nk中已报道的16S rDNA序列进行同源性比对，并选取若干菌种做进化树分析。如图3所示，本发明分离纯化得到的菌株MT-H的16S rDNA序列与无色杆菌(Achromobacters\>.D_12)同源率达99%，进化距离最近。其培养特征与扫描电镜观察特征与无色杆菌()也最为相似，因此本发明筛选获得的降解菌为无色杆菌(A chromobac tersp.)。
[0021]因此，发明人将该菌株于2015年I月22日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO: M 2015058，保藏地址为:中国武汉武汉大学，菌株分类命名为 A chromobac ter&\>.MT-H。
[0022]实施例2 JcAro?oAacteΓsp.MT-H对DEHP的降解效果实验
S1.菌悬液制备:将纯化后的菌种MT-H接入含有10 mL的LB液体培养基过夜活化培养至对数期，经5000 rpm离心10 min收集菌体，用PBS洗菌3次后重悬，调节OD6tltl ?=1.0作为菌种悬液。
[0023]S2.降解性能测定:分别向10mL含有不同浓度DEHP (50、100、200、400、600 mgL—1)的MSM培养液中接菌I mL，以不接菌作为对照，并调节pH为8.0，每组三个重复。在300C，140 rpm恒温摇床培养9天，定期取样，经GC/MS测定DEHP的降解情况。
[0024]色谱条件:采用岛津公司QP2010 Plus型GC/MS串联质谱仪。色谱柱为安捷伦HP-5柱子(0.25 μπι X 0.25 mm X 30 m)，进样温度为250°C，离子源(EI)温度为220°C，采用不分流进样I UL，载气为高纯氦气。升温程序为:初始温度为100°C，保持2 min，15°C/min梯度上升至129°C，然后以40 °C /min升温至280 °C，保持5min。
[0025]质量控制:采用外标法和六点校正标准物质制作标准曲线。6种PAEs混标的基质加标平均回收率为92.5-110.2%，相对偏差低于10.5%，仪器检测限为0.12-0.45 ug g'该方法满足痕量有机物定量分析要求。
[0026]结果如图4所示，Achromobacter邓.MT-H在培养初期对DEHP的降解速率非常缓慢，随着培养时间的延长，其降解作用也随之增大；在DEHP浓度低于200 mg L—1时，7d内DEHP几乎完全降解；当DEHP的浓度较高时，其降解速率虽明显受到抑制；当DEHP的浓度高至600 mg L—1时，培养至第9天，其降解率也可达50%以上。
[0027]本实施例说明分离所得到的MT-H可利用DEHP作为唯一碳源和能源进行生长繁殖，在DEHP浓度较低时，该菌具有高效降解DEHP的能力。
[0028]实施例3 pH、温度和转速对JcAroff1Aactersp.MT-H降解DEHP的影响
pH 对 Achromobactersv.MT-H 降解 DEHP 的影响:分别向 10mL 不同 pH (5、6、7、8、9、10)的含有DEHP (500mg/L)的MSM培养液中接菌lmL，以不接菌作为对照，每组三个重复。在300C，140 rpm恒温摇床培养48h之后，经GC/MS测定DEHP的降解情况。
[0029]温度对Achromobactersv.MT-H 降解 DEHP 的影响:向 10mL 含有 DEHP (500mg/L)的MSM培养液中接菌2.5mL，以不接菌作为对照，每组三个重复，分别在温度为20°C、25°C、30°C、35°C、40°C的恒温摇床中经140 rpm培养48h之后，经GC/MS测定DEHP的降解情况。
[0030]转速对Achromobactersv.MT-H 降解 DEHP 的影响:向 10mL 含有 DEHP( 500mg/L)的MSM培养液中接菌2.5mL，以不接菌作为对照，每组三个重复，分别在转速为80、110、140、170、200 rpm转速的恒温摇床经30°C培养48h之后，经GC/MS测定DEHP的降解情况。
[0031]实验结果如图5所示，从JcAroff1Aactersp.MT-H菌在不同pH条件下对DEHP的降解效果图可以看出，MT-H菌在不同pH条件下对DEHP的降解能力不同。在pH为6~9的范围内，该菌对DEHP的降解率均达到80%以上；尤其是pH为7_8范围内，降解效率可达90%以上；在pH为5时降解率受到较大的抑制。从Achromobacter^.MT-H菌在不同温度条件下对DEHP的降解效果图可以看出，当温度在30~40°C范围内，该菌对DEHP的降解率可达80%以上；但在较低温度下，其降解率明显受到了抑制。hk Achromobactersv.MT-H菌在不同转速条件下对DEHP的降解效果图可以看出，转速对该菌的DEHP降解效率影响并不是很显著，大致趋势为转速越高越有利于该菌降解DEHP，但当转速达到170rpm时，其降解率基本趋于不变。
[0032]本实施例说明，菌株MT-H在中性和偏碱性的较宽pH和温度范围内均能较好的降解DEHP，为其在不同的复杂环境中的应用提供了保证。
【主权项】
1.一株无色杆菌(Achromobacter sp.)菌株MT-H，所述菌株于2015年I月22日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO:M 2015058。
2.根据权利要求1所述的菌株，其特征在于，所述菌株MT-E能降解邻苯二甲酸二异辛酯。
3.根据权利要求1所述的菌株，其特征在于，所述菌株在LB培养基上菌落为圆形，微凸起，淡黄色，湿润，半透明，边缘整齐，光滑；扫描电镜下多为球状或椭球状，直径为0.5—1 μ m0
4.根据权利要求1所述的菌株，其特征在于，所述菌株的16SrDNA序列如SEQ ID NO:1所示。
5.根据权利要求1所述的菌株，其特征在于，所述菌株在pH为6~9的范围内，对DEHP的降解率达到80%以上；在30~40°C的温度范围内，该菌对DEHP的降解率达到80%以上。
6.根据权利要求1所述的菌株，其特征在于，所述菌株在pH为7~8范围内，对DEHP的降解效率达到90%以上。
【专利摘要】本发明属于环境污染物生物处理技术领域，具体公开了一株降解邻苯二甲酸二异辛酯的无色杆菌(Achromobacter sp.)MT-H。所述菌株于2015年1月22日保藏在中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏编号为CCTCC NO：M 2015058。该菌对DEHP具有很高的降解效率，且在较宽的pH和温度范围内均能较好地降解DEHP，证明MT-H可以作为优良的DEHP降解菌应用于DEHP污染的生物处理方面。CCTCC NO：M 201505820150122
【IPC分类】C02F3-34, B09C1-10, C02F101-34, B01D53-84, C12N1-20, B01D53-72, C12R1-025
【公开号】CN104805037
【申请号】CN201510066134
【发明人】莫测辉, 赵海明, 李彦文, 蔡全英, 李慧, 杜欢, 向垒, 林静
【申请人】暨南大学
【公开日】2015年7月29日
【申请日】2015年2月9日