4-(4-苯甲酰氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶衍生物及其制备方法和用途的制作方法

专利名称：：4-(4-苯甲酰氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶衍生物及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及4-(4-苯甲酰氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶衍生物以及制备方法和用途，属于化学医药领域。
背景技术：
：恶性肿瘤已成为人类死亡的第二大死因，严重地威胁着人类的健康。而在我国，据最新统计，肿瘤已成为我国人民死亡的第一大原因，据最新流行病学调査资料显示我国现有癌症病人300多万人，每年死于恶性肿瘤的患者约为130万人，每年有160万到200万新发的恶性肿瘤病例，并以3%的速度递增，给我国人民的生活和健康造成巨大威胁，给社会和家庭带来巨大的压力，一定程度上制约了我国经济的可持续发展。传统的肿瘤治疗方法主要为以外科手术为主的多学科综合治疗。由于现有的治疗手段或药物的选择性不高，在杀灭肿瘤细胞的同时损害体内某些类型的正常细胞，使治疗过程中出现明显的毒副作用。近年来随着分子生物学的进展和对癌症发病机制的深入研究，出现了以特定分子为耙点的抗肿瘤药物，如gefitinib(Iressa)、erlotinib(Tarceva)、Gleevec(imatinib)、Nexavar(sorafenib)、Sutent(sunitinibmalate)等。肿瘤血管在实体瘤的发生发展中具有重要的作用，研究证明，临床上任何可探测出的实体瘤的生长和转移是依赖于血管生成的。Folkman等提出，实体瘤的生长有赖于血管的生成，如果没有血管，肿瘤直径不会超过l2mm，因此，靶向肿瘤血管的新药研发已成为一个热点领域。目前研究已证实许多与肿瘤血管生成密切相关的细胞因子受体，典型的包括血管内皮生长因子受体(VEGFR)、血小板衍生生长因子受体(PDGFR)等等。实验研究已发现，抑制这些细胞因子受体的活性可以破坏肿瘤的血管生成，从而达到抑制肿瘤生长的目的。基于VEGFR2和PDGFR等的抑制剂在抗肿瘤中的重要价值，本发明的发明人近年来开展了针对肿瘤血管的耙向小分子药物设计和合成研究工作，设计并合成了一些实体化合物，经过体外细胞筛选，发现其中的一些化合物对肿瘤细胞增殖具有一定的抑制活性，通过进一步的结构优化和合成，得到了一些新型的化合物，它们在多种肿瘤细胞株上显示出良好的抑制活性，并在体内实验中也显示了较好的结果。
发明内容本发明的目的在于为抗肿瘤血管生成的药物提供一类新的化合物。本发明的技术方案是提供4-(4-苯甲酰氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶的衍生物，所述衍生物的结构如式I所示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>I其中，Rl为氢，卤代基，三氟甲基，硝基，烷氧基，二甲氧基或氨基；R2为氢，卤代基，三氟甲基，硝基，烷氧基，二甲氧基或氨基；R3为氢，卤代基，三氟甲基，硝基，烷氧基，二甲氧基或氨基。优选的，Ri为氢，氯代基或三氟甲基；R2为氢，氯代基或三氟甲基；R3为氢，氯代基或三氟甲基。更优的，Rl为氢；R2为氢，氯代基或三氟甲基；R3为氢，氯代基或三氟甲基。最优的，所述4-(4-苯甲酰氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶的衍生物为4-(4-(2-三氟甲基)苯甲酰胺基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶，4-(4-(3-三氟甲基)苯甲酰胺基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶，4-(4-(4-三氟甲基)苯甲酰胺基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶，或4-(4-(4-氯)苯甲酰胺基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶。本发明所要解决的第二个技术问题是提供上述式I所示化合物的合成方法，由4-(4-氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶与相应化合物通过酰化反应制备得到，具体可以采用以下几种方法a、由4-(4-氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶与取代苯甲酰氯以吡啶作为溶剂和缚酸剂，通过酰化反应制备得到。