1.一种猪圆环病毒2型病毒样颗粒的纯化方法,其特征在于包括以下步骤:
1)取PCV2病毒培养液,裂解细胞,得到细胞裂解液;
2)取步骤1)所得的细胞裂解液澄清处理,得到病毒澄清液;
3)取步骤2)所得的病毒澄清液浓缩8~12倍,得到病毒浓缩液;
4)取步骤3)所得的病毒浓缩液利用Sepharose 4FF分子筛层析纯化系统纯化,纯化过程中,先通过蠕动泵以1.56πr2ml/min的流速利用0.9~1.1mol/L PBS溶液进行柱平衡至紫外蛋白检测仪OD280基线平稳,而后取步骤3)所得的病毒浓缩液上样,上样结束后利用0.9~1.1mol/L PBS溶液洗脱,收集紫外蛋白检测仪OD280的第一洗脱峰;
其中r是层析柱半径,单位是厘米。
2.根据权利要求1所述的一种猪圆环病毒2型病毒样颗粒的纯化方法,其特征在于步骤4)纯化之前先用无菌的0.5mol/L的NaOH溶液对Sepharose 4FF分子筛层析纯化系统进行循环冲洗20~30min,再用无菌1mol/L PBS对其进行循环冲洗,至PH为6.8~7.2。
3.根据权利要求1所述的一种猪圆环病毒2型病毒样颗粒的纯化方法,其特征在于步骤1)具体包括以下操作:取PCV2病毒培养液,反复冻融3次,固液分离取沉淀,利用PBS溶液洗涤3次,弃去上清,加入细胞裂解液裂解,固液分离取沉淀,加入细胞裂解液重悬浮,而后超声波处理。
4.根据权利要求3所述的一种猪圆环病毒2型病毒样颗粒的纯化方法,其特征在于步骤1)所述的固液分离均是在4℃条件下以9500r/min的转速离心20min。
5.根据权利要求3所述的一种猪圆环病毒2型病毒样颗粒的纯化方法,其特征在于步骤1)中所述加入细胞裂解液裂解是:加入4℃预冷的细胞裂解液,用枪头吹吸混匀后,冰浴20min。
6.根据权利要求3所述的一种猪圆环病毒2型病毒样颗粒的纯化方法,其特征在于步骤1)所述超声处理是以振幅为25%的超声波每次处理10s,每两次处理之间的时间间隔30s,超声处理的总时间为30min。
7.根据权利要求1所述的一种猪圆环病毒2型病毒样颗粒的纯化方法,其特征在于步骤2)所述澄清处理是利用孔径为0.5~0.8μm的滤板实现的。
8.根据权利要求7所述的一种猪圆环病毒2型病毒样颗粒的纯化方法,其特征在于步骤2)中,先利用0.5mol/L NaOH溶液浸泡滤板5min,而后用1mol/L无菌PBS溶液洗涤至PH为7.0,再澄清处理步骤1)所得的细胞裂解液。
9.根据权利要求1所述的一种猪圆环病毒2型病毒样颗粒的纯化方法,其特征在于步骤3)中对病毒澄清液的浓缩是利用孔径为100KD的中空纤维滤膜实现的。
10.根据权利要求9所述的一种猪圆环病毒2型病毒样颗粒的纯化方法,其特征在于步骤3)中先利用0.5mol/L NaOH溶液浸泡中空纤维滤膜20~30min,而后用1mol/L无菌PBS溶液洗涤至PH为7.0,再浓缩处理步骤2)所得的病毒澄清液。