onica. cv. Nipponbare)，参考文献：水稻品种"日本晴农业科技通讯，1973年02期。公众可从 北京大学获得。
[0055] 水稻（Oryza. sativa L.)品种武育粳3号：为水稻条纹病毒（RSV)易感品种，参考 文献：武育粳3号土传病害发生特点与防治技术，江苏农业科学，1996年01期。公众可从 北京大学。
[0056] 水稻（Oryza. sativa L.)品种镇稻88 :为水稻条纹病毒（RSV)抗感品种。该品种 记载于"水稻新品种--镇稻88,农业科技通讯，1998年第05期"一文，公众可从北京大学 获得。
[0057] 水稻条纹病毒（Rice Stripe Virus, RSV):记载于"蔡小卫，赵俊玲，邵英，桂青 清，刘芳.灰飞虱传播水稻条纹病毒的研究综述.中国植保导刊，2011年09期"一文，公 众可从北京大学获得。
[0058] 农杆菌 EHA105 :记载于 "Zhu et al.，2005. The Rice Dwarf Virus P2 Protein interacts with ent-Kaurene Oxidases in vivo, leading to reduced biosynthesis of Gibberellins and rice dwarf symptoms. Plant Physiology. 139:1935-1945.，'一文，公众 可从北京大学获得。
[0059] pEASY-simple-Tl载体：北京全式金生物技术有限公司产品，其产品目录号为 CT111-01。
[0060] pCam23ACT: OCS 载体：记载于 "Liang Wu et al.，2009. Rice MrcroRNA Effector Complexes and Targets. Plant Cell. 21 (11) : 3421-3435. "一文，公众可从北京大学获得。。
[0061] 实施例1、发现0sAG018基因能够被水稻条纹病毒诱导表达
[0062] 本实施例中所涉及的0sAG018基因来源于水稻（Oryza. sativa L. )，0sAG018基因 的cDNA序列如序列表中序列1所示，序列1由3267个核苷酸组成，其中第1-3267位为编 码序列（ORF);序列1编码序列表中序列2所示的蛋白质，序列2由1088个氨基酸残基组 成。
[0063] 一、0sAG018基因 mRNA在水稻条纹病毒侵染后积累
[0064] 取被水稻条纹病毒（RSV)侵染发病的野生型水稻（Oryza. sativa L.)品种日本 晴和对照组水稻(未被水稻条纹病毒侵染的野生型水稻品种日本晴）各〇. 5g，在液氮中研 磨后，依照 Invitrogen 公司的 TRIzol Reagent 说明书（Invitrogen Trizol Reagent， cat No. 15596-018)提取总 RNA。测定总 RNA 浓度后，取 10μ g 总 RNA，按照 RQl Dnase (Promega，货号：M610A)的说明书对总RNA中的水稻基因组DNA进行消化。消化反应体系： 总 RNAlOy g，IOXDnase 缓冲液 10 μ 1，DNaselOy 1，DEPC 水补足 100 μ 1。将整个消化反 应体系于37°C孵育35min。孵育后向体系中加入4μ1 RQl DNase终止反应液，65°C孵育 IOmin,使 DNase 灭活。
[0065] 消化基因组DNA后，再利用氯仿抽提法浓缩总RNA，测定RNA浓度，取2 μ g RNA 参照Invitrogen公司的Superscript II逆转录酶进行反转录，所用引物为16个核苷酸 的 Oligod (T)引物，具体方法参见 invitrogen M-MLV Reverse Transcriptase (货号： 28025-021)。以反转录获得水稻cDNA为模板，利用realtime PCR的方法对0sAG018基因 的转录水平进行检测，实验方法参照Τ0Υ0Β0 SYBR .? Green Realtime PCR Master Mix (货 号QPK-201)说明书，引物为：
[0066] 0sAG018-F :5' -TGTTCGTCCAGGCACAGTAG-3'（序列 1 的第 2901-2920 位）；
