专利名称：人znf786基因的用途及其相关药物的制作方法
技术领域：
本发明涉及生物技术领域，更具体地涉及人ZNF786基因的用途及其相关药物。
背景技术：
核糖核酸干扰(RNA interference, RNAi)现象是指当与内源性mRNA编码区某段序列同源的双链RNA(dsRNA)导入细胞后，该mRNA发生特异性降解，而导致该基因表达的沉默。研究表明，长度为21-23nt的双链RNA能够在转录和转录后水平特异性的引起RNAi(Tuschl T, Zamore PD, Sharp PA, Bartel DP.RNAi:double-stranded RNA directsthe ATP-dependent cleavage of mRNA at 21to 23nucleotide intervals.Cell 2000 ；101:25-33.)。肿瘤是威胁人类健康的主要疾病。肿瘤患者虽经化疗、放疗和综合治疗，但五年生存率仍很低，如能对肿瘤发病和进展有关的基因进行干预，将能为肿瘤的治疗开辟新途径。近年来，RNAi已成为肿瘤的基因治疗的有效策略。利用RNAi技术可以抑制原癌基因、突变的抑癌基因、细胞周期相关基因、抗凋亡相关基因等的表达来抑制肿瘤的发生和发展(Uprichard，Susan L The therapeutic potential of RNA interference.FEBSLetters2005 ；579:5996-6007.)。锌指蛋白是人体中 最大的蛋白家族，是识别核酸最常见的结构元件。研究发现人类基因的1%属于锌指蛋白基因家族。锌指蛋白能够通过靶定在基因启动子区域而调节基因的表达，在组织细胞的生长、增殖和分化中均起重要作用，其异常表达可能导致许多疾病包括恶性肿瘤的发生(Yajima I，Kumasaka M，Thang ND，Yanagishita T，Ohgami N，Kallenberg D，Naito Y，Yoshikawa T，Sakashita N，Kato M.Zinc finger protein 28asa novel melanoma-related molecule.J Dermatol Sc1.2009 ；55:68-70.0yanagi H，Takenaka K，Ishikawa S，Kawano Y，Adachi Y，Ueda K，Wada H，Tanaka F.Expression ofLUN gene that encodes a novel RING finger protein is correlated with developmentand progression of non-small cell lung cancer.Lung Cancer.2004 ；46:21-28.Witkiewicz-Kucharczyk A，Bal W.Damage of zinc fingers in DNA repair proteins，a novel molecular mechanism in carcinogenesis.Toxicol Lett.2006 ； 162:29-42.Vendrell JA, Ghayad S，Ben-Larbi S，Dumontet C，Mechti N，Cohen PA.A20/TNFAIP3，a new estrogen-regulated gene that confers tamoxifen resistance in breastcancercells.0ncogene.2007 ；26:4656-4667.)。ZFY(zinc finger-Y)基因家族在脊椎动物中是一个高度保守的基因家族，在分子结构上都具有一个酸性氨基末端和羧基末端，含有锌指结构的DNA结合区。目前已发现ZFY基因家族共包括三个成员:ZNF786、ZFY和ZFA基因，他们在分子结构上非常相似(North M， Sargent C， O’ Brien J， Taylor K， Wolfe J， Affara NA， Ferguson-SmithMA.Comparison of ZFY and ZNF786 gene structure and analysis of alternative3，untranslated regions of ZFY.Nucleic Acids Res.1991 ；19:2579-2586.)