具有Akt抑制活性的取代嘧啶类衍生物及其制备方法与应用

具有Akt抑制活性的取代嘧啶类衍生物及其制备方法与应用
【专利摘要】本发明涉及一种新的具有Akt抑制活性的取代嘧啶类衍生物、它们的制备方法以及包括它们和它们盐的药物组合物，以及所述取代嘧啶类衍生物和它们的盐在制备用于预防和/或治疗肿瘤的药物中的用途。该化合物的结构式为式(I)或式(II)所示：本发明的化合物结构新颖，对Akt的抑制活性效果突出，安全性高，制备成本低廉，在制备治疗抗肿瘤的药物中具有很好的应用前景。
【专利说明】
具有Akt抑制活性的取代嘧啶类衍生物及其制备方法与应用
技术领域
[0001] 本发明属于有机化合物合成及医药应用技术领域，具体涉及一类具有Akt抑制活 性的取代嘧啶类衍生物及其制备方法与应用。
【背景技术】
[0002] 肿瘤以其难治愈、复发率高的特点成为威胁人类健康的严重疾病。目前，肿瘤的发 生机制，以及抗肿瘤药物的开发，成为当今医药行业研究的热点课题。磷酯酰肌醇-3-激酶 (phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase Β,ΡΚΒ,也称Akt) 信号通路与细胞的生长、增殖、存活和凋亡密切相关，研究发现，该通路在多种肿瘤如卵巢 癌、肺癌、乳腺癌、直肠癌等癌细胞中异常活化，通过抑制该通路的激活，能够有效抑制肿瘤 的生长。Akt作为该通路的中心蛋白，成为抑制该通路激活的重要靶点。
[0003] Akt于1991年被发现，因为它与蛋白激酶A和蛋白激酶C的高度同源性，所以被称为 蛋白激酶8，属于六6(：激酶家族。它有三种亚型 :41^1(?仙€〇^肚2(?仙0)^1^3(?仙丫）(^1^1 (ΡΚΒα)分布广泛，Akt2(PKBi3)存在于胰岛素敏感的器官中，Akt3(PKBy)在大脑和睾丸中表 达。它们由三种独立的基因编码，这三种基因有超过85%的序列相似性，因此这三种蛋白质 产物有相似的结构，在氨基酸水平有超过80%的同源性。每一种亚型都含有三个功能域:N 末端的PH±或、激酶催化域、C末端调节域。对不同亚型的生物学研究表明，Aktl主要控制细胞 的生长和增殖，Akt2除控制细胞的生存增殖分化外，还参与胰岛素的糖代谢，Akt3与维持大 脑的正常体积有关。在肿瘤细胞中，由于基因及表观遗传方面的改变，Akt的表达大大增加， 导致细胞抗凋亡，最终发展成肿瘤。因此，抑制Akt是治疗肿瘤的一个新策略。目前，进入临 床研究的有哌立福新、碰2206^205363、600)068、651(2110183、651(2141795等化合物。
[0004] 因此，发现新的具有Akt抑制活性的化合物，对于抗肿瘤药物的研发具有十分重要 的意义。

【发明内容】

[0005] 针对上述现有技术的不足，本发明的目的是提供一类具有Akt抑制活性的取代嘧 啶类衍生物及其制备方法与应用，该化合物具有结构新颖，对Akt的抑制活性效果突出，安 全性高，制备成本低廉等优势，可以作为治疗肿瘤的很有前景的药物。
[0006] 为实现上述目的，本发明采用下述技术方案：
[0007] -种式（I)或式（II)所示的化合物或其药学上可接受的盐，
[0009] 其中，Ri为取代苯基、苯甲酰氨基或对氯苯甲酰氨基;R2为氯、甲氨基或乙氨基;R3 为取代苯基、苄基或吲哚-3-亚甲基;R4为氨基、羟甲基或N-异丙基-氨甲基;R5为氢、醛基或 醛基〇-甲基聘，R 6为氯或氨基。
[0010] 优选的，Ri为对氟苯基、对氯苯基、对溴苯基、2，4-二氯苯基、2，6-二氯苯基、苯甲 酰氨基或对氯苯甲酰氨基;R 2为氯、甲氨基或乙氨基;R3为苯基、对氟苯基、对氯苯基、对溴苯 基、2,4_二氯苯基、苄基或吲哚-3-亚甲基;R 4为氨基、羟甲基或N-异丙基-氨甲基;R5为氢、醛 基或醛基〇-甲基B，R6为氯或氨基。
[0011] 上述化合物的实例如下：
[0012] 卜(4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-卜基)-2-(4-氟苯基）乙酮(Lai);
[0013] 卜(4-(6-氯嘧啶-4-基）哌嗪-卜基)-2-(4-氯苯基）乙酮(La2);
[0014] 1-(4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4-溴苯基）乙酮(La3);
[0015] 卜(4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-卜基)-2-(2,4-二氯苯基）乙酮(La4);
[0016] 1-(4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氯苯基）乙酮(La5);
[0017] 2-(4-氟苯基)-卜(4-(6-(甲胺基)啼啶-4-基)哌嗪-卜基）乙酮(La6);
[0018] 2-(4-氯苯基)-1-(4-(6-(甲胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(La7);
[0019] 2-(4-溴苯基)-卜(4-(6-(甲胺基)啼啶-4-基)哌嗪-卜基）乙酮(La8);
[0020] 2-(2,4-二氯苯基)-1-(4-(6-(甲胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(La9);
[0021] 2-(2,6-二氯苯基)-1-(4-(6-(甲胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(LalO);
[0022] 2-(4-氟苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(Lall);
[0023] 2-(4-氯苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(Lal2);
[0024] 2-(4-溴苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(Lal3);
[0025] 2-(2,4-二氯苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(Lal4);
[0026] 2-(2,6-二氯苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(Lal5);
[0027] N-(2-(4_(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧乙基)苯甲酰胺(Lal6);
[0028] N-(2-(4-(6-(甲氨基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧乙基)苯甲酰胺(Lal7);
[0029] N-(2-(4-(6-(乙氨基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧乙基)苯甲酰胺(Lal8);
[0030] n-(2-(4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧乙基)-4-氯苯甲酰胺(Lal9);
[0031] N-(2-(4-(6-(甲氨基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧乙基)-4-氯苯甲酰胺(La20);
[0032] N-(2-(4-(6-(乙氨基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧乙基)-4-氯苯甲酰胺(La21);
[0033] 4-氯-6-(4-(2-(4-氟苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶(Ljl);
[0034] 4-氯-6-(4-(2-(4-氯苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶(Lj2);
[0035] 4-氯-6-(4-(2-(4-溴苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶(Lj3);
[0036] 4-氯-6-(4-(2-(2,4-二氯苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶(Lj4);
[0037] 1-(4-(6-氯嘧啶-4-基)-3-羟基-2-苯基丙-1-酮(Lj5);
[0038] 4-(4-(L-色氨酸）哌嗪-1-基)-6-氯嘧啶（Lj6);
[0039] 4-(4-(L-苯丙氨酸)哌嗪-1-基)-6-氯嘧啶(Lj7);
[0040] 4-氨基-6-(4-(2-(4-氟苯基）-3-(异丙氨基）丙酰基）哌嗪-1-基）嘧啶-5-甲醛 (Lj8)；
[0041] 4-氨基-6-(4-(2-(4-氯苯基）-3-(异丙氨基）丙酰基）哌嗪-1-基）嘧啶-5-甲醛 (Lj9)；
[0042] 4-氨基-6-(4-(2-(4-溴苯基）-3-(异丙氨基）丙酰基）哌嗪-1-基）嘧啶-5-甲醛 (LjlO)；
[0043] 4-氨基-6-(4-(2-(2,4-二氯苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基）哌嗪-1-基）嘧啶-5-甲 醛(Ljll);
[0044] 4-氨基-6-(4-(2-(4-氯苯基）乙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-甲醛(Ljl2);
[0045] 4-(4-(L-色氨酸)哌嗪-1-基)-6-氨基嘧啶-5-甲醛(Ljl3);
[0046] 4-(4-(L-苯丙氨酸)哌嗪-1-基)-6-氨基嘧啶-5-甲醛(Ljl4);
[0047] 4-氨基-6-(4-(2-(4-氟苯基)-3-(异丙氨基）丙酰基)哌嗪-1-基）嘧啶-5-甲醛0-甲基肟(Ljl5);
[0048] 4-氨基-6-(4-(2-(4-氯苯基)-3-(异丙氨基）丙酰基)哌嗪-1-基）嘧啶-5-甲醛0-甲基肟(Ljl6);
[0049] 4-氨基-6-(4-(2-(4-溴苯基)-3-(异丙氨基）丙酰基)哌嗪-1-基）嘧啶-5-甲醛0-甲基肟(Ljl7);
[0050] 4-氨基-6-(4-(2-(2,4-二氯苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基）哌嗪-1-基）嘧啶-5-甲 醛0-甲基肟(Ljl8);
[0051 ] 4-氨基-6-(4-(2-(4-氯苯基）乙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-甲醛0-甲基肟(Ljl9);
[0052] 4-(4-(L-色氨酸)哌嗪-1-基)-6-氨基嘧啶-5-甲醛0-甲基肟(Lj20);
[0053] 4-(4-(L-苯丙氨酸)哌嗪-1-基)-6-氨基嘧啶-5-甲醛0-甲基肟(Lj21)。
[0054] 上述优选的42个化合物名称后的括号中为其相应的代号，为叙述方便和表达简 洁，上述括号中的代号在本说明书以下内容中将被直接应用。
[0055] 本发明另外提供了制备式（I)和式（II)化合物的方法，它们可以如下面详述地得 到。
[0056]式（I)所示的化合物的制备方法包括:使式C所示的化合物与式D1、D2或D3所示的 化合物反应，得到式(I)所示的化合物；
[0058] 其中，、R2具有如前所述的定义;X为F、C1、Br、2，4-C1或2，6-C1。
[0059] 上述式C所示的化合物的制备方法为：以4,6-二氯嘧啶(A1)为起始原料，与甲胺或 乙胺反应，得到中间体化合物A2、A3，中间体A再与1-叔丁氧羰基哌嗪反应，得到中间体化合 物B，将中间体化合B溶于HC1二氧六环溶液，室温反应，即得式C所示的化合物。
