一种新型黄酮类化合物、其制备方法和用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于植物化学技术领域，具体涉及一种源于云南地方晾晒烟中的新型黄酮 类化合物及其制备方法与应用。
【背景技术】
[0002] 云南地方晾晒烟是烟草的云南特有变种，烟草从明万历末年进入云南，至清乾隆 年间成为当地常见的农作物。云南自然条件好，温暖的河谷，冷凉的半山区、山区都适应烟 草的生长。而且云南多样的气候、地理环境，烟草在多年的栽培过程中形成了很多个具有地 方特色的晾晒烟品种，其中著名的有：罗平八大河烟、师宗五洛河烟、会泽乐业烟、蒙自新安 所烟、富源大河烟、大姚赵户冲烟、云龙天登烟、宾川白塔烟、巍山南门烟、南涧乐居烟、腾冲 绮罗生烟等。这些晾晒烟在当地常盛产不衰；但其次生代谢产物的研宄还从未见报道过。
[0003] 黄酮（flavone)，是黄酮类化合物的总称，泛指两个具有酚羟基的苯环（A-与 B-环）通过中央三碳原子相互连结而成的一系列化合物。研宄表明，黄酮类化合物具有心 血管系统活性、抗菌及抗病毒活性、抗肿瘤活性、抗氧化自由基活性、抗炎、镇痛、抗变态等 多种药理活性。同时已有研宄证实，其药理作用与化学结构密切相关，为了研宄这类化合物 的构效关系，可进一步研宄和开发更多的黄酮类化合物，从中寻找有效的先导化合物和活 性基团。本发明从云南地方晾晒烟中分离得到了一种新的黄酮类化合物，该化合物至今尚 未见到相关报道，值得一提的是该化合物具有显著的抗轮状病毒活性。
【发明内容】
[0004] 本发明的第一方面在于提供一种结构新颖的黄酮类化合物，该化合物从云南地方 晾晒烟中分离得到，其分子式为C21H2tlO6，经过分析化学鉴定，其具有下述结构：
[0005]
[0006] 按IUPAC系统命名法将其命名为：4'，7-二甲氧基-6-羟基-8-异丁酰基黄酮。
[0007] 该化合物为橘黄色粉末，本发明人将其英文名命名为4'，7-dimethoxy-6_hydroxy-8-isobutyryl-fIavone0
[0008] 本发明的第二方面提供了上述第一方面所述的黄酮类化合物的制备方法，该方法 包括如下步骤：
[0009] a.制备晾晒烟提取物浸膏：以晾晒烟叶片为原料，将其粉碎并用第一溶剂浸泡并 提取所述烟草2~4次，每次12h~72h，将提取液合并、过滤并浓缩后得到所述烟草提取物 浸膏；其中所述第一溶剂是选自甲醇、乙醇或丙酮的有机溶剂与水的混合物，其中有机溶剂 占该第一溶剂的60被％~100被％，且第一溶剂 ：烟草=1.5~4:1，重量比；
[0010]b.硅胶柱层析：将上述烟草提取物浸膏用选自纯甲醇、纯乙醇或纯丙酮的第二溶 剂溶解后与为晾晒烟提取物浸膏的1~1. 6重量倍的60~120目硅胶拌样，将拌样后的混 合物再与为晾晒烟提取物浸膏的2~5重量倍的160~300目硅胶混合后干法装柱，然后 用体积比依次为10:0、9:1、8:2、7:3、6:4和5:5的一系列氯仿-甲醇溶液进行梯度洗脱，收 集其中用体积比为9:1的氯仿-甲醇溶液洗脱时得到的洗脱液，称为第一洗脱液；将上述第 一洗脱液用硅胶层析柱继续分离，用15:1、10:1、8:1、5:1、4:1、2:1的氯仿-丙酮溶液进行 梯度洗脱，将其中体积为4:1的氯仿-丙酮溶液洗脱时得到的洗脱液称为第二洗脱液；
[0011] c.高压液相色谱分离：将上述4:1洗脱部分通入高压液相色谱进行分离纯化，该 高压液相色谱采用21. 2mmX250mm，5ym的C18色谱柱，流动相为56wt%的甲醇水溶液，流 动相流速为12mL/min，紫外检测器检测波长为364nm，第二洗脱液液每次进样60~150yL， 收集每次进样后色谱峰保留时间为24.Imin时所对应的洗脱液，蒸干溶剂后即得所述黄酮 类化合物。
[0012] 前述高压是指使用时压力在5_15MPa的反相制备色谱。
[0013] 在优选的实施方案中，本发明还包括以下进一步提纯的步骤：将在所述高压液相 色谱分离之后得到的所述黄酮类化合物再次溶于甲醇溶液，并以甲醇溶液的为流动相，通 过凝胶柱进行层析分离，提到进一步提纯的所述黄酮类化合物。
[0014] 本发明的第三方面提供了第一方面所述的黄酮类化合物在制备抗轮状病毒药物 中的应用。