。一般哺乳动物均含有ZNF786和ZFY基因，其中，ZNF786基因位于X染色体上，而ZFY基因位于Y染色体上(Palmer MS, Berta P, Sinclair AH, Pym B, Goodfellow PN.Comparison of humanZFY and ZNF786transcripts.Proc Natl Acad Sci U S A.1990 ；87:1681-1685.) 已有大量研究证实ZFY基因家族与动物的性别有关，因此鉴定ZNF786和ZFY也成为甄别动物性别的可靠指标。深入研究表明，ZFY基因家族可能与睾丸发育有关，决定了动物性别的发展(Schneider-Gjidicke A, Beer-Romero P, Brown LG, Nussbaum R, Page DC.ZNF786has agene structure similar to ZFY,the putative human sex determinant,and escapes Xinactivation.Cell.1989 ；57: 1247-1258.)。ZNF786基因编码的全长蛋白中包含一个酸性转录激活域(AD)，一个核定位序列(NLS)和一个具有 13 个 C2H2 [Cys (2) His (2)]型锌指结构的 DNA 结合域(DBD) (PoloumienkoA.Cloning and comparative analysis of the bovine, porcine, and equine sexchromosome genes ZNF786and ZFY.Genome.2004 ;47:74-83.)。在哺乳动物细胞中，C2H2锌指结构是最常见的蛋白质结构之一，具有转录调节的潜在功能。目前已发现800多种具有这种锌指结构的蛋白质，大部分已被证实存在重要的生理功能。近年来，科学家们在研究不同干细胞的基因表达过程中发现在几种不同的干细胞中ZNF786基因均存在明显高表达(Ramalho-Santos M, Yoon S, Matsuzaki Y, Mul I igan RC, Melton DA.Sternness":transcriptional profiling of embryonic and adult stem cells.Science.2002 ；298:597-600.)。另有报道，ZNF786基因具有调节干细胞自我更新的功能(Cellot S，Sauvageau G.ZNF786:at the crossroads of survival and self-renewal.Cel 1.2007 ；129 =239-241.)。然而，迄今为止，ZNF786基因在肿瘤相关领域的报道还是一片空白。
发明内容
本发明的目的在于公开与人ZNF786(zinc finger-786)基因相关的治疗方法及药物。 本发明第一方面，公开了一种肿瘤治疗方法，为通过降低人ZNF786基因的表达水平抑制肿瘤细胞的增殖。所述的肿瘤可以为其肿瘤细胞的增殖与人ZNF786基因的表达相关的任一种肿瘤，更进一步的，为一种恶性肿瘤，例如选自:喉癌、肺癌、胃癌、肝癌、乳腺癌和胶质瘤。所述肿瘤治疗方法，为将能有效降低人ZNF786基因表达水平的物质给药于患者。进一步的，所述的能有效降低人ZNF786基因表达水平的物质，包括能够特异性沉默人ZNF786基因表达的小分子干扰RNA (siRNA)。该小分子干扰RNA (siRNA)可以起到特异性沉默肿瘤细胞中内源ZNF786基因的表达的作用。进一步的，所述小分子干扰RNA以选自SEQ ID NO:1_42之任一的序列作为特异性沉默人ZNF786基因表达的靶点序列。所述小分子干扰RNA以选自SEQ ID NO: 1_42之任一的序列作为特异性沉默人ZNF786基因表达的靶点序列是指:该小分子干扰RNA能与SEQ ID NO:1~42中的任一种序列所编码的mRNA片段特异性结合，并特异性沉默人ZNF786基因的表达。