[0067] 0sAG018-R :5'-GCGGTGAAGTTGTTGTCGTC-3'（序列 1 的第 3022-3041 位的反向互补 序列)。
[0068] 内参基因为水稻EF，引物为：
[0069] OsEF-Ia-F :5, -GCACGCTCTTCTTGCTTTCACTCT-3,；
[0070] OsEF-Ia-R : 5，-AAAGGTCACCACCATACCAGGCTT-3，。
[0071] 数据处理方法，参照bio-rad公司CFX96型号实时定量荧光PCR仪自带软件CFX manager?Software (Version2. 1)。
[0072] 结果如图1所示，可见在mRNA水平上，0sAG018基因在RSV侵染水稻后明显富集， 表明RSV侵染水稻后能够诱导0sAG018基因的表达，使该基因的转录水平提高。
[0073] 二、0sAG018蛋白在水稻条纹病毒侵染的水稻中积累
[0074] 以被水稻条纹病毒（RSV)侵染发病的野生型水稻（Oryza. sativa L.)品种日本晴 和对照组水稻(未被水稻条纹病毒侵染的野生型水稻品种日本晴）的叶片为实验材料，利用 2 X SDS上样缓冲液提取总蛋白，采用Western blot方法检测0sAG018蛋白在两水稻中的积 累情况。具体如下：
[0075] (I) SDS-PAGE电泳操作流程及注意事项参见《蛋白质的SDS - PAGE凝胶电泳》：
[0076] (2 ) SDS-PAGE 凝胶转膜：
[0077] 1)将蛋白胶放于玻璃板上，测量大小，剪取相同大小的PVDF膜，做好标记，将膜放 于100%甲醇内浸润超过10秒；
[0078] 2)剪取相同大小的六块滤纸，三张一份，与胶和PVDF膜放于转膜缓冲液内平衡超 过10分钟；
[0079] 3)在转膜缓冲液中将三张一份的滤纸放于最底层，依次放上蛋白胶、PVDF膜、另 外三张滤纸，对齐后一手捏紧一角，另一手挤压滤纸，除去所有气泡，调整角度，重新挤压气 泡；
[0080] 4)将转膜槽放于冰盒内，灌注转膜缓冲液，将中间固定好蛋白胶和PVDF膜的双层 滤纸放于海绵夹层中，置于转膜模具内，之后将PVDF膜朝向正极放入转膜槽内中，根据目 的蛋白大小选择合适电流和时间恒流转膜；
[0081] (3)蛋白质的免疫检测：
[0082] 1)取出PVDF膜放于平皿中，加入约25ml PBS-T，脱色摇床上摇动洗膜5分钟；
[0083] 2)在平皿内加入50ml封闭液(含5 %脱脂奶粉的50ml PBS-T)，脱色摇床摇动将膜 封闭过夜；
[0084] 3 )大体积(约30ml) PBS-T洗膜5分钟，洗2次；
[0085] 4)将膜放于三面剪开的杂交袋中，热封两边后按每平方厘米0. Iml加入稀释好的 一抗(利用特异性较高的多肽AG018N，即序列5所示多肽，作为免疫原，免疫兔子，制备获得 的抗水稻0sAG018蛋白的多克隆抗体)，封闭最后一边，室温反应2小时；其中一抗稀释液为 含0. 25%BSA的PBS-T，一抗的稀释比例取决于所用抗体的效价和转到膜上目的蛋白的量， 期间要至少每隔5分钟混匀一次杂交袋；
[0086] 5)剪开杂交袋，将膜放于平皿内加入20ml PBS-T洗10分钟，洗3次；后用20ml TBS-T洗膜10分钟，洗2次；
[0087] 7)依照一抗反应的方法，将膜放于新的杂交袋中，加入稀释好的二抗(兔抗， Promega公司，货号：0000089056)在杂交袋中反应1小时，二抗稀释液为含0. 25%BSA的 TBS-T ；
[0088] 8) 20ml TBS-T 漂洗 10 分钟，漂洗 4 次；
[0089] 9)利用 Western blot 显影 kit (Immobilon? Western :MILLIP0RE 上海贸易有限 公司，货号：1305701)进行显影，利用柯达X-OMT BT医用X射线胶片检测结果；
[0090] (4)实验所需试剂：
[0091] 1)2XSDS 上样缓冲液 IOmL :甘油 2M1 ;溴酚蓝 0· 0202g ;lMTris-HCl (pH6. 8)lmL ; β -巯基乙醇 0· 14mL ; 10%SDS4mL ;加 ddH20 至 10mL，保存于-20°C。
[0092] 2)转膜缓冲液 lL:39mM 甘氨酸：2.9g;Tris 5.8g;SDS