[0060] 式（II)所示的化合物的制备方法包括:使式G1、G2或C1所示的化合物与式HI、H2、 H3、H4或H5所示的化合物反应，得到式(II)所示的化合物；
[0062] 其中，R3、R4、R5、R 6具有如前所述的定义;X为F、C1、Br或2，4-C1。
[0063] 式(I)和式(II)化合物的具体合成路线如下：
[
[0065]试剂及条件：（la)甲胺溶液，异丙醇，室温；（lb)乙胺溶液，异丙醇，室温；（2a)l_叔 丁氧羰基哌嗪，三乙胺，甲醇，50°C ; (2b) 1-叔丁氧羰基哌嗪，三乙胺，DMF，100°C ; (2c) 1-叔 丁氧羰基哌嗪，1，8_二氮杂二环^^一碳-7-烯(DBU)，碳酸钾，DMF，100°C ; (3)HC1二氧六环溶 液，室温；（4)甘氨酸盐酸盐，三乙胺，0-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯（HBTU)，DMF，室 温；（5)氢氧化锂，水：甲醇：四氢呋喃（1 :1:3)，室温；（6)HBTU，N，N-二异丙基乙胺(DIPEA); (7)氨气，甲苯，室温；（8)甲氧胺盐酸盐，冰醋酸，水，室温；（9)1-叔丁氧羰基哌嗪，三乙胺， 甲醇，70°C ; (10)HC1二氧六环溶液，室温；（11)二碳酸二叔丁酯，水，室温；（12)HBTU，DIPEA， DMF，室温；（13) HC1二氧六环溶液，室温。
[0066]具体合成步骤如下：
[0067] (1)将4,6_二氯嘧啶(A1)溶解在异丙醇中，慢慢滴入甲胺溶液，室温反应2h，减压 蒸除溶剂，析出固体，加入适量水搅拌过滤，滤饼用水洗，真空干燥，得中间体A2，其中起始 原料和甲胺溶液的摩尔比为1;8.25;
[0068] (2)将4，6-二氯嘧啶(A1)溶解在异丙醇中，慢慢滴入乙胺溶液，室温反应2h，减压 蒸除溶剂，析出固体，加入适量水搅拌过滤，滤饼用水洗，真空干燥，得中间体A3，其中起始 原料和乙胺溶液的摩尔比为1; 8.25;
[0069] (3)将中间体A1和1-叔丁氧羰基哌嗪溶于甲醇中，加入三乙胺，升温至50°C回流， 反应4h。减压蒸除溶剂，加入适量水搅拌过滤，滤饼用水润洗，真空干燥得中间体B1，其中中 间体Al、1-叔丁氧羰基哌嗪、三乙胺的摩尔比为1:1.26:1.26。
[0070] (4)将中间体A2和1-叔丁氧羰基哌嗪溶于DMF中，加入三乙胺，加热到100°C，反应 过夜，再加入三乙胺，继续反应48h，将反应液倒入30倍量水中，析出固体，过滤，滤饼用水多 次润洗，真空干燥得中间体B2，其中中间体A2、1 -叔丁氧羰基哌嗪、三乙胺的摩尔比为1: 1.1：2.2〇
[0071 ] (5)将中间体A3溶于DMF中，加入1-叔丁氧羰基哌嗪，碳酸钾，DBU，加热到100°C，反 应72h，将反应液倒入30倍量水中，析出固体，过滤，滤饼用水反复润洗，真空干燥得中间体 B3，其中中间体A3、1 -叔丁氧羰基哌嗪、碳酸钾、DBU的摩尔比为1:1.2:1:1。
[0072] (6)中间体C的制备:将中间体B溶于HC1二氧六环溶液，室温反应24h，析出固体，过 滤，滤饼用乙酸乙酯润洗，真空干燥得中间体C。所述中间体C中，R2为氯、甲氨基、乙氨基。 [0073] (7)中间体D3的制备:将对氯苯甲酸溶于DMF中，加入0-苯并三氮唑-四甲基脲六氟 磷酸酯(HBTU)，搅拌，加入甘氨酸乙酯盐酸盐，滴加三乙胺，室温反应过夜，将反应液倒入30 倍量水中，析出固体，过滤，一次用10%稀盐酸溶液，饱和碳酸氢钠溶液，清水洗涤滤饼，真 空干燥得固体，将所得固体溶于THF: MeOH: H20(3:1:1)溶液中，加入氢氧化锂，室温反应过 夜。减压蒸除溶剂，加入适量乙酸乙酯和水萃取，分出水相，水相用10%盐酸溶液酸化至pH =1，再用乙酸乙酯萃取，有机层用饱和食盐水洗，无水硫酸镁干燥，过滤，减压蒸除溶剂得 中间体D3，其中对氯苯甲酸、甘氨酸盐酸盐、三乙胺、HBTU、氢氧化锂的摩尔比为1:1.1:3 : 1.2:2。
[0074] (8)将中间体D溶于DMF中，加入0-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)，搅拌， 加入中间体C，N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)，室温反应过夜，将反应液倒入30倍量水中，析出 固体，过滤，滤饼用水润洗，真空干燥，再用乙酸乙酯重结晶，得目标产物La。上述反应中，中 间体D、中间体C、HBTU、DIPEA的摩尔比为1:1:1.13:5。所述目标化合物La中R!为对氟苯基、 对氯苯基、对溴苯基、2，4-二氯苯基、2，6-二氯苯基、苯甲酰氨基、对氯苯甲酰氨基，R2为氯、 甲氨基、乙氨基。
[0075] (9)将4,6_二氯嘧啶-5-甲醛溶于甲苯中，通入氨气30min，室温搅拌过夜，过滤得 固体，柱层析纯化(洗脱剂为乙酸乙酯:石油醚=1:3 )，得中间体E1。
[0076] (10)将中间体E1溶于冰醋酸和水的混合溶液中，加入甲氧胺盐酸盐，25 °C反应过 夜。TLC监测反应完成后，向反应液中加入适量水，用同体积乙酸乙酯萃取，有机层依次水洗 3次，10 %氢氧化钠溶液洗，饱和食盐水洗，无水硫酸镁干燥，过滤，减压蒸除溶剂，柱层析纯 化(洗脱剂石油醚：乙酸乙酯= 3:1)，得中间体E2,其中中间体E1、甲氧胺盐酸盐的摩尔比为 1:1.8〇
[0077] (11)将中间体E1、E2分别溶于甲醇中，加入1-叔丁氧羰基哌嗪，N，N_二异丙基乙胺 (DIPEA)，加热至60°C~70°C，回流反应3~4h，TLC监测反应结束，降至室温，减压蒸除溶剂， 加水搅拌过滤，滤饼用水润洗，真空干燥，得中间体FI、F2。其中，中间体E、1-叔丁氧羰基哌 嗪、N，N-二异丙基乙胺的摩尔比为1:1.1:2。
[0078] (12)中间体G的制备：将中间体F溶于HC1二氧六环溶液，室温反应24h，析出固体， 过滤，滤饼用乙酸乙酯润洗，真空干燥得中间体G。
[0079] (13)中间体Η的制备:分别将对氯苯甘氨酸、L-苯丙氨酸、L-色氨酸分别溶于水中， 加入碳酸钾，二碳酸二叔丁酯，室温反应过夜，TLC监测反应结束，反应液用10 %盐酸溶液酸 化至ΡΗ=1，再用乙酸乙酯萃取，有机层用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸除 溶剂得中间体11、12、13。上述反应中，（对氯苯甘氨酸或1^-苯丙氨酸或1^-色氨酸）、碳酸钾、 二碳酸二叔丁酯的摩尔比为1:1:1.1。
[0080] (14)将中间体Η溶于DMF中，加入0-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)，加入 中间体G或C1，N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)，室温反应过夜，倒入30倍量水中，析出固体，过 滤，用水润洗滤饼，真空干燥，柱层析纯化(洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯= 3:1~乙酸乙酯)得 白色固体，将白色固体溶于HC1二氧六环溶液中，反应24h，TLC监测反应结束，减压蒸除溶 剂，加乙酸乙酯润洗，过滤，真空干燥得目标化合物Lj。上述反应中，中间体G或C1、中间体H、 HBTU、DIPEA的摩尔比为1:1:1.13:5。所述Lj中，R3为取代苯基，苄基，吲哚-3-亚甲基;R4为氨 基，羟甲基，N-异丙基-氨甲基;R 5为氢，醛基，醛基0-甲基肟，R6为氯、氨基。
[0081] 本发明还提供上述化合物或其药学上可接受的盐在制备预防和/或治疗肿瘤的药 物中的用途。
[0082] 本发明还提供一种药物组合物，该药物组合物包含上述的化合物或其药学上可接 受的盐。
[0083] 优选的，所述药物组合物还包含一种或多种药学上可接受的载体、赋形剂和/或稀 释剂。
[0084]优选的，所述药物组合物包含一种或多种药学上或食品学上可接受的辅料。所用 的辅料可为固态或液态。固态形式的制剂包括粉剂、片剂、分散颗粒、胶囊、药丸及栓剂。粉 剂及片剂可包含约5%至约95%的活性成分。适当的固体辅料可以是碳酸镁、硬脂酸镁、滑 石粉、糖或者乳糖。片剂、粉剂、药丸及胶囊为适于口服用的固态剂型。液态形式的制剂包括 溶液、悬浮液及乳液，其实施例为非经肠注射用水溶液或水-丙二醇溶液，或添加甜味剂及 造影剂的口服溶液。此外，还可制成注射用小水针、注射用冻干粉针、大输液或小输液。
[0085] 优选的，所述药物组合物为固体口服制剂、液体口服制剂或注射剂。
[0086] 进一步优选的，所述药物组合物为片剂、分散片、肠溶片、咀嚼片、口崩片、胶囊、糖 衣剂、颗粒剂、干粉剂、口服溶液剂、注射用小水针、注射用冻干粉针、大输液或小输液。
[0087] 本发明的化合物是以发明人前期研究发现的具有Aktl激酶抑制活性的化合物作 为先导化合物，对其进行结构改造，通过去除吡咯环，在嘧啶4上引入取代氨基、氯，同时将 苯环换用不同的卤素取代，得到系列化合物，将得到的系列化合物进行分子对接，对接结果 显示同样能与Akt蛋白Glu228、Ala230形成氢键作用。但是活性结果显示，La系列化合物对 Aktl激酶的抑制活性较差。通过查阅文献，表明Aktl蛋白中存在Acid hole结构，为了增强 化合物与蛋白的作用，我们在羰基α位引入极性取代基，使其能与Glu234形成氢键作用。同 时，通过对蛋白结构分析，我们发现，在靠近嘧啶5位的地方存在一个有Thr211和Thr291残 基亲水性口袋，为此我们在嘧啶5为引入醛基、醛基甲氧肟取代基，探讨其对化合物活性的 影响。通过分子对接表明，本发明的化合物Lj9、化合物Ljl7能与Glu234、Glu228、Ala230、 Thr291形成氢键作用，活性结果显示，当嘧啶5为引入醛基、醛基0-甲基肟取代时，对Aktl激 酶的抑制活性明显提高。
[0088]本发明的有益效果：
[0089] (1)本发明的化合物结构新颖，对Akt的抑制活性效果突出，安全性高，为抗肿瘤药 物的开发提供了新的化合物来源。
[0090] (2)本发明化合物的合成中用到的中间体4,6_二氯嘧啶，1-叔丁氧羰基哌嗪，4,6_ 二氯嘧啶-5-甲醛，0-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)，甲氧胺盐酸盐及其他试剂 均可从试剂公司购得，价格便宜。化合物合成中，对反应仪器要求较低，操作简单，反应条件 温和，除个别反应需要用油浴锅加热外，大部分反应都在室温下进行，后处理方便，如由4， 6-二氯嘧啶(A1)生成中间体A2、A3的反应中，我们加入过量的胺，确保原料完全反应，由于 反应产物在水中溶解性较小，而未反应的胺易溶于水，所以后处理时，只需减压蒸除反应溶 剂，然后加水搅拌过滤，滤饼用水润洗，就可以得到比较纯的中间体A2、A3,产率也较高，同 样的，由中间体A生成中间体B和中间体E生成中间体F的反应中，1-叔丁氧羰基哌嗪易溶于 水，而产物水溶性较差，同样可以用此方法处理。
【具体实施方式】
[0091] 结合实施例对本发明作进一步的说明，应该说明的是，下述说明仅是为了解释本 发明，并不对其内容进行限定。
[0092] 实施例中未详细描述的方法、试剂等，均为所属领域常规方法、试剂。
[0093] 实施例1:目标化合物Lai~La21的制备
[0094] (1 )4_取代-6-氯嘧啶的（中间体A)的制备
[0095] 将4,6_二氯嘧啶(20.14mmol，3.0g)(Al)溶解在20ml异丙醇中，慢慢滴入10ml氨水 或甲胺或乙胺，室温反应2h，减压蒸除溶剂，析出固体，加入20ml水搅拌过滤，滤饼用水洗， 真空干燥，得中间体A2或A3.