进一步的，所述能够特异性沉默人ZNF786基因表达的小分子干扰RNA(siRNA)经由慢病毒载体表达。具体而言，这个过程包括:将编码所述人ZNF786基因小分子干扰RNA的DNA片段克隆慢病毒载体获得人ZNF786基因干扰慢病毒载体，进而利用该人ZNF786基因干扰慢病毒载体经过病毒包装成为有感染力的病毒颗粒后，感染肿瘤细胞并最终表达所述 siRNA。人ZNF786基因干扰慢病毒载体为将后获得，能产生人ZNF786基因小分子干扰RNA。进一步的，所述的慢病毒载体可选自:pLK0.1-pur ο > pLK0.1-CMV-tGFP、pLK0.1-puro-CMV-tGFP, pLK0.1-CMV-Neo, pLK0.l_Neo、 pLK0.l-Neo-CMV-tGFP、pLK0.1-puro-CMV-TagCFP、pLK0.l-puro-CMV-TagYFP、pLK0.l-puro-CMV-TagRFP、pLK0.l-puro-CMV-TagFP635, pLK0.1-puro-UbC-TurboGFP、pLK0.l-puro-UbC_TagFP635、pLKO-puro-1PTG-lxLacO、pLK0-puro-1PTG_3xLac0、pLPl、pLP2、pLP/VSV-G、pENTR/U6、pLenti6/BL0CK-1T-DEST、pLenti6-GW/U6-laminshrna、pcDNAl.2/V5_GW/lacZ、pLenti6.2/N-Lumio/V5-DEST、pGCSIL-GFP 或 pLenti6.2/N-Lumio/V5-Gff/lacZ 中的任一种慢病毒载体，本发明实施例具体列举了以pGCSIL-GFP为载体。慢病毒载体可在慢病毒包装质粒、细胞系的辅助下，经过病毒包装成为有感染力的病毒颗粒。本发明第二方面，公开了将人ZNF786基因用于制备或筛选肿瘤治疗药物，或者将人ZNF786基因用于制 备肿瘤诊断药物。人ZNF786基因用于制备或筛选肿瘤治疗药物包括两方面的内容:其一，将人ZNF786基因作为药物或制剂针对肿瘤细胞的作用靶标应用于制备肿瘤治疗药物或制剂；其二，将人ZNF786基因作为药物或制剂针对肿瘤细胞的作用靶标应用于筛选肿瘤治疗药物或制剂。所述将人ZNF786基因作为药物或制剂针对肿瘤细胞的作用靶标具体是指:将人ZNF786基因作为药物或制剂针对肿瘤细胞产生RNA干扰作用的靶标，从而能降低肿瘤细胞人ZNF786基因的表达水平。所述将人ZNF786基因作为药物或制剂针对肿瘤细胞的作用靶标应用于筛选肿瘤治疗药物或制剂具体是指:将人ZNF786基因作为作用对象对药物或制剂进行筛选，以找到可以抑制或促进人ZNF786基因表达的药物作为肿瘤治疗备选药物。如之后所述的人ZNF786基因小分子干扰RNA即是以人ZNF786基因为作用对象筛选获得的，可用作具有抑制肿瘤细胞增殖作用的药物。诸如抗体药物，小分子药物等也可将ZNF786基因作为作用对象。所述将人ZNF786基因用于制备肿瘤诊断药物，是指将人ZNF786基因表达产物作为一项肿瘤诊断指标应用于肿瘤诊断药物的制备。所述的肿瘤可以为其肿瘤细胞的增殖与人ZNF786基因的表达相关的任一种肿瘤，例如选自:喉癌、肺癌、胃癌、肝癌、乳腺癌和胶质瘤。所述肿瘤治疗药物可以为小分子化学药，抗体药，也可以为核酸类药物。进一步的，所述肿瘤治疗药物能降低人ZNF786基因的表达水平从而抑制肿瘤细胞的增殖。本发明第三方面，公开了一种分离的人ZNF786基因小分子干扰RNA(siRNA)靶标片段，其序列为SEQ ID NO 1-42中任意一条序列。所述分离的人ZNF786基因小分子干扰RNA(siRNA)靶标片段可应用于人ZNF786基因小分子干扰RNA的筛选与制备。本发明第四方面，公开了一种人ZNF786基因小分子干扰RNA(siRNA)，能够特异性沉默人ZNF786基因的表达。所述人ZNF786基因小分子干扰RNA以选自SEQ ID NO: 1-42之任一的序列作为特异性沉默人ZNF786基因表达的靶点序列。