植物乳杆菌L.plantarum HM6055及其用图
【技术领域】
[0001 ] 本发明涉及微生物领域，尤其涉及植物乳杆菌Z.jC^a/7iar? /^防5及其用途。
【背景技术】
[0002] 随着人们生活水平的提高和环保意识的加强，人们都非常关注自己生活的健康， 所以特别关心化学品对健康的影响，因而食品防腐剂也面临着新的选择。微生物防腐剂以 其安全、天然、健康的特点而备受关注，各国纷纷投入人力物力进行研究。随着我国对食品 安全的日益重视，用生物防腐剂代替化学防腐剂以成为食品保藏技术的发展趋势。
[0003] 苯乳酸有很强的防腐保鲜功效，可用在果酒、饮料、肉类、食品、糕点制作、蔬菜 (橄榄、小黄瓜、珍珠洋葱）腌制以及罐头加工、粮食加工、水果的贮藏，具有调节pH值、抑 菌、延长保质期、调味、保持食品色泽、提高产品质量等作用； 近年来中国对烘焙面包类食品的消费量逐年增加，对其品质的要求也日益提高，出现 了不少利用植物乳杆菌和嗜热链球菌辅助酵母发酵，以提高面包营养价值、延长其货架期 的新方法。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种新菌株植物乳杆菌Z.
[0006] 为实现上述目的，本发明提供植物乳杆菌Z. iar?選航巧反其特征在于，保藏 编号为CGMCCNo. 11213。
[0007] 另一方面，本发明还提供所述植物乳杆菌Z.選航巧5在微生态制剂、食 品中的用途。
[0008] 进一步，所述用途为植物乳杆菌Z.Mi份?55用于产生较高含量的苯乳酸 的用途。
[0009] 另一方面，本发明还提供一种微生态制剂，所述微生态制剂包含所述植物乳杆菌 L.plantarumHM6055〇
[0010] 另一方面，本发明还提供一种食品，所述食品含有所述植物乳杆菌 或采用所述植物乳杆菌制备得到。
[0011] 进一步，所述食品是食品添加剂。
[0012] 进一步，所述食品是面团。
[0013] 进一步，所述食品是面包。
[0014] 本发明植物乳杆菌的筛选方法是采集自然发酵的泡菜发酵液，取1ml于9ml无菌 生理盐水中稀释到10 3 -10 7,吸取0. 2ml涂布于改良M17平板培养基上，37°C好氧培养 24-48h。选择革兰氏阳性、过氧化氢酶阴性的菌落进一步分离纯化，直到得到纯菌株为止。 将初筛得到的菌株进行面包应用实验及通过HPLC测定其苯乳酸的产量，经过复筛得到菌 株。
[0015] L.plantarumHM6055 {墙匆涕派魯LactobacillusplantarumHM6055')隹^ 自自然发酵酸菜样品中的一株益生菌，本发明的植物乳杆菌（iar? /?紛已经保 藏。
[0016]保藏信息： 菌株名称：植物乳杆菌ZacioAaciUiA? 保藏日期：2015年8月10日， 保藏单位：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国微生物菌种保藏管理委员会普 通微生物中心（CGMCC)， 保藏编号：CGMCCNo. 11213。
[0017] 本发明根据中国消费者的膳食结构和饮食习惯，利用植物乳杆菌 研制乳酸菌发酵面包，旨在延期其货架保存期的同时，改善面包结构，赋予面包特 殊风味，拓展乳酸菌在食品特别是面包中的应用范围。
[0018]使用Z.发酵制备的面包可延长面包货架期、改善面包风味、改 善面包表观特征。Z.MMiary? 作为一种益生菌，在食品(焙烤制品)领域具有广泛 的应用前景。
[0019] 微生态制剂（Porbioties)，也叫活菌制剂（Bigone)或生菌剂，是指运用微生态 学原理，利用对宿主有益无害的益生菌或益生菌的促生长物质，经特殊工艺制成的制剂。目 前微生态制剂已被应用于饲料、农业、医药保健和食品等各领域中。