b、由4-(4-氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶与取代苯甲酰氯以四氢呋喃作为溶剂和碳酸钾作为缚酸剂，通过酰化反应制备得到。其中4-(4-氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶可以购买获得，也可以由4-(4-氯)苯胺基-2-(甲基氨甲酰基)吡啶与对氨基苯酚按照现有技术公开的方法制备得到。本发明所要解决的第三个技术问题是提供上述4-(4-苯甲酰氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶衍生物在制备抗肿瘤药物中的用途。本发明还提供了一种药物组合物，是由上述式I所示的4-(4-苯甲酰氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶衍生物添加药学上可以接受的辅助性成分制备而成的。该药物组合物可用于制备抗肿瘤药物。本发明的有益效果为本发明的4-(4-苯甲酰氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶衍生物是在大量筛选的基础上得到的，具有抗肿瘤活性，为抗肿瘤药物的开发和应用提供了新的选择。图1化合物4-(4-(3-三氟甲基)苯甲酰胺基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶对不同肿瘤细胞的抑制作用。其中符号l表示化合物对人肺癌细胞株(A549)的抑制作用，2表示化合物对人肝癌细胞株(H印G2)的抑制作用，3表示化合物对人结肠癌细胞株(HCT116)的抑制作用。具体实施例方式本发明提供的4-(4-苯甲酰氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶的衍生物如式I所示0I其中，Rl为氢，卤代基，三氟甲基，硝基，烷氧基，二甲氧基或氨基；R2为氢，卤代基，三氟甲基，硝基，烷氧基，二甲氧基或氨基；R3为氢，卤代基，三氟甲基，硝基，烷氧基，二甲氧基或氨基。上述式I所示化合物的合成方法，由4-(4-氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶与相应化合物通过酰化反应制备得到，具体可以采用以下几种方法一、将4-(4-氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶溶于吡啶中，室温下缓慢加入R取代苯甲酰氯，升温到8(TC。氮气保护下约l小时，反应完毕。向反应体系中加水，搅拌10分钟，加入饱和NaHC03溶液到无气泡产生，用乙酸乙酯萃取，有机层用饱和食盐水洗，无水MgS04干燥，浓縮得粗品，乙酸乙酯重结晶得纯品。二、将4-(4-氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶与碳酸钾的混合物溶于四氢呋喃(THF)中，室温搅拌下，缓慢滴加酰氯，然后搅拌l小时，过滤得产品。4-(4-氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶合成方法包括以下几种方法一室温下将对氨基苯酚溶于无水DMF，再加入叔丁醇钾，氮气保护下搅拌2小时。加入N-甲基-(4-氯-2-吡啶基)甲酰胺和碳酸钾，加热反应6小时。室温下向反应液中倒入乙酸乙酯和水，收集有机层干燥旋干得到粗产品，重结晶得到棕色晶体。方法二将N-甲基-(4-氯-2-吡啶基)甲酰胺溶于THF中，加入对氨基苯酚、相转移催化剂聚乙二醇600、氢氧化钠和45%氢氧化钠溶液，回流12h。蒸除THF，剩余物中加入水，过滤，滤饼以异丙醇重结晶、冷异丙醇洗涤，4(TC减压干燥，得浅棕色固体。以下结合实施例对本发明作进一步的阐述。实施例仅用于说明本发明，而不是以任何方式来限制本发明。实施例14-(4-氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶的制备合成路线如下所示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>1、4-氯-2-吡啶甲酰氯盐酸盐的制备由2-甲酸吡啶按照现有公开的方法制备得到，例如在干燥的反应瓶中，将2-甲酸吡啶(30.OOg，0.244mmol)和NaBr(4.OOg，0.040mmol)混合后，加入到氯苯(40ml)中，待混悬液加热到5(TC时缓慢加入二氯亚砜(61ml，0.840mmo1)，使放出的气体(S02，HC1)有效地得以控制。混合物加热到85。C，搅拌19小时。反应完毕后，冷却至2(TC，旋蒸除去过量的二氯亚砜和氯苯混合物。