[0096] 4-甲氨基-6-氯嘧啶（A2)，白色晶体，产率eS^c/H-NMRHOOMHz^MSO-deMbpm): 8.28(s,lH),7.68(s,lH),6.50(s,lH),2.82(s,3H).MS(ESI)m/z:144[M+H]+.
[0097] 4-乙氨基-6-氯嘧啶(A3)，白色晶体，产率92% c/H-NMRHOOMHz ,DMS0-d6)S(ppm): 8.25(s，lH)，7.71(s，lH)，6.47(s，lH)，3.14(s，2H)，1.13(t，J=7.2Hz，3H).MS(ESI)m/z: 158[M+H]+.
[0098] (2)4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯（中间体Bl)的制备
[0099] 将4，6_二氯嘧啶(A1) (12 · 75mmol，1 · 9g)和 1-叔丁氧羰基哌嗪（16 · 13mmol，3 · 0g) 溶于20ml甲醇中，加入2.3ml三乙胺（16.13mmol)，升温至50°C回流，反应4h。减压蒸除溶剂， 加入20ml水搅拌过滤，滤饼用水润洗，真空干燥得白色固体。产率83 %。h-NMlU 400MHz， DMS0-d6)5(ppm):8.35(s,lH),6.96(s,lH),3.65(s,4H),3.41(t,J=5.6Hz,4H),1.42(s, 9H).
[0100] (3)4-(6-(甲氨基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯（中间体B2)的制备
[0101] 将 4-甲氨基-6-氯嘧啶以2)(8.29111111〇1，1.198)和1-叔丁氧羰基哌嗪（9.12111111〇1， 1.70g)溶于lOmlDMF中，加入1.27ml三乙胺（9.12mmol)，加热到100°C，反应过夜，再加入 1.27ml三乙胺(9.12mmol)，继续反应48h，将反应液倒入30倍量水中，析出褐色固体，过滤， 滤饼用水多次润洗，真空干燥得褐色固体。产率44 %。匪R(400MHz，DMS0-d6) δ (卯m): 7.98(s,lH),6.68(s,lH),5.54(s,lH),3.46-3.45(m,4H),3.38-3.36(m,4H),2.72(d,J= 4.8Hz,3H),1.41(s,9H).MS(ESI)m/z:294.5[M+H]+.
[0102] (4)4-(6-(乙氨基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯（中间体B3)的制备
[0103] 将4-乙氨基-6-氯嘧啶以3)(3.81臟〇1，0.68)溶于7111101^中，加入1-叔丁氧羰基哌 嗪（4.57謹〇1，0.858)，碳酸钾（3.81111111〇1，0.538)，081](3.81111111〇1，0.571111)，加热到100°(：，反 应72h，将反应液倒入30倍量水中，析出褐色固体，过滤，滤饼用水反复润洗，真空干燥得褐 色固体。产率62%。1!1-匪1?(4001!^，015〇-(16)3( ??111):7.99(8，1!〇,6.69(^ = 5.2抱，1!1)， 5.56(s，lH),3.45-3.43(m，4H),3.37-3.36(m，4H)，3.20(m，2H)，1.42(s，9H)，1.09(t，J= 7.2Hz,3H).
[0104] (5) 6-(哌嗪-1 -基)嘧啶-4-取代盐酸盐（中间体C)的制备
[0105] 将4-(6-取代-嘧啶-4-基）哌嗪-1-甲酸叔丁酯（中间体幻（12.4111111〇1，3.478)溶于 30ml 4mo 1/L HC1二氧六环溶液，室温反应24h，析出固体，过滤，滤饼用乙酸乙酯润洗，真空 干燥得中间体C。
[0106] 6_(哌嗪-1-基)嘧啶-4-氯盐酸盐(C1).白色固体，产率96%。
[0107] N-甲基-6-(哌嗪-1-基)嘧啶-4-胺盐酸盐(C2).褐色固体，产率99%。
[0108] N-乙基-6-(哌嗪-1-基)嘧啶-4-胺盐酸盐(C3)，褐色固体，97%。
[0109] (6)(4-氯苯甲酰基)甘氨酸（中间体D3)的合成
[0110] 将对氯苯甲酸（3.19mmol，500mg)溶于5mlDMF中，加入0-苯并三氮唑-四甲基脲六 氟磷酸酯(HBTU) (3.83mmol，1.45g)，搅拌2min，加入甘氨酸乙酯盐酸盐（3.51mmol，491mg)， 滴加1.33ml三乙胺(9.58mmo 1)，室温反应过夜，将反应液倒入30倍量水中，析出固体，过滤， 分别用10%稀盐酸溶液，饱和碳酸氢钠溶液，清水洗涤滤饼，真空干燥得米黄色固体，产率 70% 〇
[0111] 将(4-氯苯甲酰基)甘氨酸乙酯（2.21mmol，0.535g)溶于 15ml THF:Me0H:H20(3:l: 1)溶液中，加入氢氧化锂(4.43mmo 1，0.106g)，室温反应过夜。减压蒸除溶剂，分别加入20ml 乙酸乙酯和水萃取，分出水相，水相用10 %盐酸溶液酸化至pH = 1，再用20ml乙酸乙酯萃取， 有机层用饱和食盐水洗，无水硫酸镁干燥，过滤，减压蒸除溶剂得白色固体，产率85%。1!1-NMR(400MHz，DMS0-d6)S(pp m):12.64(br，lH)，8.93(t，J = 6Hz，lH)，7.88(d，J = 8.4Hz，2H)， 7.58(d，J = 8.4Hz，2H)，3.91(d，J = 6Hz，2H).
[0112] (7)目标化合物La的制备
[0113] 将取代苯乙酸或(取代苯甲酰基)甘氨酸（中间体D) (0.4mmo 1)溶于2mlDMF中，加入 〇-苯并三氮唑_四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU) (0.45mmol，171mg)，搅拌，加入6-(哌嗪-1-基） 嘧啶-4-取代盐酸盐（中间体〇(0.4臟〇1，10011^)，11二异丙基乙胺(2臟〇1，0.351111)，室温 反应过夜，将反应液倒入30倍量水中，析出固体，过滤，滤饼用水润洗，真空干燥，再用乙酸 乙酯重结晶，得目标产物La.
[0114] 所述目标化合物La具体如下：
[0115] 1-(4-(6-氯嘧啶-4-基）哌嗪-1-基）-2-(4-氟苯基）乙酮（Lai)，白色固体，产率 56%，mp:15hl54°C<31H-Mffi(400MHz，DMS0-d6)S(pp m):8.36(s，lH)，7.27(d，J = 6Hz，lH)， 7.26(d，J = 6Hz，lH)，7.13(t，J=12.8Hz，2H)，6.98(s，lH)，3.77(s，2H)，3.64-3.56(m，8H) ? 13C-NM R(100MHz，DMS0)S(ppm) :169.56,162.56，161.41((1, J = 241Hz) ,159.58,158.38, 132 ·39(d，J = 3Hz)，131 ·49(d，J = 8Hz，2C)，115·41 (d，J = 21Hz，2C) ,102.37,44.98,44.01， 43.79,41.10,38.86.
[0116] 1-(4-(6-氯嘧啶-4-基）哌嗪-1-基）-2-(4-氯苯基）乙酮（La2)，白色固体，产率 53%，mp:167-168°C<31H-MMR(400MHz，DMS0-d6)S(pp m):8.36(s，lH)，7.37(d，J = 8.4Hz， 2H),7.26(d ,J = 8.4Hz,2H) ,6.98(s, 1H), 3.78(s , 2H), 3.64-3.56(m,8H). 13C-NMR( 100MHz , DMS0)5(ppm):169.35,162.56,159.58,158.39,135.31,131.59(20,131.52,128.62(2C), 102.38.44.97.44.00. 43.77.41.11.39.02
[0117] 1-(4-(6-氯嘧啶-4-基）哌嗪-1-基）-2-(4-溴苯基）乙酮（La3)，白色固体，产率 47%，mp:183-184°C<31H-MMR(400MHz，DMS0-d6)S(pp m):8.36(s，lH)，7.50(d，J = 8.4Hz， 2H),7.20(d ,J = 8.4Hz,2H) ,6.98(s, 1H), 3.76(s , 2H), 3.64-3.56(m,8H). 13C-NMR( 100MHz , DMS0)5(ppm):169.28,162.55,159.58,158.39,135.74,131.99(2C),131.54(2C),120.00, 102.38.44.97.44.00. 43.77.41.11.39.09.