进一步的，所述人ZNF786基因小分子干扰RNA包含正义RNA片段和反义RNA片段，所述正义RNA片段和所述反义RNA片段互补，所述正义RNA片段含有SEQ ID N0:l_42中之任一序列编码的RNA。所述正义RNA片段和反义RNA片段存在于两条不同的RNA链上或者存在于同一条RNA链上。所述正义RNA片段和反义RNA片段的长度均为15_27个核苷酸；较佳的，长度均为19-23个核苷酸；最佳的，长度均为19、20或者21个核苷酸。进一步的，所述人ZNF786基因小分子干扰RNA为发夹型单链RNA，包括正义RNA片段、茎环片段和反义RNA片段，正义RNA片段和反义RNA片段中间由茎环片段分隔；其中，正义RNA片段和反义RNA片段互补，正义RNA片段的序列选自SEQ ID NO:1~42之任一。所述茎环片段结构包括6个或9个碱基。进一步的所述茎环片段的序列选自以下任一:UUCAAGAGA、AUG、CCC, UUCG, CCACC, CTCGAG, AAGCUU, CCACACC。本发明具体列举了以UUCAAGAGA 为茎环。如实施例列举的，所述人ZNF786基因小分子干扰RNA的序列为SEQ ID NO:43:CGCUGACGGUGAAAUGUGCUUU UCAAGAGAAAGCACAUUUCACCGUCAGCGo本发明第五方面，公开了一种人ZNF786基因干扰核酸构建体，包含编码前述人ZNF786基因小分子干扰RNA的基因片段，能表达前述人ZNF786基因小分子干扰RNA。所述的人ZNF786基因干扰核酸构建体可以是将编码前述人ZNF786基因小分子干扰RNA的基因片段克隆入已知载体获得。进一步的，所述人ZNF786基因干扰核酸构建体为人ZNF786基因干扰慢病毒载体，为将编码所述人ZNF786基因小分子干扰RNA的基因片段克隆入慢病毒载体后获得，能产生人ZNF786基因小分子干扰RNA。所述慢病毒载体可以选自:pLK0.1-pur o, pLK0.1-CMV-tGFP,pLK0.1-puro-CMV-tGFP, pLK0.1-CMV-Neo, pLK0.l_Neo、 pLK0.l-Neo-CMV-tGFP、pLK0.1-puro-CMV-TagCFP、pLK0.l-puro-CMV-TagYFP、pLK0.l-puro-CMV-TagRFP、pLK0.l-puro-CMV-TagFP635、pLK0.l-puro-UbC-TurboGFP、pLK0.l-puro-UbC_TagFP635、pLKO-puro-1PTG-lxLacO、pLK0-puro-1PTG_3xLac0、pLPl、pLP2、pLP/VSV-G、pENTR/U6、pLenti6/BL0CK-1T-DEST、pLenti6-GW/U6-laminshrna、pcDNAl.2/V5_GW/lacZ、pLenti6.2/N-Lumio/V5-DEST、pGCSIL-GFP 或 pLenti6.2/N-Lumio/V5-Gff/lacZ 中的任一。本发明实施例具体列举了以pGCSIL-GFP为载体构建的人ZNF786基因干扰核酸构建体,命名为 pGCSIL-GFP-ZNF786-siRNA-l。进一步的，编码所述人ZNF786基因小分子干扰RNA的基因片段的序列含有SEQIDNO:1-42中之任一序列及其互补序列。本发明的人ZNF786基因小分子干扰RNA可用于抑制肿瘤细胞的增殖，进一步地可以用作治疗或诊断肿瘤的药物或制剂。人ZNF786基因干扰核酸构建体则可用于制备所述人ZNF786基因小分子干扰RNA。当用作治疗肿瘤的药物或制剂时，是将安全有效量的人ZNF786基因小分子干扰RNA施用于哺乳动物。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。本发明第六方面，公开了一种人ZNF786基因干扰慢病毒，由前述人ZNF786基因干扰慢病毒载体在慢病毒包装质粒、细胞系的辅助下，经过病毒包装而成。该慢病毒可感染肿瘤细胞并产生人ZNF786基因小分子干扰RNA，从而抑制肿瘤细胞的增殖。本发明第七方面，还公开了一种药物组合物，含有治疗有效量的人ZNF786基因小分子干扰RNA或人ZNF786基因干扰慢病毒。