再加入甲苯(65.70g，75.5ml)，再次旋蒸除去仍然残留的二氯亚砜和大量的氯苯，所得粗品溶于甲苯(84.80g，97.5ml)，以待下步反应使用。也可以购买获得。2、N-甲基-(4-氯-2-吡啶基)甲酰胺的制备由4-氯-2-(氯甲酰基)吡啶盐酸盐按照现有公开的方法制备得到，例如25%甲胺溶液(95.50g，0.77mol)冷至-5°C，20°C以下滴加上述4-氯-2-(氯甲酰基)吡啶盐酸盐的甲苯溶液。滴毕同温反应90分钟。静置分层，甲苯层用水(45mlX2)洗涤，减压蒸除溶剂，剩余棕色油状物中加入THF(170ml)，冷至5。C，20°C以下滴加36%盐酸(29.40g，0.30mol)。加毕同温搅拌1小时，过滤，滤饼用THF(20mlX2)洗涤，溶于水(120ml)中，加20%氢氧化钠溶液调至pH=7，搅拌30分钟，过滤，滤饼用水(20mlX2)洗涤，2(TC减压干燥，得白色固体(38.60g，产率93.1%，以2-甲酸吡啶计)，mp3538°C。也可以购买获得。工H丽R(400腿z，CDC13)S:3.00(s，3H，NHCH3)，7.40(dd，J=l.9、5.2Hz，lH)，7.95(br，s，1H，NH)，8.18(d，J=l.9Hz，1H，pyridine)，8.41(d，J=5.2Hz，1H，pyridine)。质谱(m/e)170(M+l)。3、4-(4-氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶的制备N-甲基-(4-氯-2-吡啶基)甲酰胺(3.40g，0.02mol)溶于THF(16ml)，加入对氨基苯酚(2.40g，0.02mol)、相转移催化剂聚乙二醇600(2.40g)、氢氧化钠(1.20g，0.03mol)和45X氢氧化钠溶液(2.7ml)，回流12小时。蒸除THF溶剂，剩余物中加入水(20ml)，过滤，滤饼以异丙醇重结晶、冷异丙醇(5mlX2)洗涤，4(TC减压干燥，得浅棕色固体(3.50g，产率72.2%)，mp108110。C。实施例24-(4-氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶的制备室温下将对氨基苯酚(0.70g，6.40mmo1)溶于7ml无水DMF加入叔丁醇钾(0.72g，6.40mmol)氮气保护下搅拌2小时。加入N-甲基-(4-氯-2-吡啶基)甲酰胺(O.50g，2.90mmo1)，碳酸钾(0.20g，1.40mmo1)，加热反应6小时。室温下将反应液倒入(乙酸乙酯200ml+水20ml)混合液中，收集有机层，去除溶剂，得粗产品，柱层析分离，得到棕黑色固体0.41g，(产率57.1%)。工HNMR(400腿z，CDC13):3.0(d，J=5.2Hz，3H，—NHCH3)，3.7(br，s，2H，—NH2)，6.7(d，J=8.8Hz，2H)，6.9(m，3H)，7.67(d，J=2.他，1H)，8.0(s，1H，NH)，8.3(d，J=6Hz，1H)MS-ESI(m/z):244.4(M+l)，266.4(M+23)实施例3化合物Ia:4-(4-(2-三氟甲基)苯甲酰胺基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶的制备将4-(4-氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶(0.20g，0.82mmol)溶于吡啶(1.5ml)中，室温下缓慢加入邻三氟甲基苯甲酰氯(0.21ml，2.90mmo1)，升温到8(TC。氮气保护下反应约1小时，TCL法监测，原料反应完为反应终点。向反应体系中加水(3ml)，搅拌10分钟。反应液加入饱和NaHC03溶液到无气泡产生，用乙酸乙酯萃取，有机层用饱和食盐水洗，无水MgS04干燥，浓縮得粗品，粗品用乙酸乙酯重结晶，得浅粉色纯品(0.17g，产率50%)。MS—ESI(m/z):414.2(M—1)实施例4化合物Ib:4-(4-(3-三氟甲基)苯甲酰胺基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶的制备将4-(4-氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶(0.50g，2.06mmol)溶于吡啶(3ml)中，室温下缓慢加入间三氟甲基苯甲酰氯(2.47ml，5.2mmo1)，升温到8(TC。氮气保护下约l小时，TCL监测，原料化合物反应完为反应终点。向反应体系中加水(6ml)，搅拌10分钟。反应液加入饱和NaHC03溶液到无气泡产生，用乙酸乙酯萃取，有机层用饱和食盐水洗，无水MgS04干燥，浓縮得粗品，柱层析分离，得到浅粉色化合物0.51g(产率60呢)。