[0118] 1-(4-(6-氯嘧啶-4-基）哌嗪-1-基)-2-(2,4-二氯苯基）乙酮(La4)，白色固体，产 率69%，1^:166-167。(：。 1!1-匪1?(4001〇^，0150-(16)3(??111):8.37(8，1!〇,7.59((1，了=1.6!^， lH),7.38(dd ,Ji = 8.4Hz ,J2 = 2Hz,1H) ,7.34(d ,J = 8.4Hz,lH) ,7.00(s,lH) ,3.88(s,2H), 3.75-3.57(m，8H).13C-NMR(100MHz，DMS0)S(pp m):168.08，162.58，159.60，158.40，135.23， 134.10,133.75,132.45,128.81,127.53,102.39,44.83,44.02,43.86,41.21,37.30.
[0119] 1-(4-(6-氯嘧啶-4-基）哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氯苯基）乙酮(La5)，白色固体，产 率76%，mp :198-2001:,11-匪R(400MHz，DMS0-d6)S(ppm) :8.38(s，lH)，7.46((1, J = 8Hz， 2H),7.32(dd ,Ji = 7.6Hz ,J2 = 0.8Hz,1H) ,7.02(s,lH) ,4.05(s, 2H), 3.77(s ,4H), 3.67(s, 2H) ,3.59-3.56(m，8H).13C-NMR(100MHz，DMS0)S(ppm) :167.01,162.61,159.61,158.41， 135.89(2C)，133.46,129.66,128.45(2C)，102.43,44.79,44.11,43.91,41.28,36.01.
[0120] 2-(4-氟苯基)-1-(4-(6-(甲胺基）嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(La6)，褐色固体， 产率24%，m ρ: 172-173Γ</Η-匪R(400MHz，DMS0-d6)S(ppm) :7.99(s，lH)，7.27((1, J = 5.6Hz,lH) ,7.26(d,J = 5.6Hz,lH) ,7.12(t,J = 9.2Hz,2H) ,6.68(q,J = 4Hz,lH) ,5.54(s, lH)，3.75(s，2H)，3.57-3.54(m，4H)，3.45(s，4H)，2.73(d，J=4.8Hz，3H). 13C-NMR(100MHz, DMS0)5(ppm) :169.45,164.26,162.38,161.39(d,J = 241Hz) ,157.60,132.48(d,J = 3Hz), 131.46(d ,J = 8Hz,2C),115.42(d ,J = 21Hz,2C),45.23,44.00,43.73,41.26,38.91,28.04.
[0121] 2-(4-氯苯基)-1-(4-(6-(甲胺基）嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(La7)，褐色固体， 产率54%，m ρ: 174-175Γ</Η-匪R(400MHz，DMS0-d6)S(ppm) :8.00(s，lH)，7.34((1, J = 8.4Hz,2H) ,7.26(d,J = 8.4Hz,2H),6.69(q,J = 4Hz,lH) ,5.55(s,lH),3.77(s,2H) ,3.57- 3.53(m,4H),3.346(s,4H),2.73(d,J=4.8Hz,3H).13C-NMR(100MHz,DMS0)5(ppm):169.22, 164.29,162.39,157.61,135.40,131.55(20,131.49,128.62(20,45.23,44.00,43.73, 41.29.39.08.28.04.
[0122] 2-(4-溴苯基)-1-(4-(6-(甲胺基）嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(La8)，褐色固体， 产率55%，m ρ: 183-184Γ</Η-匪R(400MHz，DMS0-d6)S(ppm) :7.99(s，lH)，7.50((1, J = 8.4Hz,2H) ,7.21(d,J = 8.4Hz,2H),6.67(q,J = 4Hz,lH) ,5.54(s,lH),3.75(s,2H) ,3.56-3.53(m，4H)，3.45(s，4H)，2.72(d，J = 4.4Hz，3H).13C-NMR(100MHz，DMS0)S(ppm) :169.15， 164.29,162.39,157.61,135.82,131.95(20,131.54(20,119.97,45.23,44.00,43.73, 41.29.39.15.28.05.
[0123] 2-(2,4-二氯苯基)-1-(4-(6-(甲胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(La9)，类白色 固体，产率63 %，mp: 199-200 Γ。匪R( 400MHz，DMS0-d6 )S(ppm):8.00(s，lH)，7.59(d，J = 2Hz,lH) ,7.37(dd ,Ji = 8.4Hz ,J2 = 2Hz,1H) ,7.35(d ,J = 8.4Hz,lH),6.69(q ,J = 4Hz,lH), 5.57(s,lH),3.86(s,2H),3.66-3.48(m,8H) ,2.73(d,J = 4.8Hz,3H) ,13C-NMR(100MHz,DMS 0)5(ppm):167.96,164.30,162.41,157.63,135.21,134.17,133.74,132.42,128.80, 127.52.45.08.44.01.43.81.41.40.37.32.28.05.
[0124] 2-(2,6-二氯苯基)-1-(4-(6-(甲胺基）嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(LalO)，类白 色固体，产率70%，mp:231-233°C< 31H-NMR(400MHz，DMS0-d6)S(ppm):8.02(s，lH)，7.46(d，J = 8Hz,2H),7.32(dd ,Ji = 7.6Hz ,J2 = 0.8Hz,1H) ,6.70(d ,J = 4.8Hz , lH), 5.58(s , lH) ,4.04 (s,2H),3.73-3.72(m,2H),3.62(m,2H),3.55-3.54(m,2H),3.50-3.48(m,2H),2.74(d,J= 4.8Hz , 3H). 13C-NMR(100MHz,DMS0)δ(ppm):166.86,164.32,162.42,157.64,135.89(2C), 133.53,129.64,128.45(20,45.05,44.12,43.89,41.49,40.20,36.02,28.05.
[0125] 2-(4-氟苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(Lall)，褐色固体， 产率41%，mp:162-164cC<31H-NMR(400MHz，DMS0-d6)S(pp m):7.99(s，lH)，7.27(s，2H)，7.14 (t，J = 8.4Hz，2H)，6.71(s，lH)，5.56(s，lH)，3.75(s，2H)，3.53(d，J=14Hz，4H)，3.43(s， 4H)，3.20(m，2H)，1.09(t，J=6.4Hz，3H). 13C-NMR(100MHz，DMS0)S(ppm):169.46,163.54， 162.36,161.40(d,J = 241Hz) ,157.71,132.48(d,J = 3Hz), 131.45(d,J = 8Hz,2C),115.41 (d,J = 21Hz, 2C),45.22,44.02,43.74,41.26,38.92,35.53,15.11.
[0126] 2-(4-氯苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(Lal2)，褐色固体， 产率 90 %，mp: 171-173 Γ,Η-匪 R(400MHz，DMS0-d6) δ (ppm) :7.99( s，lH)，7.36((1, J = 8.4Hz，2H)，7.26(d，J = 8.4Hz，2H)，6.70(t，J = 5.6Hz，lH)，5.56(s，lH)，3.76(s，2H)，3.57-3.52(m，4H)，3.45-3.43(m，4H)，3.20(m，2H)，1.09(t，J = 7.2Hz，3H).13C-NMR(100MHz，DMS0) 5(ppm):169.21,163.54,162.35,157.71,135.39,131.55(20,131.49,128.62(2C),45.22, 44.01.43.74.41.28.39.08.35.53.15.11.
[0127] 2-(4-溴苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(Lal3)，褐色固体， 产率81 %，mp: 178-179 Γ,Η-匪 R(400MHz，DMS0-d6) δ (ppm) :7.99( s，lH)，7.50((1, J = 8.4Hz，2H)，7.20(d，J = 8.4Hz，2H)，6.70(t，J = 5.2Hz，lH)，5.56(s，lH)，3.75(s，2H)，3.57-3.52(m，4H)，3.45-3.43(m，4H)，3.20(m，2H)，1.09(t，J = 7.2Hz，3H).13C-NMR(100MHz，DMS0) 5(ppm):169.14,163.54,162.35,157.71,135.83,131.95(20,131.54(2C),119.97,45.22, 44.01.43.74.41.28.39.15.35.53.15.11.
[0128] 2-(2，4-二氯苯基)-1-(4-(6-(乙胺基）嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(Lal4)，褐色 固体，产率 96 %，mp: 224-226 Γ。匪R( 400MHz，DMS0-d6 )S(ppm):8.01(s，lH)，7.58(d，J = 2Hz,lH) ,7.37(dd ,Ji = 8Hz j2 = 2Hz,lH),7.34(d ,J = 8.4Hz,lH) ,6.72(t ,J = 5.6Hz , 1H), 5.59(s,lH),3.86(s,2H),3.64-3.62(m,2H),3.55(m,4H),3.47-3.46(m,2H),3.19(m,2H), 1.09(t，J = 6.4Hz，3H) .13C-匪R(100MHz，DMS0)S(ppm) :167.96,163.56,162.35,157.73, 135.21,134.18,133.75,132.42,128.80,127.53,45.07,44.02,43.81,41.40,37.32, 35.53,15.12.
[0129] 2-(2,6-二氯苯基)-1-(4-(6-(乙胺基）嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(Lal5)，褐色 固体，产率61 %，mp: 183-185 Γ。h-NMlK 400MHz，DMS0-d6 )S(ppm):8.02(s，lH)，7.46(d，J = 8Hz,2H),7.32(dd ,Ji = 7.6Hz j2=1.2Hz,lH),6.72(t ,J = 5.6Hz,lH),5.60(s,lH),4.04(s, 2H),3.73(m,2H),3.60(m,2H),3.56(m,2H),3.47(m,2H),3.22(m,2H),1.10(t,J=7.2Hz, 3H). 13C-NMR(100MHz,DMS0)5(ppm):166.85,163.57,162.37,157.74,135.89(2C),133.53, 129.63,128.44(20,45.05,44.13,43.89,41.48,36.02,35.55,15.13.
[0130] N-(2-(4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧乙基)苯甲酰胺(Lal6)，淡黄色固体， 产率58 %，mp: 200-202 Γ。匪R(400MHz，DMS0-d6) δ (ppm): 8 · 60 (t，J = 5 · 6Hz，1H)，8 · 38 (s,lH) ,7.88(d,J = 7.2Hz,2H) ,7.55(t,J = 7.2Hz,lH) ,7.48(t,J = 7.6Hz,2H) ,7.01 (s, 1H) ,4.19(d，J = 5.6Hz，2H) ,3 ·75-3·57(ι?，8H) .13C-匪R(101MHz，DMS0)S(ppm): 167.85， 166.81,162.57,159.60,158.41,134.57,131.78,128.79(20,127.70(20,102.40,43.84 (2C),41.45(2C),41.25.
