专利名称：：一种单克隆抗体的冻干制剂的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种抗-EGFR单克隆抗体的冻干制剂。
背景技术：
：表皮生长因子受体(印ider腿lgrowthfactorrec印tor，EGFR)突变、失调或过表达于许多上皮恶性肿瘤，在肿瘤的生长和分化过程中起重要作用。抗EGFR的单克隆抗体是针对于胞外域EFGR的靶向性抗体，临床应用显示了良好的抗肿瘤活性，而且并不产生严重副反应。而抗-EGFR单克隆抗体抗癌原理正基于此。现有的抗-EGFR抗体制剂专利德国S马瑟斯和H-C马勒通过沉淀试剂和晶体得到抗-EGFR抗体的固体形式制剂(申请号/专利号200480034587)。其缺点沉淀试剂得到的蛋白有时无法复溶。默克专利有限公司的H-C马勒；R米勒；；U马丁尼_马尔；U哈斯；C巴赫曼发明包含两妥昔单抗(Cetuximab)的稳定的液体药物制剂(申请号02814105.9)，所述Cetuximab是一种抗表皮生长因子受体(EGF受体)的嵌合单克隆抗体。所述制剂的贮藏稳定性增强并且可经胃肠外途径用于治疗肿瘤。但此配方是液体制剂，长时间贮存容易发生蛋白聚集和其他化学反应，不利于运输和贮存。S*马瑟斯和H-O马勒又通过超滤制备抗-EGFR抗体的高浓縮液体，发明了抗-EGFR抗体液体制剂的方法(申请号/专利号200580004883)。这项发明很大程度缓解了以往因蛋白药物浓度低，但是也有不足之处，首先以液体制剂的形式存在的蛋白，更容易发生理化反应，比如发生脱酰胺反应、被其他物质氧化或水解，其次当蛋白在水溶液中浓度过高时容易聚集，注入人体后易产生免疫反应。更重要的是，液体制剂在长途运输中，剧烈震荡会使蛋白质容易变性，大去活性。
发明内容抗EGFR-单克隆抗体包括鼠源的、人鼠嵌合的、完全人源化的抗EGFR-单克隆抗体。本发明制剂配方简单，蛋白体系稳定。冻干得到的制剂，蛋白稳定性更高，便于大规模生产，贮存和运输。冻干蛋白经复溶后蛋白理化性质及活性没有显著变化，并且不存在药理上不可接受的试剂，从而具有良好的安全性和耐受性。本发明是一种含有抗EGFR-单克隆抗体的冻干制剂，制剂的组成包括抗EGFR-单克隆抗体、赋形剂、保护剂、缓冲盐。抗EGFR-单克隆抗体冻干制剂复溶后抗体蛋白含量为2-1OOmg/mL，更优选为25-75mg/mL。这种高浓度的蛋白制剂可以大大减轻患者用药注射量大的痛苦。在赋形剂的帮助下抗EGFR-抗体更容易赋形冻干保存。赋形剂为糖类、多醇类，更优选为甘露醇、蔗糖、葡萄糖、山梨醇。赋形剂在制剂中的含量为0-20%，更优选为2-10%。本发明选择的保护剂为氨基酸、糖类、醇类、吐温。更优选为吐温、精氨酸、山梨醇。保护剂在冻干制剂经注射用水复溶后的含量为10mmol/L-200mmol/L，更优选为50-100,l/L。本发明选择的冻干制剂缓冲盐为磷酸盐缓冲体系、Tris缓冲体系以及人体可接受的缓冲盐。冻干制剂经注射用水复溶后缓冲盐浓度为0-200mmol/L，更优选为5mmo1/L-50mmol/L，pH在6.5-8.0之间，优选为6.8-7.4。制剂冻干过程包括预冻，抽真空和循环冷冻2步。预冻时间不少于1.5小时，更有选4-8小时。抽真空和循环冷冻是同时进行，程序化步骤，循环冷冻不少于15小时。具体实施例方式以下通过实施例、实验例详细说明本发明的内容，但这些实施例并不构成对本发明的限制。实施例1:水针对比溶液实施例2:溶液A<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>实施例4:冻干将溶液A、溶液B按照以下程序冻干预冻-50°C，5小时。循环冷冻从-5(rC程序性升温到30°C，共20小时，真空度70bar。在冻干期间，可使用参气来达到温度均匀的目的。也可以更长时间进行循环冷冻而不会影响产品的质量。实施例5:稳定性考察，采用药品加速稳定性实验考察以上3种配方的贮存稳定性，温度25°C。检测方法纯度检测高效液相色谱法，柱子用TSK3000SW^流动相20mmo1磷酸盐缓冲液50.4mol/LNa2S04。等电点根据《中国药典》2005年版等点聚焦电泳法。内毒素检测根据《中国药典》2005年版细菌内毒素检测方法。外观根据《中国药典》2005年版可见异物检查法。活性根据A418检测方法以市售爱必妥(默克公司)做为对照品。设定其活性为100%，水针对比溶液、溶液A、溶液B采用与其活性的比较值。加速稳定性实验结果(25°C)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>根据稳定性试验结果表明冻干制剂的贮存稳定性明显优于液体制剂。权利要求一种含有抗EGFR-抗体的冻干制剂，其特征是制剂的组成部分含有抗EGFR-抗体、赋形剂、保护剂、缓冲盐。2.根据权利要求l，其特征在于抗EGFR-抗体冻干制剂复溶后含量为2-100mg/mL，更优选为25-75mg/mL。3.根据权利要求1，其特征在于赋形剂为糖类、多醇类，更优选为甘露醇、蔗糖、葡萄糖、山梨醇。4.根据权利要求3，其特征在于赋形剂在制剂中的含量为0-20%，更优选为2-10%。5.根据权利要求1，其特征在于保护剂为氨基酸、糖类、醇类、吐温。更优选为吐温、精氨酸、山梨醇。6.根据权利要求5，保护剂在冻干制剂经注射用水复溶后的含量为10mM/L-200mM/L，更优选为50-100mM/L。7.根据权利要求l，其特征在于冻干制剂缓冲盐为人体可接受的缓冲盐，更优选磷酸盐缓冲体系，冻干制剂经注射用水复溶后缓冲盐浓度为0-200mM/L，更优选为5mM/L-50mM/L，pH在6.5-8.0之间。8.根据权利要求1，其特征在于表面活性剂为吐温类，更优选吐温80，9.根据权利要求8，其特征在于冻干制剂经注射用水复溶后表面活性剂浓度为0.001%-0.05%，更优选0.001%-0.01%。10.根据权利要求9，其特征在于预冻时间不少于1.5小时，更有选4-8小时。11.根据权利要求9，其特征在于抽真空和循环冷冻是同时进行，程序化步骤，循环冷冻不少于15小时。全文摘要本发明提供了抗EGFR-抗体的冻干制剂的制备方法。所述抗EGFR-抗体的冻干制剂是由抗EGFR-抗体蛋白，保护剂，赋型剂，缓冲盐经过冻干制备而成，是一种新的高浓度的EGFR-抗体的冻干制剂。本发明提供的抗EGFR-抗体蛋白冻干制剂稳定性好，有效期延长，易于保存和运输。文档编号A61P35/00GK101716343SQ200810137278公开日2010年6月2日申请日期2008年10月9日优先权日2008年10月9日发明者冷国庆,刘高波,李会成,李郑武,李金花,赵华南,陈玉军,高晶申请人:哈药集团生物工程有限公司