4NMR(400腿z，DMSO—d6):2.97(d，J=4.8，3H)，7.18(m，1H)，7.26(d，J=9.2Hz，2H)，7.4(d，J=2.4Hz，1H)，7.8(m，1H)，7.92(d，J=9.2Hz，2H)，7.99(d，J=7.6Hz，2H)，8.3(m，2H)，8.5(d，J=5.2Hz，1H)，8.8(m，1H)，10.63(s，1H)MS—ESI(m/z):416.2(M+l)实施例5化合物Ic:4-(4-(4-三氟甲基)苯甲酰胺基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶的制备<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>4-(4-氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶(0.20g，0.82mmol)溶于吡啶(1.5ml)中，室温下缓慢加入对三氟甲基苯甲酰氯(1.6ml，2.0mmo1)，升温到8(TC。氮气保护下约l小时，向反应体系中加水(3ml)，搅拌10分钟，然后加入饱和NaHC03溶液到无气泡产生，用乙酸乙酯萃取，有机层用饱和食盐水洗涤，无水MgS04干燥，浓縮得粗品0.34g，乙酸乙酯重结晶，得纯品(0.19g，产率55%)。工HNMR(400腿z，DMSO—d6):2.8(d，J=4.8Hz，3H，NHCH3)，7.1(q，1H)，7.2(d，J=8.8Hz，2H)，7.4(d，J=2.他，1H)，7.9(t，J=4.8Hz，鄉，8.1(d，J=8.他，2H)，8.5(d，J=5.6Hz，1H)，8.7(d，J=4.8Hz，1H)，10.6(s，1H)MS—ESI(m/z):414.2(M—1)实施例6化合物Id:4-(4-(4-氯)苯甲酰胺基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶的制备<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>4-(4-氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶(0.40g，1.65mmo1)与碳酸钾(0.45g，3.30mmol)的混合物溶于THF(4ml)中，室温搅拌下，滴加对氯苯甲酰氯(0.43g，2.47mmo1)的THF(4ml)溶液，滴毕搅拌l小时，抽滤，得粗品，用甲醇和二氯甲烷的混合溶液重结晶，艮口得产品(0.41g，产率65.9%)。工HNMR(400腿z，DMSO—d6):2.97(d，J=4.4Hz，3H，—NHCH3)，7.0(d，J=14.4Hz，1H)，7.1(d，J=14.4Hz，2H)，7.2(d，J=8.4Hz，1H)，7.5(t，J=4.2Hz，2H)，7.7(m，2H)，7.9(m，2H)，8.5(d，J=5.2Hz，1H)，8.7(d，J=他，1H)，10.4(s，H)MS-ESI(m/z):382.1(M+1)，405.9(M+23)药效学实验部分试验例细胞增殖抑制实验1、实验材料RPMI-1640、DMEM、胎牛血清、胰酶等购自GibcoBRL公司(InvitrogenCorporation,USA)，溴化噻唑蓝四唑(MTT)、二甲亚砜(DMSO)为Sigma公司(USA)产品。本发明涉及的新化合物由我实验室自行合成，体外实验时用DMSO配制成20mg/ml储存液，置4'C冰箱避光保存备用，临用时用完全培养液稀释至所需浓度。细胞系及培养本实验所用的本实验所用的人肝癌细胞株(H印G2)、人结肠癌细胞株(SW480和HCT116)、人乳腺癌细胞株(MCF7)和人肺癌细胞株(A549)均购于美国ATCC公司。人肝癌细胞株(H印G2)，用含10%胎牛血清、100U/mL青霉素、100yg/mL链霉素的DMEM完全培养基、5%C02、37。C培养。人结肠癌细胞株(HCT116和SW480)、人乳腺癌细胞株(MCF7)和人肺癌细胞株(A549)用含10%胎牛血清、100U/mL青霉素、100yg/mL链霉素的RPMI-1640完全培养基、5%C02、37'C培养。2、实验方法(MTT法)用完全培养液调整细胞浓度为2X10VmL，接种于96孔板，每孔200yL，培养过夜，次日分别用不同剂量的IaId(终浓度分别为20、10、5、2.5、1.25、0.625、0.312mg/ml)处理细胞，同时设等体积的溶剂对照组，DMSO浓度为O.1%(0.P/。的DMSO对细胞增殖无影响)。每个组设5个复孔，37°C，5%C02培养。分别于培养48及72小时后，取l个培养板，每孔加入5mg/mLMTT试剂20yL，继续培养2h，弃上清，再加DMSO150yL，振荡混匀15min，用酶标仪(入=570nm)测定吸光度(A)值(A值与活细胞数成正比)，取其平均值。