[0131] N-(2-(4-(6-(甲氨基）嘧啶-4-基）哌嗪-1-基)-2-氧乙基）苯甲酰胺(Lal7)，淡褐 色固体，产率60 %，mp : 204-206 °C。匪R(400MHz，DMS0-d6) δ (ppm): 8 · 59 (t，J = 5 · 6Hz， 1H)，8.02(s，lH)，7.88(d，J = 7.6Hz，2H)，7.55(t，J = 7.2Hz，lH)，7.48(t，J = 7.6Hz，2H)， 6.72(d，J = 4.8Hz，lH)，5.58(s，lH)，4.19(d，J = 5.2Hz，2H)，3.58-3.51(m，8H)，2.74(d，J = 4 · 8Hz，3H) .13C-匪R(101MHz，DMS0)δ(ppm):167.74,166.81,164.18,162.37,157.51, 134·60，131·78，128·80(2C)，127·71(2C)，43·99(2C)，43·77(2C)，41·45，28·07
[0132] N-(2-(4-(6_(乙氨基）嘧啶-4-基）哌嗪-1-基)-2-氧乙基）苯甲酰胺(Lal8)，褐色 固体，产率52 %，mp: 202-204Γ。匪R(400MHz，DMS0-d6) δ(ppm): 8 · 59(t，J = 5 · 6Hz，1H)， 8.02(s,lH) ,7.88(d,J = 7.2Hz,2H) ,7.55(t,J = 7.2Hz,lH) ,7.48(t,J = 7.6Hz,2H) ,6.75 (t ,J = 5.2Hz,lH) ,5.60(s,lH) ,4.18(d,J = 5.6Hz,2H) ,3.58-3.48(m,8H) ,3.21(m,2H), 1.10(t，J = 7.2Hz，3H) .13C-匪R(101MHz，DMS0)S(ppm) :167.73,166.80,163.42,162.31, 157.60,134.60,131.78,128.80(2C),127.71(2C),44.01(2C),43.78(2C),41.44,35.56, 15.11.
[0133] N-(2-(4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧乙基)-4-氯苯甲酰胺(Lal9)，黄色固 体，产率69%，mp: 177-17%~</Η-匪R(400MHz，DMS0-d6)S(ppm) :8.73(t，J = 5.6Hz，lH)， 8.38(s,lH) ,7.90(d,J = 8.6Hz,2H) ,7.56(d,J = 8.6Hz,2H) ,7.01(s,lH) ,4.19(d,J = 5·7Ηζ，2Η),3.75-3.57(m，8H) .13C-匪R(101MHz，DMS0)S(ppm):167.73,165.84,162.58, 159.62,158.42,136.62,133.33,129.68(20,128.91 (20,102.41,43.84(2C),41.47(2C), 41.25.
[0134] N-(2-(4-(6-(甲氨基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧乙基)-4-氯苯甲酰胺(La20)， 褐色固体，产率55 %，mp: 224-227 °C。h-NMR(400MHz，DMS0-d6) δ (ppm): 8 · 70 (t，J = 5 · 6Hz， 1H) ,8.02(s,lH),7.90(d ,J = 8.6Hz,2H) ,7.56(d ,J = 8.5Hz,2H) ,6.69(d ,J = 4.8Hz , 1H), 5.58(s，lH)，4.18(d，J = 5.7Hz，2H)，3.58-3.51(m，8H)，2.74(d，J = 4.6Hz，3H) .13C-匪R (101MHz,DMS0)5(ppm):167.60,165.82,164.24,162.38,157.56,136.61,133.34,129.67 (2C),128.90(2C),43.98(2C),43.76(2C),41.47,28.06.
[0135] N-(2-(4-(6-(乙氨基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧乙基)-4-氯苯甲酰胺(La21)， 淡黄色固体，产率45%，1^:208-210°(：。 1!1-匪1?(4001〇^，0150-(16)5(??111):8.71(^ = 5.6Hz,lH),8.01(s,lH),7.90(d ,J = 8.6Hz,2H),7.56(d ,J = 8.6Hz,2H),6.72(t ,J = 5.3Hz, lH),5.59(s,lH),4.18(d ,J = 5.7Hz,2H),3.57-3.48(m,8H),3.26-3.16(m,2H),1.10(t ,J = 7. lHz，3H) .13C-匪R(101MHz，DMS0)δ(ppm):167.58,165.80,163.57,162.35,157.73, 136.59,133.35,129.66(20,128.89(2C),43.99(20,43.75(2C),41.46,35.53,15.12.
[0136] 实施例2目标化合物Ljl~Lj21的制备
[0137] (1 )4-氨基-6-氯嘧啶-5-甲醛（中间体El)的制备
[0138] 将4,6-二氯啼啶-5-甲醛（16.951111]1〇1，38)溶于2〇1111甲苯中，通入氨气3〇111；[11，室温 搅拌过夜，过滤得黄色固体，柱层析纯化(洗脱剂为乙酸乙酯：石油醚=1:3)，得白色固体， 产率60%。 1!1-匪1?(40冊!^，0150-(16)3(??111):10.25(8，1!1)，8.72(1^，1!1)，8.56(1^，1!1)， 8.40(s,lH).
[0139] (2)4-氨基-6-氯嘧啶-5-甲醛0-甲基肟（中间体E2)的制备
[0140] 将4-氨基-6-氯嘧啶-5-甲醛$1)(7.62111111〇1，1.28)溶于251111冰醋酸和41111水的混 合溶液中，加入甲氧胺盐酸盐（13.7lmmo 1，1.14g)，25°C反应过夜。TLC监测反应完成后，向 反应液中加入20ml水，用50ml乙酸乙酯萃取，有机层依次水洗3次，10 %氢氧化钠溶液洗，饱 和食盐水洗，无水硫酸镁干燥，过滤，减压蒸除溶剂，柱层析纯化(洗脱剂石油醚：乙酸乙酯 =3:1)，得白色固体，产率99%。 1!1-匪1?(40冊!^，0150-(16)3(??111):8.49(8,2!1)，8.26(8， 1H)，7.80(s，1H)，3.98(s，3H).
[0141 ] (3)4-(6-氨基-5-取代嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯（中间体F)的制备
[0142] 将4-氨基-6-氯嘧啶-5-甲醛（F1)，4_氨基-6-氯嘧啶-5-甲醛0-甲基肟（F2) (9.65mmol)分别溶于20ml甲醇中，加入1-叔丁氧羰基哌嗪（10.61mmol，1.98g)，N，N-二异丙 基乙胺（19.29臟〇1，3.41111)，加热至60°(：~70°(：，回流反应3~411，11(：监测反应结束，降至室 温，减压蒸除溶剂，加20ml水搅拌过滤，滤饼用水润洗，真空干燥，得中间体F。
[0143] 4-(6-氨基-5-醛基嘧啶-4-基）哌嗪-1-甲酸叔丁酯，白色固体（中间体F1)，产率 77 % . ^-N MR(400MHz,DMS〇-d6)δ(ppm):9.76(s,1H),8.28(br,1H),8.08(s,1H),7.83(br, 1H)，3·61-3·58(m，4H)，3·44(m，4H)，1·42(s，9H)·
[0144] 4-(6-氨基-5-((甲氧亚胺基）甲基）嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯，白色固体（中 间体F2)，产率72% ,Η-匪R(400MHz，CDCl3)S(ppm):8.20(s，lH)，8.12(s，lH)，3.96(s，3H)， 3.55-3.53(m，4H),3.35-3.33(m，4H)，l.48(s，9H).
[0145] (4) 4-氨基-6-(哌嗪-1 -基)啼啶-5-取代盐酸盐（中间体G)的制备
[0146] 将4-(6-氨基-5-取代嘧啶-4-基）哌嗪-1-甲酸叔丁酯（中间体G) (4.45mmol)溶于 10ml4m ol/LHCl二氧六环溶液中，室温搅拌过夜，析出白色固体，过滤，滤饼用乙酸乙酯润 洗，真空干燥得白色固体。
[0147] 4-氨基-6-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-甲醛盐酸盐（中间体G1)，白色固体，产率89%。
[0148] 4-氨基-6-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-甲醛0-甲基肟盐酸盐（中间体G2)，白色固体，产率 89% 〇
[0149] (5)中间体H1、H2、H3的制备
[0150] 将对氯苯甘氨酸、L-苯丙氨酸、L-色氨酸(2.45mmol，500mg)分别溶于10ml水中，加 入碳酸钾（2 · 45mmol，338 · 37mg)，二碳酸二叔丁酯（2 · 69mmol，587 · 76mg)，室温反应过夜， TLC监测反应完全。反应液用10 %盐酸溶液酸化至pH = 1，用20ml乙酸乙酯萃取，有机层用饱 和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸除溶剂得中间体H1、H2、H3。
[0151] 2-((叔丁氧羰基)氨基)-2-(4-氯苯基）乙酸（中间体!11)，白色固体，产率78%。 1!1-NMR(400MHz，DMS0-d6)S(ppm): 12.88(br，lH)，7.64((1,J = 8Hz，lH)，7.41(s，4H)，5.12((1,J = 8.4Hz,lH)1.38(s,9H).