[0020] 由本发明的实施例可以看出，由菌粉发酵制备所得的面包酸 感适中不刺激，发酵香气浓厚宜人，麦香味浓厚，整体香气清新；表面呈金黄色，色泽均匀一 致，有光泽，面包为圆形，表面向外鼓凸，切面气孔均匀细密，无大孔洞，内质洁白而富有弹 性，组织蓬松之海绵状，无生心；其可检测苯乳酸含量明显高于对照菌株，从而可以有效延 长货架期。
【附图说明】
[0021] 图1是实施例2空白组面包的外观。
[0022] 图2是实施例2由菌粉发酵制备所得的面包的外观。
【具体实施方式】
[0027] 下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终 相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附 图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。实施例 中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明 书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
[0028]实施例1:植物乳杆菌Z.Mi柳55的筛选鉴定 1、筛选 采集四川农家自制泡菜（30度发酵240h)，取lml自然发酵的泡菜发酵液于9ml无菌生 理盐水中，继续添加无菌生理盐水稀释到10 3 -10 7,吸取0. 2ml涂布于改良M17平板培养 基上，37°C好氧培养24-48h。选择革兰氏阳性、过氧化氢酶阴性的菌落进一步分离纯化，直 到得到纯菌株为止。挑选在37度培养24小时的平板上，菌落边缘平整，光滑，乳白色，菌落 直径为l-2mm，中间部分略有细小突起，37度培养48小时后，菌落呈扁平状，表面略黄，菌落 直径扩大为2-3mm。将初筛得到的菌株进行面包应用实验(见实施例2的步骤)，经过复筛 (具体标准为：测定应用实验得到面包的苯乳酸含量比较高(提高10%以上)、风味口感评价 发酵风味更加柔和，酸感不刺激、面包比容增加10%以上评价及保质期实验）得到菌株。
[0029] 改良M17平板培养基配方：大豆蛋白胨10g，酵母浸粉2.5g，牛肉膏5g，葡萄糖 5g，抗坏血酸钠 0. 5g，MgS04 0. 25g，琼脂 17g，蒸馏水 1000ml，调节pH6. 5±0. 2。
[0030] 2、鉴定 1) 16srDNA鉴定 用细菌的16srDNA通用引物从HM6055的基因组DNA中PCR扩增得到1条约1. 5kb的条 带，将扩增产物测序，获得序列在GenBank中进行同源序列检索，结果显示所检索的100个 相似性较高的菌株的16SrDNA序列中，90%为ZacioAaciUiA?jOa/wiar·;与相关属种16S rDNA序列构建系统发育树，经同源性比对发现菌株HM6055与ZacioAaciWiA?jOahiari/a?的 16SrDNA序列同源性超过99%，因此确定其为植物乳杆菌。
[0031] 2)微生物学特性 Z. 菌株为革兰氏阳性，兼性厌氧，葡萄糖发酵类型为兼性异型发酵， 接触酶阴性，聚肽糖组成B群为阴性，形态为规整杆状，判断其为乳杆菌属；其阿拉伯糖、松 三糖、木糖发酵为阳性(利用率为11-89%)，判断其为植物乳杆菌。
[0032] 显微镜观察形态：呈规整杆状，在液体培养基中成短链，不生芽孢； 根据《常见细菌系统鉴定手册》（2001东秀珠蔡妙英版）判断其属于植物乳杆菌属。
[0033] 实施例2:植物乳杆菌7????在食品中的应用 以下为1000重量份的量。
[0034] 1、含Z.iari/a?選航巧5乳酸菌面团的制备： 将搅拌好的乳酸菌面团（呈稀糊状）置入37°C水浴恒温培养3hl5min，得到乳酸菌发酵 面团。此时面团的pH应为6.05±0.05。乳酸菌面团配方(面粉171g，全脂乳粉19g，葡萄糖 2g，鹿糖 8g，AN脂肪酶 0· 03g，Picca