进一步的，所述药物组合物含有I 99wt%如前所述的人ZNF786基因小分子干扰RNA或人ZNF786基因干扰慢病毒，以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。在制备这些组合物时，通常将活性成分与赋形剂混合，或用赋形剂稀释，或包在可以胶囊或药囊形式 存在的载体中。当赋形剂起稀释剂作用时，它可以是固体、半固体或液体材料作为赋形剂、载体或活性成分的介质。因此，组合物可以是片剂、丸剂、粉剂、溶液剂、糖浆剂、灭菌注射溶液等。合适的赋形剂的例子包括:乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、等。制剂还可包括:湿润剂、乳化剂、防腐剂(如羟基苯甲酸甲酯和丙酯)、甜味剂等。综上所述，本发明设计了针对人ZNF786基因的42个RNAi靶点序列，构建相应的 ZNF786RNAi 载体，其中编码序列 SEQ ID N0.19 的 RNAi 载体 pGCSIL-GFP-ZNF786_siRNA能够显著下调ZNF786基因在mRNA水平和蛋白水平的表达。使用慢病毒(lentivirus，简写为Lv)作为基因操作工具携带RNAi载体pGCSIL-GFP-ZNF786-siRNA能够靶向地将针对ZNF786基因的RNAi序列高效导入人喉癌H印2细胞、肺癌％D细胞、胃癌AGS细胞、肝癌SMMC-7721细胞、乳腺癌MCF-7细胞和胶质瘤U251细胞，降低ZNF786基因的表达水平，显著抑制上述肿瘤细胞的增殖能力。因此慢病毒介导的ZNF786基因沉默是恶性肿瘤潜在的临床非手术治疗方式。本发明提供的siRNA或者包含该siRNA序列的核酸构建体、慢病毒能够特异性抑制人ZNF786基因的表达，尤其是慢病毒，能够高效侵染靶细胞，高效率地抑制靶细胞中ZNF786基因的表达，进而抑制肿瘤细胞的生长，促进肿瘤细胞凋亡，在肿瘤治疗中具有重要意义。
图1表示pGCSIL-GFP质粒DNA图谱图2表示ZNF786-RNAi慢病毒侵染人喉癌H印2细胞、肺癌％D细胞、胃癌AGS细胞、肝癌SMMC-7721细胞、乳腺癌MCF-7细胞和胶质瘤U251细胞5天后，ZNF786mRNA的表达水平显著降低图3表示ZNF786-RNAi慢病毒侵染人喉癌H印2细胞5天后，引起细胞增殖抑制图4表示ZNF786_RNAi慢病毒侵染人肺癌％D细胞5天后，引起细胞增殖抑制图5表示ZNF786-RNAi慢病毒侵染人胃癌AGS细胞5天后，引起细胞增殖抑制
图6表示ZNF786-RNAi慢病毒侵染人肝癌SMMC-7721细胞5天后，引起细胞增殖抑制图7表示ZNF786-RNAi慢病毒侵染人乳腺癌MCF-7细胞5天后，引起细胞增殖抑制图8表示ZNF786-RNAi慢病毒侵染人胶质瘤U251细胞5天后，引起细胞增殖抑制图9使用ZNF786抗体在肿瘤组织样本上的免疫组化检测结果a.人胰腺癌，b.乳腺癌，c.结直肠癌，d，e:肺癌，f，g，h, 1:胃癌图10使用ZNF786在癌旁组织中的免疫组化检测结果a.人胰腺癌癌旁组织，b.乳腺癌癌旁组织，c.结直肠癌癌旁组织，d，e:肺癌癌旁组织，f，g，h，1:胃癌癌旁组织
具体实施例方式本发明基于锌指蛋白可能与肿瘤细胞的增殖、耐药和血管形成等相关的研究，认为ZNF786作为一个新发现的锌指蛋白可能参与了恶性肿瘤的发生和发展。本发明涉及了一组针对人ZNF786基因的小分子干扰RNA(siRNA)序列、RNA干扰载体和RNA干扰慢病毒。选取人ZNF786mRNA编码区序列作为siRNA的靶位点，根据靶位点中连续的10-30(优选15-27，更优选19-23)个碱基序列设计siRNA靶点序列。通过基因克隆，构建表达上述siRNA的核酸构建体，包装表达上述siRNA的慢病毒。细胞实验证明，上述siRNA序列能够特异性沉默人肿瘤细胞中内源ZNF786基因的表达。发明人发现，采用RNAi方法下调人ZNF786基因的表达后可有效地抑制肿瘤细胞的增殖，这一研究 成果表明ZNF786基因是原癌基因，可作为肿瘤治疗的靶点。