[0152] (叔丁氧羰基）-L-苯丙氨酸（中间体H2)，无色油状物，产率99 %。匪R(400MHz， DMS0-d6)5(ppm):12.58(br,lH),7.30-7.18(m,5H),7.11(d,J=8.4Hz,lH),4.12-4.06(m, 1H)，3·03-2·99(m，1H)，2·85-2·79(m，1H)，1·32(s，9H)。
[0153] (叔丁氧羰基）-L-色氨酸（中间体H3)，白色固体，产率80 %。匪R( 400MHz，DM S0-d6)5(ppm):12.53(s,lH),10.83(s,lH),7.51(d,J = 8Hz,lH),7.32(d,J = 8Hz,lH) ,7.14 (s,lH),7.06(t ,J = 7.6Hz,lH),6.98(t ,J = 7.6Hz,2H),4.17-4.12(m,lH),3.15-3.10(m, 1H),3.00-2.94(m,1H),1.33(s,9H)〇
[0154] (6)目标化合物Lj的制备
[0155] 将中间体H(0.357mmol)溶于3mlDMF中，加入0-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯 (H BTU)(0.403mmol，153mg)，4-氨基-6-(哌嗪-1-基）嘧啶-5-取代盐酸盐（中间体G)或6-(哌嗪-1-基）嘧啶-4-氯盐酸盐（中间体Cl)(0·357mmol)，N，N-二异丙基乙胺（l·78mmol， 0.3 lml )，室温反应过夜，倒入30倍量水中，析出固体，过滤，用水润洗滤饼，真空干燥，柱层 析纯化(洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯=3:1~乙酸乙酯)得产物，将产物溶于10ml4mo 1/LHC1 二氧六环溶液，反应24h，TLC监测反应结束，减压蒸除溶剂，加乙酸乙酯润洗，过滤，真空干 燥得目标化合物Lj。
[0156] 4-氯-6-(4-(2-(4-氟苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶盐酸盐，黄绿 色固体(Ljl)，产率 16%</H-NMR(400MHz，D2〇)S(ppm):8.16(s，lH)，7.26(dd，J = 8.4,5.2Hz， 2H)，7.07(t，J = 8.7Ηζ，2Η)，6·67(s，lH)，4.35(dd，J = 8.3，5·0Ηζ，1Η) ,3.88-3.71(m，2H)， 3.56-3.32(m,7H) ,3.22(dd,J=12.7,4.8Hz,lH) ,2.88(s,lH) ,1.22(dd,J = 6.4,4.2Hz, 6H) .13C-匪R(101MHz,D2〇)S(ppm) :170.54,162 · 46( J = 245Hz) ,161.58,155.03,154.68, 130.23(J = 3Hz),129.89(J = 9Hz,2C),116.62(J = 22Hz,2C),102.64,51.65,47.06,45.06, 44.01,43.37,43.25,41.24,18.00,17.89.MS(ESI)m/z:406[M+H]+.
[0157] 4-氯-6-(4-(2-(4-氯苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-i-基)嘧啶盐酸盐，黄绿 色固体〇^_2)，产率11%。1!1-匪1?(4001!^，〇2〇)3(??111):8.22(8，1!〇,7.36((1，了 = 8.4!^，2!〇， 7.22(dJ = 8.5Hz,2H),6.74(s,lH),4.33(dd,J = 8.4,4.9Hz,lH),3.92-3.74(m,2H),3.56-3.32(m,7H) ,3.22(dd,J=12.7,4.9Hz,lH) ,2.97-2.93(m,lH) ,1.21(dd,J = 6.5,4.3Hz, 6H).13C-NMR(101MHz，D2〇)S(ppm):170.37，161.65，154.88，154.35，134.19，132.88，129.80 (2C),129.45(2C),102.73,51.65,46.90,45.22,43.97,43.42,43.16,41.17,17.96, 17.85,MS(ESI)m/z:422[M+H]+.
[0158] 4-氯-6-(4-(2-(4-溴苯基)-3-(异丙氨基）丙酰基）哌嗪-1-基）嘧啶盐酸盐，白色 固体（1^_3)，产率39%。 1!1-匪1?(40冊泡，〇2〇)3(??111):8.22(8，1!1)，7.48((1，了 = 8.4!^，2!1)， 7.15(dJ = 8.5Hz,2H),6.75(s,lH),4.31(dd,J = 8.5,4.8Hz,lH),3.90-3.73(m,2H),3.56-3.32(m,7H),3.21(dd,J = 12.7,4.8Hz,lH),2.94(s,lH),1.21(dd,J = 6.5,4.2H z,6H).13C-MMR(101MHz，D2〇)S(ppm):170.22，161.48，154.28，154.16，133.40，132.76(2C)，129.72 (2C),122.29,102.72,51.65,46.81,45.28,43.92,43.54,43.25,41.12,17.97,17.83. MS (ESI)m/z:466[M+H]+.
[0159] 4-氯-6-(4-(2-(2,4-二氯苯基)- 3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-i-基)嘧啶盐酸盐， 棕色固体（1^_4)，产率40%。1!1-匪1?(40冊!^，〇2〇)3( ??111):8.24(8，1!〇,7.56((1，了 = 1.9泡， 1H) ,7.27(dd ,J = 8.4,1.9Hz,lH) ,7.12(d ,J = 8.4Hz,lH),6.77(s,lH) ,4.63(dd ,J = 9.2, 3.6Hz,lH),3.94-3.77(m,2H),3.58-3.36(m,7H),3.16(dd,J=12.6,3.7Hz,lH),3.02(s, 1H) ,1.24(dd,J = 6.3,4.5Hz,6H) .13C-NMR(101MHz,D2〇)5(ppm): 169.93,161.55,154.45, 153.62,135.12,133.80,130.49,130.12,129.55,128.55,102.72,51.76,45.14,43.77, 43.48,43.08,42.54,41.19,18.00,17.83.MS(ESI)m/z:456[M+H]+.
[0160] 1-(4-(6-氯嘧啶-4-基)-3-羟基-2-苯基丙-1-酮，无色油状物(Lj5)，产率46%。 4-匪1?(4001〇^，0150-(16)3( ??111):8.32(8，1!〇,7.32((1，了 = 4.3泡，4!1)，7.24(七(1，了 = 8.3， 3.9Hz,lH) ,6.91(s,lH),4.74(t ,J = 5.3Hz,lH) ,4.15(dd ,J = 7.9,5.6Hz , 1H), 4.04-3.94 (m,lH),3.72-3.56(m,5H),3.55-3.40(m,3H),3.18(s, 1H). 13C-NMR(101MHz,DMS0)5(ppm): 170.86,162.53,159.56,158.34,138.07,129.04(20,128.56(20,127.41,102.35,64.78, 50.59,44.71,43.96,43.77,41.23.MS(ESI)m/z:347[M+H]+.
[0161] 4-(4-(L-色氨酸）哌嗪-1-基）-6-氯嘧啶盐酸盐，褐色固体（Lj6)，产率49%。 [a]D25:+44.10° (cl, MeOH)。1!!-匪 R(400MHz，D2〇)S(ppm) :8.17(s，lH) ,7.39-7 ·34(ι?，1H)， 7.24-7.16(m，2H)，7.00(m，2H)，6.50(s，lH)，4.62(dd，J=10·7,5·2Hz，lH)，3.51(m，lH)， 3.25(m,6H) ,2.77(ddd, J=10.5,5.7,4.0Hz, 1H) ,2.64(s, 1H) ,2.18(s, 1H) ,13C-NMR (101MHz,D2〇)5(ppm):168.88,160.55,152.53,150.55,135.65,126.68,125.22,122.09, 119.61,117.83,111.80,106.32,102.67,62.45,50.40,43.60,42.51,40.72,27.11.MS (ESI)m/z:385[M+H]+.
[0162] 4-(4-(L-苯丙氨酸）哌嗪-1-基）-6-氯嘧啶盐酸盐，白色固体（Lj7)，产率57%。 [a]D25:+21.60。（c Ι,ΜθΟΗ)。1!!-匪R(400MHz，D2〇)S(ppm):8.27(s，lH)，7.30(t，J = 7.5Hz， 2H),7.25-7.18(m,3H),6.76(s,lH),3.75-3.71(m,2H),3.59-3.34(m,5H),3.22(dd,J= 13·3,5·6Ηζ，1Η)，3.06-2.96(m，2H)，2.81(s，lH) .13C-匪R(101MHz，D2〇)S(ppm) :168.14, 161.52，154.94，154.43，133.45,129.67(2C),129.21(2C),128.15,102.82,50.90,44.06， 43.21,42.88,41.13,37.10.MS(ESI)m/z:346[M+H]+.
[0163] 4-氨基-6-(4-(2-(4-氟苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基）哌嗪-1-基）嘧啶-5-甲醛盐 酸盐，白色固体（!^_8)，产率93%。 1!1-匪1?(4001取，〇2〇)3(??111):8.01(8，1!1)，7.26((1(1，了 = 8.7,5.2Hz,2H),7.09(t ,J = 8.8Hz,2H) ,4.34(dd ,J = 8.4,5.0Hz , 1H), 3.86-3.80(m, 1H), 3.79-3.69(m,lH),3.61-3.32(m,7H),3.22(dd,J=12.7,5.0Hz,lH),2.95-2.83(m,lH), 1.21(dd，J = 6.5,4.1Hz，6H).13C-MMR(101MHz，D2〇)S(ppm):174.65，170.58，162.45(J = 245Hz),160.32,154.47,148.28,130.19(J = 3Hz),129.87(J = 8Hz,2C),116.60(J = 22Hz, 2C),80.95,51.61,47.03,45.05,44.01,43.24,43.17,41.27,17.95,17.86.MS(ESI)m/z: 387[M+H-CO]+.
[0164] 4-氨基-6-(4-(2-(4-氯苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基）哌嗪-1-基）嘧啶-5-甲醛盐 酸盐，淡黄色固体(Lj9)，产率 79%<31H-NMR(400MHz，D2〇W(ppm):8.00(s，lH)，7.35(d，J = 8.4Hz,2H) ,7.21 (d,J = 8.4Hz,2H),4.31 (dd,J = 8.4,4.9Hz, 1H) ,3.89-3.80(m,lH) ,3.71 (m,lH),3.55-3.31(m,7H),3.20(dd ,J=12.7,4.7Hz,lH),2.96-2.86(m,lH),1.20(dd ,J = 6 · 4,4 · 1Hz，6H) · 13C-匪R( 101MHz，D2〇)S(ppm): 174 · 65，170 · 37，160 · 29，154· 43，148 · 26， 134.13,132.91,129.76(20,129.45(20,80.91,51.64,46.88,45.20,43.97,43.26, 42.96.41.13.17.96.17.84. MS(ESI)m/z:403[M+H-C0]+.
[0165] 4-氨基-6-(4-(2-(4-溴苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基）哌嗪-1-基）嘧啶-5-甲醛盐 酸盐，白色固体（!^_10)，产率92%。 1!1-匪1?(40冊!^，020)3(??111):8.01(8，1!1)，7.50((1，了 = 8.4Hz,2H) ,7.15(d,J = 8.4Hz,2H),4.31(dd,J = 8.5,4.9Hz,lH) ,3.89-3.81(m,lH) ,3.71 (m,lH),3.44(m,7H) ,3.21(dd,J=12.7,4.8Hz,lH),2.98-2.89(m,lH) ,1.21(dd,J = 6.5, 4.0Hz，6H).13C-NMR(101MHz，D2〇)S(ppm):174.64，170.29，160.29，154.42，148.27，133.43， 132·75(2C)，129.72(2C),122.28,80.90,51.64,46.81,45.27,43.97,43.28,42.92,41.11， 17.97.17.84. MS(ESI)m/z:447[M+H-C0]+.
