在水溶液中的稳定性在浓度为lg/100ml的水性盐溶 液在50°C下和在单独的测试中在非常严格的条件（100°C，其中在一小时后测定到分解）下 温育后进行测定。
[0067] 表2 :在50°C /时间（小时）下水中的十五肽含量涕减:
[0068]
[0071] 化合物特别是肽在胃液中的稳定性是重要的参数，肽在胃蛋白酶的存在下以及在 酸性介质中非常迅速地分解。在胃液中更好的稳定性意味着更长的时间，在其中化合物可 用于吸收和发挥其治疗活性。
[0072] 人工胃液显示了正常人胃液中的条件，并包含：1000 ml水中0. 08mol盐酸， 0? 03mol氯化钠和I.Og胃蛋白酶。
[0073] 所研究的10mg/5ml浓度的肽盐在具有pH值2. 0、3. 0和4. 0的人工胃液中在37°C 下温育。
[0074] 表4 :在DH = 2. 0下胄液中的十五肽含量涕减（相对％ )
[0081] 十五肽BPC-157在测试样品中的含量在下列系统中通过HPLC方法测定：
[0082]柱：Reprosil Orpegen C18, 100, 5 y m，250 X 4. 6mm，
[0083] 流动相A :0.1 %三氟乙酸/5%乙腈/水
[0084] 流动相B :0. 11 %三氟乙酸/40%乙腈/水
[0085] 梯度：在25分钟内从100% A至30% A
[0086]温度：20 cC
[0087]流速：1. 5ml/分钟
[0088]检测：UV，2IOnm
[0089] 稳定性测定的结果表明，具有碱性氨基酸的bepecin盐比其它的迄今已知的存在 问题的十五肽盐实质上更加稳定，这是令人惊讶的巨大的优势。在任何情况下，这些新型的 盐比根据专利EP 0983300和US No. 6, 288, 028所述的具有不同胺、碱金属和碱土金属的 bepecin盐（其易于形成极性降解产物（多至10%，结构尚未确定））更好。更好的稳定性 的结果还是更好的生物活性，因为完整化合物存在于生物体中的时期更长并且可用于更有 效的吸收。
[0090] 在光下的稳定性
[0091] 这种类型的化合物对于紫外光非常易感。用波长253. 7nm的紫外光辐照20°C下 的Arg-BPC(lg/100ml水）水性溶液，随后在230至350nm的波长范围内在70分钟的时期 内每10分钟测量吸光度。结果示于图1中，并确认该化合物是稳定的。
[0092] 作为本发明的目的的新型的bepecin盐可用作治疗活性物质，其与惰性的药学可 接受的载体一起被转化为合适的形式例如片剂和胶囊剂，用于治疗疾病和病状、生物体损 伤、创伤、骨折和烧伤以及病毒感染，如通过之前的药理学研究所确定的。
[0093] 本发明的目的还是含有与不同添加剂混合的bepecin盐的氨基酸盐的口服药物 制剂。所使用的药学可接受的添加剂是本领域技术人员一般熟知的物质。惰性物质或药物 添加剂选自下列组：
[0094]-填充剂例如：无水乳糖，微晶纤维素，淀粉，磷酸钙，碳酸钙，麦芽糖糊精，D-甘露 糖醇，海藻糖等；
[0095]-粘合剂例如：微晶纤维素，羟烷基纤维素，聚维酮，纤维素酯，淀粉或其混合物；
[0096]-崩解剂例如：淀粉，交联羧甲纤维素钠（crosslinked sodium croscarmelose)， 交聚维酮，微晶纤维素，羧甲基纤维素钠等，主要为1-10%的量；
[0097] _稳定剂例如：碱金属和碱土金属碳酸氢盐或所选择的糖，优选碳酸氢钠和D-甘 露糖醇；
[0098]-在压片中使用的润滑剂和助流剂：滑石，硬脂酸镁，硬脂酸，硬脂酸钾和胶体二 氧化硅。这些物质通常在最后阶段加入到其它成分中。
[0099] bepecin盐在具有不同酸度的溶液中的稳定性的比较显示，该化合物在微酸性、中 性或甚至微碱性介质（优选在6. 5至8. 5的pH范围中）中是最稳定的。合理地，在组成药 物制剂中应当考虑此。在用于压片和封装的颗粒的制备中，适当地添加微碱性物质例如碱 金属和碱土金属碳酸氢盐和碳酸盐、碱性碳酸盐和氧化物，诸如碳酸氢钠、碳酸氢钙和氧化 镁，从而提高稳定性。所选择的糖的添加防止美拉德反应。药物制剂通过已知的方法制备， 例如直接混合，干法造粒，湿法造粒，或通过在暖风逆流的同时干燥下将bepecin盐溶液喷 雾到惰性制药物质上来制备。如果需要的话，向如此获得的颗粒添加其它成分，以常规方式 均化和压片或封装。在最后的阶段，片剂、胶囊或锭剂可用对胃液活性有抗性的保护膜包 衣，以使bepecin释放不比在肠内更早。
[0100] 本发明的新型盐中的氨基酸成分是这种形式中活性物质的更大疏水性的原因。因 此，期望更好地转移通过生物膜是现实的，这也提供用于透皮制剂例如乳膏、软膏或贴剂的 制造。