【附图说明】
[0015] 图1为本发明的新型黄酮类化合物的核磁共振碳谱。
[0016] 图2为本发明的新型黄酮类化合物的核磁共振氢谱。
[0017] 图3为本发明的新型黄酮类化合物的主要HMBC相关图示。
【具体实施方式】
[0018] 本发明所制备的新型黄酮类化合物的结构是通过以下方法测定出来的：本发 明化合物为橘黄色粉末；紫外光谱（溶剂为甲醇），Xmax(loge)210(4. 18)，254(3. 69)， 3364(3.58)_;红外光谱（溴化钾压片）丫 1^ 3454,2927，1710，165〇，1 610，1536，1455， 1376,1236,1176,1068,946,818CHT1;高分辨质谱（HRESIMS)给出准分子离子峰m/z 391. 1166 [M+Na] + (计算值391. 1158)。结合1H和13CNMR谱给出分子式C21H2tlO6，不饱和度为 12。紫外、红外和核磁数据（表1)表明，该化合物可能是一个黄酮类化合物。1HNMR和13C NMR谱（表1)显不显不21个碳原子和20个质子信号（表-1)，包括：一个1，4-二取代的 苯环、一个1，2, 3, 4, 5-五取代的苯环、一个异丁酰基、二个甲氧基、一个酚羟基、一个羰基 和一组双键；其中两个苯（C-5~C-IO和C-I'~C-6')、羰基（C-4)和双键（C-2和C-3) 构成了黄酮的骨架。黄酮的母体骨架确定后，剩余的信号：一个异丁酰基、二个甲氧基、一个 酚羟基则为黄酮的取代基。根据两甲氧基氢信号与C-7和C-4'的HMBC相关（图-3)可证 实两甲氧基分别取代在黄酮骨架的C-7和C-4'位，根据H-2"和C-8的HMBC相关可证实异 丁酰基取代在C-8位；根据酚羟基信号与C-5,C-6和C-7的HMBC相关，可证实酚羟基信号 取代在C-6位。至此，本化合物的结构得以确定。命名为4'，7_二甲氧基_6_羟基_8_异 丁酉先基黄酉同（4,，7_dimethoxy_6_hydroxy_8_isobutyryl_flavone) 〇
[0019] 表-1化合物的核磁共振数据
[0020]
[0021] 本发明化合物是首次被分离出来的，通过上述核磁共振和质谱测定方法确定了为 黄酮类化合物，并表征了其具体结构。经对抗轮状病毒的实验，其TC5tl值为176. 3yg/mL、IC5tl值为7. 87yg/mL，治疗指数TI为22. 4 ;其治疗指数超过对照病毒唑的治疗指数19. 16 ; 化合物具有很好的抗轮状病毒活性。以上结果揭示了本发明的化合物在制备抗轮状病毒药 物中有良好的应用前景。本发明化合物结构简单活性较好，可作为抗轮状病毒药物研发的 先导性化合物用于抗轮状病毒药物制剂研发。
[0022] 下面结合实施例及附图对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以 限制，基于本发明教导所作的任何变换或改进，均落入本发明的保护范围。
[0023] 本发明所用原料不受地区和品种限制，任何来源地的晾晒烟均可以实现本发明， 下面以来源于云南中烟工业有限责任公司的烟草原料对本发明做进一步说明。除非另有说 明，本发明中所采用的百分数均为质量百分数。
[0024] 实施例1
[0025] 所用地方晾晒烟为云南大理云龙天登烟。将晾晒烟取样3.Okg粉碎以70%的丙 酮/水提取3次，每次提取24h，提取液合并，过滤，减压浓缩成浸膏，得浸膏150g。浸膏用 重量比180g的纯甲醇溶解后用200g的80目粗硅胶拌样，I.Okg的160目硅胶装柱进行 硅胶柱层析，用体积配比为10:0、9:1、8 :2、7:3、6:4、5:5的氯仿-甲醇梯度洗脱，将其中 体积配比为9:1的氯仿-甲醇洗脱部分进一步用15:1、10 :1、8:1、5:1、4:1、2:1的一系列 氯仿-丙酮溶液进行梯度洗脱，将其中体积为4:1的氯仿-丙酮溶液洗脱时得到的洗脱 液继续用安捷仑1100半制备高效液相色谱分离，以56%的甲醇水溶液为流动相，Zorbax SB-C18 (21. 2X250mm，5ym)制备柱为固定相，流动相流速为12ml/min，紫外检测器检测波 长为364nm，每次进样