[0166] 4-氨基-6-(4-(2-(2,4-二氯苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-甲 醛盐酸盐，白色固体(Ljll)，产率 88^4-^1^(40010^,020)6(^^):8.02(8,111),7.57((13 = 2.1Hz,lH),7.28(dd,J = 8.4,2.1Hz, 1H),7.11 (d,J = 8.5Hz,lH) ,4.61(dd,J = 9.3,3.8H z,lH),3.91-3.83(m,lH),3.74(m,lH),3.58-3.36(m,7H),3.15(dd,J=12.7,3.6Hz,lH), 3.03-2.92(m，lH)，1.23(dd，J = 6.5,4.3Hz，6H).13C-Mffi(101MHz，D2〇)S(ppm):174.66， 169.97,160.33,154.45,148.30,135.11,133.81,130.55,130.13,129.57,128.55,80.92， 51.77,45.16,43.83,43.26,42.86,42.55,41.23,18.02,17.85.MS(ESI)m/z:437[M+H-C0] + .
[0167] 4-氨基-6-(4-(2-(4-氯苯基）乙酰基）哌嗪-1-基）嘧啶-5-甲醛盐酸盐，白色固体 (1^_12)，产率57%。1!1-匪1?(40冊抱，〇2〇)3(??111):8.02(8，1!〇,7.44((1，了 = 8.5!^，2!1)，7.37 (d,J=8.6Hz,2H),5.47(s,lH),3.83(m,lH),3.78-3.70(m,lH),3.56-3.41(m,4H),3.29 (ddd,J=13.5,6.1,3.9Hz,lH) ,3.01-2.92(m,lH).13C-NMR(101MHz,D2〇)5(pp m) :176.61, 166.43,160.37,154.47,148.29,136.21,130.08(20,129.92(2C),129.44,81.02,54.54, 43.84,43.19,42.88,41.53.MS(ESI)m/z:347[M+H-C0]+.
[0168] 4-(4-(L-色氨酸)哌嗪-1-基)-6-氨基嘧啶-5-甲醛盐酸盐，灰白色固体(Ljl3)，产 率94%。[0]。 25:+29.20。（(：1，]^0!〇。1!1-匪1?(4001!^，〇2〇)3(??111):7.93(8，1!〇,7.40((1，了 = 7.6Hz,lH),7.28-7.21(m,2H),7.09-6.99(m,2H),4.63(dd,J=10.6,5.2Hz,lH),3.54(d d, J = 14.1,7.0Hz,2H) ,3.35(dd,J=13.9,5.1Hz,2H) ,3.21(m,4H) ,2.83-2.72(m,lH) ,2.65 (s，lH) ,2.27(s，lH) .13C-匪R(101MHz，D20)S(ppm): 174.66,168.88,159.60,154.22, 148.02,135.81,126.72,125.16,122.09,119.62,117.82,111.85,106.31,80.87,61.68， 50.42,43.82,42.53,41.95,40.78,27.09.MS(ESI)m/z:366[M+H-C0]+.
[0169] 4-(4-(L-苯丙氨酸)哌嗪-1-基)-6-氨基嘧啶-5-甲醛盐酸盐，白色固体(Ljl4)，产 率72%。[0]。25:+23.90。（c l，Me0H)<31H-NMR(400MHz，D20)S(ppm):8.04(s，lH)，7.28(t，J = 7.3Hz，2H)，7.21(t，J = 7.5Hz，3H)，4.66(dd，J = 9.7,5.8Hz，lH)，3.72-3.61(m，2H)，3.49-3·31(m，4H)，3·19(dd，J=13.3,5.7Hz，1H),3.04-2.90(m，2H),2.79(s，1H). 13C-NMR (101MHz，D2〇)S(ppm):168.10,160.13,154.44,148.28,133.39,129.62,129.16,128.11， 81.00,50.86,44.05,42.99,42.70,41.15,37.04.MS(ESI)m/z:327[M+H-C0]+.
[0170] 4-氨基-6-(4-(2-(4-氟苯基)-3-(异丙氨基）丙酰基)哌嗪-1-基）嘧啶-5-甲醛0-甲基肟盐酸盐，淡黄色固体（Ljl5)，产率 55%</Η-匪 R(400MHz，D20W(ppm):8.01(s，lH)， 7.86(s，lH)，7.24(dd，J = 8.7,5.2Hz，2H)，7.08(t，J = 8.8Hz，2H)，4.32(dd，J = 8.3,5.0Hz， 1H),3.85(s,3H),3.78-3.69(m,lH),3.63-3.32(m,8H),3.21(dd,J=12.7,5.ΙΗζ,ΙΗ), 2.94-2.84(m,lH) ,1.20(dd,J = 6.5,3.9Hz,6H) .13C-NMR(101MHz,D20)5(p pm) :170.63, 162.48( J = 245Hz) ,161.92,153.15,146.76,145.21,130.23( J = 4Hz) ,129.83( J = 8Hz, 2C),116.63(J=22Hz,2C),88.07,62.28,51.60,48.13,47.69,46.99,44.99,44.40,41.87, 17.94,17.85.MS(ESI)m/z:444[M+H]+.
[0171] 4-氨基-6-(4-(2-(4-氯苯基)-3-(异丙氨基）丙酰基)哌嗪-1-基）嘧啶-5-甲醛0-甲基肟盐酸盐，白色固体(Ljl6)，产率 87%</H-NMR(400MHz，D20)S(ppm):8.01(s，lH)，7.84 (s,lH),7.35(d ,J = 8.2Hz,2H),7.19(d ,J = 8.3Hz,2H) ,4.31 (dd ,J = 8.0,4.7Hz , 1H), 3.86 (s,3H),3.73-3.69(m,lH),3.59-3.56(m,2H),350-3.34(m,6H),3.19(dd,J=12.6,4.6Hz, lH),2.92-2.83(m,lH),1.20(dd ,J = 6.2,3.8Hz,6H).13C-NMR(101MHz,D2〇)5(ppm):170.42, 161.96,153.16,146.82,145.14,134.22,132.96,129.80(20,129.38(20,88.05,62.29, 51.63.48.11.47.51.46.85.45.13.44.25.41.81.17.94.17.82. MS(ESI)m/z:460[M+H]+.
[0172] 4-氨基-6-(4-(2-(4-溴苯基)-3-(异丙氨基）丙酰基)哌嗪-1-基）嘧啶-5-甲醛0-甲基肟盐酸盐，白色固体(Ljl7)，产率 70%</H-NMR(400MHz，D20)S(ppm):8.01(s，lH)，7.83 (s,lH),7.50(d ,J = 8.4Hz,2H),7.13(d ,J = 8.5Hz,2H) ,4.30(dd ,J = 8.5,4.9Hz , 1H), 3.86 (s,3H),3.74-3.66(m,lH),3.61-3.32(m,8H),3.19(dd,J=12.7,4.9Hz,lH),2.91-2.82(m, 1H) ,1.20(dd,J = 6.5,3.9Hz,6H) .13C-NMR(101MHz,D2〇)5(ppm): 170.34,162.01,153.24, 146.95,145.14,133.48,132.79(20,129.65(20,122.38,88.11,62.30,51.63,48.17, 47.45.46.79.45.22.44.23.41.83.17.95.17.82. MS(ESI)m/z:504[M+H]+.
[0173] 4-氨基-6-(4-(2-(2,4-二氯苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基）哌嗪-1-基）嘧啶-5-甲 醛 〇-甲基肟盐酸盐，黄色固体(Ljl8)，产率 55%<3iH-NMR(4〇〇MHZ，D 2〇W(ppm):8.07(s，lH)， 7.90(s，lH)，7.61(d，J=1.7Hz，lH)，7.31(dd，J = 8.4,2.1Hz，lH)，7.13(d，J = 8.4Hz，lH)， 4.64(dd J = 9.2,3.7Hz,lH),3.91(s,3H),3.81-3.73(m,lH),3.69-3.38(m,7H),3.26(dt ,J = 9.2,4.3Hz,lH) ,3.17(dd,J=12.8,3.8Hz,lH) ,3.00-2.91(m,lH) ,1.27(dd,J = 6.3, 4.1Hz,6H). 13C-NMR( 101MHz ,D2〇)5(ppm): 170.09,162.07,153.30,147.01,145.23,135.24, 133.85,130.69,130.26,129.72,128.61,88.17,62.39,51.84,48.08,47.51,45.20,44.17, 42.63,42.01,18.08,17.91.MS(ESI)m/z:494[M+H]+.
[0174] 4-氨基-6-(4-(2-(4-氯苯基）乙酰基）哌嗪-1-基）嘧啶-5-甲醛0-甲基肟盐酸盐， 淡黄色固体(L jl9)，产率62%<31H-NMR(400MHz，D2〇)S(ppm):8.03(s，lH)，7.85(s，lH)，7.44 (d,J = 8.5Hz,2H) ,7.35(d,J = 8.6Hz,2H) ,5.48(s,lH) ,3.86(s,3H) ,3.78-3.69(m,lH), 3.64-3.41(m,5H),3.34(dt,J = 9.5,4.4Hz,lH),2.97-2.88(m,lH).13C-NMR(101M Hz,D20)5 (ppm):166.50,162.04,153.18,146.84,145.12,136.29,130.11,129.87,129.49,88.27, 62.32,54.49,47.93,47.55,44.15,42.19.MS(ESI)m/z:404[M+H]+.
[0175] 4-(4_(L-色氨酸）哌嗪-1-基)-6-氨基嘧啶-5-甲醛0-甲基肟盐酸盐，灰白色固体 (1^20)，产率56%。[0]。 25:+34.70。（(：1，]\^0!1)。1!1-匪1?(4001!^，020)3(??111):7.92(8，1!1)， 7.51(s，lH)，7.35(dd，J=17.7,8.0Hz，2H)，7.23(s，lH)，7· ll-6.99(m，2H)，4.63(dd，J = 10.6，5·1Hz，1H)，3.89(s，3H)，3.53-3.45(m，2H)，3.33(dd，J=13·9,5·2Ηζ，1Η),3.24-3.12 (m，5H) ,2.82-2.72 (m，1H)，2 ·69-2·61(ι?，1H) .13C-匪 R(101MHz，D20) δ (ppm): 168.71， 161.18,152.95,146.53,144.94,135.79,126.75,125.22,122.23,119.69,117.86,111.96， 106.41，87.94,62.33,50.30,47.22,47.01,44.58,41.85,27.15.MS(ESI)m/z:423[M+H]+.