相对细胞增殖抑制率(％)=(溶剂对照组A57Q-实验组A57Q)/溶剂对照组A570X100%。以下各化合物对细胞增值抑制作用，均采用细胞增殖抑制率(％)表示。3、实验结果化合物IaId在不同肿瘤细胞株上的对细胞增殖抑制作用见表l。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>结果显示，化合物Ib作用A549、H印G2及HCT116细胞后，随药物浓度增大，细胞增殖抑制越明显(图l)，具有剂量依赖性(P〈0.05)。各剂量组与溶剂对照组相比，相对细胞增殖抑制率差异均有统计学意义(P〈0.05)。化合物Ib处理A549，H印G2及HCT116细胞48h的半数抑制浓度(IC5o)分别约为21.5yg/ml、18.2yg/ml及8.1yg/ml。权利要求1.式I所示的4-(4-苯甲酰氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶衍生物其中，R1为氢，卤代基，三氟甲基，硝基，烷氧基，二甲氧基或氨基；R2比为氢，卤代基，三氟甲基，硝基，烷氧基，二甲氧基或氨基；R3为氢，卤代基，三氟甲基，硝基，烷氧基，二甲氧基或氨基。2.根据权利要求1所述的4-(4-苯甲酰氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶衍生物，其特征在于^为氢，氯代基或三氟甲基；&为氢，氯代基或三氟甲基；R-;为氢，氯代基或三氟甲基。3.根据权利要求2所述的4-(4-苯甲酰氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶衍生物，其特征在于^为氢；&为氢，氯代基或三氟甲基；R.;为氢，氯代基或三氟甲基。4.根据权利要求3所述的4-(4-苯甲酰氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶衍生物，其特征在于所述衍生物为4-(4-(2-三氟甲基)苯甲酰胺基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶，4-(4-(3-三氟甲基)苯甲酰胺基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶，4-(4-(4-三氟甲基)苯甲酰胺基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶，或4-(4-(4-氯)苯甲酰胺基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶。5.制备式I所示的4-(4-苯甲酰氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶衍生物的方法，其特征在于由4-(4-氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶与相应化合物通过氮酰化反应制备得到。6.根据权利要求5所述的制备式I所示的4-(4-苯甲酰氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶衍生物的方法，其特征在于:它是由4-(4-氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶与相应化合物以吡啶作为溶剂和缚酸剂，通过氮酰化反应制备得到；或由4-(4-氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶与R取代苯甲酰氯以四氢呋喃作为溶剂、碳酸钾作为缚酸剂，通过氮酰化反应制备得到。7.式I所示的4-(4-苯甲酰氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶衍生物在制备抗肿瘤药物中的用途。8.式I所示的4-(4-苯甲酰氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶衍生物添加药学上可以接受的辅助性成分制备而成的药物组合物。9.权利要求8所述的药物组合物在制备抗肿瘤药物中的用途。全文摘要本发明涉及4-(4-苯甲酰氨基苯氧基)-2-(甲基氨甲酰基)吡啶衍生物以及制备方法和用途，属于化学医药领域。该衍生物的结构如式I所示R₁为氢，卤代基，三氟甲基，硝基，烷氧基，二甲氧基或氨基；R₂为氢，卤代基，三氟甲基，硝基，烷氧基，二甲氧基或氨基；R₃为氢，卤代基，三氟甲基，硝基，烷氧基，二甲氧基或氨基。所述衍生物可用于制备抗肿瘤药物。文档编号C07D213/00GK101362718SQ200810304730公开日2009年2月11日申请日期2008年9月28日优先权日2008年9月28日发明者余洛汀,黎杨,杨胜勇,赵瀛兰,魏于全申请人:四川大学