[0101] 透皮系统由活性物质不能透过的支持层、用作活性物质储库的压敏聚合物层、在 几个位置穿孔以允许活性物质穿过其中的保护箱和外层保护箱组成。
[0102] B印ecin盐可以以溶液、灌肠剂、注射剂或干注射剂的形式使用。在这种情况下，具 有介于6和8之间，优选介于7. 0和7. 5之间的最适pH值的缓冲剂的水性溶液用作溶剂。 该溶液可通过精细过滤经过具有0. 22 ym孔的过滤器或通过非常短的加热至IOOtC来进行 灭菌。干注射剂以含有bepecin盐、缓冲剂和防腐剂的无菌溶液在安瓿中冻结并冻干的方 式制备。
[0103] 旨在用于眼或鼻滴剂的溶液通过使用具有7. 0至7. 5的pH值的等渗和等氢离子 溶液制备，其除了活性物质bepecin以外还含有缓冲剂和防腐剂并在无菌条件下过滤。 [0104]用于直肠和阴道使用的栓剂通过采用明胶、可可脂、具有低熔点的天然或半合成 脂肪、石蜡、甘油、具有1000至6000的基础分子量的聚乙二醇，向其中混入bepecin的水性 溶液来制备。此外，可添加乳化剂、抗氧化剂和防腐剂。
[0105] Bepecin盐还可以以乳膏、软膏或凝胶的形式使用。在这种情况下，使用基于天 然的、植物或动物脂肪和天然油的亲脂性、亲水性或两亲性脂肪基质，向其中也可添加防腐 剂、着色剂、乳化剂、水或缓冲溶液以及抗氧化剂。
[0106] B印ecin是在极低剂量下起作用的化合物。用于口服使用的治疗剂量的范围将是 KT 5至KT 2mg/kg体重，其取决于疾病的类型和严重程度。片剂、锭剂或胶囊剂中常用的剂 量范围将是从0.1到至多5mg。局部使用的浓度更高，范围为0.001 %至0.5%。最佳剂量 的确定根据评估和经验而定。非常重要的是，bepecin不显示任何副作用或毒性。基于上述 以及其对生物体众多的有利效应，还可能将其以非常低的剂量（从每日I yg到至多0.1 mg) 用于食品补充剂的形式。在为此目的制备的制剂中，其还可与维生素、矿物质和其它有利作 用的物质相结合。
[0107] 根据本发明，还可添加改善b印ecin的主要活性或协同地作用的其它单一活性物 质。这些是来自下列组中的物质：
[0108] _具有抗菌活性的物质，例如庆大霉素，阿奇霉素，氨苄青霉素，头孢菌素和多西环 素，特别是在用于局部使用的制剂中，其中期望同时实现抗病毒和抗菌活性。这样的例子是 蜱叮咬，其中意图是双重的：同时防止疏螺旋体（borellia)和蜱传脑炎；
[0109]-具有抗氧化剂活性的物质，例如干燥的绿茶提取物，辅酶Q1。，依地吡喃，姜黄素，abigenol，碧萝]E等。
[0110]与辅酶Qw或泛醌的结合是特别有利的。辅酶Q11:是非常有效的抗氧化剂和自由基 清除剂，并且可另外地用于与血流量减少、高血压相关的心脏疾病和心功能不全的体征。最 近已证实一个重要的抗氧化剂还是具有强大抗癌活性的姜黄素。
[0111] 我们的研究已证实新型bepecin盐在治疗神经系统疾病例如多发性硬化中非常 有利的活性。此炎性疾病导致对脑和脊髓中轴突周围的髓鞘的损害。神经细胞通常通过神 经纤维-轴突发送电子信号进行通信，其中髓鞘是绝缘体。在髓鞘损坏的情况下，电信号传 导中断或极度扰乱。在多发性硬化中，机体免疫系统攻击并损坏髓鞘。针对多发性硬化没 有已知有效的治疗方法。现有的治疗旨在改善攻击后的功能，预防新的攻击，但通常具有有 害效应或难以耐受。
[0112] Bepecin具有抗炎性、修复性、保护性和免疫调节活性。
[0113] 药理学研究的基础上，预期bepecin对多发性硬化具有良好的治疗效应。具有 bepencin-L-精氨酸盐的制剂的使用在由感染莱姆疏螺旋体病（L. Reik et all. ,Neurolo gy,巡，1989, 790 - 795)或梅毒（D. Grey, The Lancet, July 12, 1986, 75 - 77)引起继发性 损伤和障碍的辅助治疗中可以是有用的。在所有这些情况中，髓鞘受损且脑中的病变可用 MRL可见。
[0114] 多发性硬化将由含有稳定形式的Img至5mg剂量的bepecin盐的口服制剂来治 疗。bepecin制剂的使用不与有害的或令人不快的副作用相关，它们对于长期施用也是安全 的。
[0115] 在对动物的药理学实验的基础上，据信合适药物制剂的形式的具有碱性氨基酸的 bepecin盐的使用还将在其它神经系统疾病例如神经病、重症肌无力等中是有益的。
[0116] Bepecin还对于侧支血管在股动脉严重损伤后的重组具有非常有益的效应。