[0176] 4-(4_(L-苯丙氨酸）哌嗪-1-基)-6-氨基嘧啶-5-甲醛0-甲基肟盐酸盐，黄色固体 (1^21)，产率58%。[0]。 25:+17.70。（(：1，]\^0!1)。1!1-匪1?(4001!^，020)3(??111):8.06(8，1!1)， 7.86(s,lH) ,7.31 (d,J = 7.4Hz,2H) ,7.21 (d,J = 6.5Hz,3H) ,3.89( s,3H) ,3.56-3.31 (m, 7H)，3.19(dd，J=13.2,5.7Hz，lH)，3.04-2.96(m，2H)，2.68-2.60(m，lH). 13C-NMR(101MHz, D20)5(ppm):168.00,161.79,153.28,146.88,145.25,133.46,129.69(2C),129.25(20, 128.21,88.35,62.35,50.81,47.87,47.68,44.80,42.06,37.05.MS(ESI)m/z:384[M+H]+.
[0177] 实施例3:化合物的生物活性(Aktl激酶的抑制活性)测定
[0178] 化合物对Aktl激酶的抑制活性采用时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)的方法 进行测定。
[0179] (1)待测药物溶液的配置：用万分之一天平精密称取化合物，用生化级DMS0将化合 物配制成浓度为2X10~4ym 〇l/L，作为储备液，使用前，将储备液用生化级DMS0稀释到200μ mol/L，再用激酶缓冲溶液将其浓度稀释至2.5ymol/L作为待测液，低温保存，待测液需随用 随配，活性实验中DMS0的浓度不得高于0.5%。
[0180] (2)工作液的配制：
[0181] ①1 X激酶缓冲溶液：用移液枪移取三蒸水2590.5yL，加入5 X激酶缓冲液660yL， DTT溶液33yL，MgCl 2溶液16.5yL，混匀后插入冰中保存。
[0182] ②Aktl激酶工作液：用移液枪移取1 X激酶缓冲液149.72yL，激酶Aktl母液0.28μ L，混匀，插入冰中保存。
[0183] ③底物工作溶液：用移液枪移取IX激酶缓冲液146.25yL，加入底物母液3.75yL， 混匀，插入冰中保存。
[0184] ④ATP工作溶液：用移液枪移取1 X激酶缓冲液147.99yL，加入ATP母液2. OlyL，混 匀，插入冰中保存。
[0185] (3)检测溶液的配制：用移液枪移取检测缓冲液295.50yL，加入链酶亲和素 XL665 母液4.50yL，混匀，插入冰中保存。（使用前20分钟配制）
[0186] 试验中设定测试组(S)、背景组(C)、空白组(B)。测试组为待测化合物，按4μ!7孔将 待测化合物溶液加入到384孔板中，然后加入ΑΤΡ溶液2yL/孔;背景组不加化合物，加4yLl X 激酶缓冲液代替，其他与测试组相同；空白组中不加化合物和Aktl，用6yLl X激酶缓冲液代 替，其他与测试组相同。将上述各组于37°C孵育40min，加入检测液（ΙΟμL孔），37°C孵育2h。 使用PerkinElmer公司的EnSpire多标记微孔板检测仪检测，激发波长为330nm，发射波长为 620nm和665nm。检测结果用Ratio值表示，计算抑制率。 其中S表示测试组，C表示背景组，B表示空白 组。
[0188] 本发明化合物的活性试验数据如表1所示：
[0189] 表1化合物的活性试验数据





[0197]活性数据实验结果显示，本发明的6-哌嗪基-取代嘧啶类衍生物对Aktl激酶均有 一定的抑制活性。Lj系列中，当R3为对氯苯基或对溴苯基时活性优于苄基和吲哚-3-亚甲 基，嘧啶4位氨基取代好于氯取代，R 4为N-异丙基-氨甲基时活性较氨基要好，嘧啶5位取代 对活性影响很大，为醛基甲氧肟时最好。化合物L j9、L j 16、L j 17有明显的Akt 1抑制活性，在1 μΜ浓度下对Aktl激酶抑制率分别为79%、82%、98% j-89是最早发现的具有Akt抑制活性 的化合物，它对Akt的半数抑制浓度为2.2μΜ，本发明的化合物Lj9、Ljl6、Ljl7的抑制活性均 优于H-89。
【主权项】
1. 一种式(I)或式(II)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R:为取代苯基、苯甲酰氨基或对氯苯甲酰氨基;R2为氯、甲氨基或乙氨基;R3为取 代苯基、苄基或吲哚-3-亚甲基;R4为氨基、羟甲基或N-异丙基-氨甲基;R5为氢、醛基或醛基 〇-甲基肟，R6为氯或氨基。2. 根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述心为对氟苯 基、对氯苯基、对溴苯基、2，4-二氯苯基、2，6-二氯苯基、苯甲酰氨基或对氯苯甲酰氨基;R 2 为氯、甲氨基或乙氨基;R3为苯基、对氟苯基、对氯苯基、对溴苯基、2,4_二氯苯基、苄基或吲 哚-3-亚甲基;R 4为氨基、羟甲基或N-异丙基-氨甲基;R5为氢、醛基或醛基0-甲基肟，R6为氯 或氨基。3. 根据权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，其是选自下 列化合物： 1-(4-(6_氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4_氟苯基）乙酮； 1-(4-(6_氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4_氯苯基）乙酮； 1-(4-(6_氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4_溴苯基）乙酮； 1-(4-(6_氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2,4_二氯苯基）乙酮； 1- (4-(6_氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2,6_二氯苯基）乙酮； 2_(4_氟苯基)-1-(4-(6-(甲胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮； 2_(4_氯苯基)-1-(4-(6-(甲胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮； 2_(4_溴苯基)-1-(4-(6-(甲胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮； 2- (2,4_二氯苯基)-1-(4-(6-(甲胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮； 2-(2,6_二氯苯基)-1-(4-(6-(甲胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮； 2_(4_氟苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮； 2_(4_氯苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮； 2_(4_溴苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮； 2-(2,4_二氯苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮； 2-(2,6_二氯苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮； N-(2-(4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2_氧乙基)苯甲酰胺； N-(2-(4-(6-(甲氨基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2_氧乙基)苯甲酰胺； N-(2-(4-(6-(乙氨基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2_氧乙基)苯甲酰胺； N-(2-(4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2_氧乙基)-4_氯苯甲酰胺； N-(2-(4-(6-(甲氨基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2_氧乙基)-4_氯苯甲酰胺； N-(2-(4-(6-(乙氨基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2_氧乙基)-4_氯苯甲酰胺； 4-氯-6-(4-(2-(4-氟苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)啼啶； 4-氯-6-(4-(2-(4-氯苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)啼啶； 4-氯-6- (4- (2- (4-溴苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-1 -基)嘧啶； 4-氯-6-(4-(2-(2,4-二氯苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)啼啶； 1-(4-(6_氯嘧啶-4-基)-3_羟基-2-苯基丙-1-酮； 4-(4-(L-色氨酸)哌嗪-1-基)-6_氯嘧啶； 4-(4-(L-苯丙氨酸)哌嗪-1-基)-6_氯嘧啶； 4-氨基-6- (4- (2- (4-氟苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-1 -基)嘧啶-5-甲醛； 4-氨基-6- (4- (2- (4-氯苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-1 -基)嘧啶-5-甲醛； 4-氨基-6- (4- (2- (4-溴苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-1 -基)嘧啶-5-甲醛； 4-氨基-6- (4- (2- (2，4-二氯苯基)-3-(异丙氨基)丙酰基)哌嗪-1 -基)嘧啶-5-甲醛； 4-氨基-6- (4- (2- (4-氯苯基）乙酰基)哌嗪-1 -基)嘧啶-5-甲醛； 4-(4-(L-色氨酸)哌嗪-1-基)-6_氨基嘧啶-5-甲醛； 4-(4-(L-苯丙氨酸)哌嗪-1-基)-6_氨基嘧啶-5-甲醛； 4-氨基-6-(4-(2-(4-氟苯基)-3-(异丙氨基）丙酰基）哌嗪-1-基）嘧啶-5-甲醛0-甲基 肟； 4-氨基-6-(4-(2-(4-氯苯基)-3-(异丙氨基）丙酰基）哌嗪-1-基）嘧啶-5-甲醛0-甲基 肟； 4-氨基-6-(4-(2-(4-溴苯基)-3-(异丙氨基）丙酰基）哌嗪-1-基）嘧啶-5-甲醛0-甲基 肟； 4-氨基-6-(4-(2-(2,4-二氯苯基)-3-(异丙氨基）丙酰基）哌嗪-1-基）嘧啶-5-甲醛0-甲基肟； 4-氨基-6- (4- (2- (4-氯苯基）乙酰基)哌嗪-1 -基)嘧啶-5-甲醛0-甲基肟； 4- (4- (L-色氨酸)哌嗪-1 -基)-6-氨基嘧啶-5-甲醛0-甲基月亏； 4- (4- (L-苯丙氨酸)哌嗪-1 -基)-6-氨基嘧啶-5-甲醛0-甲基肟。4. 权利要求1-3中的任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备Akt抑制剂中 的用途。5. 权利要求1-3中的任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备预防和治疗肿 瘤的药物中的用途。6. -种权利要求1-3中的任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐的制备方法，其 特征在于，式（I)所示的化合物的制备方法包括:使式〇所示的化合物与式D1、D2或D3所示的 化合物反应，得到式(I)所示的化合物；其中，办、1?2具有如权利要求1所述的定义;X为F、Cl、Br、2,4-C^2,6-Cl; 式（II)所示的化合物的制备方法包括:使式G1、G2或C1所示的化合物与式HI、H2、H3、H4 或H5所示的化合物反应，得到式(II)所示的化合物；其中，R3、R4、R5、R6具有如权利要求l所述的定义;X为F、Cl、Br或2,4-Cl。7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，式C所示的化合物的制备方法为：以4， 6-二氯嘧啶(A1)为起始原料，与甲胺或乙胺反应，得到中间体化合物A2或A3，中间体A再与 1-叔丁氧羰基哌嗪反应，得到中间体化合物B，将中间体化合B溶于HC1二氧六环溶液，室温 反应，即得式C所示的化合物。8. -种药物组合物，其包含权利要求1-3中任一项所述的的化合物或其药学上可接受 的盐。9. 根据权利要求8所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物还包括一种或多种 药学上可接受的载体、赋形剂和/或稀释剂。10. 根据权利要求8或9所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物为固体口服制 剂、液体口服制剂或注射剂。
【文档编号】C07D403/12GK106045918SQ201610494647
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年6月28日
【发明人】赵桂森, 陆锦杰, 王冠杰, 杨德志, 张震, 景永奎
【申请人】山东大学