发明人进一步合成和测试了多种针对ZNF786基因的siRNA，筛选出了可有效抑制ZNF786的表达进而抑制人喉癌H印2细胞、肺癌％D细胞、胃癌AGS细胞、肝癌SMMC-7721细胞、乳腺癌MCF-7细胞和胶质瘤U251细胞增殖和生长的siRNA，在此基础上完成了本发明。本发明提供了一系列干扰人ZNF786基因的小干扰RNA(siRNA)序列，构建了可特异性沉默ZNF786基因表达的慢病毒。本发明研究发现，针对人ZNF786基因设计的小干扰RNA及RNAi慢病毒，稳定并特异地下调ZNF786基因的表达，并有效地抑制人肿瘤细胞的增殖。本发明表明ZNF786基因可促进肿瘤细胞生长，有望成为肿瘤早期诊断和治疗的靶点。而且，通过RNAi方式沉默ZNF786基因的表达，可作为抑制肿瘤发展的有效手段。本发明的设计思路为:本发明通过如下方法来筛选获得一种人ZNF786基因RNAi慢病毒:从Genbank中调取人ZNF786基因序列；预测siRNA位点；合成针对ZNF786基因的有效的siRNA序列，两端含酶切位点粘端的双链DNA Oligo ;慢病毒载体双酶切后与双链DNA Oligo连接，构建表达ZNF786基因siRNA序列的RNAi质粒；将RNAi质粒和慢病毒包装需要的辅助载体(Packing Mix, Sigma-aldrich公司)共转染人胚肾细胞293T,产生重组慢病毒颗粒，即可制得高效沉默ZNF786基因的慢病毒。基于上述方法，本发明提供了 42个干扰ZNF786基因的有效靶点(具体如SEQ IDNO 1-42所示)，构建了特异干扰人ZNF786基因的慢病毒。同时本发明还公开一种人ZNF786基因RNAi慢病毒(ZNF786_RNAi)及其制备与应用。本研究发现，利用慢病毒介导的RNAi方法，在降低ZNF786基因在肿瘤细胞中的表达后，可以有效抑制肿瘤细胞的增殖。本研究表明，ZNF786基因是一个原癌基因，可促进肿瘤细胞增殖，在肿瘤发生和发展中具有重要的生物学功能，ZNF786基因可以为肿瘤治疗的靶标，慢病毒介导的ZNF786基因特异性沉默可作为肿瘤治疗的一种新手段。下面结合实施例进一步阐述本发明。应理解，实施例仅用于说明本发明，而非限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法及未说明配方的试剂均为按照常规条件，如[美]Sambrook.J等著；黄培堂等译。分子克隆试验指南，第三版。北京:科学出版社2002中所述的条件或者制造商建议的条件进行或配置。实施例1:针对人ZNF786基因RNAi慢病毒的制备1.筛选针对人ZNF786基因的有效的siRNA靶点从Genbank调取ZNF786 (NM_152411.3)基因信息；利用上海吉凯基因化学技术有限公司的设计软件Genechem设计针对ZNF786基因的有效的siRNA靶点。在ZNF786基因的编码序列(CDS)区域内，每隔一个碱基起始获得21个碱基的序列，表I列出了其中42条针对ZNF786基因的有效siRNA靶点序列。表I靶向于人ZNF786基因的siRNA靶点序列
权利要求
1.人ZNF786基因在制备或筛选肿瘤治疗药物，或者在制备肿瘤诊断药物中的用途。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的肿瘤为其肿瘤细胞的增殖与人ZNF786基因的表达相关的任一种肿瘤。
3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的肿瘤选自:喉癌、肺癌、胃癌、肝癌、乳腺癌和胶质瘤。
4.一种分离的人ZNF786基因小分子干扰RNA靶标片段，其序列为SEQ ID NO 1_42中任意一条序列。
5.一种人ZNF786基因小分子干扰RNA，能够特异性沉默人ZNF786基因的表达。
6.如权利要求5所述人ZNF786基因小分子干扰RNA，其特征在于，所述人ZNF786基因小分子干扰RNA以选自SEQ ID NO: 1-42之任一的序列作为特异性沉默人ZNF786基因表达的靶点序列。
7.如权利要求5所述人ZNF786基因小分子干扰RNA，其特征在于，所述人ZNF786基因小分子干扰RNA包含正义RNA片段和反义RNA片段，所述正义RNA片段和所述反义RNA片段互补，所述正义RNA片段含有SEQ ID NO: 1-42中之任一序列编码的RNA。