[0117] 本发明进一步显示但不局限于下列意欲澄清工艺的实施例中。实施例18至44描 述为测定b印ecin的药理学活性而进行的实验。它们已通过使用实践中和引用的文献来源 中广泛使用的体外和体内实验模型来实施。在所有的实验中Bepecin以具有L-精氨酸的 盐的形式使用。
[0118] 附图简述
[0119] 图1:显示当通过紫外光福照时，bepecin溶液的稳定性；样品1至7的吸光度各 自测量10分钟。
[0120] 图2 :显示b印ecin对黑色素瘤B-16细胞的活性。
[0121] 图3 :显示b印ecin对蜱传脑炎病毒（TBE)的效应：
[0122] A :IO2TBE 病毒（i. c. V.)和无 bepecin 的 0? 9% NaCl 盐水（i. p.)的同时施用。
[0123] B :102 TBE 病毒（i. c.V.)和 10 y g/kg bepecin(i. p.)的同时施用。感染症状发 生在相当晚的阶段。
[0124]C :10 y g/kg bepecin(i. p.)在用 IO2 TBE 病毒（i. c.V.)感染前 4 小时的施用。 没有疾病的临床体征。30天之后，将动物无痛致死，并将一部分脑匀浆物转移至新的动物； 见：D。
[0125] D:脑匀浆物的和用IO2TBE病毒（i. c. V.)的新感染的同时施用。即使在50天后 也没有疾病的体征。
[0126] 图4 :bepecin盐的1H-NMR光谱，在D2O中记录：
[0127] A :bepecin L-赖氨酸盐（1:3)的光谱，
[0128] B :bepecin L-精氨酸盐（1:2)的光谱，
[0129] C :b印ecin L-鸟氨酸盐（1:2)的光谱。
[0130] 图5:显示侧支血管：
[0131] A :只经历局部盐水浴1分钟的对照组-无侧支血管可见；
[0132] B :经历b印ecin浴1分钟的测试组-可见具有安全的相互连接的大量侧支血管。 实施例
[0133] 实施例1 :b印ecin D-精氨酸盐（1:2)的制备
[0134] Bepecin三氟乙酸盐（500mg，0. 34mmol)溶解在25ml水中。伴随温和搅拌，逐渐加 入D-精氨酸（212mg，I. 22mmol)，并再搅拌15分钟。该溶液的pH值随后用稀乙酸（50% ) 调节至7. 40±0. 05。将溶液过滤澄清并冷冻干燥。将冻干物溶解在少量水中，并施加在经 预先洗涤和用纯水平衡的HPLC柱（ID = 2.2cm, h = 25cm,吸附剂Reprosil C18, IOym)的 起始处。用具有增加浓度的异丙醇的水进行洗脱：从〇至5%的异丙醇，30分钟。弃去含有 盐和杂质的第一级分。将收集的主要级分冷冻干燥。获得含有2mol D-精氨酸/Imol十五 肽的550mg干燥盐。
[0135] 氨基酸分析对应于如下组成：
[0136] 2-Ala, 1-Val, 3-Gly, 4-Pro, 1-Leu, 2-Asp, 1-Glu, 1-Lys, 2~Arg〇
[0137] MS (TOF MS ES+) =M1= 1419. 8(十五肽+H+)
[0138] M2= 175. I (D-精氨酸 +H +)
[0139] FTIR S? (cm-1) :3275, 3057, 2958, 2872, 1628, 1533, 1448, 1394, 1315, 1244, 1204, I 161, 1096, 1044, 919, 875〇
[0140]比旋度（c = lg/lOOml) [a ]D28= - 154°。HPLC 纯度：99.48%。
[0141] 实施例2 :b印ecin L-精氨酸盐（1:1)的制备
[0142] 具有b印ecin乙酸盐和L-精氨酸的溶液按实施例1所述制备。该溶液的pH值用 稀乙酸（50% )调节至4. 60±0. 05,类似于实施例1处理得到的溶液。获得含有Imol L-精 氨酸/lmol bepecin的232mg无定形粉末。
[0143] 氨基酸分析对应于如下组成：
[0144] 2-Ala, 1-Val, 3-Gly, 4-Pro, 1-Leu, 2-Asp, 1-Glu, 1-Lys,l~Arg〇
[0145] MS(TOFMSES+) =M1= 1419. 8(十五肽 +H)
[0146] M2= 175. I (L-精氨酸 +H)
[0147] FTIRW(cm-:) : 3265, 3060, 2960, 2875, 1629 (CONH), 1534, 1448, 1394, 1312, 1243, 1202,1160, 1043, 919, 873