝基、氰基、羟基、苯基、C1-6烷基、(二C1-6烷基)氨基、C1-6烷氧基、苯基C1-6烷氧基、羟基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基、羟基羰基、C1-6烷基羰基、多卤代C1-6烷氧基、多卤代C1-6烷基、C1-6烷基磺酰基、羟基羰基C1-6烷基、C1-6烷基羰基氨基、氨基磺酰基、氨基磺酰基C1-6烷基、异噁唑基、氨基羰基、苯基C2-6烯基、苯基C3-6炔基或吡啶基C3-6炔基取代；R6、R7和R8每个独立地是氢、-NH2、硝基、呋喃基、卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、三氟甲基、噻吩基、苯基、C1-6烷基羰基氨基、氨基羰基C1-6烷基或-C≡C-CH2-R11；其中R11是氢、C1-6烷基、羟基、氨基或C1-6烷氧基；R2是C1-6烷基、C3-7环烷基、C1-6烷基氨基羰基或C1-6烷氧基羰基；R3是氢、C1-6烷基、C3-7环烷基、羟基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基或C1-6烷基氨基羰基；或R2和R3可以与亚甲基、亚乙基或亚丙基桥连基桥连(即形成环状的环体系)；R4是氢、C1-6烷基、-C(＝O)-CHR12R13或-S(＝O)2-N(CH3)2；其中每个R12和R13独立地是氢、氨基、C1-6烷基或氨基C1-6烷基；和R5是氢、羟基、氨基、卤素、C1-6烷基、多卤代C1-6烷基、C1-6烷氧基羰基、羟基羰基、C1-6烷基羰基氨基、C1-6烷氧基或单-或二(C1-6烷基)氨基。2.权利要求1的化合物，其中n是l;p是0;每个Y是CH;R"是氢；R6、117和118每个独立地是氢，RS是d—6烷基以及I^是氢或者I^和RS可以与亚曱基、亚乙基或亚丙基桥连基桥连；W是C"烷基；以及RS是氢。3.权利要求1和2的化合物，其中n是l;m是l或2;p是0;每个X是N;每个Y是CH;112和113与亚曱基、亚乙基或亚丙基桥连基桥连；W是Cw烷基；以及W是氢。4.权利要求l、2和3的化合物，其中所述化合物是化合物No.2和化合物No.3。<table>tableseeoriginaldocumentpage3</column></row><table>5.药物组合物，其包含药学上可接受的载体和作为活性成分的治疗有效量的权利要求1-4所述的化合物。6.制备权利要求5所述的药物组合物的方法，其中将所述的药学上可接受的载体和权利要求1-4所述的化合物密切混合。7.权利要求l-4任一项的化合物，作为药品。8.权利要求1-4任一项的化合物制备用于治疗增殖性疾病的药物的用途。9.抗癌剂和权利要求l-4任一项所述的HDAC抑制剂的组合。10.制备权利要求1所述的化合物的方法，其特征在于a)使式(II)中间体与合适的酸反应，得到式(I)的异羟肟酸，其中Ri是羟基，在此称为式(I-a)的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>(I-a)b)使式(III)的中间体，其中M代表氢或钠或锂或碱金属阳离子，与式(IV)的中间体在合适的试剂存在下和在合适的溶剂中反应，生成式(I)的化合物，其中W是式(a-1)的基团以及RS是-NH2，在此称为式(I-b)的化合物，R6IO^,II/=N/\(CH2>nR4厂l、-N\_7R5(I-b)c)使式(V)的中间体与合适的酸在合适的溶剂中反应，生成式(I-b)的化合物，或d)使式(VI)的中间体，其中TBDMS是指叔丁基(二曱基)硅烷基,与氟化四丁基铵在合适的溶剂中反应，生成式(I)的化合物，其中R]是式(a-1)的基团以及W是羟基，在此称为式(I-c)的化合物。11.式(A)的化合物，其中Q是d.2烷氧羰基、羟基羰基或四氢p比喃氧基氨基羰基以及n、m、p、X、Y、Z、R2、R3、114和115如式(I)所定义，及其N-氧化物形式、药学上可接受的加成盐和立体化学异构形式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>12.制备权利要求11所述的化合物的方法，其特征在于a)使式(III-a)的中间体与式(VII)的中间体反应，生成式(A)的化合物，其中Q是四氢吡喃氧基氨基羰基，由式(II)表示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>b)使式(X)的中间体与合适的酸性溶液反应，生成式(A)的化合物，其中Q是羟基羰基，在此称为式(III)的化合物，c)使式(XI)的中间体与式(XII)的中间体反应，形成式(A)的化合物，其中Q是d.2烷氧羰基以及R^是氢，在此称为式(X-a)的化合物，或d)使式(XIII)的中间体与式(XIV)的中间体反应，形成式(A)的化合物，其中Q是d.2烷氧羰基以及I^和RS是桥连的，所述的虚线代表亚曱基、亚乙基或亚丙基桥连基以及n是1，在此称为式(X-b)的中间体<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>全文摘要本发明包含新的式(I)的化合物，其中R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、X和Y具有所定义的含义，具有组蛋白脱乙酰酶抑制酶活性；它们的制备方法、含有它们的组合物以及它们用作药品的用途。文档编号A61K31/506GK101370803SQ200780002579公开日2009年2月18日申请日期2007年1月16日优先权日2006年1月19日发明者I·N·C·皮拉特,P·R·安基鲍德申请人:詹森药业有限公司