8.如权利要求7所述人ZNF786基因小分子干扰RNA，其特征在于，所述正义RNA片段和反义RNA片段的长度均为15-27个核苷酸。
9.如权利要求7所述人ZNF786基因小分子干扰RNA，其特征在于，所述人ZNF786基因小分子干扰RNA为发夹型单链RNA，所述正义RNA片段和所述反义RNA片段中间由茎环片段分隔。
10.如权利要求9所述人ZNF786基因小分子干扰RNA，其特征在于，所述茎环片段的序列选自以下任一:UUC AAGAGA、AUG、CCC, UUCG, CCACC, CTCGAG, AAGCUU, CCACACC。
11.如权利要求5所述人ZNF786基因小分子干扰RNA，其特征在于，所述人ZNF786基因小分子干扰RNA的序列为SEQ ID NO:43。
12.—种人ZNF786基因干扰核酸构建体，包含编码权利要求5-11任一权利要求所述人ZNF786基因小分子干扰RNA的基因片段，能表达人ZNF786基因小分子干扰RNA。
13.如权利要求12所述人ZNF786基因干扰核酸构建体，其特征在于，所述人ZNF786基因干扰核酸构建体为人ZNF786基因干扰慢病毒载体。
14.如权利要求13所述人ZNF786基因干扰核酸构建体，其特征在于，所述慢病毒载体选自:pLK0.1-pur ο, pLK0.1-CMV-tGFP、pLK0.l-puro-CMV-tGFP、pLK0.1-CMV-Neo,pLK0.l-Neo、pLK0.l-Neo-CMV-tGFP、pLK0.l-puro-CMV-TagCFP、pLK0.l-puro-CMV-TagYFP、pLK0.1-puro-CMV-TagRFP, pLK0.l-puro-CMV_TagFP635、pLK0.1-puro-UbC-TurboGFP,pLK0.l-puro-UbC-TagFP635> pLKO-puro-1PTG-lxLacO、pLK0-puro-1PTG-3xLac0> pLPl、pLP2、pLP/VSV-G、pENTR/U6、pLenti6/BL0CK-1T_DEST、pLenti6-GW/U6_laminshrna、pcDNAl.2/V5-GW/lacZ、pLenti6.2/N-Lumio/V5_DEST、pGCSIL-GFP 或 pLenti6.2/N-Lumio/V5-Gff/lacZ 中的任一。
15.一种人ZNF786基因干扰慢病毒，由权利要求12-14任一权利要求所述人ZNF786基因干扰慢病毒载体在慢病毒包装质粒、细胞系的辅助下，经过病毒包装而成。
16.一种药物组合物，含有治疗有效量的权利要求5-11任一权利要求所述人ZNF786基因小分子干扰RNA或权利要求15所述人ZNF786基因干扰慢病毒，以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
17.如权利要求16所述药物组合物，其特征在于，所述药物组合物用于治疗肿瘤，所述的肿瘤为其肿瘤细胞的增殖与人ZNF786基因的表达相关的任一种肿瘤。
18.如权利要求17所述药物组合物，其特征在于，所述肿瘤为恶性肿瘤，选自喉癌、肺癌、胃癌、肝癌、乳腺癌和胶质瘤之`任一。
全文摘要
本发明公开了人ZNF786基因的用途及其相关药物。本发明公开了人ZNF786基因在肿瘤治疗、肿瘤诊断及药物制备中的用途。本发明还进一步构建了人ZNF786基因小分子干扰RNA、人ZNF786基因干扰核酸构建体、人ZNF786基因干扰慢病毒并公开了他们的用途。本发明提供的siRNA或者包含该siRNA序列的核酸构建体、慢病毒能够特异性抑制人ZNF786基因的表达，尤其是慢病毒，能够高效侵染靶细胞，高效率地抑制靶细胞中ZNF786基因的表达，进而抑制肿瘤细胞的生长，促进肿瘤细胞凋亡，在肿瘤治疗中具有重要意义。
文档编号A61K48/00GK103157114SQ20111041265
公开日2013年6月19日 申请日期2011年12月12日 优先权日2011年12月12日
发明者曹跃琼, 朱向莹, 韩海雄, 金杨晟 申请人:上海吉凯基因化学技术有限公司